一種明膠殼聚糖復(fù)合止血粉的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)用材料制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種明膠殼聚糖復(fù)合止血粉。
【背景技術(shù)】
[0002]出血是創(chuàng)傷患者死亡的重要原因之一。在出現(xiàn)突發(fā)事故或進(jìn)行外科手術(shù)時(shí)，降低出血時(shí)間，減少出血量，防止傷口與外界接觸造成感染，有利于后續(xù)治療和患者傷口愈合。
[0003]傳統(tǒng)的止血方法主要是將止血材料(如繃帶、止血帶、海綿、棉紗等)貼附于創(chuàng)面，利用機(jī)械外力擠壓創(chuàng)面或利用材料吸水性阻止創(chuàng)面繼續(xù)流血，但上述材料在面對復(fù)雜的創(chuàng)面部位及形狀時(shí)，或者大面積彌漫性出血時(shí)，效果欠佳。粉末狀止血產(chǎn)品不受創(chuàng)面大小和部位的影響，使用方便快捷，有其獨(dú)到的優(yōu)點(diǎn)。因此開發(fā)新型粉末狀止血產(chǎn)品為止血類產(chǎn)品的一個(gè)新的熱點(diǎn)。除此之外，目前常用的局部止血材料主要有多孔海綿類材料(膠原海綿)、粉末類材料(沸石、馬鈴薯淀粉)、纖維類材料、止血紗布類等。這些止血材料各有一定的不足之處:傳統(tǒng)的明膠膠原材料來自于牛皮、豬皮等陸生動(dòng)物皮，容易出現(xiàn)排異性和過敏反應(yīng)；沸石和淀粉材料主要通過吸收血液中的水分起到止血效果，但容易導(dǎo)致傷口炎癥反應(yīng)；氧化再生纖維素結(jié)構(gòu)松散，對傷口粘附性差，止血效果不佳。因此針對傳統(tǒng)止血材料的局限性，開發(fā)新型高效止血?jiǎng)┚惋@得十分必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是在于針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種明膠殼聚糖復(fù)合止血粉，所提供的止血粉能夠快速止血，具有較好的粘附性和生物相容性，并且具有抗菌和消炎的效果。
[0005]本發(fā)明的明膠殼聚糖復(fù)合止血粉，是將魚皮明膠溶液和殼聚糖溶液混合后，在低溫下攪拌，再冷凍干燥，超微粉碎后消毒滅菌制備的。
[0006]其中使用的魚皮明膠的制備方法如下:
[0007]將魚皮浸泡在堿性溶液中，然后用清水洗至中性，再將魚皮浸泡在酸性溶液中，浸泡結(jié)束后用清水洗至中性，在45?70°C在水中進(jìn)行提取4?Sh ;提取液過濾后通過截留分子量為700KDa、孔徑大小為0.45um的微孔濾膜，再通過超濾技術(shù)分離得到分子量不小于700KDa的魚皮明膠；
[0008]所述的魚皮優(yōu)選為鱈魚皮；
[0009]所述的堿性溶液優(yōu)選為0.05M的NaOH溶液；
[0010]所述的酸性溶液優(yōu)選為0.1M的硫酸溶液；
[0011]本發(fā)明所使用的殼聚糖溶液，是將殼聚糖溶解在酸溶液中制備的；
[0012]本發(fā)明的明膠殼聚糖復(fù)合止血粉，其一種具體制備方法如下:
[0013]將脫乙酰度不小于50%的殼聚糖溶解在0.05?0.2M的醋酸溶液中，配置成I?2%的殼聚糖溶液，然后將明膠溶液與殼聚糖溶液混合，得到魚皮明膠與殼聚糖質(zhì)量比為5:1?4的混合溶液；將混合溶液在4°C溫度下攪拌8?10h，冷凍干燥、超微粉碎使顆粒粒徑平均分布在3-4 μ m左右，用劑量為25KGy6°Co消毒滅菌，得到明膠殼聚糖復(fù)合止血粉劑。
[0014]本發(fā)明將制備的魚皮明膠中加入殼聚糖，可以發(fā)揮材料之間的協(xié)同效應(yīng)，提高了復(fù)合材料的吸水性和粘附性，使得復(fù)合材料的止血性能得到了提高，同時(shí)還具備了殼聚糖抗菌、抑菌的性能。復(fù)合材料的力學(xué)性能、止血性能和愈合傷口的能力都得到了提高，成為了一種綜合性能優(yōu)良的止血?jiǎng)?br>【具體實(shí)施方式】
[0015]為了使本技術(shù)領(lǐng)域的人員更好地理解本發(fā)明技術(shù)方案，下面就具體的實(shí)施方式做進(jìn)一步的說明。
[0016]實(shí)施例1
[0017]—種明膠殼聚糖復(fù)合止血粉的制備方法，包括以下步驟:
[0018]步驟一:鱈魚皮明膠的提取
[0019]新鮮鱈魚皮儲(chǔ)存在-20 0C的冰箱中。將鱈魚皮從冰箱中取出，室溫下解凍，去除魚皮上粘連的魚肉，用清水沖洗干凈。將魚皮剪成2cmX 2cm的小塊，用濃度為的0.05M的NaOH溶液浸泡魚皮45min，料液比1:30(w/v)使其充分溶脹，將魚皮用清水沖洗至中性，再用濃度為0.1M的硫酸溶液浸泡30min，料液比為(1: 30)，將魚皮沖洗至中性。魚皮加3倍體積的水，在65°C下用水浴搖床提取5h，用兩層娟紗過濾，濾液離心，取上清液即為鱈魚皮明膠提取液。
[0020]步驟二:尚分子量鱈魚皮明膠的制備
[0021]將鱈魚皮明膠提取液抽濾，濾液通過0.45um的微孔濾膜進(jìn)一步去除雜質(zhì)，用截留分子量為700KDa的超濾膜在4°C下進(jìn)行超濾，氮?dú)饧訅?.2MPa，冷凍干燥后得到分子量高于700KDa的高分子量鱈魚皮明膠。
[0022]步驟三:明膠殼聚糖復(fù)合止血粉的制備及理化性質(zhì)研究
[0023]將高分子量的鱈魚皮明膠樣品用65°C熱水溶解，配置成2%的明膠溶液，將脫乙酰度65%的殼聚糖溶解在0.2M的醋酸溶液中，配置成1.2%的殼聚糖溶液，將明膠溶液和殼聚糖溶液按照1:1混合，得到明膠:殼聚糖為10:6的混合溶液。將混合液放在4°C下攪拌8h，冷凍干燥得到海綿狀復(fù)合物。將復(fù)合物用超微粉碎機(jī)粉碎，得到粉末用劑量為25KGy60Co消毒滅菌，成型包裝，得到明膠殼聚糖復(fù)合止血粉，混合止血粉劑的粒徑平均分布在3.97 μ m左右，體外實(shí)驗(yàn)測定其吸水倍率為0.926，體外溶血率為3.01 %，低于5%，符合國家生物材料評價(jià)規(guī)定的溶血率安全范圍。體外促凝實(shí)驗(yàn)的平均凝血時(shí)間為46.16s,與自然止血組平均止血時(shí)間103.17s相比縮短了 57.01s，說明其具有促凝作用。
[0024]步驟四:高分子量明膠殼聚糖復(fù)合止血粉的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究
[0025]選取體重200g左右的健康雄性wistar大鼠做斷尾止血實(shí)驗(yàn)，用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精消毒尾部，并用刀片在鼠尾端約2cm處割斷，在傷口處撒上30mg的高分子量明膠殼聚糖復(fù)合止血粉，每隔15s觀察一次，以斷尾不再滲血為止血完畢，高分子量明膠殼聚糖復(fù)合止血粉的止血時(shí)間為3.77min，與自然止血組的止血時(shí)間6min、云南白藥組的止血時(shí)間
4.87min相比，止血時(shí)間縮短，止血效果較好；選取體重200g左右的健康雄性wistar大鼠做股動(dòng)脈止血實(shí)驗(yàn)，小心沿股內(nèi)側(cè)切一 3cm切口，暴露大鼠股動(dòng)脈，小心將股動(dòng)脈橫向剪開約直徑1/3的切口。立即用脫脂棉擦去噴出的血液，將200mg的高分子量明膠殼聚糖復(fù)合止血粉撒在切口上，用無菌紗布覆蓋，每隔15s揭開紗布觀察一次，直到傷口不再出血為止，高分子量明膠殼聚糖復(fù)合止血粉的止血時(shí)間為1.88min，與自然止血組的時(shí)間5.21min、云南白藥組的止血時(shí)間2.5min相比較，止血時(shí)間縮短，止血效果較好；選取體重200g左右的健康雄性wistar大鼠做肝創(chuàng)面止血實(shí)驗(yàn)，于大鼠的腹中線作一長約3cm縱行切口，暴露大鼠的肝臟，用無菌紗布將肝臟中葉隔離，用刀片在肝臟中葉縱向切開一長1cm，深0.5cm的切口，用脫脂棉立即擦去血液，分別將200mg高分子量明膠殼聚糖復(fù)合止血粉撒在創(chuàng)面上，覆蓋無菌紗布，每隔15s觀察創(chuàng)面出血的情況，直到傷口不再出血為止，記錄止血時(shí)間為1.55min，與自然止血組的止血時(shí)間3.24min、云南白藥組的止血時(shí)間1.85min相比較，止血時(shí)間縮短，止血效果較好。
[0026]實(shí)施例2
[0027]—種明膠殼聚糖復(fù)合止血粉的制備方法，包括以下步驟:
[0028]步驟一:鱈魚皮明膠的提取
[0029]新鮮鱈魚皮儲(chǔ)存在-20 0C的冰箱中。將鱈魚皮從冰箱中取出，室溫下解凍，去除魚皮上粘連的魚肉，用清水沖洗干凈。將魚皮剪成2cmX 2cm的小塊，用濃度為的0.05M的NaOH溶液浸泡魚皮45min，料液比1:30(w/v)使其充分溶脹，將魚皮用清水沖洗至中性，再用濃度為0.1M的硫酸溶液浸泡30min，料液比為(1: 30)，將魚皮沖洗至中性。魚皮加3倍體積的水，在55°C下用水浴搖床提取6h，用兩層娟紗過濾，濾液離心，取上清液即為鱈魚皮明膠提取液。
[0030]步驟二:尚分子量鱈魚皮明膠的制備
[0031]將鱈魚皮明膠提取液抽濾，濾液通過0.45um的微孔濾膜進(jìn)一步去除雜質(zhì)，用截留分子量為700KDa的超濾膜在4°C下進(jìn)行超濾，氮?dú)饧訅?.2MPa，冷凍干燥后得到分子量高于700KDa的高分子量鱈魚皮明膠。
[0032]步驟三:明膠殼聚糖復(fù)合止血粉的制備及理化性質(zhì)研究
[0033]將高分子量的鱈魚皮明膠樣品用55°C熱水溶解，配置成2%的明膠溶液，將脫乙酰度55%的殼聚糖溶解在0.1M的醋酸溶液中，配置成I %的殼聚糖溶液，將明膠溶液和殼聚糖溶液按照1:1混合，得到明膠:殼聚糖為10:5的混合溶液。將混合液放在4°C下攪拌8h