專利名稱：：耐氧化的指示劑分子的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及耐氧化增強(qiáng)的可檢測(cè)的指示劑，包括熒光指示劑。
背景技術(shù)：
：熒光分子被用于各種應(yīng)用，包括織物和增白劑、招牌、各種印刷油墨、當(dāng)與抗體或其他分子連接時(shí)作為標(biāo)記(tag)和探針(probe)的診斷學(xué)，并可以在分子水平下構(gòu)造，以用作化學(xué)和生物化學(xué)活性指示劑，具體被設(shè)計(jì)用于檢測(cè)某些分析物，例如葡萄糖。碳水化合物(包括葡萄糖)與苯基硼酸的絡(luò)合已知己久，并且這種相互作用的可逆性已經(jīng)用作糖的色譜分離的基礎(chǔ)。具體而言，在1959年，Lorand和Edwards報(bào)道了苯基硼酸與許多飽和多元醇的水締合的締合常數(shù)結(jié)合相互作用的范圍從極弱(例如，乙二醇，Kd二360mM)至中等強(qiáng)度(例如，葡萄糖，Kd=9.1mM)。參見(jiàn)J.Yoon等人，所oorg朋/c朋dMe^"'"a/C/zew'Wo;1(4):267-71(1993)。據(jù)認(rèn)為，結(jié)合機(jī)理是通過(guò)用葡萄糖上的相鄰羥基置換硼酸根部分上的羥基而發(fā)生的。美國(guó)專利5,503,770(James等人)描述了一種含有硼酸的熒光化合物，該化合物經(jīng)與糖類(包括葡萄糖)結(jié)合發(fā)射高強(qiáng)度熒光。熒光化合物的分子結(jié)構(gòu)包括熒光團(tuán)、至少一個(gè)苯基硼酸部分和至少一個(gè)提供胺的氮原子，其中氮原子位于苯基硼酸部分附近，從而與硼酸發(fā)生分子內(nèi)相互作用。因此這種相互作用導(dǎo)致化合物與糖結(jié)合而發(fā)射熒光。參見(jiàn)T.James等人J.C/ze肌Soc.117(35):8982-87(1995)。此外，使用含有蒽基硼酸的化合物檢測(cè)血糖的熒光傳感器在本領(lǐng)域中是已知的。例如，J.Yoon等人，■/C77e附.5bc114:5874-5875(1992)描述了蒽基硼酸可以用作碳水化合物結(jié)合(包括葡萄糖和果糖結(jié)合)的信號(hào)的熒光化學(xué)傳感器。熒光分子易于分解，從而由于氧化速率經(jīng)常變化而隨著時(shí)間推移失去其熒光強(qiáng)度(或亮度)。氧化通常與光致褪色相關(guān)，技術(shù)上也被稱作"光氧化"，或者可以在熒光分子的局部環(huán)境內(nèi)被各種活性氧物質(zhì)氧化。環(huán)境和大氣如臭氧中存在著多種潛在的氧化劑，或者可以存在于從人類到細(xì)菌范圍的活體內(nèi)部。在活體內(nèi)部，常見(jiàn)的活性氧物質(zhì)(ROS)可以包括典型的健康復(fù)原反應(yīng)中涉及到的那些，如過(guò)氧化物、羥基自由基、過(guò)氧亞硝酸鹽、超氧化物等。在活體體系內(nèi)部，也被稱作加氧酶的特異性酶用于分子分解時(shí)的特定氧化目的?；钚匝跷镔|(zhì)或加氧酶活性對(duì)熒光分子的不利結(jié)果通常是損失熒光。在指示劑分子或無(wú)源標(biāo)記(passivetag)、探針或標(biāo)記的情況下，裝置的使用壽命和靈敏度或者診斷結(jié)果受到限制，或者由于熒光信號(hào)的氧化分解而完全無(wú)效。因此，仍然需要耐氧化增強(qiáng)的熒光分子。
發(fā)明內(nèi)容在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種在氧化性條件下使用分子的方法，所述方法包括a)得到具有芳基硼酸殘基的分子，其中所述殘基在含有硼酸殘基的芳香族部分上具有一種或多種吸電子基，使得與沒(méi)有一種或多種吸電子基的相應(yīng)分子相比，所述分子具有增強(qiáng)的耐氧化性；和b)使所述具有一種或多種吸電子基的分子經(jīng)歷氧化性條件。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種在氧化性環(huán)境中檢測(cè)樣品中的分析物的存在或濃度的方法，所述方法包括a)使樣品接觸具有可檢測(cè)性質(zhì)的指示劑分子，所述可檢測(cè)性質(zhì)在所述指示劑分子接觸分析物時(shí)變化，所述分子包括芳基硼酸殘基，所述殘基在含有硼酸殘基的芳香族部分上具有一種或多種吸電子基，使得與沒(méi)有一種或多種吸電子基的相應(yīng)分子相比，所述指示劑分子具有增強(qiáng)的耐氧化性；和b)測(cè)量所述可檢測(cè)性質(zhì)的任何變化，從而測(cè)定所述樣品中所述分析物的存在或濃度。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物其中-每一個(gè)Ar是芳基基團(tuán)；-每一個(gè)R,和R2相同或不同并且是吸電子基；-m和n每一個(gè)獨(dú)立地是1~10的整數(shù)；-R4是可檢測(cè)部分；和-每一個(gè)R獨(dú)立地是具有010個(gè)相鄰或枝化的碳原子和/或雜原子的連接基團(tuán)，至少一個(gè)R還含有聚合性單體單元；和與沒(méi)有一種或多種吸電子基的相應(yīng)化合物相比，其中所述化合物具有增強(qiáng)的耐氧化性。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物其中-每一個(gè)Ar是除苯基之外的芳基基團(tuán)；-每一個(gè)Ri和112相同或不同并且是吸電子基;-m和n每一個(gè)獨(dú)立地是110的整數(shù)；-^是可檢測(cè)部分；和-每一個(gè)R獨(dú)立地是具有0~10個(gè)相鄰或枝化的碳原子和/或雜原子的連接基團(tuán)，至少一個(gè)R包含能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團(tuán)；和與沒(méi)有一種或多種吸電子基的相應(yīng)化合物相比，其中所述化合物具有增強(qiáng)的耐氧化性。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種制備用于在氧化性環(huán)境中檢測(cè)分析物的存在或濃度的指示劑大分子的方法，所述方法包括將a)—種或多種指示劑組分單體，各自單體的水溶性不足以允許其在用于檢測(cè)所述分析物的存在或濃度的水性環(huán)境中使用，其中所述指示劑組分單體包括具有以下結(jié)構(gòu)的化合物其中-每一個(gè)Ar是芳基基團(tuán)；-每一個(gè)R,和R2相同或不同并且是吸電子基；-m和n每一個(gè)獨(dú)立地是1~10的整數(shù)；-R4是可檢測(cè)部分；和-每一個(gè)R獨(dú)立地是具有0~10個(gè)相鄰或枝化的碳原子和/或雜原子的連接基團(tuán)，至少一個(gè)R還含有聚合性單體單元；和b)—種或多種親水性單體進(jìn)行共聚；使得生成的大分子能夠在水性環(huán)境中檢測(cè)所述分析物的存在或濃度，并且與沒(méi)有一種或多種吸電子基的相應(yīng)化合物相比，其中所述化合物具有增強(qiáng)的耐氧化性。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物其中-Ar是芳基基團(tuán)；-每一個(gè)R,相同或不同并且是吸電子基；-n是110的整數(shù)；和-R是具有0~10個(gè)相鄰或枝化的碳原子和/或雜原子的連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)還含有聚合性單體單元和可檢測(cè)部分；和與沒(méi)有吸電子基的相應(yīng)化合物相比，其中所述化合物具有增強(qiáng)的耐氧化性。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物其中-Ar是芳基基團(tuán)；-每一個(gè)Ri相同或不同并且是吸電子基；-n是l10的整數(shù)；和-R是針對(duì)色譜載體的連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)具有0~10個(gè)相鄰或枝化的碳原子和/或雜原子；和與沒(méi)有吸電子基的相應(yīng)化合物相比，其中所述化合物具有增強(qiáng)的耐氧化性。圖1示出實(shí)施例1中的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。圖2示出實(shí)施例2中的一個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。圖3示出實(shí)施例1中的一個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。圖4示出實(shí)施例3中的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。圖5A和B示出本發(fā)明的幾個(gè)優(yōu)選的化合物。圖6示出實(shí)施例4中的一個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。圖7示出實(shí)施例4中的另一個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。圖8示出實(shí)施例4中的另一個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。具體實(shí)施例方式在本發(fā)明人持續(xù)研究基于熒光指示劑分子的可植入的葡萄糖傳感器的工作中，觀察到除了作為定量的累積曝光的直接和可預(yù)測(cè)作用的光氧化之外，對(duì)于體內(nèi)試驗(yàn)的一系列熒光指示劑分子而言，存在在體內(nèi)發(fā)生但在體外不明顯發(fā)生的額外的、嚴(yán)重的快速熒光信號(hào)損失。將熒光指示劑的樣品植入，然后在幾周后植出。然后，在信號(hào)嚴(yán)重?fù)p失之后化學(xué)分析樣品。分析表明了指示劑體系的硼酸根識(shí)別成分被特定氧化成羥基基團(tuán)的特定反應(yīng)，從而使分子的活性(具體而言，熒光調(diào)節(jié))完全損失。這種體內(nèi)氧化反應(yīng)如下所示標(biāo)準(zhǔn)指示劑分子體內(nèi)改變的指示劑分子鍵能C-C=358kJ/molC-B=323kJ/molB-0=519kJ/mo1破壞性的體內(nèi)氧化反應(yīng)表明極特異性地僅氧化硼酸根，在其位置留下羥基基團(tuán)。通過(guò)用l、5和10pM過(guò)氧化氫處理在體外重復(fù)氧化。在體外和體內(nèi)，均發(fā)現(xiàn)僅有硼酸根部分被氧化成羥基。這是出乎意料的，因?yàn)閾?jù)認(rèn)為ROS是更普遍和不加區(qū)分地可以氧化并破壞分子。根據(jù)本發(fā)明，通過(guò)將一種或多種吸電子基加到含有硼酸殘基的芳香族部分上，可以使含有芳基硼酸殘基的指示劑分子更耐氧化，從而穩(wěn)定硼酸根部分。應(yīng)該理解，術(shù)語(yǔ)"芳基"包括大范圍的芳香族基團(tuán)，如苯基、多核芳香物、雜芳香物、多核雜芳香物等。非限制性例子包括苯基、萘基、蒽基、吡啶基等。大范圍的吸電子基在本發(fā)明的范圍內(nèi)，包括但不限于鹵素、氰基、硝基、鹵素取代的烷基、羧酸、酉旨、磺酸、酮、醛、磺酰胺、砜、磺酰基、亞砜、鹵素取代的砜、鹵素取代的烷氧基、鹵素取代的酮、酰胺或它們的組合。關(guān)于上述結(jié)構(gòu)I和n，R,和R2優(yōu)選是先前段落中所述的吸電子基。最優(yōu)選地，每一個(gè)R,和R2是三氟甲基。此外，如上所述，在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)R基團(tuán)含有允許將結(jié)構(gòu)(I)并入聚合物中的聚合性單體單元。這種聚合性單元是公知的，包括但不限于乙烯基、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺等。本發(fā)明的指示劑化合物具有可檢測(cè)性質(zhì)(如結(jié)構(gòu)I中的成分R4所示)，該性質(zhì)在該化合物與含有葡萄糖的樣品接觸時(shí)以濃度依賴性的方式變化。許多這種性質(zhì)是已知的，并可以用于本發(fā)明。例如，指示劑化合物可以包括發(fā)光(熒光或磷光)或化學(xué)發(fā)光部分、基于吸光的部分等。指示劑化合物可以包括能量供體部分和能量受體部分，每個(gè)部分是間隔的，使得在指示劑化合物與葡萄糖相互作用時(shí)發(fā)生可檢測(cè)的變化。指示劑化合物可以包括熒光團(tuán)和猝滅劑，可以將熒光團(tuán)和猝滅劑構(gòu)造為使得在葡萄糖不存在的情況下熒光團(tuán)被猝滅劑猝滅。在這種情況下，當(dāng)葡萄糖存在時(shí)，指示劑經(jīng)歷構(gòu)型變化，該構(gòu)型變化導(dǎo)致猝滅劑移動(dòng)離熒光團(tuán)充分遠(yuǎn)的距離，從而發(fā)射熒光。相反地，可以將熒光團(tuán)和猝滅劑構(gòu)造為使得在葡萄糖不存在的情況下它們充分分離并使熒光團(tuán)發(fā)射熒光；經(jīng)與葡萄糖相互作用，熒光團(tuán)和猝滅劑移動(dòng)至足夠接近以導(dǎo)致猝滅。在美國(guó)公開(kāi)的申請(qǐng)2002/0119581中更為詳細(xì)地描述了構(gòu)型變化概念，在此引入該申請(qǐng)作為參考。在另一個(gè)實(shí)施方案中，猝滅劑含有芳香族硼酸，硼酸與目標(biāo)分子(例如，葡萄糖)的結(jié)合改變猝滅劑效率，從而導(dǎo)致可檢測(cè)變化。這些內(nèi)容記載在美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)2006/0083688中，在此引入其內(nèi)容作為參考?？蛇x擇地，指示劑可以包括能夠與識(shí)別成分或相對(duì)于該識(shí)別成分空間上放置的另一部分相互作用的諸如熒光團(tuán)的部分，使得在葡萄糖不存在的情況下熒光團(tuán)發(fā)射熒光。經(jīng)加入葡萄糖，葡萄糖與熒光團(tuán)和識(shí)別成分之間的相互作用競(jìng)爭(zhēng)，或者與熒光團(tuán)和相對(duì)于識(shí)別成分空間上放置的另一部分之間的相互作用競(jìng)爭(zhēng)，導(dǎo)致熒光減少。還將認(rèn)識(shí)到，可以選擇指示劑，使得在葡萄糖不存在的情況下，當(dāng)熒光團(tuán)與識(shí)別成分或相對(duì)于識(shí)別成分空間上放置的另一部分相互作用時(shí)，熒光團(tuán)不發(fā)射熒光，或者發(fā)射相對(duì)低水平的熒光。經(jīng)加入葡萄糖，葡萄糖與熒光團(tuán)和識(shí)別成分之間的相互作用競(jìng)爭(zhēng)，或與熒光團(tuán)和相對(duì)于識(shí)別成分空間上放置的另一部分之間的相互作用競(jìng)爭(zhēng)，導(dǎo)致熒光增加。其他可檢測(cè)部分包括通過(guò)光致電子轉(zhuǎn)移或誘導(dǎo)效應(yīng)而使葡萄糖相互作用影響可檢測(cè)部分的熒光的部分。這些包括在此引入作為參考的美國(guó)專利6,344,360中公開(kāi)的鑭系元素螯合物；聚芳烴和它們的衍生物；香豆素；BoDiPy;丹磺酰；兒茶酚等。另一類部分包括在該指示劑化合物與葡萄糖相互作用時(shí)其吸收光譜發(fā)生變化的部分，包括茜素紅等。另一類部分包括其熒光受鄰近效應(yīng)調(diào)節(jié)的部分，例如能量供體/受體對(duì)，如丹磺酰/dabsyl等。優(yōu)選地，可檢測(cè)性質(zhì)是可檢測(cè)的光譜變化，如吸收特征(例如，吸光系數(shù)和/或光譜遷移)、熒光衰減時(shí)間(通過(guò)時(shí)域(timedomain)或頻域(frequencydomain)測(cè)量而確定)、熒光強(qiáng)度、熒光各向異性或偏振的變化；發(fā)射光譜的光譜遷移；時(shí)間分辨的各向異性衰減(通過(guò)時(shí)域或頻域測(cè)量而確定)的變化等。應(yīng)該理解，在使用前可以用保護(hù)基封閉硼酸識(shí)別成分。這些基團(tuán)是公知的，包括新戊二醇、頻哪醇等。在某些實(shí)施方案中，在化合物將要使用的介質(zhì)中將封閉的識(shí)別成分去封閉。本發(fā)明也包括耐氧化改善但不必須含有可檢測(cè)基團(tuán)的化合物。這種化合物可以用在例如用于分離糖類的色譜樹(shù)脂中。在這種情況下，本發(fā)明的化合物將通過(guò)能夠承受樹(shù)脂或載體所經(jīng)歷條件的連接劑與樹(shù)脂或其他固體載體連接。本發(fā)明的指示劑化合物如果是可溶的話，在需要時(shí)可以直接用于溶液中。另一方面，如果期望的應(yīng)用這樣要求，指示劑化合物可以固定(如通過(guò)機(jī)械夾帶或者共價(jià)或離子結(jié)合)在不溶性表面或基質(zhì)(如玻璃、塑料、聚合材料等)上或其內(nèi)部。當(dāng)在例如另一種聚合物中夾帶指示劑化合物時(shí)，夾帶的材料優(yōu)選應(yīng)該對(duì)葡萄糖具有充分的滲透性，以使葡萄糖和指示劑化合物之間發(fā)生適宜的相互作用。如果指示劑化合物在水中難溶或不溶，但仍期望進(jìn)行水性介質(zhì)中的檢測(cè)，則指示劑化合物可以與親水性單體共聚形成親水性大分子，例如在美國(guó)專利6,794,195中所述，在此引入其內(nèi)容作為參考。針對(duì)聚合物或載體的適宜的連接基團(tuán)可以包括約1~約20個(gè)相鄰原子的基團(tuán)，所述基團(tuán)可以是枝化或被取代的，且其可以包括一種或多種雜原子，其用能夠與聚合物或載體進(jìn)一步反應(yīng)或結(jié)合的官能團(tuán)終止。適宜的連接基團(tuán)的例子包括垸基、芳基、?；⒕埘０?、聚醚及其組合，所有這些基團(tuán)任選地被取代。由以上定義還可以理解，本發(fā)明的化合物和檢測(cè)系統(tǒng)可以是聚合物形式。因此，完整化合物(含有識(shí)別成分和可檢測(cè)部分)可以與現(xiàn)有聚合物連接，或者單體形式的完整化合物可以聚合或與另一種適宜的單體共聚，形成聚合物?？蛇x擇地，兩種單獨(dú)的單體組分(例如，一種含有識(shí)別成分，一種含有可檢測(cè)部分)可以共聚，從而使生成的聚合物含有體系所有必需的成分。本發(fā)明的指示劑化合物有多種用途，包括用作能源、醫(yī)學(xué)和農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的指示劑。例如，指示劑化合物可以用于檢測(cè)生理緩沖液或液體如血液、血漿、血清、間質(zhì)流體、腦脊髓液、尿液、唾液、眼內(nèi)液、淋巴液、淚液或汗液中的亞水平或超水平的葡萄糖，從而提供用于診斷或監(jiān)測(cè)諸如糖尿病和腎上腺功能不全等疾病的有價(jià)值的信息。用于人類治療應(yīng)用的葡萄糖的醫(yī)學(xué)/藥物生產(chǎn)需要監(jiān)測(cè)和控制。本發(fā)明在農(nóng)業(yè)中的用途包括檢測(cè)大豆和其他農(nóng)產(chǎn)品中葡萄糖的水平。對(duì)于高價(jià)值產(chǎn)品如葡萄酒用葡萄而言，在重要的收割決定中必須仔細(xì)地監(jiān)測(cè)葡萄糖。由于葡萄糖是發(fā)酵工藝中最昂貴的碳源和原料，因此用于最佳反應(yīng)器進(jìn)料速率控制的葡萄糖監(jiān)測(cè)在動(dòng)力醇生產(chǎn)中是重要的。反應(yīng)器混合和控制葡萄糖濃度對(duì)軟飲料和發(fā)酵飲料的生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制也是至關(guān)重要的，所述生產(chǎn)在國(guó)際上消耗最大量的葡萄糖和可發(fā)酵的(鄰二醇)糖類。當(dāng)指示劑化合物引入熒光指示劑取代基時(shí)，各種檢測(cè)技術(shù)在本領(lǐng)域中也是已知的。例如，本發(fā)明的化合物可以用于熒光傳感裝置(例如，美國(guó)專利No.5，517,313)或者可以與聚合物材料如試紙結(jié)合以用于目測(cè)。例如，后一種技術(shù)允許類似于用石蕊試紙條測(cè)定pH的方式測(cè)定葡萄糖。本文所述的化合物還可以作為簡(jiǎn)單的試劑與標(biāo)準(zhǔn)臺(tái)式分析儀器一起使用，如由Shimadzu、Hitachi、Jasco、Beckman等制造的分光熒光光度計(jì)或臨床分析儀。這些分子還提供用于由OceanOptics(Dunedin，F(xiàn)lorida)或OrielOptics制造的基于光纖的傳感器和分析熒光計(jì)的分析物特異性的化學(xué)/光學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。美國(guó)專利5,517,313，在此引入其內(nèi)容作為參考，描述了一種熒光傳感裝置，其中本發(fā)明的化合物可以用于測(cè)定液體介質(zhì)中葡萄糖的存在或濃度。該傳感裝置包括含有熒光指示劑分子的基質(zhì)(下文稱為"熒光基質(zhì)")、高通過(guò)濾波器(high-passfilter)和光電檢測(cè)器的分層排列。在該裝置中，光源優(yōu)選為發(fā)光二極管("LED")，至少部分位于指示劑材料內(nèi)或指示劑基質(zhì)所處的波導(dǎo)管內(nèi)，從而使來(lái)自光源的入射光導(dǎo)致指示劑分子發(fā)熒光。高通過(guò)濾波器允許發(fā)射的光到達(dá)光電檢測(cè)器，同時(shí)濾掉來(lái)自光源的散射的入射光。在美國(guó)專利5，517，313所述的裝置中采用的指示劑分子的熒光由局部存在的葡萄糖調(diào)節(jié)，例如削弱或增強(qiáng)。在美國(guó)專利5,517,313所述的傳感器中，含有指示劑分子的材料對(duì)分析物而言是可滲透的。因此，分析物可以從周圍試驗(yàn)介質(zhì)中擴(kuò)散到該材料中，從而影響由指示劑化合物發(fā)射的熒光。光源、含有指示劑化合物的材料、高通過(guò)濾波器和光電檢測(cè)器的結(jié)構(gòu)使得至少一部分由指示劑化合物發(fā)射的熒光影響光電檢測(cè)器，從而產(chǎn)生指示周圍介質(zhì)中葡萄糖濃度的電信號(hào)。根據(jù)使用本發(fā)明的指示劑化合物的其他可能的實(shí)施方案，傳感裝置還在美國(guó)專利No.5,910,561、5,917,605禾卩5，894，351中描述，在此引入它們作為參考。本發(fā)明的化合物還可以用于可植入的裝置，例如用于在體內(nèi)連續(xù)監(jiān)測(cè)血糖水平。例如，適宜的裝置在美國(guó)專利美國(guó)專利No.6，330，464、5，833，603、6,002,954禾[l6,011,984中描述，在此引入它們作為參考。特別優(yōu)選的化合物包括圖5A和B中示出的化合物(被稱為"未取代的"和"2-甲基"的化合物不含有吸電子基，但為說(shuō)明目的而列出)。各化合物以羧酸形式示出，硼酸基團(tuán)是未保護(hù)的。然而，可以理解，例如，具有羧酸鹽形式和/或封閉的硼酸基團(tuán)的化合物也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的化合物可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員在不用進(jìn)行過(guò)度量實(shí)驗(yàn)的情況下，使用已知的反應(yīng)機(jī)理和試劑，例如包括與下述的一般過(guò)程一致的反應(yīng)機(jī)理來(lái)制備方案1從市售苯基硼酸酯合成葡萄糖指示劑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>方案2從市售苯基硼酸合成葡萄糖指示劑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>方案6從市售取代的苯基硼酸合成葡萄糖指示劑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>可以根據(jù)以下一般合成路線制備方案1中的原料化合物2C:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>應(yīng)該理解，盡管上示合成可以用于合成方案1的化合物2c，但本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解怎樣來(lái)制備化合物2a-2b和2d-2i，所有這些都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實(shí)施例1測(cè)定通過(guò)改變葡萄糖的濃度對(duì)各分子(圖5所示)的熒光的調(diào)節(jié)。結(jié)果示于圖1，表明大多數(shù)試驗(yàn)分子能很好地調(diào)節(jié)。兩種分子(4-硝基和2-甲基取代的化合物)調(diào)節(jié)不好，但仍可用作耐氧化標(biāo)記。在進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)中，用1mM過(guò)氧化氫對(duì)未取代的對(duì)照和本發(fā)明的兩種化合物(4-三氟甲基和3，4-二氟)進(jìn)行氧化處理，并測(cè)量熒光強(qiáng)度損失。數(shù)據(jù)示于圖3。實(shí)施例2使含有本發(fā)明的化合物(4-三氟甲基、3,4-二氟和4-氟)和對(duì)照(未取代的)的幾種凝膠(按實(shí)施例3制備)長(zhǎng)期接觸37°C的10pM過(guò)氧化氫和4mM葡萄糖/PBS，并測(cè)量熒光強(qiáng)度損失。數(shù)據(jù)示于圖2。此外，三種化合物的體外半衰期數(shù)據(jù)示于下表l。表中數(shù)據(jù)表明，與標(biāo)準(zhǔn)未取代的單體相比，在10pM過(guò)氧化氫存在下，3,4-二氟和4-三氟甲基類似物分別具有大約33和26倍的更長(zhǎng)的半衰期。為比較，文獻(xiàn)報(bào)道了典型的生理過(guò)氧化氫水平最大大約為0.5pM。從表中還值得注意的是平均熒光強(qiáng)度差異。兩種類似物均表現(xiàn)出較低的總調(diào)節(jié)，但基本上更大的熒光(更亮)，因而提供更強(qiáng)的信號(hào)，從而增大了信號(hào)的信噪比，因此傳感器產(chǎn)品的附帶優(yōu)點(diǎn)是分辨率更大。對(duì)于4-三氟甲基指示劑測(cè)量的較低Kd優(yōu)于人葡萄糖傳感用的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，因?yàn)槠湓谏矸秶鷥?nèi)對(duì)葡萄糖具有更大的靈敏度。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>實(shí)施例3根據(jù)本發(fā)明的兩種化合物(4-三氟甲基和3，4-二氟)和未取代的對(duì)照分別與甲基丙烯酸羥基乙基酯(HEMA)和丙烯酸共聚，并與二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)交聯(lián)，形成水不溶性的聚合物接枝，然后植入大鼠中，進(jìn)行體內(nèi)氧化22天或43天。經(jīng)植出，測(cè)量各化合物的熒光，數(shù)據(jù)示于圖4。與對(duì)照相比，本發(fā)明的化合物保持更大的熒光。實(shí)施例4按實(shí)施例3所述，將本發(fā)明的幾種化合物分別與甲基丙烯酸羥基乙基酉旨(HEMA)、丙烯酸和二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)共聚，形成水不溶性的聚合物凝膠。通過(guò)使凝膠在37°C的PBS中接觸1mM過(guò)氧化氫，分析它們對(duì)氧化劑的穩(wěn)定性。數(shù)據(jù)示于圖6。在進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)中，在37。C的PBS中的4mM葡萄糖存在下，使兩種指示劑凝膠(4-三氟甲基和4-三氟甲基砜凝膠)接觸lmM過(guò)氧化氫。數(shù)據(jù)示于圖7。從上面兩個(gè)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)計(jì)算出的半衰期示于表2。在進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)中，測(cè)量各種指示劑凝膠的020mM葡萄糖的熒光變化(調(diào)節(jié)％)，結(jié)果示于圖8。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>*在4mM葡萄糖溶液中實(shí)施例5合成3，4-二氟指示劑9-[N-[6-(4，4，5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,3-二氟節(jié)基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[]^[6-(4,4,5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，3-二氟芐基]-N-[2-(羧乙基)氨蜀甲基]蒽鈉鹽(4b)。步驟1:9-[N-[6-(4，4，5,5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,3-二氟芐基]_^[3_(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4，4,5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2，3-二氟芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3b):將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，2.40g，4.91mmol)放入150mL圓底燒瓶中，并在19mL二甲基甲酰胺中攪拌，直到溶解。在氬氣流中加入2-(溴甲基)-3，4-二氟苯基硼酸頻哪醇酯(2b，4.90，14.7mmol，3當(dāng)量)和DIEA(6.8mL，39mmol，8.0eq)并攪拌，直到全部溶解，然后在油浴中并在氬氣流中加熱到80。C保持3小時(shí)。真空除去DMF，加入醚(200mL)，用磷酸鹽緩沖液(IOOmL0.1M，pH7.0)洗滌。水溶液用醚(2xl00mL)逆流洗滌，合并醚溶液，用Na2S04干燥。真空除去醚，用己垸(100mL)研磨得到的黃色粉末15分鐘。用沸騰的80/20的乙酸乙酯/IPA研磨粗產(chǎn)物(2.60g)得到灰白色粉末，HPLC純度為~98%。合并粗樣品，通過(guò)在沸騰的80/20的乙酸乙酯/IPA中懸浮并加入乙酸乙酯直到所有固體溶解來(lái)重結(jié)晶。經(jīng)冷卻，結(jié)晶出純產(chǎn)物，灰白色粉末(1.54g，32%產(chǎn)率)。RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)(injectionloop),254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間16.4min。步驟2:9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，3-二氟芐基]^-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4，4，5,5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2,3-二氟芐基]-N-[2-(羧乙基廣基]甲基]蒽鈉鹽(4b)將9-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2,3-二氟芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[1^[6-(4,4，5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2,3-二氟芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3b，1.50g，1.51mmol)放入100mL圓底燒瓶中，并溶解在10mL60:40的CH2C12:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌達(dá)到2天或直到HPLC分析表明少于1%的原料剩余。真空除去溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在30mLCH2Cl2t，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲烷溶解/蒸發(fā)處理，直到產(chǎn)物變?yōu)辄S色粉末。粉末溶解在60mL二氯甲垸中，并以使得溫度保持在低于5°C的速率下滴加到250mL冷的飽和NaHC03水溶液中。溶液在<5°C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)層用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到1.21g黃色粉末。粗產(chǎn)物溶解在30mL無(wú)水CH2Cl2中，并轉(zhuǎn)移到100mL圓底燒瓶中。PS-DEAM珠(0.38g)加到燒瓶中，反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下?lián)u動(dòng)16h。過(guò)濾珠，用5mL二氯甲院洗滌。合并有機(jī)溶液，真空濃縮。得到純產(chǎn)物(0.979g，68%)，黃色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0,010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間14.1min。iH麗R(400MHz，CDC13):S1.32(s，12H)，1.33(s，12H)，1.50(m，5H，0=C-C(CH2)CS3)，N-CH2Cg2CH2-N)，2.33(t，2H)，2.38(t，2H)，2.78(m，2H)，2,83(m，2H)，4,21(s，2H)，4.41(s，4H)，4.60(s，2H)，4,90(t，1H，C=Cg2)，4.95(s，1H，C《壓)，5.25(br，1H，NH)，7.15-7.25(m，1H，Arg)，7.28-7.32(m，1H)，7.35(m，4H，Aiii)，7.68(dd，1H，Arg)，7.82(dd，1H，A坦)，7.8(d，2H，ArH)，8.20(d，2H，Arg)。ESI-MS(TFA/乙腈/水)720.3(M-3H20+H)+，738.3(M-2H20+H)+，756.4(M-H20+H)+，794.2(M+Na)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。實(shí)施例6合成4-三氟甲基指示劑9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基)芐基]-N-p-(羧乙基)氨萄甲基]蒽鈉鹽(40)步驟1:9-[N-[6-(4,4，5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6陽(yáng)(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷萄-3-(三氟甲基)芐基]->^[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3c)將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，2.10g，4.29mmol)放入250mL圓底燒瓶中。將其溶解在5mL脫氣的二甲基甲酰胺中。2-(溴甲基)-4-(三氟甲基)苯基硼酸頻哪醇酯(2c，3.80，10.4mmol，2.4當(dāng)量)溶解在4mL氮?dú)鈬娚涞腄MF中，并加到反應(yīng)燒瓶中。攪拌溶液并用氮?dú)鉀_洗5分鐘。DIEA(6.0mL，34mmo1，8.0當(dāng)量)加到反應(yīng)混合物中，溶液在溫和氮?dú)饬飨潞驮诤诎抵性诃h(huán)境溫度下攪拌2晚。48h后，真空蒸發(fā)溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在100mL二氯甲烷中，用2x50mL份磷酸鹽緩沖液(O.lM，pH7.0)萃取。真空干燥和蒸發(fā)二氯甲烷溶液，得到金色油狀殘余物。粗產(chǎn)物用10mL己垸攪拌15-30分鐘，直到黃色沉淀出現(xiàn)。過(guò)濾，測(cè)定產(chǎn)物重量(3.5g黃色粉末)。通過(guò)多次結(jié)晶從熱2-丙醇來(lái)純化粗產(chǎn)物(<2mLIPA/克化合物)。收集純產(chǎn)物(3c)(~1.5g)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間17.8min。，HNMR(400MHz，CDC13):51.25(s，9H，C(QJ3)3)，1.32(s，12H，O-C(CH3)2C(Cg3)2，C-O)，1.35(s，12H，0-C(Cg3)2C(CH3)2，C-O)，1.46(s，3H,0=C-C(CH2)CH3)，1.65(m，2H，N-CH2CH2CH2-N)，2.43(t,2H)，2.52(t，2H)，2.88(t，2H)，3.04(m，2H)，3.98(s，2H)，4.05(s，2H)，4.42(s，2H)，4.45(s，2H)，4.82(s，1H)，4.88-4.90(br，2H，與CJL重疊的NH)，7.38-7.42(m，5H，Arg)，7.50(d，1H，ArH)，7.63(s，1H，Arg)，7.80(m，2H，A邸，7.89(d，1H，A坦)，8.32(m，4H，A邸。ESI-MS(TFA/乙腈/水)858.4(M-2H20+H)+，876.3(M-H20+H)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。步驟2:9-[N-[6-(4，4,5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲基)芐基]_N_[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基)芐基]->^[2-潔乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(4c)將9-[N-[6-(4A5,5-四甲基-l,3;二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基)芐基]-N—[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]—10-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟-甲基)芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨萄甲基]蒽(3c，1.037g，0.980mmol)放入250mL圓底燒瓶中，并溶解在10mL的60:40脫氣的CH2Cl2:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌24-48h或直到HPLC分析表明少于1%的原料剩余。殘余產(chǎn)物用30mLCH2Cl2洗滌，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲垸洗滌，直到產(chǎn)物變?yōu)辄S色粉末。粉末溶解在60mL二氯甲垸中，并以使得溫度保持在低于5。C的速率下滴加到240mL冷的飽和NaHC03水溶液。溶液在<5°C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)萃取物用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到lg黃色粉末。粗產(chǎn)物溶解在10mL無(wú)水CH2Cl2中，并轉(zhuǎn)移到100mL圓底燒瓶中。將PS-DEAM珠(0.55g，1mmol，1eq)加到燒瓶中，反應(yīng)混合物用氮?dú)鉀_洗2分鐘。溶液在環(huán)境溫度下?lián)u動(dòng)16h。過(guò)濾珠，用2xl0mL二氯甲烷洗滌。合并有機(jī)溶液，真空濃縮。得到純產(chǎn)物(4c)(0.603g，60%指示劑)。結(jié)構(gòu)確定mp:91-95。C(未校正)RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，Waters4.6x100mmSymmetry3.5(iC18柱(帶有SentryC18保護(hù)柱)，0.010mL注射(樣品溶解在含有1%v/vTFA的70/30水/MeCN中)，0.100mL注射環(huán)，0.75mL/min，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%TFA)禾口B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min,18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間14.9min。H麗R(400MHz，CDC13):S1.34(s，12H)，1.38(s，12H)，1.58-1.60(m，5H，0=C-C(CH2)Cg3)，N-CH2CH2CH2-N)，2.31(t，2H)，2.44(t，2H)，2.87(m，2H)，2.92(m，2H)，4.05(s，2H)，4.35(s，2H)，4.44(s，2H)，4.55(s，2H)，4.95(t，1H，C=Qi2)，5,05(s，1H，C=CH2)，5.3-5.4(br，1H，NH)，7.38-7.42(m，4H，A邸，7.52(d，1H，A坦)，7.68(d，1H，A坦)，7.80(brs，1H，A坦)，7,85-7.90(m，3H，A坦)，7.91(d，1H，A邸，8.12(d，1H，A邸，8.28(d，2H，A邸。ESI隱MS(TFA/乙腈/水)802.4(M-2H20+H)+，820.3(M-H20+H)+，838.4(M+H)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。實(shí)施例7合成4-氟指示劑9-[^[6-(4，4，5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氟芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-氟芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(4d)步驟1:9-[N-[6-(4，4,5，5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-氟芐基]_1^_[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4,4,5，5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氟芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨萄甲基]蒽(3d):在5mL二甲基甲酰胺中攪拌9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(1，718g，1.47mmol)，直到溶解。加入2-(溴甲基)-4-氟苯基硼酸頻哪醇酯(2d，1.85g，5.87mmol，4叫)和DIEA(1.52g，12mmol，8.0eq)并加熱到80°C保持18小時(shí)。然后加入醚(100mL)，溶液用磷酸鹽緩沖液(3xl00mL0.1M，pH7.0)洗滌。有機(jī)溶液用Na2S04干燥，然后真空除去。粗產(chǎn)物用己垸(2x50mL)研磨，然后從25mL沸騰的80/20的乙酸乙酯/IPA重結(jié)晶，得到灰白色粉末(0.52g，37%)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間15.7min。NMR(400MHz，CDC13):51.3(兩個(gè)重疊的單峰，24H，0-C(CH3)2C(qa3)2，C-O)，1.33(s，9H，C(CH3)3)，1.52(s，3H)，1.55(s，1H)，1.70(t，1H)，2.48(t，2H)，2.55(m，2H)，2.82(t，2H)，3.08(m，2H)，3.85(s，2H)，4.05(s，2H)，4.45(s，2H)，4.55(s，2H)，4.82(d，2H)，5.05(br，1H)，6.83(t，1H)，6.84(t，1H)，7.08(dd，1H)，7.20(dd，1H)，7.44(m，4H)，7.68(dd，1H)，7.78(dd，1H)，8.36(m，2H)，8.45(m，2H)。ESI-MS:957(M+H)+，874.4(M+H)+，對(duì)于單硼酸酯一元酸，792.3(M+H)+和774.2(M-H20+H)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下觀察到硼酸酯和酸。步驟2:9-[N-[6-(4,4，5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氟芐基]_^[3_(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]_10_[^[6_(4,4,5，5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-氟芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(4d)將9-[N-[6一(4，4,5,5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氟芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4，4，5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氟芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3d，0.450g，0.47mmol)溶解在10mL的60:40CH2C12:TFA溶液中，在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)。反應(yīng)溶液用二氯甲烷(30mL)稀釋，然后分3次加到快速攪拌的冰冷的飽和NaHC03水溶液中。分離有機(jī)層，用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和真空濃縮，得到0.32g黃色粉末。粗產(chǎn)物溶解在無(wú)水CH2C12中，用PS-DEAM珠搖動(dòng)過(guò)夜。過(guò)濾珠，真空除去有機(jī)溶劑。得到純產(chǎn)物(0.235g，55%)，黃色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0,1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間13.7min。'H應(yīng)R(400MHz，CDC13):31.33(s，12H)，1.35(s，12H)，1.62(m，5H，0=C-C(CH2)CH3)，N-CH2CH2CH2-N)，2.33(t，2H)，2.48(t，2H)，2.88(m，2H)，2.95(m，2H)，4.04(s，2H)，4.32(s，2H)，4.48(s，2H)，4.62(s，2H)，5.00(t，1H，C=CH2)，5,12(s，1H，C=Cg2)，5.48(br，1H，NH)，6.95(dt，1H)，7.15(dt，1H)，7.22(br，1H)，7.30(dd，1H)，7.48(m，4H)，7.80(dd，1H)，7.90(m，2H)，8.05(dd，1H)，8.37(m，2H)。實(shí)施例8合成2,5-二氟指示劑9-[N-[6-(4，4,5，5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,5-二氟芐基]->^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4,4,5，5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2，5-(二氟)芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(4e)步驟1:9-[N-[6-(4,4,5，5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2,5-二氟芐基]-N—[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2,5-二氟芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3e):將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，0.872g，1.78mmol)放入100mL圓底燒瓶中，并在7mL二甲基甲酰胺中攪拌，直到溶解。在氬氣流中加入6-(溴甲基)-2,5-二氟苯基硼酸頻哪醇酯(2e，1.49,4.47mmo1，2.5當(dāng)量)和DIEA(1.86g，14.4mmol，8.0當(dāng)量)并攪拌，直到全部溶解，然后在油浴中并在氬氣流中加熱到80°C過(guò)夜。加入更多的6-(溴甲基)-2,5-二氟苯基硼酸頻哪醇酯(0.300g，0.5當(dāng)量)，第二晚繼續(xù)加熱。將醚(100mL)加到反應(yīng)溶液中，用pH7.0，O.IM磷酸鹽緩沖液洗滌。有機(jī)溶液用Na2S04干燥，真空除去溶劑，殘余物用己垸(2x50mL)研磨。用沸騰己烷(50mL)處理得到的紅棕色固體，傾析，從冷卻的己烷中收集所需的產(chǎn)物(0.49g)，白色晶體。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B,100%B2min，保留時(shí)間15.0min。步驟2:9-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2，5-二氟芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4，4，5，5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2，5-二氟芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(4e)將9畫[N-[6-(4，4，5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,5-二氟芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，5-二氟芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3e，0.49)在10mL60:40中攪拌過(guò)夜，直到HPLC顯示沒(méi)有原料剩余。真空除去溶劑，殘余物溶解在二氯甲烷(3mL)中，滴加到快速攪拌的戊烷(100mL)中。過(guò)濾分離出產(chǎn)物三氟乙酸鹽，黃色粉末(0.40g)，用質(zhì)譜表征。按下述得到游離堿指示劑。粉末(0.20g)溶解在10mL二氯甲烷中，并以使得溫度保持在低于5°C的速率下滴加到100mL冷的飽和NaHC03水溶液中。分離有機(jī)層，然后用無(wú)水Na2S04干燥。將PS-DEAM珠(0.5g)加到燒瓶中，懸浮液在環(huán)境溫度下?lián)u動(dòng)過(guò)夜。過(guò)濾，真空除去溶劑，得到產(chǎn)物(95mg)，黃色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)禾卩B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間12.9min。ESI-MS(TFA/乙腈/水)720.3(M-3H20+H)+，738.3(M-2H20+H)+，756.4(M-H20+H)+，778.3(M-H20+Na)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。實(shí)施例9合成3,4-二氯指示劑9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,3-二氯芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6《4，4，5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,3-二氯芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(4f)步驟1:9-[N-[6-(4，4，5,5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,3-二氯芐基]_]^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4,4，5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,3-二氯芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3f):將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-P-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，0.25g，0.51mmol)放入100mL圓底燒瓶中，在5mL二甲基甲酰胺中攪拌，直到溶解。加入2-(溴甲基)-3，4-二氯苯基硼酸頻哪醇酯(2f，0.56，1.5mmo1，3.0當(dāng)量)禾口DIEA(0.7mL，4.1mmol，8.0eq)，并在黑暗中在氮?dú)庵性谑覝叵聰嚢?8h。真空除去DMF;加入二氯甲垸(20mL)，用磷酸鹽緩沖液(40mL0.1M，pH7.0)洗滌。收集二氯甲烷溶液，用Na2S04干燥。真空除去二氯甲烷，在氮?dú)饩徛鲃?dòng)下將得到的黃色殘余物用己烷(IOmL)研磨15分鐘。用冷的IPA研磨粗產(chǎn)物(0.41g)得到黃色粉末，HPLC純度為89%(0.29g，54%產(chǎn)率)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A:水(0.1。/。v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間16.4min。^薩R(400MHz，CDC13):S1.22(s，9H)，1.32(s，12H)，1.38(s，12H)，1.56(bs，5H)，2.35(t，2H)，2.50(t，2H)，2.78(t，2H)，2.91(q，2H)，4.20(s，2H)，4.28(s，2H)，4.38(s，2H)，4.91(s，2H)，4.50(bs，1H)，4.65(s，1H)，4.79(s，1H)，7.36(m，4H)，7.45(m,2H)，7.69(d，2H)，8.16(m，4H)。步驟2:9-[N-[6-(4,4，5，5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,3-二氯芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(M，5,5-四甲基-l，3,^二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，3-二氯芐基]-N-[2-(羧乙基嵐基]甲基]蒽鈉鹽(4f)將9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，3-二氯芐基]-1^-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4，4，5，5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,3-二氯芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3f，0.29g，0.27mmol)放入100mL圓底燒瓶中，并溶解在6mL的60:40CH2C12:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌17h或直到HPLC分析表明少于0.1%原料剩余。真空除去溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在10mLCH2Cl2中，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲烷溶解/蒸發(fā)處理，直到產(chǎn)物變?yōu)辄S色粉末。粉末溶解在10mL二氯甲烷中，并以使得溫度保持在低于5°C的速率下滴加到70mL冷的飽和NaHC03水溶液中。溶液在<5°C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)層用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到0.23g黃色粉末。粗產(chǎn)物溶解在10mL無(wú)水CH2C12中，并轉(zhuǎn)移到100mL圓底燒瓶中。PS-DEAM珠(0.13g，leq)加到燒瓶中，反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下?lián)u動(dòng)16h。過(guò)濾珠，用5mL二氯甲垸洗滌。合并有機(jī)溶液，真空濃縮。得到純產(chǎn)物(0.2g，71%)，黃色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間14.1min。'H固R(400固z，CDC13):51.35(s，12H)，1.38(s，12H)，1.58(m，5H)，2.28(t，2H)，2.42(t，2H)，2.70(q，2H)，2.89(t，2H)，4.28(s，2H)，4.42(s，2H)，4.48(s，2H)，4.60(s，2H)，4.92(s，1H)，4.05(m，1H)，5.30(s，1H)，7.38(m，3H)，7.49(m，4H)，7.58(d，1H)，7.72(m，1H)，7.88(d，1H)，7.91(d，1H)，8.17(m，1H)。ESI國(guó)MS(TFA/乙腈/水)822.3(M-H20+H)+，804.4(M-2H20+H)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。實(shí)施例10合成4-三氟甲氧基指示劑9-[N-[6-(4，4，5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基K3-(三氟甲氧基)芐基]-N-IX甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4，5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲氧基)芐萄-N-p-(羧乙基)氨基]甲基]-蒽鈉鹽(化)步驟1:9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲氧基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲氧基)芐基]咎[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3g)將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨萄甲基]-蒽(l，0.2g，0.41mmol)放入150mL圓底燒瓶中。將其溶解在5mL脫氣的二甲基甲酰胺中。將2-(溴甲基)-4-(三氟甲氧基)苯基硼酸頻哪醇酯(2g，0.37，0.97mmol，2.4當(dāng)量)溶解在4mL氮?dú)鈬娚涞腄MF中，并加到反應(yīng)燒瓶中。攪拌溶液并用氮?dú)鉀_洗5分鐘。D正A(0.6mL，3.5mmol，8.0當(dāng)量)加到反應(yīng)混合物中，溶液在溫和氮?dú)饬飨潞驮诤诎抵性诃h(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。24h后，真空蒸發(fā)溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在10mL二氯甲垸中，用3xl5mL分批次的磷酸鹽緩沖液(O.lM，pH7.0)萃取。真空干燥和蒸發(fā)二氯甲烷溶液，得到金色油狀殘余物。粗產(chǎn)物用5mL醚攪拌15分鐘，然后除去溶劑。黃色油狀殘余物在真空下保持30min，得到泡沫狀粉末(3g，0.41g，91%產(chǎn)率)。RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)禾口B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間15.0min。步驟2:9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲氧基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,^-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲氧基)芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(4g)將9-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲氧基)芐基]-:^-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4,4，5，5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲氧基)節(jié)基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3g，0.4g，0.37mmol)放入100mL圓底燒瓶中，并溶解在5mL的60:40脫氣的CH2C12:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌21h或直到HPLC分析表明少于0.1%原料剩余。殘余產(chǎn)物用10mLCH2Cl2洗漆，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲烷洗滌幾次。粉末溶解在IOmL二氯甲垸中，并以使得溫度保持在低于5°C的速率下滴加到80mL冷的飽和NaHC03水溶液中。溶液在<5°C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)萃取物用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到0.18g黃色粉末(4g，46%產(chǎn)率)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，Waters4.6x100mmSymmetry3.5(iC18柱(帶有SentryC18保護(hù)柱)，0.010mL注射(樣品溶解在含有1%v/vTFA的70/30的水/MeCN中)，0.100mL注射環(huán)，0.75mL/min，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%TFA)禾卩B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間12.9min。JHNMR(400MHz,CDC13):S1.32(s，12H)，1.33(s，12H)，1.51(s，6H)，2.31(bm，2H)，2.40(bt，2H)，2.82(bt，2H)，2.89(bm，2H)，3.85(s，2H)，4.22(s，2H)，4.43(s，2H)，4.56(s，2H)，4.86(d，2H)，4.88(bs，IH)，7.32(d，IH)，7.40(m，5H),7.82(d，IH)，7.92(d，IH)，7.96(m，2H)，8.40(d，2H)，8.27(m，2H)。實(shí)施例11合成4-磺酰胺指示劑9-[N-[6-(4，4,5,5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(N,N-二甲基磺酰氨基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(N,N-二甲基磺酰氨基)芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲萄蒽鈉鹽(4h)步驟1:9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(N,N-二甲基磺酰氨基)節(jié)基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4,4,5,5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(N,N-二甲基磺酰氨基)芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3h)在25mL圓底燒瓶中，將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙塞氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(1，0.27g，0.55mmol)溶解在無(wú)水DMF(2mL)中。加入2-(溴甲基)-4-(N,N-二甲基磺酰氨基)苯基硼酸頻哪醇酯(2h，0.595g，1.47mmol，2.7當(dāng)量)和DIEA(0.765mL，4.4mmol，8eq)，在氮?dú)庀略诤诎抵性谑覝叵聰嚢?9小時(shí)。真空除去DMF，加入二氯甲烷(10mL),用磷酸鹽緩沖液(2xl0mL0.1M，pH7.0)洗滌。二氯甲烷溶液用Na2S04干燥，真空過(guò)濾并除去。用己烷(2x5mL)研磨粗產(chǎn)物，得到黃色粉末，純度為90。/。HPLC(0.59g，94%產(chǎn)率)。RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)禾卩B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間14.6min。步驟2:9-[N-[6-(4,4，5，5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(N，N-二甲基磺酰氨基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(N，N-二甲基磺酰氨基)節(jié)基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(4h)將9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(N,N-二甲基磺酰氨基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4，4,5，5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(N,N-二甲基磺酰氨基)芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3h，0.44g，039mmol)放入100mL圓底燒瓶中，并溶解在從氮?dú)鈬娚涞脑噭┲苽涞?0mL的60:40CH2C12:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌28h。真空除去溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在20mLCH2Cl2中，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲烷溶解/蒸發(fā)處理4次以上，直到產(chǎn)物變?yōu)辄S色粉末。粉末溶解在20mL二氯甲垸中，并以使得溫度保持在低于5°C的速率下滴加到40mL冰冷的飽和NaHC03水溶液中。溶液在<5。C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)層用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到0.24g(57y。)產(chǎn)物，黃色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP誦HPLC條件HP1100HPLC色譜，Waters4.6x100mmSymmetry3.5pC18柱(帶有SentryC18保護(hù)柱)，0.010mL注射(樣品溶解在含有1%v/vTFA的70/30的水/MeCN中)，0.100mL注射環(huán)，0.75mL/min，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%TFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間12.7min。ESI-MS(TFA/乙腈/水)920.3(M-H20+Na)+，898.2(M-H20+H)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。實(shí)施例12合成2-甲基指示劑9-[N-[2-(4，4,5，5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-甲基芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(4，4，5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-甲基芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽(8)步驟l:2-(溴甲萄-6-甲基苯基硼酸(6):在回流CCl4中將2,6-二甲基苯基硼酸(2.22g，14.8mmo1)、NBS(1.31g，7.36mmol，0.5eq)和AIBN(0.17g，1.0mmol，0.07eq)加熱2小日寸。溶液冷卻，然后過(guò)濾。然后用水(50mL)洗滌溶液，用Na2S04干燥，真空蒸發(fā)溶劑。得到的白色粉末(1.66g)HPLC純度為84%，其含有原料和一些二溴化產(chǎn)物。硅膠60柱色譜(洗脫條件，二氯甲烷中的0%-2%甲醇)不能改善純度，粗材料用于下一步。步驟2:9-[N-[2-(4,4,5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-甲基芐基]^-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[2-(4,4,5，5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-甲基芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(7):將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，0.85g，0.17mmol)放入50mL圓底燒瓶中，在2mL二甲基甲酰胺中攪拌，直到溶解。加入2-(溴甲基)-6-甲基苯基硼斷6，389mg，1.7mmol)和D正A(0.24mL，1.4mmol，8eq)并在油浴中在充入氬氣的球形瓶(ballon)中加熱到80°C過(guò)夜。真空除去DMF，加入二氯甲烷(20mL)，用磷酸鹽緩沖液(3x10mL0.1M，pH7.0)洗滌。有機(jī)溶劑用Na2S04干燥，真空除去溶劑，得到的黃色固體用己垸(2x10mL)研磨。在硅膠60上通過(guò)快速柱色譜純化粗產(chǎn)物，用二氯甲垸中的1-5%甲醇洗脫，得到93%純材料(55mg，41%)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=zK(0.1°/。v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間15.8min。步驟3:9-[N-[2-(4,4,5，5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-甲基芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[]^[2-(4，4，5,5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-甲基芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽三氟乙酸鹽(8)將9-[N-[2-(4,4,5,5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-甲基芐基]->1-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[2-(4,4，5，5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-甲基芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(7，55mg，0.070mmol)溶解在2mL的60:40CH2C12:TFA溶液中并在充入氬氣的球形瓶中攪拌過(guò)夜。加入額外的10mL二氯甲烷，真空除去溶劑。加入二氯甲烷(10mL)，再次真空除去溶劑。重復(fù)溶解/蒸發(fā)步驟3次以上。粗產(chǎn)物用醚(10mL)然后用庚烷(3mL)研磨，得到~卯％純產(chǎn)物，三氟乙酸鹽(59mg，88%)，黃色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)禾口B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B,100%B2min，保留時(shí)間14.2min。ESI-MS(TFA/乙腈/水)694.4(M-2H20+H)+，712.4(M-H20+H)+，730.4(M+H)+。實(shí)施例13合成4-氰基指示劑9-[N-[6-(4，4,5，5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氰基芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基)]甲基]-10-[^[6-(4，4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-氰基芐基]-N-[2-(羧乙基廣基]甲基]蒽鈉鹽(14a)步驟1:3-甲基-4-(4，4,5，5-四甲基-[l,2,3]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-芐腈(lla)將4-溴-3-甲基芐腈(9a，5.0g，0.0255mol，1.0當(dāng)量)放入含有153mL無(wú)水二甲基甲酰胺的250mL圓底燒瓶中。醋酸鉀(7.5g，0.076mol，3當(dāng)量)，4,4，4'，4',5,5,5'，5'-八甲基-2,2'-雙-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸(10，7.12g，0.028mol，U當(dāng)量)和[U'-雙(二苯基膦基)-二茂鐵]二氯化鈀(II)(0.56g，0.00076mol，0.03當(dāng)量)加到燒瓶中，反應(yīng)混合物加熱到80°C保持24h。將溶液冷卻到環(huán)境溫度，熱過(guò)濾懸浮液。真空除去收集的溶劑。得到的油狀深棕色產(chǎn)物溶解在200mL乙酸乙酯中并轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。加入250mL水，萃取溶液。收集有機(jī)層，用無(wú)水Na2S04干燥。真空除去溶劑。在硅膠60上通過(guò)快速柱色譜純化粗產(chǎn)物(洗脫條件2。/。-20。/。EtOAc/己垸)。收集大約5g材料。通過(guò)結(jié)晶從熱己烷進(jìn)一步純化產(chǎn)物。得到純產(chǎn)物(lla)(3.7g，產(chǎn)率60%)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，3.9x150mmSymmetryColumnHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%TFA)禾口B=MeCN(0.1%TFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間10.7min。]HNMR(400MHz，CDC13):51.35(s，12H，C(Qi3)3)，2.55(s，3H，Qi3)，7.41(m，2H，A邸，7.81(m，1H，A坦)。步驟2:3-溴甲基-4-(4,4,5，5-四甲基-[l，2，3]二氧雜環(huán)戊硼垸-2-基)-芐腈(12a)將3-甲基-4-(4，4,5，5-四甲基-[l，2，3]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-芐腈(lla，3.3g，0.0136mol，1.0eq)放入含有50mL四氯化碳的250mL圓底燒瓶中。加入NBS(2.5g，0.0142mol，1.05當(dāng)量)和催化量的2，2'-偶氮二異丁腈(0.03g，0.00018mol，0.014當(dāng)量)，反應(yīng)混合物回流53h。熱過(guò)濾得到的溶液，然后42真空除去溶劑。通過(guò)結(jié)晶從熱己垸純化粗產(chǎn)物。得到含有一些lla的產(chǎn)物(12a)(3.08g，70%)。結(jié)構(gòu)確定，RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，3.9x150mmSymmetryColumnHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%TFA)禾口B=MeCN(0.1%TFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間13.4min。^NMR(400MHz，CDC13):51.38(s，12H，C(CH3)3)，4.85(s，2H，CHjBr),7.55(d,1H，A但)，7.68(s，1H，A坦)，7.92(d，1H，Arg)。步驟3:9-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氰基芐基]->^-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4，4,5，5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)各氰基芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]葸(13a)將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，0.3g，0.00061mol，1.0eq)放入25mL圓底燒瓶中，并溶解在4.5mL脫氣的二甲基甲酰胺中。將3-溴甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,2,3]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-芐腈(12a，0.53，0.0016mol,2.7eq)溶解在2mL氮?dú)鈬娚涞腄MF中，并加到反應(yīng)燒瓶中。攪拌溶液并用氮?dú)鉀_洗5分鐘。將DIEA(0.85mL，0.0049mol，8.0當(dāng)量)加到反應(yīng)混合物中，溶液在溫和氮?dú)饬飨潞驮诤诎抵性诃h(huán)境溫度下攪拌26h。真空蒸發(fā)反應(yīng)溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在20mL二氯甲烷中，用2x10mL分批次的磷酸鹽緩沖液(O.lM，pH7.0)萃取。合并二氯甲垸萃取物，真空干燥和蒸發(fā)，得到金色油狀殘余物。粗產(chǎn)物用5mL己烷攪拌15-30分鐘，直到黃色沉淀出現(xiàn)。過(guò)濾，測(cè)定產(chǎn)物重量(~0.9g黃色粉末)。通過(guò)多次結(jié)晶從熱2-丙醇(~3mLIPA)來(lái)進(jìn)一步純化粗產(chǎn)物。收集純產(chǎn)物(13a)(0.07g，HPLC純度為98.8%)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，Waters3.9x150mmSymmetryColumnHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1,500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間15.2min。'H麗R(400MHz，CDC13):S1.31(s，12H，0-C(CH3)2C(QJ3)2，C-O)，1.34(s，12H，0-C(CSb)2C(CH3)2，C-O)，1.35(s，9H，C(Q33)3)，1.63(m，3H，N-CH2Qi2CH2-N+NIi重疊)，2.51(m，4H)，2.59(t，2H)，3.10(q，2H)，3.89(s，2H)，3.99(s，2H)，4.45(s，2H)，4.53(s，2H)，5.09(m，1H)，5.13(s，1H)，5.22(t，1H)，7.29(d，1H，A邸，7.42(d，1H，A邸，7.50(m，5H，A但)，7.62(d，1H，A邸，7.70(s，1H，A邸，7.78(d，1H，A坦)，8.35(m，2H，ArH)，8.41(d，2H，Ar出。ESI-MS:m/z7卯.4(M+，100%)。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。步驟4:9-[N-[6-(4,4，5，5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-氰基芐基〗-^[3-(甲基丙烯酰胺基)-丙基氨基]甲基]-10-|>46-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-氰基芐基]-N-[2-(羧乙基嵐基]甲基]蒽鈉鹽(14a)將9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氰基芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)-丙基氨基]甲基]-10-1^-[6-(4，4，5，5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-氰基芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(13a，0.064g，0.066mmol，1.0eq)放入25mL圓底燒瓶中，并溶解在2.5mL的60:40脫氣的CH2C12:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌24h。殘余產(chǎn)物用5mLCH2Cl2洗滌，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲烷洗滌，直到產(chǎn)物變?yōu)辄S色粉末。粉末溶解在IOmL二氯甲烷中，并以使得溫度保持在低于5°C的速率下滴加到20mL冷的飽和NaHC03水溶液中。溶液在<5°C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)萃取物用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到0.042g黃色粉末。粗產(chǎn)物溶解在3mL無(wú)水CH2C12中，并轉(zhuǎn)移到25mL圓底燒瓶中。PS-DEAM珠(0.039g，1mmol，1eq)加到燒瓶中，反應(yīng)^^合物用氮?dú)鉀_洗2分鐘。溶液在環(huán)境溫度下?lián)u動(dòng)16h。過(guò)濾珠，用2xl0mL二氯甲垸洗滌。合并有機(jī)溶液，真空濃縮。得到純產(chǎn)物(14a)(34mg指示劑)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，Waters4.6x100mmSymmetry3.5jnC18柱，0.010mL注射(樣品溶解在含有1%v/vTFA的70/30水/MeCN中)，0.100mL注射環(huán)，0.75mL/min，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%TFA)禾卩B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間12.9min。JH麗R(柳MHz，CDC13):51,33(s，12H)，1.36(s，12H)，1.65(m，2H)，1.71(bs，3H)，2'35(t，2H)，2.48(t,2H)，2.88(t，2H)，2.98(q，2H)，4.01(s，2H)，4.25(s,2H)，4.48(s，2H)，4.58(s,2H)，5.10(s，IH)，5.28(s，IH)，5.61(bs，IH)，7.45(m，5H)，7.65(d，IH)，7.72(d，2H)，7郡，IH)，7.92(d，2H)，8.05(d，IH)，8.30(d，2H)。實(shí)施例14合成4-硝基指示劑9-[N-[6-(4,4，5，5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-硝基芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-硝基芐蜀-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(14b).步驟1:3-硝基-6-(4,4,5，5-四甲基-[l,2，3]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-甲苯(lib)將2-溴-5-硝基甲苯(9b，10.2g，47.2mmol)放入含有醋酸鉀(7.14g，72.7mmol)、4，4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷(10,13.3g，52.3mmol)、[l，l'-雙(二苯基膦基)-二茂鐵]二氯化鈀(n)(413mg，0.506mmol)和DMSO(50mL)的100mL圓底燒瓶中，反應(yīng)混合物加熱到80°C保持4天。溶液冷卻到環(huán)境溫度，加入冰水(125mL)，用乙酸乙酯(3xl00mL)萃取黑色懸浮液。真空除去溶劑，在硅膠60上通過(guò)快速柱色譜純化粗產(chǎn)物，用己烷然后用5。/。EtOAc/己烷洗脫。從最純餾分得到大約95%純產(chǎn)物(2.09g，17%)。結(jié)構(gòu)確定-RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間10.48min。'HNMR(400MHz，CDC13):51.36(s，12H，C(Cg3)3)，2.62(s，3H，Qi3)，7.89(d，2H，A坦)，7.92(dd，1H，A邸，7.97(d，1H)。步驟2:3-溴甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[l，2,3]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-硝基苯(12b)將3-硝基-6-(4，4，5，5-四甲基-[l，2，3]二氧雜環(huán)戊硼垸-2-基)-甲苯(llb，3.59g，13.6mmol)放入含有50mL苯的500mL圓底燒瓶中。加入NBS(2.68g，15.0mmol，1.1當(dāng)量)和催化量的2，2'-偶氮二異丁腈(AIBN，84mg，0.5mmol)，反應(yīng)混合物在氬氣流中回流3.5h。加入額外的NBS(0.27g，1.5mmol，0.1eq)，繼續(xù)回流2小時(shí)以上。過(guò)濾冷卻的懸浮液，真空除去溶劑。通過(guò)結(jié)晶從熱己垸來(lái)純化粗產(chǎn)物。得到產(chǎn)物(12b)(2.12g，46%)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間12.5min。'H畫R(400畫z，CDC13):S1.40(s，12H，C(C貼)，4.92(s，2H，C腿r)，7,98(d，1H，A邸，8.08(dd，1H，A坦)，8.22(d，1H，A坦)。步驟3:9-[N-[6-(4,4,5，5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-硝基芐基]—N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-lO-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-硝基芐萄-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(13b):將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，0.509g，1.04mmol)放入100mL圓底燒瓶中，在5mL二甲基甲酰胺中攪拌，直到溶解。加入4-硝基-2-(溴甲基)苯基硼酸頻哪醇酯(12b，1.09，3.19mmol，3當(dāng)量)和DIEA(1.45mL，8.38mmol，8叫)，溶液在油浴中并在充入氬氣的球形瓶中加熱到80°C保持2小時(shí)。真空除去DMF，加入二氯甲烷(50mL)，用磷酸鹽緩沖液(2x50mL0.1M，pH7.0)洗滌。水溶液用二氯甲垸(25mL)逆流洗滌，合并有機(jī)溶液，用Na2S04干燥。真空除去有機(jī)物，用沸騰己垸研磨得到的紅黃色油兩次(每次50mL)，得到棕褐色粉末。用沸騰的80/20乙酸乙酯/IPA研磨，得到145mg純產(chǎn)物，棕褐色粉末。從冷卻的乙酸乙酯/IPA中析出更多的純產(chǎn)物(400mg)，合并純的固體。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)禾BB=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間16.0min。^NMR(400MHz，CDC13):51.32(s，12H，0-C(Cii3)2C(QJ3)2，C-O)，1.36(s，21H，0-C(Cg3)2C(CH3)2，C-0+叔丁基)，1.65(s，3H，0=C-C(CH2)CH3)，1.75(m，2H，N-CH2CH2CH2-N)，2.55(t，2H)，2.59(t，2H)，3.0(t，2H)，3.15(m，2H)，3.96(s，2H)，4.05(s，2H)，4.48(s，2H)，4.55(s，2H)，5,04(s，1H)，5.08(s，1H)，5.25(br，1H)，7.44-7.52(m，4H，A坦)，7.64(d，1H)，7.76(dd，1H，A坦)，7.80(d，1H)，7.92(dd，1H)，7.96(d，1H，A邸，8.25(d，1H，輔)，8.36-8.44(m，4H，A邸。步驟4:9-[N-[6-(4，4,5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-硝基芐基]—N—[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]_10_[N-[6-(4，4,5，5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3_硝基芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(14b)將9_[N-[6-(4，4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-硝基芐基]—N-[3—(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-l0-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-硝基芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(13b，0.499g，0.493mmol)溶解在10mL60:40的CH2C12:TFA溶液中，攪拌過(guò)夜。真空除去溶劑，殘余產(chǎn)物溶解在20mLCH2C12中，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲烷溶解/蒸發(fā)處理4次以上，直到產(chǎn)物變?yōu)辄S色粉末。粉末溶解在20mL二氯甲烷中，并以使得溫度保持在低于5°C的速率下滴加到80mL冷的飽和NaHCO3水溶液中。溶液在<5°C下再攪拌5min。加入額外的二氯甲烷(50mL)以輔助分配各層。有機(jī)萃取物用無(wú)水Na^04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到157mg黃色粉末。粗產(chǎn)物溶解在10mL無(wú)水CH2Cl2中，并轉(zhuǎn)移到100mL圓底燒瓶中。加入PS-DEAM珠(0.10g)，用隔膜密封燒瓶并用氬氣沖洗，反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下?lián)u動(dòng)16h。過(guò)濾珠，用二氯甲烷洗滌(2x10mL)。合并有機(jī)溶液，真空濃縮。得到純產(chǎn)物(0.125mg，26%),黃色粉末。47結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，0.75mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0,1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B，2min內(nèi)80-100%B,100%B2min，保留時(shí)間13.7min。實(shí)施例15合成4-三氟甲基砜指示劑9-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲基磺?；?芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲基磺酰基)芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(21)步驟l:4-溴-3-甲基苯磺酰氟(16)將4-溴-3-甲基苯磺酰氯(15，9.87g，36.6mmo1)、無(wú)水氯化鉀(8.50g，146mmol，4eq)和18-冠-6(0.299g，1.13mmol，0.03eq)在無(wú)水乙腈(20mL)中攪拌過(guò)夜，直到HPLC表明原料完全轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。將水(100mL)加到反應(yīng)混合物中，分離出產(chǎn)物，油狀。傾析水溶液，然后用己垸(50mL)萃取。油溶解在己垸萃取物中，用Na2S04干燥，真空除去溶劑。分離出蠟狀白色固體(8.08g，87%)。M.p.=47-48。C.結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，Waters4.6x100mmSymmetry3.5pC18柱(帶有SentryC18保護(hù)柱)，0.010mL注射(樣品溶解在含有1%v/vTFA的60/40的水/MeCN中)，0.100mL注射環(huán)，1.50mL/min，254腿檢測(cè)，A=水(0.1%TFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10o/oBlmin，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間10.5mm.NMR(400MHz，CDC13):S2.5(s，3H)，7.68(dd，1H)，7.80(d，1H)，7.86(d，1H)。歩驟2:6_溴-3-(三氟甲基磺?；?甲苯(17)在備配有滴液漏斗的烘箱干燥的2頸燒瓶中使TASF(0.61g，2.2mmol)懸浮在無(wú)水戊烷(40mL)中，并冷卻到5。C。加入溶解在戊烷(40mL)中的4-溴-3-甲基苯磺酰氟(16，5.00g，19.8mmol)，將溫度計(jì)插入懸浮液中。將溶解在戊烷(20mL)中的三甲基三氟甲基硅烷(TFM-TMS，6.4mL，41mmol，2.1eq)通過(guò)滴液漏斗滴加到懸浮液中，使得反應(yīng)溫度保持在4-5。C。攪拌繼續(xù)5小時(shí)，同時(shí)使懸浮液升溫。從棕色固體傾析出透明溶液，用水(100mL)洗滌，用Na2S04干燥，真空過(guò)濾并除去溶劑。分離出黃色油(5.35g，89%),然后放置結(jié)晶(針狀)。結(jié)構(gòu)確定RP畫HPLC條件HP1100HPLC色譜，Waters4.6x100mmSymmetry3.5^C18柱(帶有SentryC18保護(hù)柱)，0.010mL注射(樣品溶解在含有1%v/vTFA的60/40的水/MeCN中)，0.100mL注射環(huán)，1.50mL/min，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%TFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間11.0min。'HNMR(400MHz，CDC13):S2,55(s，3H)，7.70(dd，1H)，7.85(d，1H)，7.7(d，1H)。步驟3:2-甲基-4-(三氟甲基磺酰基)苯基硼酸頻哪醇酯(18)在250mL圓底燒瓶中加入醋酸鉀(5.0g，50mmol)、[l,l'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)(0.373g，0.51mmol)和雙聯(lián)(頻哪醇基pinacolato)二硼(5.2g，20mmol)并用氮?dú)鉀_洗。加入將6-溴-3-(三氟甲基磺?；?甲苯(17，5.0g，16mmol)的無(wú)水DMF(100mL)溶液，懸浮液在氮?dú)庵屑訜岬?0。C保持24小時(shí)。真空除去溶劑，得到的漿料在硅膠60(60g)上用95/5的己烷/乙酸乙酯(500mL)洗脫。除去溶劑，得到6.1g粗產(chǎn)物，白色蠟狀固體。重結(jié)晶從己垸得到3.78g(68。/。)白色晶體；第二次收集分離得到0.44g。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，Waters4.6x100mmSymmetry3.5(iC18柱(帶有SentryC18保護(hù)柱)，0.010mL注射(樣品溶解在含有1%v/vTFA的60/40水/MeCN中)，0.100mL注射環(huán)，1.50mL/min，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%TFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min,保留時(shí)間8.0min。'HNMR(400MHz,CDC13):3L37(s，12H)，2.62(s，3H)，7,80(m，2H)，8.00(d，m)。FABMS(mNBA):351(M+H)+，335(M-15)十。步驟4:2-溴甲基-4-(三氟甲基磺?；?苯基硼酸頻哪醇酯(19)在回流CC14(70mL)中加熱2-甲基-4-(三氟甲基磺?；?苯基硼酸頻哪醇酯(18，3.60g，10.3mmo1)、N-溴琥拍酰亞胺(1.92g，10,8mmol，1.04eq)和AIBN(25mg，0.15mmol，0.015eq)，同時(shí)用75瓦白熾燈泡照射5小時(shí)。然后溶液到達(dá)室溫，重力過(guò)濾和真空除去溶劑。在硅膠上純化粗產(chǎn)物，用己垸中的0、5%和然后用10%的乙酸乙酯洗脫，分離出混有一些二溴化物19和18，黃色油(2.65g，60%)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，Waters4.6x100mmSymmetry3.5|iC18柱(帶有SentryC18保護(hù)柱)，0.010mL注射(樣品溶解在含有1%v/vTFA的60/40水/MeCN中)，0.100mL注射環(huán)，1.50mL/min，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%TFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間8.7min。!H麗R(400MHz,CDC13):S1.37(s，12H)，4.92(s，2H)，7.96(dd，IH)，8.02(d，IH)，8.08(d，IH)。步驟5:9-[N-[6-(4，4,5，5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基磺?；?芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基磺?；?芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(20)將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，(X706g，1.44mmol)、2-溴甲基-4-(三氟甲基磺?；?苯基硼酸頻哪醇酯(19，2.11g)和DIEA(4.5mL，26mmol)溶解在無(wú)水DMF(12mL)中，在室溫下在氮?dú)饬髦袛嚢琛?6小時(shí)后，真空蒸發(fā)溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在30mL二氯甲烷中，用2x30mL分批次的磷酸鹽緩沖液(O.lM，pH7.0)洗滌。用Na2S04干燥二氯甲垸溶液，過(guò)濾和真空蒸發(fā)，得到橙色油。粗產(chǎn)物用己烷(10mL)研磨，然后溶解在最小量的IPA中，加入己烷，直到溶液變渾濁。真空除去溶劑，留下黃色粉末(1.93g，95%)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，Waters4.6x100mmSymmetry3.5[iC18柱(帶有SentryC18保護(hù)柱)，0.010mL注射(樣品溶解在含有1%v/vTFA的70/30水/MeCN中)，0.100mL注射環(huán)，0.75mL/min，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%TFA)禾口B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80°/。B，2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間17.4min。'H麗R(400MHz，CDC13):5L30(s，12H)，1.32(s，12H)，1.34(s，9H)，1.63(s，3H)，1.78-1.81(m，2H)，2.55-2,61(m，4H)，2.96(t，2H)，3.15(m，2H)，3.98(s，2H)，4.05(s，2H)，4.54(s，2H)，4.56(s,2H)，5.10(bs，IH)，5.12(s，IH)，5.30(bt，IH)，7.49-7.52(m，4H)，7.68(dd，IH)，7.80(m，2H)，7.84(d，IH)，7.94(s，IH)，8,18(s，IH)，8.40-8.42(m，4H)。ESI-MS(TFA/乙腈/水)1004.2(M-H20+H)+，1006.2(M-H20+Na)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。步驟6:9-[N-[6-(4，4，5，5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲基磺?；?芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺萄丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4，4,5，5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基磺酰基)節(jié)基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(21)'9-[N-[6-(4，4,5,5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲基磺?；?芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基磺?；?節(jié)萄-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(20，1.00g，843mmol)溶解在從氮?dú)鈬娚涞脑噭┲苽涞?0mL60:40CH2C12:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌22h，然后真空除去溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在30mLCH2Cl2中，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲烷溶解/蒸發(fā)處理4次以上，直到產(chǎn)物變?yōu)辄S色粉末。粉末溶解在30mL二氯甲烷中，并以使得溫度保持在低于5。C的速率下滴加到60mL冰冷的飽和NaHC03水溶液中。溶液在<5°C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)層用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到0.58g(60%)產(chǎn)物，黃色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，Waters4.6x100mmSymmetry3.5pC18柱(帶有SentryC18保護(hù)柱)，0.010mL注射(樣品溶解在含有1%v/vTFA的70/30水/MeCN中)，0.100mL注射環(huán)，0.75mL/min，254nm檢測(cè)，A=水(0.1。/oTFA)禾口B:MeCN(0.10/0v/vTFA)，梯度10%B2min，18min內(nèi)10-80%B,2min內(nèi)80-100%B，100%B2min，保留時(shí)間15.5min。'H麗R(400MHz，CDC13):S1.32(s，12H)，1,35(s，12H)，1.69-1.72(m，5H)，2.41(t，2H)，2.53(t，2H)，2.89(t，2H)，3.03(dd，2H)，4.07(s，2H)，4.23(s，2H)，4.54(s，2H)，4.60(s，2H)，5.09(s，1H)，5.26(s，1H)，5.56(m，1H)，7.45-7.49(m，4H)，7.82(m，2H)，7.91(m，1H)，7.98(d，1H)，8.10-8.16(m，4H)，8.39(m，2H)。ESI-MS(TFA/乙腈/水)948.0(M-H20+H)+，970.0(M-H20+Na)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。實(shí)施例16合成3,5-二氯-指示劑9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,4-(二氯)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基〗甲基]-10-[N-[6-(4,4,5，5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，4-(二氯)芐基]-N-[2-(羧乙萄氨基]-甲萄蒽鈉鹽(4i)步驟1:9-[N-[6-(4，4，5,5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，4-(二氯)節(jié)基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)^，4-(Zl氯)芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲萄蒽(3i):將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，0.4g，0.82mmol)放入100mL圓底燒瓶中，并在10mL二甲基甲酰胺中攪拌，直到溶解。在氮?dú)庵屑尤?-(溴甲基)-3,5-二氯苯基硼酸頻哪醇酯(2i，0.83g，2.3mmo1，2.4當(dāng)量)和DIEA(1.14mL，6.6mmo1，8.0eq)，在黑暗中在室溫下攪拌24h。真空除去DMF，加入二氯甲烷(30mL)，用磷酸鹽緩沖液(50mL0.1M，pH7.0)洗滌。收集二氯甲烷溶液，用Na2S04干燥。真空除去二氯甲垸，得到的黃色泡沫狀殘余物，在氮?dú)饩廸曼流動(dòng)下用己烷(IOmL)研磨15分鐘。從熱IPA結(jié)晶粗產(chǎn)物(1.02g)，得到黃色粉末(3i，0.38g，44%產(chǎn)率)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/mm，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間8.7min。^麗R(400MHz，CDC13):S1.23(s，9H)，1.32(s，12H)，1.37(s，12H)，1.41(bs，3H)，1,52(m，2H)，2.36(t，2H)，2.48(t，2H)，2.76(t，2H)，2.89(q，2H)，4.12(s，2H)，4.16(s，2H)，4.37(s，2H)，4.43(s，2H)，4.56(t，IH)，4.67(s，IH)，4.82(t，IH)，7.36(m，4H)，7.48(d，IH)，7.56(d，IH)，7.76(t，2H)，8.17(m，2H)，8.24(m,2H)。步驟2:9-[N-[6-(4,4，5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，4-(二氯)芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[1^[6-(4,4,5,5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,4-(:i氯)節(jié)基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(4i)將9-[N-[6-(4，4，5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2，4-(二氯)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)-丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,4-(二氯)芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(3i，0.38g,0.36mmol)放入50mL圓底燒瓶中，并溶解在10mL的60:40CH2C12:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。20h后，真空除去溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在10mLCH2Cl2中，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲垸溶解/蒸發(fā)處理，直到產(chǎn)物變?yōu)辄S色粉末。粉末溶解在30mL二氯甲烷中，并以使得溫度保持在低于5°C的速率下滴加到50mL冷的飽和NaHC03水溶液中。溶液在<5°C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)層用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到黃色粉末。粗產(chǎn)物溶解在15mL無(wú)水CH2C12中，并轉(zhuǎn)移到100mL圓底燒瓶中。PS-DEAM珠(0.2g，leq)加到燒瓶中，反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下?lián)u動(dòng)16h。過(guò)濾珠，用10mL二氯甲烷洗滌。合并有機(jī)溶液，真空濃縮。得到純產(chǎn)物(0.19g，52%產(chǎn)率)，黃色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間7.9min。ESI-MS(TFA/乙腈/水)822.11(M-H20+H)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。實(shí)施例17合成3,5-雙(三氟甲基)指示劑9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2，4-雙(三氟甲基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4，4，5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2,4-雙(三氟甲基)芐基]-N-[2-(羧乙基廣基]-甲基]蒽鈉鹽(273)步驟l:2-溴-4,6-雙(三氟甲基)甲苯(23a)將2，4-雙(三氟甲基)甲苯(22a，12.7g，56mmol)放入圓底燒瓶中。然后加入28mlTFA和7.8mlH2S04(TFA的量為28%)。以少量將NBS(10.0g，56mmol，1eq)加到反應(yīng)混合物中。反應(yīng)在環(huán)境溫度下進(jìn)行2天。48h后，處理反應(yīng)。反應(yīng)混合物倒在冰冷水(200ml)上，通過(guò)用Et20萃取從水層分離有機(jī)層(油狀殘余物)。用飽和的NaHC03水溶液洗滌醚層，然后分離各層。收集有機(jī)層，用Na2S04干燥，除去溶劑。收集純產(chǎn)物(13.1g，77%產(chǎn)率)，微黃色油。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間12.3min。'H薩R(400顧z，CDC13):52.54(s，3H)，7.64(s，1H)，8.00(s，1H)。步驟2:2-M乙基-3，5-雙(三氟甲萄苯基硼酸頻哪醇酯(24a)將2-溴-4,6-雙(三氟甲基)甲苯(23a，10.0g，30mmol)放入圓底燒瓶中，并溶解在200mlDMF中。然后一次將KOAc(8.8g，90mmol，3eq)加到反應(yīng)混合物中，然后加入PdCl2(dppf)(0.66g，0.9mmol，0.03eq)和雙聯(lián)(頻哪醇基)二硼(bis(pinacolato)diboron)(10.2g，45mmo1，1.5eq)。溶液在80。C下攪拌24h。然后除去溶劑，對(duì)黑色殘余物進(jìn)行塞柱色譜(plugcolumnchromatography,DCM)，得到深綠色油狀殘余物。通過(guò)二次柱色譜進(jìn)一步純化化合物(2。/。MeOH/DCM)。收集純產(chǎn)物(8.7g，76%)，微綠色油。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min,9min內(nèi)10-80%B,1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間9.1min(對(duì)于硼酸)和12.8min(對(duì)于頻哪醇酯)。'H麗R(400MHz，CDC13):S1.36(s，12H)，2.75(s，3H)，7,90(s，1H)，8.16(s，1H)。步驟3:2-(溴甲基)-3，5-雙(三氟甲基)苯基硼酸頻哪醇酯(25a)將2-甲基-3，5-雙(三氟甲基)苯基硼酸頻哪醇酯(24a，2.0g，5.6mmol)和50mlCCU放入250ml圓底燒瓶中。加入NBS(1.05,5.88mmol，1.05eq)和AIBN(0.013g，0.078mmol，0.014eq)，反應(yīng)混合物在75W白熾燈泡存在下回流3h。3h后，將溶液冷卻到室溫，使琥珀酰亞胺沉淀析出。過(guò)濾出固體。除去溶劑，收集油狀產(chǎn)物。通過(guò)用己垸研磨來(lái)純化粗產(chǎn)物，得到90%純產(chǎn)物(25a，2.2g，90%產(chǎn)率)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254歸檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間9.7min(對(duì)于硼酸)和12.9min(對(duì)于頻哪醇酯)。H薩R(400MHz，CDC13):51.41(s，12H)，5.08(s，2H)，7.94(s，1H)，8.24(s，1H)。步驟4:9-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2,4-雙(三氟甲基)芐基]—N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，4-雙(三氟甲基)芐蜀-^[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(26a)將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，0.8g，1.6mmol)放入250mL圓底燒瓶中。溶解在15mL脫氣的二甲基甲酰胺中。將2-(溴甲基)-3，5-雙(三氟甲基)苯基硼酸頻哪醇酯(25a，1.66g，3.8mmo1，2,4eq)溶解在5mL氮?dú)鈬娚涞腄MF中并加到反應(yīng)燒瓶中。攪拌溶液并用氮?dú)鉀_洗5分鐘。D正A(2.2mL，12.8mmol，8.0當(dāng)量)加到反應(yīng)混合物中，溶液在溫和氮?dú)饬飨虏⒃诤诎抵性诃h(huán)境溫度下攪拌4晚。96h后，反應(yīng)在60°C下持續(xù)4.5h。然后冷卻反應(yīng)，真空蒸發(fā)溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在50mL二氯甲烷中，用2x70mL分批次的磷酸鹽緩沖液(0.1M，pH7.0傳取。真空干燥和蒸發(fā)二氯甲烷溶液，得到棕色油狀殘余物。用己烷(15ml)研磨粗產(chǎn)物30分鐘。收集黃色粉末，從熱IPA結(jié)晶，得到純產(chǎn)物(26a，1.2g,59%產(chǎn)率)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)禾口B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間10.8min。'H雇R(400MHz，CDC13):51.23(s，9H)，1.32(s，12H)，1.36(s，12H)，1.74(s，5H)，2.31(t，2H)，2.8(m，5H)，2.88(t，2H)，4.08(s，2H)，4.16(s，2H)，4.47(s，2H)，4.76(s，2H)，5.12(s，1H)，5.32(s，1H)，7.44(m，4H)，7.88(s，1H)，7.96(s，1H)，8.08(m，2H)，8.14(m，2H)，8.20(s，1H)，8.29(s，1H)。步驟5:9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2，4-雙(三氟甲基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2,4-雙(三氟甲基)芐基]-N-[2(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(27a)將9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,4-雙(三氟甲基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-l0-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，4-雙(三氟甲基)芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(26a，0.013g，0.011mmol)放入50mL圓底燒瓶中，并溶解在5mL的60:40脫氣的CH2Cl2:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌19h。殘余產(chǎn)物用10mLCH2Cl2洗滌，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲烷洗漆幾次。得到的油狀產(chǎn)物溶解在5mL二氯甲烷中，并以使得溫度保持在低于5。C的速率下滴加到25mL冷的飽和NaHC03水溶液中。溶液在〈5。C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)萃取物用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到0.012g黃色粉末(27a)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0,010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)禾QB=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間9.6min。ESI-MS(TFA/乙腈/水)956.0(M-H20+H)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。實(shí)施例18合成5-三氟甲基指示劑9-[N-[2-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-4-(三氟甲基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氮基]甲基]-10-[N-[2-(4,4，5,5-四-甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-4-(三氟甲基)芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]-蒽鈉鹽(27b)步驟l:l溴-4-三氟甲基甲苯("b)將4-(三氟甲基)甲苯(22b，9.0g，56mmol)放入圓底燒瓶中。然后加入20mlTFA和5.6mlH2S04(TFA的量為28%)。分少量將NBS(10.0g，56mmol，1叫)加到反應(yīng)混合物中。反應(yīng)在環(huán)境溫度下進(jìn)行過(guò)夜。20h后，處理反應(yīng)。反應(yīng)混合物倒在冰冷水(100ml)上，通過(guò)用Et20萃取從水層分離有機(jī)層(油狀殘余物)。收集醚層，用Na2S04干燥，除去溶劑。收集純產(chǎn)物(7.86g，59%產(chǎn)率)，微黃色油。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢領(lǐng)U，A=水(0,1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間11.7min。'HNMR(400MHz，CDC13):52.45(s，3H)，7.34(d，1H)，7.50(d，1H)，7,80(s，1H)。步驟2:6-甲基-3-(三氟甲基)苯基硼酸頻哪醇酯(24b)將2-溴-4-(三氟甲基)甲苯(23b，5g，21mmol)放入圓底燒瓶中，并溶解在150mlDMF中。然后一次將KOAc(6.2g，63mmol，3eq)加到反應(yīng)混合物中，然后加入PdCl2(dppf)(0.46g，0.63mmol，0.03eq)和雙聯(lián)(頻哪醇基)二硼(5.9g，23.1mmol，Ueq)。溶液在80°C下攪拌48h。除去溶劑，對(duì)黑色殘余物進(jìn)行塞柱色譜(EtOAc)，得到深綠色油狀殘余物。通過(guò)二次柱色譜進(jìn)一步純化化合物(2。/。MeOH/DCM)。收集純產(chǎn)物(3.5g，58%)，微綠色油。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1°/。v/vTFA)禾卩B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間7.9min(對(duì)于硼酸)和12.6min(對(duì)于頻哪醇酯)。JHNMR(400MHz，CDC丄3):31.35(s，認(rèn))，2.58(s，3H)，7.26(d，1H)，7.55(d，1H)，8.00(s，1H)。步驟3:6-(溴甲基)-3-(三氟甲基)苯基硼酸頻哪醇酯(25b)將6-甲基-3-(三氟甲基)苯基硼酸頻哪醇酯(24b，3.0g，10mmol)和60mlCCl4放入500ml圓底燒瓶中。加入NBS(1.9，10.5mmol，1.05eq)和AIBN(0.02g，0.14mmol，0.014eq)，反應(yīng)混合物在75W白熾燈泡存在下回流4.5h。4.5h后，溶液冷卻到室溫，使琥珀酰亞胺沉淀析出。過(guò)濾出固體。除去溶劑，收集油狀產(chǎn)物。用己烷研磨來(lái)純化粗產(chǎn)物，得到80。/。純產(chǎn)物(25b，3.6g，95%產(chǎn)率)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254■檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)禾口B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間8.7min(對(duì)于硼酸)和12.4min(對(duì)于頻哪醇酯)。'H麗R(400MHz，CDC13):51.38(s，12H)，4.91(s，2H)，7.50(d，1H)，7.64(d，IH)，8.06(s，1H)。步驟4:9-[N-[2-(4,4,5,5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷萄4-(三氟甲基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-l0-[N-[2-(4,4,5,5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-4-(三氟甲基)節(jié)基]->1-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(26b)將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，l.Og，2.0mmol)放入150mL圓底燒瓶中。將其溶解在15mL脫氣的二甲基甲酰胺中。將6-(溴甲基)-3-(三氟甲基)苯基硼酸頻哪醇酯(25b，1.75g，4.8mmol，2.4當(dāng)量)溶解在5mL氮?dú)鈬娚涞腄MF中，并加到反應(yīng)燒瓶中。攪拌溶液并用氮?dú)鉀_洗5分鐘。DIEA(2.8mL，16mmol，8.0當(dāng)量)加到反應(yīng)混合物中，溶液在溫和氮?dú)饬飨虏⒃诤诎抵性诃h(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。24h后，真空蒸發(fā)溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在lOmL二氯甲垸中，用3xl5mL分批次的磷酸鹽緩沖液(0.1M，pH7.0)萃取。真空干燥和蒸發(fā)二氯甲烷溶液，得到金色油狀殘余物。粗產(chǎn)物用10mL己烷攪拌15分鐘，然后除去溶劑。收集黃色粉末，從熱IPA結(jié)晶，得到純產(chǎn)物(26b，1.2g，55%產(chǎn)率)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)禾口B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間8.1min。'H畫R(400MHz,CDC13):S1.29(s，9H)，1.31(s，12H)，1.35(s，12H)，1.55(bs，3H)，1.73(m，2H)，2.52(m，4H)，2.91(t，2H)，3.10(q，2H)，3.95(s，2H)，4.05(s，2H)，4.45(s，2H)，4.51(s，2H),4.97(s，2H)，5.05(t，1H)，7.42-7.47(m，6H)，7.54(d，1H)，7.60(d，1H)，7.91(s，1H)，8.01(s，1H)，8.34(m，2H)，8.39(m，2H)。步驟5:9-[N-[2-(4,4,5,5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-4-(三氟甲基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(4，4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-4-(三氟甲基)節(jié)基]-:^-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(27b)將9-[N-[2-(4,4，5，5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-4-(三氟甲基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基H(HN-[W,S，S-四甲基-l,3,〉二氧雜環(huán)戊硼垸基)-4-(三氟-甲基)芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(26b，0.39g，0.37mmol)放入100mL圓底燒瓶中，并溶解在20mL的60:40脫氣的CH2Cl2:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌23h。殘余產(chǎn)物用10mLCH2Cl2洗滌，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲烷洗滌幾次。粉末溶解在IOmL二氯甲烷中，并以使得溫度保持在低于5。C的速率下滴加到80mL冷的飽和NaHC03水溶液中。溶液在<5°C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)萃取物用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到0.33g黃色粉末。粗產(chǎn)物溶解在10mL無(wú)水CH2C12中，并轉(zhuǎn)移到100mL圓底燒瓶中。PS-DEAM珠(0.19g，leq)加到燒瓶中，反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下?lián)u動(dòng)16h。過(guò)濾珠，用5mL二氯甲垸洗滌。合并有機(jī)溶液，真空濃縮。得到純產(chǎn)物(27b，0.27g，72%)，黃色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間7.2min。HNMR(400MHz，CDC13):S1.33(s，12H)，1.39(s，12H)，1.60-1.63(m，5H)，2.33(t，2H)，2.47(t，2H)，2.85-2.96(m，4H)，4.05(s，2H)，4.33(s，2H)，4.46(s，2H)，4,60(s，2H)，5.03(s，1H)，5.18(s，1H)，5.52(bt，1H,)，7.35-7.43(m，4H)，7.55-7.66(m，2H)，7.68(d，1H)，7.77-7.88(m，3H)，8.03(s，1H)，8.24(s，1H)，8.30(m，2H)。ESI-MS(TFA/乙腈/水)820.12(M-H20+H)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。實(shí)施例19合成5-氟指示劑9-[N-[2-(4,4,5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-4-氟芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(4，4，5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-4-氟芐萄^-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(323)步驟l:3-氟-6-甲基苯基硼酸頻哪醇酯(29a)將3-氟-6-甲基苯基硼酸(IOg，65mmol)和220mL乙醚放入圓底燒瓶中。然后加入頻哪醇(7.68g，65mmol，leq)，得到的反應(yīng)混合物攪拌幾分鐘，直到溶液透明。最后，加入MgS04(15,6g，130mmol，2eq)，溶液在氮?dú)馇蛐纹恐性诃h(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。24h后，處理反應(yīng)。過(guò)濾出MgS04,用Et20洗滌。收集有機(jī)層，然后除去溶劑。得到純產(chǎn)物(15.2§，99%產(chǎn)率)，深黃色油狀殘余物。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1,5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間6.1min。'HNMR(400MHz，CDC13):51.34(s，12H)，2.48(s，3H)，6.97(ddd，1H)，7.09(dd，1H)，7.43(dd，1H)。步驟2:6-(溴甲基)-3-氟苯基硼酸頻哪醇酯(30a)將3-氟-6-甲基苯基硼酸頻哪醇酯(29a，5.01g，21.2mmol)和140mlCC14放入500ml圓底燒瓶中。加入NBS(3.97g，22.3mmol，1.05eq)和AIBN(0.054g，0.33mmol，0.016eq)，反應(yīng)混合物在75W白熾燈泡存在下回流3.5h。3.5h后，溶液冷卻到室溫，使琥珀酰亞胺沉淀析出。過(guò)濾出固體。除去溶齊U，收集油狀產(chǎn)物。用柱色譜(95/5己烷/乙酸乙酯)純化，得到純產(chǎn)物(30a，5.59g，84%產(chǎn)率)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注身牙，1.5mL/min，1.500mL注身寸環(huán)，254nm檢觀lj，A=水(0.1%v/vTFA)禾口B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間7.2min(對(duì)于游離硼酸)和12.1min(對(duì)于頻哪醇酯)。'HNMR(400MHz，CDC13):S1.36(s，12H)，4.88(s，2H)，7.04-7.09(ddd，1H)，7.33-7.37(dd，1H)，7.47-7.50(dd，1H)。步驟3:9-[N-[2-(4,4，5，5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-4-氟芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[2-(4，4,5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-4-氟芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]葸(31a):將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰萄乙基氨基]甲基]-蒽(l，1.0g，2.04mmol)放入100mL圓底燒瓶中，在16mL二甲基甲酰胺中攪拌，直到溶解。加入6-(溴甲基)-3-氟苯基硼酸頻哪醇酯(30a，1.96，6.22mmol，3.0當(dāng)量)和DIEA(2.8mL，16mmol，8.0eq)，在氮?dú)庵性诤诎抵性谑覝叵聰嚢?4h。真空除去DMF;加入二氯甲烷(20mL)，用磷酸鹽緩沖液(40mL0.1M，pH7.0)洗滌。收集二氯甲烷溶液，用Na2S04干燥。真空除去二氯甲烷，在氮?dú)饩徛鲃?dòng)下將得到的黃色殘余物用己烷(10mL)研磨15分鐘。粗產(chǎn)物(1.6g)從熱IPA結(jié)晶兩次，得到黃色粉末，HPLC純度為98.6。/。(31a，0.89g，45%產(chǎn)率)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254腿檢觀ij，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間7.3min。'H雇R(400MHz，CDC13):Sl,29(s，9H)，1.31(s，12H)，1.35(s，12H),1.55(bs，3H)，1.72(m，2H)，2.54(m，4H)，2.92(t，2H)，3.09(q，2H)，3.95(s，2H)，4.03(s，2H)，4.47(s，2H)，4.51(s，2H)，4.96(s，2H)，5.05(t，1H)，7.42-7.46(m，6H)，7.54(d，1H)，7.60(d，1H)，7.90(s，1H)，8.01(s，1H)，8.32(m，2H)，8.38(m，2H)。步驟4:9-[N-[2-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-4-氟芐基]_^[3_(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]_10_[^[2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼浣基)-4-氟芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽鈉鹽(32a)將9-[N-[2-(4,4,5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-4-氟芐蜀-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)-丙基氨基]甲基]-10-[N-[2-(4,4，5，5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-4-氟-芐基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(31a，0.79g，0.82mmol)放入100mL圓底燒瓶中，并溶解在30mL的60:40CH2C12:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。24h后，真空除去溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在10mLCH2Cl2中，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲烷溶解/蒸發(fā)處理，直到產(chǎn)物變?yōu)辄S色粉末。粉末溶解在30mL二氯甲烷中，并以使得溫度保持在低于5°C的速率下滴加到50mL冷的飽和NaHC03水溶液中。溶液在〈5。C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)層用無(wú)水!^2804干燥，過(guò)濾和濃縮，得到0.7g黃色粉末。粗產(chǎn)物溶解在20mL無(wú)水CH2Cl2中，并轉(zhuǎn)移到100mL圓底燒瓶中。PS-DEAM珠(0.44g，leq)加到燒瓶中，反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下?lián)u動(dòng)16h。過(guò)濾珠，用5mL二氯甲垸洗滌。合并有機(jī)溶液，真空濃縮。得到純產(chǎn)物(0.55g，71%)，黃色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)禾口B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間6.4min。'H菌R(400應(yīng)z，CDC13):51.33(s，12H)，1.37(s，12H),1.56(t，2H)，1.62(s，3H)，2.24(t，2H)，2.43(t，2H)，2.86(m，2H)，4.00(s，2H)，4.27(s，2H)，4.43(s，2H)，4.61(s，2H)，4.89(t，1H)，5.12(s，1H)，5.48(m，1H)，7.12(ddd，1H)，7.29(ddd，1H)，7.38(m，4H)，7.44-7.52(m，2H)，7.57(dd，1H)，7.69(dd，1H)，7.83(m，2H)，8.24(m，2H)。實(shí)施例20合成4-氯指示劑9-[1^-[6-(4，4，5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氯芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4，4，5，S-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氯芐基]-N-[2-(羧乙基)氨蜀甲基]蒽鈉鹽(32b)步驟l:4-氯-2-甲基苯基硼酸頻哪醇酯(29b)63將4-氯-2-甲基苯基硼酸(5.0g，29mmol)和100mL乙醚放入圓底燒瓶中。然后加入頻哪醇(3.43，29mmo1，l叫)，得到的反應(yīng)混合物攪拌幾分鐘，直到溶液透明。最后，加入MgS04(6.98，58mmol，2eq)，溶液在氮?dú)馇蛐纹恐性诃h(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。24h后，處理反應(yīng)。過(guò)濾出MgS04，用Et20洗漆。收集有機(jī)層，然后除去溶劑。得到純產(chǎn)物(7.2g，97%產(chǎn)率)，白色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0:1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間12.6min。'H麗R(400固z，CDC13):51.33(s，12H),2.50(s，3H)，7.14(m，2H)，7.68(d，1H)。步驟2:2-(溴甲基)-4-氯苯基硼酸頻哪醇酯(30b)將4-氯-2-甲基苯基硼酸頻哪醇酯(29b，7.2g，28.5mmol)和100mlCCl4放入500ml圓底燒瓶中。加入NBS(5.3g，29.9mmol，1,05eq)和AIBN(0.066g，0.399mmol，0.014eq)，反應(yīng)混合物在75W白熾燈泡存在下回流6h。6h后，溶液冷卻到室溫，使琥珀酰亞胺沉淀析出。過(guò)濾出固體。除去溶劑，收集產(chǎn)物(30b，9.3g，99%產(chǎn)率)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRCI8柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢領(lǐng)lj，A^水(0.1。/。v/vTFA)和B-MeCN((U0/0v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間8.05min(對(duì)于游離硼酸)和12.4min(對(duì)于頻哪醇酯)。'H麗R(400MHz，CDC13):M.36(s，12H)，4.85(s，2H)，7.24-7.28(m，IH)，7.58(d，IH)，7.74(d，IH)。步驟3:9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-氯芐基]-^[3-(甲基丙烯酰氨基)丙基氨基]甲基]-10-|^-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氯節(jié)基]-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(31b):將9-[N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基胺]甲基]-10-[N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]-蒽(l，1.0g，2.04mmol)放入100mL圓底燒瓶中，在15mL二甲基甲酰胺中攪拌，直到溶解。加入2-(溴甲基)-4-氯苯基硼酸頻哪醇酯(30b，1.8，4.89mmol，2.4當(dāng)量)和DIEA(2.78mL，16.3mmol，8.0eq)，在氮?dú)庵性诤诎抵性谑覝叵聰嚢?4h。真空除去DMF;加入二氯甲烷(100mL)，用磷酸鹽緩沖液(2xl00mL0.1M，pH7.0)洗滌。收集二氯甲烷溶液，用Na2S04干燥。真空除去二氯甲垸，在氮?dú)饩徛鲃?dòng)下將得到的黃色殘余物用己垸(10mL)研磨30分鐘。從熱IPA結(jié)晶粗產(chǎn)物(1.9g)，得到淺粉紅色粉末(31b，1.6g，79%產(chǎn)率)。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)和B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間7.7min。'H固R(400MHz，CDC13):51.27(s，9H)，1.31(s，12H),1.35(s，12H)，1.^50(bs，3H)，1.66(m，2H)，2,44(t，2H)，2.53(t，2H)，2.88(t，2H)，3.06(q，2H)，3.93(s，2H)，4.02(s，2H)，4.43(s，2H)，4.47(s，2H)，4.87(s，1H)，4.92(bs，1H)，5.00(t，1H)，7,09-7.15(dd，1H)，7.22-7.26(dd，1H)，7.37(d,1H)，7.42-7.48(m，4H)，7.53(d，1H)，7.63(d，1H)，7.72(d，1H)，8.30-8.39(m，4H)。步驟4:9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氯芐基]_^[3_(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]_10_[^一[6_(4，4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氯芐基]-N-[2-(羧乙基嵐基]甲基]蒽鈉鹽(32b)將9-[N-[6-(4，4,5，5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-氯芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)-丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4，4,5，5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-氯芐萄-N-[2-(叔丁氧基羰基)乙基氨基]甲基]蒽(Mb，1.0g，10.09mmol)放入100mL圓底燒瓶中，并溶解在20mL的60:40CH2C12:TFA溶液中。反應(yīng)混合物在氮?dú)馇蛐纹恐性诃h(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。20h后，真空除去溶劑。殘余產(chǎn)物溶解在10mLCH2Cl2中，然后真空除去溶劑。重復(fù)二氯甲垸溶解/蒸發(fā)處理，直到產(chǎn)物變?yōu)辄S色粉末。粉末溶解在30mL二氯甲烷中，并以使得溫度保持在低于5°C的速率下滴加到80mL冷的飽和NaHC03水溶液中。溶液在<5。C下再攪拌5min，然后分配各層。有機(jī)層用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾和濃縮，得到0.7g黃色粉末。粗產(chǎn)物溶解在20mL無(wú)水CH2Cb中，并轉(zhuǎn)移到100mL圓底燒瓶中。PS-DEAM珠(0.42g，leq)加到燒瓶中，反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下?lián)u動(dòng)16h。過(guò)濾珠，用5mL二氯甲垸洗滌。合并有機(jī)溶液，真空濃縮。純產(chǎn)物(32b，0.55g，57%)得到，黃色粉末。結(jié)構(gòu)確定RP-HPLC條件HP1100HPLC色譜，帶有保護(hù)柱的Waters3.9x150mmNovaPakHRC18柱，0.010mL注射，1.5mL/min，1.500mL注射環(huán)，254nm檢測(cè)，A=水(0.1%v/vTFA)禾口B=MeCN(0.1%v/vTFA)，梯度10%B1min，9min內(nèi)10-80%B，1min內(nèi)80-100%B，100%B1min，保留時(shí)間6.9min。'H麗R(400MHz，CDC13):S1.34(s，12H)，1.37(s，12H)，1.56(t，2H)，1.62(bs，3H)，2.32(t，2H)，2.46(t，2H)，2.86(t,2H)，2.91(q，2H)，4.03(s,2H)，4.29(s，2H),4.44(s，2H)，4.58(s，2H)，5.00(t，1H)，5.10(s，1H)，5,44(bt，1H)，7.24(m，1H)，7.40-7.46(m，5H)，7.53(d,1H),7.60(d，1H)，7.74(d，1H)，7.84(m，2H)，7.96(d，1H)，8.24-8.34(m，2H)。ESI-MS(TFA/乙腈/水)752.23(M-H20)+，對(duì)于雙硼酸。在該分析的酸性條件下未觀察到硼酸酯。6權(quán)利要求1.一種在氧化性條件下使用分子的方法，所述方法包括a)得到具有芳基硼酸殘基的分子，所述殘基在含有硼酸殘基的芳香族部分上具有一種或多種吸電子基，使得與沒(méi)有一種或多種吸電子基的相應(yīng)分子相比，所述分子具有增強(qiáng)的耐氧化性；和b)使所述具有一種或多種吸電子基的分子經(jīng)歷氧化性條件。2.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述吸電子基包括選自以下的一種或多種鹵素、氰基、硝基、鹵素取代的垸基、羧酸、酯、磺酸、酮、醛、磺酰胺、砜、磺酰基、亞砜、鹵素取代的砜、鹵素取代的烷氧基、鹵素取代的酮、酰胺或它們的組合。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述在芳香族部分上具有一種或多種吸電子基的分子還包含可檢測(cè)基團(tuán)。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述可檢測(cè)基團(tuán)包括蒽殘基。5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述在芳香族部分上具有一種或多種吸電子基的分子與植入哺乳動(dòng)物中的裝置相關(guān)聯(lián)。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述裝置在體內(nèi)測(cè)定葡萄糖的存在或濃度。7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述在芳香族部分上具有一種或多種吸電子基的分子包括9_[N-[6-(4,4，5，5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基)芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4,4，5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基)節(jié)基]-N-[2-羧基乙基腐基]甲基]蒽(4c);9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基磺酰基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-l0-[N-[6-(4,4，5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基磺?；?芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽(21);9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2,4-雙(三氟甲基)芐基]-1^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4，4，5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2,4-雙(三氟甲基)芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]-甲基]蒽(27a);或其殘基或鹽。8.—種在氧化性環(huán)境中檢測(cè)樣品中的分析物的存在或濃度的方法，所述方法包括a)使樣品接觸具有可檢測(cè)性質(zhì)的指示劑分子，所述可檢測(cè)性質(zhì)在所述指示劑分子接觸分析物時(shí)變化，其中所述指示劑分子包括芳基硼酸殘基，所述殘基在含有硼酸殘基的芳香族部分上具有一種或多種吸電子基，使得與沒(méi)有一種或多種吸電子基的相應(yīng)分子相比，所述指示劑分子具有增強(qiáng)的耐氧化性；和b)測(cè)量所述可檢測(cè)性質(zhì)的任何變化，從而測(cè)定所述樣品中所述分析物的存在或濃度。9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述吸電子基包括選自以下的一種或多種鹵素、氰基、硝基、鹵素取代的烷基、羧酸、酯、磺酸、酮、醛、磺酰胺、砜、磺?；?、亞砜、鹵素取代的砜、鹵素取代的烷氧基、鹵素取代的酮、酰胺或它們的組合。10.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述可檢測(cè)性質(zhì)變化是光學(xué)變化。11.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述分析物是葡萄糖。12.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述在芳香族部分上具有一種或多種吸電子基的分子包括9-[N-[6-(4，4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基)芐基]_^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[1^[6-(4,4，5,5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲基)芐基]-N-[2-羧基乙基)氨基]甲基]蒽(4c);9-[N-[6-(4，4,5,5-四甲基-l，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基磺?；?芐基]_N_[3_(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]_10-[N-[6-(4,4，5，5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基磺?；?節(jié)基]-N-[2-(羧乙基)氨基]甲基]蒽(21);9一[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2，4-雙(三氟甲基)芐基]^-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-|^-[6-(4,4，5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2，4-雙(三氟甲基)芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]-甲基]蒽(27a);或其殘基或鹽。13.—種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中-每一個(gè)Ar是芳基基團(tuán)；-每一個(gè)R}和R2相同或不同并且是吸電子基；-m和n每一個(gè)獨(dú)立地是110的整數(shù)；-R4是可檢測(cè)部分；和-每一個(gè)R獨(dú)立地是具有0~10個(gè)相鄰或枝化的碳原子和/或雜原子的連接基團(tuán)，至少一個(gè)R還含有聚合性單體單元；和其中與沒(méi)有一種或多種吸電子基的相應(yīng)化合物相比，所述化合物具有增強(qiáng)的耐氧化性。14.如權(quán)利要求13所述的化合物，其中R,和R2每一個(gè)選自包括以下的一種或多種鹵素、氰基、硝基、鹵素取代的垸基、羧酸、酯、磺酸、酮、醛、磺酰胺、砜、磺酰基、亞砜、鹵素取代的砜、鹵素取代的烷氧基、鹵素取代的酮、酰胺或它們的組合。15.如權(quán)利要求13所述的化合物，其中R4包括蒽殘基。16.如權(quán)利要求13所述的化合物，其中所述化合物包括9-[N-[6-(4，4，5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基)芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[>1-[6-(4，4,5,5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷萄-3-(三氟甲基)節(jié)基]-N-[2-羧基乙基)氨蜀甲基]蒽(4c);9-[N-[6-(4，4，5,5-四甲基-l,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲基磺?；?芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-l0-[N-[6-(4，4，5,5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲基磺?；?芐基]-1^-[2-(羧乙萄氨基]甲基]蒽(21);9-[N—[6-(4,4，5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，4-雙(三氟甲基)芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-|^-[6-(4,4，5，5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-2,4-雙(三氟甲基)芐基]-N-[2-(羧乙基)氨基]-甲基]蒽(27a);或其殘基或鹽。17.—種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中-每一個(gè)Ar是除苯基之外的芳基基團(tuán);-每一個(gè)R,和R2相同或不同并且是吸電子基；-m和n每一個(gè)獨(dú)立地是110的整數(shù)；-R4是可檢測(cè)部分；和-每一個(gè)R獨(dú)立地是具有0~10個(gè)相鄰或枝化的碳原子和/或雜原子的連接基團(tuán)，至少一個(gè)R包含能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團(tuán)；和其中與沒(méi)有一種或多種吸電子基的相應(yīng)化合物相比，所述化合物具有增強(qiáng)的耐氧化性。18.如權(quán)利要求17所述的化合物，其中Ri和R2每一個(gè)包括以下的一種或多種鹵素、氰基、硝基、鹵素取代的烷基、羧酸、酯、磺酸、酮、醛、磺酰胺、砜、磺?；嗧?、鹵素取代的砜、鹵素取代的烷氧基、鹵素取代的酮、酰胺或它們的組合。19.如權(quán)利要求17所述的化合物，其中R4包括蒽殘基。20.—種制備用于在氧化性環(huán)境中檢測(cè)分析物的存在或濃度的指示劑大分子的方法，所述方法包括將a)—種或多種指示劑組分單體，各自單體的水溶性不足以允許其在用于檢測(cè)所述分析物的存在或濃度的水性環(huán)境中使用，其中所述指示劑組分單體包括具有以下結(jié)構(gòu)的化合物其中-每一個(gè)Ar是芳基基團(tuán)；-每一個(gè)R,和R2相同或不同并且是吸電子基;-m和n每一個(gè)獨(dú)立地是1~10的整數(shù)；-R4是可檢測(cè)部分；和-每一個(gè)R獨(dú)立地是具有0~10個(gè)相鄰或枝化的碳原子和/或雜原子的連接基團(tuán)，至少一個(gè)R還含有聚合性單體單元；和b)—種或多種親水性單體進(jìn)行共聚；使得生成的大分子能夠在水性環(huán)境中檢測(cè)所述分析物的存在或濃度，并且與沒(méi)有一種或多種吸電子基的相應(yīng)化合物相比，其中所述化合物具有增強(qiáng)的耐氧化性。21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中R,和R2每一個(gè)包括以下的一種或多種鹵素、氰基、硝基、鹵素取代的烷基、羧酸、酉旨、磺酸、酮、醛、磺酰胺、砜、磺酰基、亞砜、鹵素取代的砜、鹵素取代的烷氧基、鹵素取代的酮、酰胺或它們的組合。22.如權(quán)利要求20所述的方法，其中R4包括蒽殘基。23.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述化合物包括9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-3-(三氟甲基)芐基]-^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4,4，5，5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲基)芐基]-N-[2-羧基乙基)氨基]甲基]蒽(4c);9_[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲基磺?；?芐基]_N-[3_(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[N-[6-(4,4,5，5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷基)-3-(三氟甲基磺?；?芐萄-:^-[2-(羧乙基)氨蜀甲基]蒽(21);9-[N-[6-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2,4-雙(三氟甲基)芐基]_^[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基氨基]甲基]-10-[^[6-(4,4，5，5-四甲基-1,3，2-二氧雜環(huán)戊硼垸基)-2，4-雙(三氟甲基)節(jié)基]-N-[2-(羧乙基)氨基]-甲基]蒽(27a);或其殘基或鹽。24.—種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物:其中-Ar是芳基基團(tuán)；-每一個(gè)R,相同或不同并且是吸電子基；-n是l10的整數(shù)；和-R是具有0~10個(gè)相鄰或枝化的碳原子和/或雜原子的連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)還含有聚合性單體單元和可檢測(cè)部分；和其中與沒(méi)有吸電子基的相應(yīng)化合物相比，所述化合物具有增強(qiáng)的耐氧化性。25.如權(quán)利要求24所述的化合物，其中Ri包括以下的一種或多種鹵素、氰基、硝基、鹵素取代的垸基、羧酸、酉旨、磺酸、酮、醛、磺酰胺、砜、磺?；?、亞砜、鹵素取代的砜、鹵素取代的烷氧基、鹵素取代的酮、酰胺或它們的組合。26.如權(quán)利要求24所述的化合物，其中所述可檢測(cè)部分包括蒽殘基。27.—種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物射-Ar是芳基基團(tuán)；-每一個(gè)&相同或不同并且是吸電子基;-n是l10的整數(shù)；和-R是針對(duì)色譜載體的連接基團(tuán)，所述連接基團(tuán)具有010個(gè)相鄰或枝化的碳原子和/或雜原子；禾口其中與沒(méi)有吸電子基的相應(yīng)化合物相比，所述化合物具有增強(qiáng)的耐氧化性。28.如權(quán)利要求27所述的化合物，其中R,包括以下的一種或多種鹵素、氰基、硝基、鹵素取代的垸基、羧酸、酯、磺酸、酮、醛、磺酰胺、砜、磺?；?、亞砜、鹵素取代的砜、鹵素取代的烷氧基、鹵素取代的酮、酰胺或它們的組合。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種具有增強(qiáng)的氧化穩(wěn)定性的化合物。所述化合物具有芳基硼酸殘基，其中所述殘基在含有硼酸殘基的芳香族部分上具有一種或多種吸電子基，使得與沒(méi)有一種或多種吸電子基的相應(yīng)分子相比，所述分子具有增強(qiáng)的耐氧化性。所述化合物優(yōu)選是用于測(cè)定葡萄糖的存在或濃度的蒽基指示劑化合物。文檔編號(hào)C07F5/02GK101541813SQ200780044236公開(kāi)日2009年9月23日申請(qǐng)日期2007年11月30日優(yōu)先權(quán)日2006年11月30日發(fā)明者A·E·科爾文,A·莫澤來(lái)夫斯卡,M·A·莫爾泰拉羅申請(qǐng)人:醫(yī)藥及科學(xué)傳感器公司