一種抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物以及檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物以及肺癌細 胞轉(zhuǎn)移的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 肺癌是一種常見的肺部惡性腫瘤，近年來的發(fā)病率和死亡率增長最快，對人類健 康安全的威脅也越來越大。惡性腫瘤是危害人類生命健康的細胞性疾病，腫瘤細胞從生物 體內(nèi)正常細胞轉(zhuǎn)化為惡性細胞，其形態(tài)、功能、代謝和增殖等都會發(fā)生變化，可以看作是細 胞的異常分化導致其具有永生性。
[0003] 水飛薊賓（Silybin)是從菊科藥用植物水飛薊種子的種皮中提取所得的一種天 然黃酮木脂素類化合物。水飛薊賓呈黃色粉末，味苦，可溶于丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇， 微溶于氯仿，幾乎不溶于水。其分子式為C25H22Oltl，摩爾質(zhì)量為482. 12。水飛薊賓臨床上主 要用于治療中毒性及酒精相關(guān)性肝病的治療，還可作為抗氧化食品添加劑。藥理學研宄表 明，水飛薊賓能夠清除機體內(nèi)自由基，延緩衰老，對抗脂質(zhì)過氧化，抑制一氧化氮的產(chǎn)生，減 輕對組織細胞的毒素，保護肝細胞膜、改善肝功能，降血脂和保護心肌等作用。孫羿等在《水 飛薊賓對人膀胱癌細胞株5637增殖的抑制作用及其機制》一文中指出水飛薊賓可抑制人 膀胱癌細胞株5637的增殖，并能降低凋亡抑制因子Survivin的mRNA表達。中國專利申請 201010238453. X公開了水飛薊賓在治療神經(jīng)受損方面的用途。
[0004] 替加氟是氟尿嘧啶的衍生物，在體內(nèi)經(jīng)肝臟活化轉(zhuǎn)變?yōu)榉蜞奏ざ鹂鼓[瘤作 用，能干擾和阻斷DNA、RNA及蛋白質(zhì)合成，主要作用于S期，是抗嘧啶類的細胞周期特異性 藥物。藥理學研宄表明，替加氟對胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、乳腺癌和肝癌具有一定的 療效。
[0005] 喜樹堿類藥物通過特異性抑制DNA拓撲異構(gòu)酶I，產(chǎn)生DNA斷裂，使腫瘤細胞死亡。 喜樹堿類藥物具有較寬的抗瘤譜，主要用于胃癌、腸癌和肝癌等的治療。
[0006] 目前，市場上仍缺少可以顯著抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合 物，并提供了相應的肺癌細胞轉(zhuǎn)移的檢測方法。
[0008] 一種抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物，包括水飛薊賓、替加氟和喜樹堿類藥物；所 述肺癌細胞選自非小細胞肺癌細胞株A549。
[0009] 發(fā)明人對現(xiàn)有的具有抗癌效果的藥物進行了大量篩選和復配，預料不到地發(fā)現(xiàn)： 通過水飛薊賓、替加氟和喜樹堿類藥物以一定重量比組合得到的藥物組合物具有良好的肺 癌細胞抑制效果，且可顯著抑制肺癌細胞的轉(zhuǎn)移。
[0010] 通常情況下，水飛薊賓主要用于肝臟疾病的治療，替加氟主要用于治療消化系癌。 喜樹堿類藥物雖然具有較廣泛的抗癌作用，但尚無文獻報道喜樹堿類藥物可與水飛薊賓、 替加氟聯(lián)合作為組合物聯(lián)合使用。替加氟即I-(四氫-2-呋喃基）-5-氟-2, 4 (1H，3H)-嘧 啶二酮。
[0011] 優(yōu)選地，所述藥物組合物中，水飛薊賓、替加氟和喜樹堿類藥物的質(zhì)量比為（1~2): (1~2) ： (0. 5~1) 〇
[0012] 優(yōu)選地，所述藥物組合物中，水飛薊賓、替加氟和喜樹堿類藥物的質(zhì)量比為2 :2 : 1〇
[0013] 優(yōu)選地，所述喜樹堿類藥物選自喜樹堿、羥基喜樹堿或硝基喜樹堿。
[0014] 優(yōu)選地，所述藥物組合物由水飛薊賓、替加氟、喜樹堿類藥物和藥學上可接受的載 體制得。
[0015] 優(yōu)選地，所述藥物組合物為注射劑。
[0016] 相應地，本發(fā)明還提供一種肺癌細胞轉(zhuǎn)移的檢測方法，包括如下步驟：A)培養(yǎng)肺 癌細胞，所述肺癌細胞選自非小細胞肺癌細胞株A549,采用所述的藥物組合物對所述肺癌 細胞進行處理；B)采用胰酶消化所述肺癌細胞，并用不含胎牛血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸細胞； C)進行細胞計數(shù)后，對細胞懸液進行稀釋；D)將細胞懸液加入至Transwell小室，并加入含 胎牛血清的培養(yǎng)基至Transwell小室下方的培養(yǎng)孔里，于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)后，用甲紫染 色，顯微鏡下檢測所述肺癌細胞的轉(zhuǎn)移。
[0017] 根據(jù)Corning公司的Transwell說明書中的介紹，可以認為Transwel是一種膜濾 器，也可認為是一種有通透性的支架。將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培 養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯 膜相隔。發(fā)明人將細胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影 響到上室內(nèi)的細胞，從而可以研宄下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。
[0018] 優(yōu)選地，所述培養(yǎng)箱的培養(yǎng)條件包括37°C和5%的二氧化碳。
[0019] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供藥物組合物包括水飛薊賓、替 加氟和喜樹堿類藥物，具有良好的肺癌細胞抑制效果，且可顯著抑制肺癌細胞的轉(zhuǎn)移，對肺 癌細胞的轉(zhuǎn)移能力有顯著的協(xié)同抑制作用，尤其對非小細胞肺癌細胞株A549具有非常好 的抑制效果。
【具體實施方式】
[0020] 下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明。
[0021] 細胞迀移（cell migration)的基本原理是細胞在接收到迀移信號或感受到某些 物質(zhì)的濃度梯度后而產(chǎn)生的移動。迀移過程中細胞不斷重復著向前方伸出突足，然后牽拉 胞體的循環(huán)過程。癌細胞轉(zhuǎn)移是指轉(zhuǎn)移是指腫瘤細胞從原發(fā)部位侵入淋巴管，血管或其他 途經(jīng)被帶到它處繼續(xù)生長，形成與原發(fā)部位腫瘤相同類型的腫瘤，具有極大的危害，在治療 肺癌的方向上，如何抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移，成為腫瘤治療中的一個關(guān)鍵問題。
[0022] 本發(fā)明中，肺癌細胞株A549細胞株購自武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中心，SPF 級BALB/c-nu小鼠購自廣東省醫(yī)學實驗動物中心，所使用的試劑均為常規(guī)市售試劑。
[0023] 實施例一抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物
【主權(quán)項】
1. 一種抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物，其特征在于：包括水飛薊賓、替加氟和喜樹 堿類藥物；所述肺癌細胞選自非小細胞肺癌細胞株A549。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物，其特征在于：所述藥物組 合物中，水飛薊賓、替加氟和喜樹堿類藥物的質(zhì)量比為（1~2) :(1~2) :(0. 5~1)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物，其特征在于：所述藥物組 合物中，水飛薊賓、替加氟和喜樹堿類藥物的質(zhì)量比為2 :2 :1。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物，其特征在于： 所述喜樹堿類藥物選自喜樹堿、羥基喜樹堿或硝基喜樹堿。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物，其特征在于： 由水飛薊賓、替加氟、喜樹堿類藥物和藥學上可接受的載體制得。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物，其特征在于： 所述藥物組合物為注射劑。
7. -種肺癌細胞轉(zhuǎn)移的檢測方法，其特征在于：包括如下步驟:A)培養(yǎng)肺癌細胞，所述 肺癌細胞選自非小細胞肺癌細胞株A549,采用權(quán)利要求1至6中任一項所述的藥物組合物 對所述肺癌細胞進行處理；B)采用胰酶消化所述肺癌細胞，并用不含胎牛血清的基礎(chǔ)培養(yǎng) 基重懸細胞；C)進行細胞計數(shù)后，對細胞懸液進行稀釋；D)將細胞懸液加入至Transwell小 室，并加入含胎牛血清的培養(yǎng)基至Transwell小室下方的培養(yǎng)孔里，于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng) 后，用甲紫染色，顯微鏡下檢測所述肺癌細胞的轉(zhuǎn)移。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的肺癌細胞轉(zhuǎn)移的檢測方法，其特征在于：所述培養(yǎng)箱的培養(yǎng) 條件包括37 °C和5%的二氧化碳。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種抑制肺癌細胞轉(zhuǎn)移的藥物組合物，包括水飛薊賓、替加氟和喜樹堿類藥物；所述肺癌細胞選自非小細胞肺癌細胞株A549。本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明提供的藥物組合物具有良好的肺癌細胞抑制效果，且可顯著抑制肺癌細胞的轉(zhuǎn)移。
【IPC分類】A61K31-4745, A61P35-04, A61K31-513, G01N21-84, A61K31-357
【公開號】CN104873513
【申請?zhí)枴緾N201510240011
【發(fā)明人】燕啟江
【申請人】廣州金域醫(yī)學檢驗中心有限公司
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年5月13日