一種松果菊提取物的制備方法及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種松果菊提取物的制備方法及其應(yīng)用。其制備方法包括以下步驟：（1）將紫花松果菊地上部分置于勻漿機(jī)中，加入乙醇水溶液，勻漿處理3min；（2）超聲波提取；（3）大孔吸附樹脂純化。本發(fā)明具有操作簡單、得率高、污染少、耗能小等優(yōu)點(diǎn)。經(jīng)藥效學(xué)評(píng)價(jià)，所得提取物具有明顯的抗腫瘤效果，為開發(fā)應(yīng)用新一代天然來源的抗腫瘤藥物開拓了新徑。
【專利說明】
一種松果菊提取物的制備方法及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種松果菊提取物的制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 紫花松果菊是菊科松果屬植物。松果菊屬植物主要用于促進(jìn)機(jī)體的免疫功能以及 對(duì)抗各種感染，所含松果菊苷有抗菌、抗病毒、抗脂質(zhì)過氧化等作用；菊苣酸能夠增強(qiáng)免疫 功能、抗發(fā)炎，并具有抑制透明質(zhì)酸酶，保護(hù)膠原蛋白m的作用。
[0003] 松果菊的治療用途十分廣泛，可以治療各種炎癥和感染，最近的研究表明松果菊 提取物還有抗氧化、抗衰老、調(diào)控細(xì)胞凋亡等作用，其療效得到了越來越多的臨床肯定，是 國際市場(chǎng)需求量最大的植物藥之一?，F(xiàn)有國內(nèi)提取松果菊提取物的報(bào)道并不多見，因此，本 發(fā)明對(duì)松果菊提取物的制備方法及其在抗腫瘤方面的研究十分必要，可以為其后續(xù)研究提 供支持。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為滿足臨床需要，擴(kuò)大用藥品種，更好地治療癌癥，本發(fā)明提供了一種松果菊提取 物的制備方法及其在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0005] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案： (1) 原料預(yù)處理:將紫花松果菊地上部分置于功率為185W的勻漿機(jī)中，加入原料卜2倍 的70~80%乙醇水溶液，勻漿處理3min; (2) 超聲提取:將處理后的物料置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入原料3~5倍的70~ 80%的乙醇溶液，于70~80°C提取1~2h，趁熱抽濾，濾渣反復(fù)提取2次，合并提取液，減壓濃縮， 得濃縮液； (3) 大孔樹脂富集:將所得濃縮液加入大孔吸附樹脂柱，先用2~3BV的蒸餾水洗脫除雜， 再以4~6BV的60~70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、干燥，即得松果菊提取物。
[0006] 步驟(3)中所述的大孔吸附樹脂類型為D-101、AB-8、HPD300中的任意一種。
[0007] 本發(fā)明制得的提取物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明制得的提取物的進(jìn)行抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)表明：該提取物具有較強(qiáng)的抗腫瘤活 性，在天然新藥開發(fā)中具有良好的應(yīng)用前景。
[0009] 松果菊提取物采用MTT法（四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法)進(jìn)行抗腫瘤活性測(cè) 試。
[0010] 試驗(yàn)用細(xì)胞株： HeLa:人子宮頸癌細(xì)胞株;HEC-1:人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株;HLE:人肝癌細(xì)胞株;MM1-CB 和HMV-1:人黑色素瘤細(xì)胞株。
[0011]方法：（1)〇.25%胰酶消化對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，10%_3的1^0 1640調(diào)細(xì)胞濃度50000 個(gè)/1111。96孔板100ul/孔。設(shè)溶劑對(duì)照，每組3平行孔。37°C，5%C0 2、95%空氣的培養(yǎng)箱中預(yù) 培養(yǎng)24h，棄上清。
[0012] (2)加藥物5個(gè)10倍稀釋的濃度(溶劑為有二甲亞砜和水），為10-4 mol/L。
[0013] (3)細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)48h，每孔加入10μ1 5mg/ml的MTT溶液（以無血清培養(yǎng)基配制）， 繼續(xù)培養(yǎng)4h。
[0014] (4)吸去上清。加入200μ1 DMS0,輕輕振蕩以使甲臜完全溶解。570nm處用酶標(biāo)儀測(cè) 定0D值。
[0015] (5)計(jì)算抑制率(％)=(對(duì)照0D-藥物0D)/對(duì)照0D*100% 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:松果菊提取物的抑制率以相對(duì)于對(duì)照(添加 DMS0)的結(jié)果如下表1。
[0016] 表1松果菊提取物的腫瘤細(xì)胞增值抑制率％
由表1的結(jié)果可知，松果菊提取物具有良好的抑制腫瘤細(xì)胞生長的活性，其可在制備抗 腫瘤藥物中得到應(yīng)用。
[0017] 本發(fā)明所述松果菊提取物在制備抗腫瘤藥物時(shí)，可按照常規(guī)的制劑方法以松果菊 提取物為藥物活性成分，添加適宜的藥物載體，制成各種藥物劑型，如片劑、膠囊、滴丸、注 射劑、緩控釋劑等等。
[0018] 下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
[0019]
【具體實(shí)施方式】： 實(shí)施例1: 將500g的紫花松果菊地上部分置于功率為185W的勻漿機(jī)中，加入原料1倍的70%乙醇水 溶液，勻漿處理3min;將處理后的物料置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入原料3倍的70% 的乙醇溶液，于70°C提取lh，趁熱抽濾，濾渣反復(fù)提取2次，合并提取液，減壓濃縮，得濃縮 液;將所得濃縮液加入D-101大孔吸附樹脂柱，先用2BV的蒸餾水洗脫除雜，再以4BV的60%的 乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、干燥，即得松果菊提取物12.6g。
[0020] 實(shí)施例2: 將500g的紫花松果菊地上部分置于功率為185W的勻漿機(jī)中，加入原料2倍的80%乙醇水 溶液，勻漿處理3min;將處理后的物料置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入原料4倍的80% 的乙醇溶液，于75°C提取2h，趁熱抽濾，濾渣反復(fù)提取2次，合并提取液，減壓濃縮，得濃縮 液;將所得濃縮液加入AB-8大孔吸附樹脂柱，先用2BV的蒸餾水洗脫除雜，再以5BV的65%的 乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、干燥，即得松果菊提取物16. lg。
[0021] 實(shí)施例3: 將500g的紫花松果菊地上部分置于功率為185W的勻漿機(jī)中，加入原料1倍的75%乙醇水 溶液，勻漿處理3min;將處理后的物料置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入原料4倍的75% 的乙醇溶液，于80°C提取2h，趁熱抽濾，濾渣反復(fù)提取2次，合并提取液，減壓濃縮，得濃縮 液;將所得濃縮液加入HPD300大孔吸附樹脂柱，先用3BV的蒸餾水洗脫除雜，再以6BV的70% 的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、干燥，即得松果菊提取物14.4g。
[0022] 實(shí)施例4: 本發(fā)明藥物顆粒劑 將松果菊提取物加入乙醇作黏合劑，加入淀粉作填充劑，制成顆粒。
[0023] 實(shí)施例5: 本發(fā)明藥物片劑 將松果菊提取物，加入淀粉、糊精、硬脂酸鎂等，混合制成濕粒，壓片，每片含松果菊提 取物200mg。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種松果菊提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 原料預(yù)處理:將紫花松果菊地上部分置于功率為185W的勻漿機(jī)中，加入原料1~2倍 的70~80%乙醇水溶液，勻漿處理3min; (2) 超聲提取:將處理后的物料置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入原料3~5倍的70~ 80%的乙醇溶液，于70~80°C提取1~2h，趁熱抽濾，濾渣反復(fù)提取2次，合并提取液，減壓濃縮， 得濃縮液； (3) 大孔樹脂富集:將所得濃縮液加入大孔吸附樹脂柱，先用2~3BV的蒸餾水洗脫除雜， 再以4~6BV的60~70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、干燥，即得松果菊提取物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種松果菊提取物的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述 的大孔吸附樹脂類型為D-101、AB-8、HPD300中的任意一種。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法制得的松果菊提取物在制備具有抗腫瘤作用的藥物中的應(yīng) 用。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK106038646SQ201610307110
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年5月11日
【發(fā)明人】楊成東
【申請(qǐng)人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司