用于炎性疾病的抗-cxcl9、抗-cxcl10、抗-cxcl11、抗-cxcl13、抗-cxcr3和抗-cxcr5試劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本申請主要涉及炎性疾病的檢測。更具體地說，本申請涉及用于使用抗-趨化因 子和/或抗-趨化因子受體檢測試劑檢測炎性疾病的方法。
【背景技術】
[0002] 盡管近來在與炎癥過程相關的研宄中取得進展，但是用于診斷和治療慢性炎性疾 病的方法仍然還有很多沒有弄清楚。這可能是因為在宿主中引發(fā)并且維持炎癥狀態(tài)的因 子有很多并且是復雜的。目前治療具有與它們相關的缺點，包括免疫系統(tǒng)的抑制可能導致 宿主更容易受到細菌、病毒和寄生蟲感染。例如，使用類固醇是慢性炎癥治療的一種傳統(tǒng)方 法。這種治療可能導致保護性免疫的抑制和體重的變化。生物技術中的進展已經(jīng)促進了具 有很少副作用的靶向生物制品的發(fā)展。為了改善炎性疾病治療，需要發(fā)展改變和控制由先 天性和適應性免疫系統(tǒng)兩者的細胞生成的因子的技術。
[0003] 宿主細胞具有與配體關聯(lián)的表面受體以轉導信號并且調節(jié)宿主細胞活性。施用抗 TNF-α抗體或者可溶性TNF-α受體已經(jīng)顯示抑制炎性疾病。不幸的是，與這種治療相關聯(lián) 的副作用可能通過沒有充分了解的機制導致感染（例如肺結核）和其他不良反應的風險增 加。類似的，針對膜結合分子樣CD40的抗體治療具有抑制炎癥和移植物-宿主病的特性。 雖然一直在研宄用于預防炎性疾病的其他靶向宿主細胞治療，但是仍然沒有能阻止所有炎 性疾病的已知單獨表面或分泌因子。因此，需要開發(fā)采用新鑒定的特異性宿主細胞目標的 治療。
[0004] 在進入粘膜之后不久，各種不同的病原體或毒素激活巨噬細胞、嗜中性粒細胞、T 細胞、B細胞、單核細胞、NK細胞、潘氏和隱窩細胞以及上皮細胞。趨化因子是耐受水解的、 促進新血管形成或內皮細胞生長抑制、誘導細胞骨架重排、使淋巴細胞激活或者失活以及 通過與G蛋白偶聯(lián)受體相互作用而介導趨藥性的小的細胞因子樣蛋白的超級家族。趨化因 子可以介導表達它們的受體的宿主細胞的迀移和生長。負責趨化因子的這些功能的細胞機 制一般是但是不是全部是Ca 2+流依賴性的并且是百日咳毒素敏感的。然而，趨化因子介導 事件的準確機制仍未清楚。

【發(fā)明內容】

[0005] 本申請的一個方面涉及分離的抗-CXCL9、抗-CXCL10、抗-CXCL11、抗-CXCL13、 抗-CXCR3或抗-CXCR5試劑，所述試劑對炎性疾病具有結合親和力，Kd值范圍為0.0 lpM至 ΙμΜ。在一個實施方式中，本申請涉及一種用于檢測受試者中的炎性疾病的方法。所述方 法包括如下步驟：(a)檢測獲自所述受試者的生物樣品中的一種或者多種炎性疾病標記物 的表達水平；和（b)比較所述生物樣品中的所述一種或者多種炎性疾病標記物的表達水平 和所述一種或者多種炎性疾病標記物的正常表達水平，其中，高于所述多個炎性疾病標記 物中的一種或者多種在所述生物樣品中的正常表達水平指示所述受試者中存在炎性疾病， 其中所述多個炎性疾病標記物的所述正常表達水平是預定值，并且其中所述一種或者多種 炎性疾病標記物包括選自由CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL13、CXCR3和CXCR5組成的組中的 一種或者多種標記物。
[0006] 本申請的另一個方面涉及一種用于監(jiān)測受試者中炎性疾病治療過程的方法。所 述方法包括如下步驟：測定在治療過程中或者治療之后獲自所述受試者的一種或者多種生 物樣品中的一種或者多種炎性疾病標記物的表達水平；和比較所述一種或者多種生物樣 品中的所述一種或者多種炎性疾病標記物的表達水平和所述一種或者多種炎性疾病標記 物的對照表達水平，其中，所述一種或者多種炎性疾病標記物的所述對照表達水平是預定 參考水平或者所述受試者中的所述一種或者多種炎性疾病標記物的治療前水平，其中，如 果在所述治療過程中或者所述治療之后獲自所述受試者的所述一種或者多種生物樣品中 的所述一種或者多種炎性疾病標記物的表達水平類似于或者低于所述對照表達水平，那么 認為所述治療是有效的，其中，所述一種或者多種炎癥標記物包括選自由CXCL9、CXCL10、 CXCL11、CXCL13、CXCR3和CXCR5組成的組中的一種或者多種炎性疾病標記物。
[0007] 本申請的另一個方面涉及一種用于檢測受試者中的炎性疾病的試劑盒。所述試劑 盒包括用于測定選自由CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL13、CXCR3和CXCR5組成的組中的一種 或者多種炎性疾病標記物的表達的試劑；用于測定生物樣品中的選自由致輕素、腫瘤壞死 因子 a (TNFa)、干擾素 -γ (IF-γ)、白介素 -Ia (IL-Ια )、IL_10、IL-6、IL-12、IL_17 和 IL-23組成的組中的一種或者多種炎性疾病標記物的表達的試劑；和關于如何使用所述試 劑的說明書。
【附圖說明】
[0008] 圖1顯示了 IFN-γ，IP-10，MIG，I-TAC和CXCR3mRNA在小鼠結腸炎過程中的表達。
[0009] 圖2顯示了通過過繼性轉移而接受⑶45RBHI或CXCR3 +⑶4+T細胞的TCR β X δ +小 鼠中的IBD的組織學分析。
[0010] 圖3顯示了 IL-10+小鼠的結腸炎的發(fā)展和SAA水平。大于200 μ g/ml的SAA濃 度與第〇周無癥狀性結腸炎的發(fā)作相關聯(lián)。
[0011] 圖4顯示了 IL-10+小鼠的體重變化。
[0012] 圖5顯示了血清IL-6和SAA水平與小鼠結腸炎的關聯(lián)。
[0013] 圖6顯示了 IL-10+小鼠中的總的糞便和血清Ab (抗體）水平。
[0014] 圖 7 顯示 了患有 IBD 的 IL-10+小鼠中的血清 IL-12, IFN-γ，IL-2, TNF-a， IL-I a 和 IL-I β 水平。
[0015] 圖8顯示了由IL-10+小鼠所呈現(xiàn)的結腸炎的組織學特性。
[0016] 圖9顯示了抗-CXCLlO抗體消除了嚴重結腸炎。
[0017] 圖10顯示了粘膜組織在嚴重結腸炎過程中的Thl細胞因子、CXCLlO和CXCR3mRNA 表達。
[0018] 圖11顯示了嚴重結腸炎進展過程中血清中的Thl和炎性細胞因子水平。
[0019] 圖12顯示了抗-CXCLlO抗體對結腸炎病理學的影響。
[0020] 圖13顯示了 CD患者的結腸中的CXCL9、CXCL10、CXCLll和TNF- a的組織學和免 疫熒光定位。
[0021] 圖14顯示了自發(fā)性結腸炎過程中IL-10+小鼠中的副結核桿菌鳥結核分枝桿菌 亞種（M.avium subsp.paratuberculosis(MAP))特異性血清 Ab 反應。
[0022] 圖15顯示了使用副結核桿菌鳥結核分枝桿菌亞種（MAP)挑戰(zhàn)的IL-10+小鼠中 的組織學特性。
[0023] 圖16顯示了 MAP挑戰(zhàn)之后IL-10+小鼠的體重變化
[0024] 圖17顯示了 MAP挑戰(zhàn)之后IL-10+小鼠的血清細胞因子水平。
[0025] 圖18顯示了來自IL-10+小鼠的CD4+T細胞的抗-肽#25Ag(來自MPT59)誘導的 增殖和IL-2生成。
[0026] 圖19顯示了 IBD患者中的血清CXCR3配體和分枝桿菌特異性Ab反應。
[0027] 圖20顯示了分枝桿菌挑戰(zhàn)后IL-10+小鼠和IBD患者中的SAA水平變化
[0028] 圖21顯示了使用分枝桿菌挑戰(zhàn)的IL-IO+小鼠的腸組織學特性。
[0029] 圖22顯示了 IC患者中的血清CXCL9、CXCLlO和CXCLll濃度。
[0030] 圖23顯示了 CYP誘導膀胱炎之后的組織學變化。
[0031] 圖 24 顯示了 CYP 處理的小鼠中的 CXCR3、CXCL9、CXCLlO 和 CXCLllmRNA 表達。
[0032] 圖25顯示了活動性⑶過程中的上調的CXCLlO表達。
[0033] 圖26顯示了活動性⑶過程中CXCLll和CXCL9的上調表達。
[0034] 圖27顯示了⑶患者中的血清淀粉樣蛋白A (SAA)和IL-6的上調的血清濃度。
[0035] 圖28顯不了⑶過程中血清IL-12p40和IFN-γ水平相關。
[0036] 圖29顯示了活動性⑶過程中炎性細胞因子水平。
[0037] 圖30顯示了正常和具有高血清CXCR3配體濃度的⑶患者中的結腸炎的組織學特 性。
[0038] 圖31顯示了通過組織學檢查得到的正常和⑶患者的結腸中的CXCR3配體和 TNFa表達。
【具體實施方式】
[0039] 提供如下詳細說明以使本領域技術人員能夠實施和使用本申請。為了解釋目的， 給出具體術語以充分地理解本申請。但是，本領域技術人員應當清楚的是，實施本申請不需 要這些具體細節(jié)。具體申請的