專利名稱：用于抑制mrp1的方法
與外科手術(shù)和放射療法一起，化學(xué)療法一直是多種癌癥的有效療法。事實上，目前認(rèn)為幾種癌癥經(jīng)化學(xué)療法是可以治愈的并且包括何杰金氏病、大細(xì)胞淋巴瘤、急性淋巴細(xì)胞性白血病、睪丸癌和早期乳腺癌。其它癌癥例如卵巢癌、小細(xì)胞肺癌和晚期乳腺癌盡管尚未治愈，但對于組合化學(xué)療法呈現(xiàn)正性反應(yīng)。
在癌癥治療中，最重要的未解決的問題之一是抗藥性。在對于單一細(xì)胞毒藥物選擇抗性后，對整個范圍的具有不同結(jié)構(gòu)和細(xì)胞靶向的藥物例如烷化劑、抗代謝藥、激素、含鉑藥物和天然產(chǎn)物，細(xì)胞可變得具有交叉抗性。這個現(xiàn)象被稱作多抗病性(MDR)。在一些類型的細(xì)胞中，該抗性為先天具有的，而在其它類型的細(xì)胞例如小細(xì)胞肺癌中，該抗性則為后天獲得的。
已知這樣的抗性是多種因素造成的并且由至少兩種蛋白授與170kDa的P-糖蛋白(MDR1)和最近鑒定的190kDa的多抗病性蛋白(MRP1)。盡管MDR1和MRP1兩者屬于ATP結(jié)合的盒超家族的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，它們是結(jié)構(gòu)上完全不同的分子并且具有少于15％的氨基酸同源性。盡管在所述兩種蛋白間存在結(jié)構(gòu)多樣性，直到1994年人們才知道在MDR1和MRP1細(xì)胞系的抗性模式中一致的差異性。然而，人們知道MRP1和對特定腫瘤消解劑的抗性的關(guān)聯(lián)或缺乏此關(guān)聯(lián)。參見Cole等，“多抗病性MRP轉(zhuǎn)染的人腫瘤細(xì)胞的藥理特性”，CancerResearch,54:5902-5910,1994。多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、長春新堿和依托泊苷為MRP1的底物，即MRP1能結(jié)合于這些腫瘤消解劑并且使它們離開它們的作用部位細(xì)胞核并且在細(xì)胞之外重新分布。同一作者和Marquardt,D.和Center,M.S.,Cancer Research,52:3157,1992。
多柔比星、柔紅霉素和表柔比星是蒽環(huán)類抗生素的成員。它們?yōu)殒溍咕鷮俚亩喾N菌株的分離物并且通過抑制核酸合成起作用。這些藥物用于治療骨、卵巢、膀胱、甲狀腺和尤其是乳腺的腫瘤。它們也用于治療急性成淋巴細(xì)胞性和急性原始粒細(xì)胞性白血病、維耳姆斯氏瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、軟組織肉瘤、何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤及支氣管癌。
長春新堿是長春花生物堿類腫瘤消解劑的成員，其為常見的開花期草本植物長春花(Vinca rosea Linn)的分離物。長春新堿的作用機(jī)制仍然處于研究之中，但是已發(fā)現(xiàn)其與抑制有絲分裂紡錘體中的微管形成有關(guān)。長春新堿用于治療急性白血病、何杰金氏病、非何杰金氏惡性淋巴瘤、橫紋肌肉瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤和維耳姆斯氏瘤。
依托泊苷系表鬼臼毒素類腫瘤消解劑的成員，其為鬼臼毒素的半合成衍生物。依托泊苷作為拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑起作用并且用于治療睪丸和肺的腫瘤。
目前尚不清楚是什么決定細(xì)胞系是否借助MDR1或MRP1機(jī)制獲得抗性。由于這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的組織特異性和/或在一種機(jī)制起主要支配作用或者是唯一的作用的情況中，具有對于一種超過另一種的選擇性抑制劑將是有用的。此外，當(dāng)給予是兩種蛋白中任何一種的底物的藥物時，組合給予其為所述蛋白選擇性抑制劑的藥物將是特別有利的。因此，需要提供為MDR1或MRP1選擇性抑制劑的化合物。
本發(fā)明涉及式Ⅰ化合物或它們的藥用的鹽或溶劑合物 其中R為(CH2)m’CHR1NHR2、O(CH2)2NHR2、(CH2)m’COR3、NHR2和(CH2)m’CHR1NR4R5；R’為氫、羥基或O(以苯基或C3-C7環(huán)烷基任選取代的C1-C6烷基)；m和m’在每種情況下獨(dú)立為0、1或2；R1在每種情況下獨(dú)立為氫或C1-C6烷基；R2為氫、COR6、CH2R6’、SO2R7或式 的部分；R3為氫、羥基、C1-C6烷氧基、氨基酯、氨基酸或NR4R5；R4為氫或C1-C6烷基；R5為氫、C1-C6烷基、C6-C10雙環(huán)烷基、CH2CH(CH3)苯基、CH(CH3)CH2CO2R1、芳基、取代的芳基、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nNH2、(CH2)2NHCOR6、(CH2)2OH、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)，或R4和R5合并形成吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、六亞甲基亞胺-1-基或嗎啉-4-基環(huán)；n為1、2、3或4；q為0、1、2或3；R6為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、叔丁氧基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2、(CH2)2NH-芳基或NHR7；R6’為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2或(CH2)2NH-芳基；r為0、1或2；R7為C1-C6烷基、苯基或取代的苯基；和R8為氫或CO2R1。
本發(fā)明另外涉及在哺乳動物上抑制MRP1的方法，該方法包括給予需要它們的哺乳動物有效量的式Ⅰ化合物或它們的藥用的鹽或溶劑合物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及抑制哺乳動物的抗性腫瘤或?qū)剐悦舾械哪[瘤的方法，該方法包括給予需要它們的哺乳動物與有效量的腫瘤消解劑組合的有效量的式Ⅰ化合物或它們的藥用的鹽或溶劑合物。
本發(fā)明也涉及包含與一種或多種腫瘤消解劑、藥用載體、稀釋劑或賦形劑組合的式Ⅰ化合物或它們的藥用的鹽或溶劑合物的藥用制劑。
本發(fā)明涉及發(fā)現(xiàn)一選擇組的化合物即那些式Ⅰ化合物為多抗病性蛋白(MRP1)的選擇性抑制劑并因此用于治療在抗性腫瘤和對抗性敏感的腫瘤中MRP1授予的多抗病性(MDR)。
當(dāng)涉及MRP1時的術(shù)語“抑制”和“抑制MRP1”指的是抑制、減輕、緩解、改善、阻止、延緩或逆轉(zhuǎn)MRP1從腫瘤消解劑的作用部位、最經(jīng)常的是腫瘤細(xì)胞核離開并且在細(xì)胞之外重新分布的能力的發(fā)展，或者降低MRP1的這種能力。
如同在此使用的術(shù)語“有效量的式Ⅰ化合物”指的是一定量的能夠抑制MRP1的本發(fā)明化合物。術(shù)語“有效量的腫瘤消解劑”指的是一定量的能夠抑制抗性腫瘤或非抗性腫瘤的腫瘤消解劑。
術(shù)語“抑制抗性腫瘤或?qū)剐悦舾械哪[瘤”指的是抑制、改善、阻止、延緩或逆轉(zhuǎn)抗性腫瘤或?qū)剐悦舾械哪[瘤的發(fā)展，降低抗性腫瘤或?qū)剐悦舾械哪[瘤的生長或者殺死抗性腫瘤和/或?qū)剐悦舾械哪[瘤。
術(shù)語“抗性腫瘤”指的是其對化學(xué)治療具有抗性的腫瘤，其中該抗性部分或者全部由MRP1授予。這樣的腫瘤包括(但不局限于)膀胱癌、骨癌、乳腺癌、肺(小細(xì)胞)癌、睪丸癌和甲狀腺癌并且也包括(但不局限于)更為具體類型的癌癥例如急性成淋巴細(xì)胞性和急性原始粒細(xì)胞性白血病、維耳姆斯氏瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、軟組織肉瘤、何杰金氏和非何杰金氏淋巴瘤及支氣管癌。
其為“對抗性敏感”的腫瘤為其中抗性既不是先天的也不是現(xiàn)在存在的而是化學(xué)治療開始后能夠通過MRP1授予的腫瘤。因此，本發(fā)明方法包括預(yù)防和治療性地給予式Ⅰ化合物。
術(shù)語“化學(xué)治療”指的是使用一種或多種腫瘤消解劑，其中至少一種腫瘤消解劑為MRP1的底物。“MRP1的底物”為結(jié)合MRP1的腫瘤消解劑并且離開腫瘤消解劑的作用部位(腫瘤的細(xì)胞核)，在細(xì)胞之外重新分布，因此，使得所述治療效果較差。
術(shù)語“治療”具有它們通常的含義，其包括在多抗病性腫瘤中預(yù)防、抑制、緩解、改善、阻止、延緩或逆轉(zhuǎn)MRP1衍生的藥物抗性的進(jìn)展、或者降低MRP1衍生的藥物抗性的嚴(yán)重性。
在本文的通式中，通用化學(xué)術(shù)語具有它們的通常含義。例如，術(shù)語“C1-C4烷基”指的是甲基、乙基、丙基、異丙基、環(huán)丙基、丁基、環(huán)丁基、仲丁基和叔丁基。術(shù)語“C1-C6烷基”指的是含有1至6個碳原子的單價的、直形的、分枝的或環(huán)狀的飽和烴并且包括C1-C4烷基。另外，C1-C6烷基也包括(但不局限于)環(huán)戊基、戊基、己基、環(huán)己基等。術(shù)語“C3-C6環(huán)烷基”指的是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。術(shù)語“C5-C7環(huán)烷基”指的是環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。術(shù)語“C6-C10雙環(huán)烷基”指的是雙環(huán)-[2.1.1]己烷基、[2.2.1]庚烷基、[3.2.1]辛烷基、[2.2.2]辛烷基、[3.2.2]壬烷基、[3.3.1]壬烷基、[3.3.2]癸烷基和[4.3.1]癸烷基環(huán)體系，其中該環(huán)在對于環(huán)上取代的任何可能的點(diǎn)上連接母體分子部分。
術(shù)語“C1-C4烷氧基”和“C1-C6烷氧基”分別指的是式O-(C1-C4烷基)和O-(C1-C6烷基)的部分。
術(shù)語“取代的C3-C6環(huán)烷基”指的是用苯基、取代的苯基或CO2R1基團(tuán)取代一次的C3-C6環(huán)烷基。
術(shù)語“鹵代”或“鹵化物”指的是氟、氯、溴和碘。
術(shù)語“芳基”指的是苯基、芐基和萘基。
術(shù)語“取代的芳基”指的是分別用以下基團(tuán)獨(dú)立取代1至5次的苯基、芐基和萘基C1-C6烷基、鹵代、羥基、三氟甲基、N(R1)2、SO2N(R1)2、NH-Pg、C1-C6烷氧基、芐氧基、CO2R1、C5-C7環(huán)烷基、三氟甲氧基或硝基。
術(shù)語“雜環(huán)”分別指的是含有1至3個獨(dú)立選自氧、硫和氮的雜原子的，5至7個或8至10個總原子的單價的、飽和的、不飽和的或芳香的單環(huán)或稠合環(huán)體系。
術(shù)語“取代的雜環(huán)”指的是用C1-C6烷基、鹵代、芐基、苯基、三氟甲基或氧代基團(tuán)獨(dú)立取代1或2次的雜環(huán)。
如同在此說明書中使用的術(shù)語“氨基酸”指的是N-末端連接的甘氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。
如同在此說明書中使用的術(shù)語“氨基酯”指的是其中每一個氨基酸的羧基(天冬氨酸和谷氨酸每一個具有兩個羧基而其余的氨基酸僅含有一個羧基)用C1-C6烷基取代的氨基酸。即烷基當(dāng)與羧基連接在一起時形成C1-C6烷基酯。
術(shù)語“保護(hù)基團(tuán)”指的是氨基保護(hù)基團(tuán)或羥基保護(hù)基團(tuán)。由所述“Pg”基團(tuán)是否連接于氮原子(氨基保護(hù)基團(tuán))或連接于氧原子(羥基保護(hù)基團(tuán))來判斷保護(hù)基團(tuán)的種類將是顯而易見的。
如同在此說明書中使用的術(shù)語“氨基保護(hù)基團(tuán)”指的是通常用于封閉或保護(hù)氨基的官能性而化合物中的其它官能團(tuán)發(fā)生反應(yīng)的氨基的取代基。這樣的氨基保護(hù)基團(tuán)的實例包括甲?；?、三苯甲基、苯二甲酰亞胺基、乙?；?、三氯乙?；?、氯乙酰基、溴代乙酰基和碘代乙?；?、尿烷類封閉基團(tuán)如芐氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基(“FMOC”)等氨基保護(hù)基團(tuán)。所用氨基保護(hù)基團(tuán)的種類是不嚴(yán)格的，只要衍生的氨基基團(tuán)對在分子的其它位置上進(jìn)行的后續(xù)的反應(yīng)的條件是穩(wěn)定的并且在適當(dāng)?shù)臅r機(jī)能夠被除去而不斷裂分子的剩余部分即可。以上術(shù)語也包含在頭孢菌素、青霉素和肽領(lǐng)域中使用的相似的氨基保護(hù)基團(tuán)。在由T.W.Greene“有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)”JohnWiley and Sons,New York,N.Y.,1991(下文稱作Greene)第7章中，描述了以上術(shù)語所指的基團(tuán)的其它實例。優(yōu)選的氨基保護(hù)基團(tuán)為叔丁氧基羰基。
術(shù)語“羥基保護(hù)基團(tuán)”指的是在Greene第2章中描述的，由有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員理解的基團(tuán)。代表性羥基保護(hù)基團(tuán)包括例如包括甲基和取代的甲基醚的醚基團(tuán)如甲基醚、甲氧基甲基醚、甲基硫代甲基醚、叔丁基硫代甲基醚、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基-甲基醚、芐氧基甲基醚、對甲氧基芐氧基-甲基醚和叔丁氧基甲基醚、取代的乙基醚基團(tuán)如乙氧基乙基醚、1-(2-氯乙氧基)-乙基醚、2,2,2-三氯乙氧基甲基醚和2-(三甲基甲硅烷基)乙基醚、異丙基醚基團(tuán)、苯基和取代的苯基醚基團(tuán)如苯基醚、對氯苯基醚、對甲氧基苯基醚和2,4-二硝基苯基醚、芐基和取代的芐基醚基團(tuán)如芐基醚、對甲氧基芐基醚、鄰硝基芐基醚和2,6-二氯芐基醚以及烷基甲硅烷基醚基團(tuán)如三甲基-、三乙基-和三異丙基甲硅烷基醚、混合的烷基甲硅烷基醚基團(tuán)如二甲基異丙基甲硅烷基醚和二乙基異丙基甲硅烷基醚和酯保護(hù)基團(tuán)例如甲酸酯、芐基甲酸酯、一-、二-和三氯乙酸酯、苯氧基乙酸酯和對氯苯氧基乙酸酯等。所使用的羥基保護(hù)基團(tuán)的種類不是嚴(yán)格的，只要所述衍生的羥基對在中間體分子的其它位置上進(jìn)行的后續(xù)反應(yīng)的條件是穩(wěn)定的并且在適當(dāng)?shù)臅r機(jī)能夠被選擇性除去而不斷裂分子的剩余部分即可，這包括任何其它羥基保護(hù)基團(tuán)。
術(shù)語“羰基活化基團(tuán)”指的是其使得羰基易于親核加成的羰基的取代基。適宜的活化基團(tuán)為那些在羰基上具有凈電子吸引作用的基團(tuán)。這樣的基團(tuán)包括(但不局限于)烷氧基、芳氧基、含氮芳香雜環(huán)或氨基基團(tuán)例如氧代苯并三唑、咪唑基、硝基苯氧基、五氯苯氧基、N-氧代琥珀酰亞胺、N,N’-二環(huán)己基異脲-O-基、N-羥基-N-甲氧基氨基等、乙酸酯、甲酸酯、磺酸酯如甲磺酸酯、乙磺酸酯、苯磺酸酯或?qū)妆交撬狨サ群望u化物尤其是氯化物、溴化物或碘化物。
一般地，術(shù)語“藥用的”當(dāng)用作形容詞時意指基本上對生物體無毒性的。例如，如同在此使用的術(shù)語“藥用鹽”指的是其為基本上對生物體無毒性的式Ⅰ化合物的鹽。參見例如Berge,S.M,Bighley,L.D.和Monkhouse,D.C.,“藥用鹽”,J.Pharm.Sci.,66:1,1977。典型的藥用鹽包括那些通過式Ⅰ化合物與無機(jī)或有機(jī)酸或堿反應(yīng)制備的鹽。這樣的鹽分別稱之為酸加成鹽或堿加成鹽。與它們被衍生來自的化合物相比較，這些藥用鹽經(jīng)常具有增強(qiáng)的溶解性特性，并且由此經(jīng)常更適合于作為液體或乳劑的制劑。
藥用酸加成鹽的實例為式Ⅰ化合物的硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、單氫磷酸鹽、二氫磷酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯代苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、枸櫞酸鹽、乳酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、扁桃酸鹽等。
藥用堿加成鹽的實例為式Ⅰ化合物的銨鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽、鎂鹽、甲基胺鹽、二乙基胺鹽、亞乙基二胺鹽、環(huán)已基胺鹽和乙醇胺鹽等。
術(shù)語“溶劑合物”表示包含一種或多種溶質(zhì)例如式Ⅰ化合物的分子與一種或多種溶劑分子的聚集體。
術(shù)語“適宜的溶劑”指的是其對進(jìn)行著的反應(yīng)是惰性的并且有效溶解反應(yīng)物質(zhì)以影響所要求反應(yīng)的溶劑。適宜的溶劑的實例包括(但不局限于)二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、乙醚、乙腈、乙酸乙酯、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮、四氫呋喃、二甲基甲酰胺、甲苯、氯代苯、二甲基亞砜、它們的混合物等。
術(shù)語“羰基活化試劑”指的是使羧酸基團(tuán)的羰基轉(zhuǎn)化為更易于進(jìn)行親核加成的基團(tuán)的試劑并且包括(但不局限于)那些在“肽類”，Gross和Meienhofer編輯，Academic Press(1979)，第二章和M.Bodanszky，“肽合成原理”，第2版，Springer-Verlag Berlin Heidelberg,1993，在下文分別稱作“肽類”和“肽合成”中發(fā)現(xiàn)的這樣的試劑。更具體的說，羰基活化試劑包括鹵素的親核來源例如亞硫酰溴、亞硫酰氯、草酰氯等，醇類例如硝基苯酚、五氯苯酚等，胺類例如N-羥基-N-甲氧基胺等、酰鹵例如乙酰鹵、甲酰鹵、甲磺酰鹵、乙磺酰鹵、苯磺酰鹵或?qū)妆交酋｛u等和化合物如1,1’-羰基二咪唑、苯并三唑、咪唑、N-羥基琥珀酰亞胺、二環(huán)己基碳二亞胺等。
術(shù)語“適宜的熱力學(xué)堿”指的是其作為用于作為所要求反應(yīng)的副產(chǎn)物產(chǎn)生的任何質(zhì)子的質(zhì)子捕集器的堿，或者指的是其提供可逆的脫除質(zhì)子的酸性底物并且其反應(yīng)性足以影響所要求的反應(yīng)而不顯著影響任何不合乎需要的反應(yīng)的堿。熱力學(xué)堿的實例包括(但不局限于)碳酸鹽、碳酸氫鹽和氫氧化物(例如鋰、鈉或鉀的碳酸鹽、碳酸氫鹽或氫氧化物)、三-(C1-C4烷基)胺或含氮芳香雜環(huán)(例如吡啶)。
盡管所有本發(fā)明化合物均是有用的，然而某些化合物特別重要并且是優(yōu)選的。以下條目列出幾組優(yōu)選的化合物、制劑和方法。人們將理解每一個條目可與其它條目結(jié)合以產(chǎn)生另外組的優(yōu)選實施方案。
a)m為0和m’為0；b)m為0和m’為1；c)R處于間位；d)R為CHR1NHR2和R1為甲基；e)R為COR3；f)R為(CH2)COR3；g)R為(CH2)NR4R5；h)R’為氫；i)R2為4-氨基磺酰基芐基；j)R2為3,4,5-三甲氧基芐基；k)R3為(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基；l)R3為(4-氨基磺酰基苯基)氨基；m)R3為(6-甲氧基喹啉-8-基)氨基；n)R4為氫；o)R5為5-甲基異噁唑-3-酰基；p)R5為3,4,5-三甲氧基苯甲?；籷)R5為3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲?；?；r)R5為3,4,5-三甲氧基芐基；s)所述化合物為藥用的鹽；t)所述化合物為鹽酸鹽；u)實施例部分的化合物；v)其中哺乳動物為人的方法；w)其中所述腫瘤消解劑選自多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、長春新堿和依托泊苷的方法；x)其中所述腫瘤為維耳姆斯氏瘤、膀胱癌、骨癌、乳腺癌、肺(小細(xì)胞)癌、睪丸癌或甲狀腺癌或者所述腫瘤與急性成淋巴細(xì)胞性和急性原始粒細(xì)胞性白血病、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、軟組織肉瘤、何杰金氏和非何杰金氏淋巴瘤或支氣管癌的方法；和y)其中所述腫瘤消解劑選自多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、長春新堿和依托泊苷的制劑。
本發(fā)明化合物能夠通過多種方法來制備，其中一些在以下流程中闡明。生成式Ⅰ化合物需要的步驟的特定順序依所要合成的特定化合物、起始化合物和取代部分的相對不穩(wěn)定性而定。
式Ⅰ化合物可由如同在以下流程1中闡明的其中R、R’和m如同前面描述的式Ⅱ化合物來制備。流程1 式Ⅰ化合物可通過將式Ⅱ化合物溶解于或懸浮于適宜的溶劑中并加入適宜的熱力學(xué)堿來制備。優(yōu)選和便利的溶劑一般為二甲基甲酰胺。便利和優(yōu)選的熱力學(xué)堿通常為氫氧化鈉，其作為在甲醇中的2N溶液加入。一般將反應(yīng)物在室溫下混合，但是生成的溶液一般在大約30℃至混合物的回流溫度下加熱30分鐘至大約18小時。所述混合物優(yōu)選加熱到至少50℃反應(yīng)大約1至大約6小時，并且最優(yōu)選加熱到大約65℃至75℃反應(yīng)大約1.5小時至大約3小時。所述堿一般以大摩爾過量使用，通常以相對于式Ⅱ化合物大約4至大約8摩爾過量使用。優(yōu)選一般使用大約5至大約7摩爾過量。以下討論的式Ⅰ化合物的某些的中間體也通過以上討論的方法來制備。
如同在Greene中所述的那樣，可任選除去在環(huán)合的式Ⅰ化合物中發(fā)現(xiàn)的任何羥基或氨基保護(hù)基團(tuán)，以提供游離的氨基或羥基的式Ⅰ化合物?？稍谝韵碌闹苽浜蛯嵤├糠种?，發(fā)現(xiàn)對優(yōu)選選擇的保護(hù)基團(tuán)和它們的除去方法。
如同在以下流程2中闡明的那樣，可從式Ⅰ(a)、Ⅰ(c)或Ⅰ(e)化合物制備其中R為(CH2)m’CHR1NHR2、(CH2)m’CHR1NR4R5或O(CH2)2NHR2和R2為CH2R6’的式Ⅰ化合物，其中R9為羰基活化基團(tuán)且m、m’、R’、R1、R2、R4、R5和R6’如上所述。流程2 如同在流程1中描述的那樣制備的式Ⅰ(a)、Ⅰ(c)或Ⅰ(e)化合物可轉(zhuǎn)化為其它的本發(fā)明化合物。例如，式Ⅰ(a)、Ⅰ(c)和Ⅰ(d)化合物可還原胺化以分別形成式Ⅰ(b)、Ⅰ(d)和Ⅰ(f)化合物。還原胺化為熟知的轉(zhuǎn)化，參見例如，Larock，“有機(jī)轉(zhuǎn)化作用大全”，第421頁，VCH出版社，NewYork,N.Y.,1989,下文稱作“Larock”。在本發(fā)明內(nèi)容中，可通過標(biāo)準(zhǔn)方法或組合合成技術(shù)完成所述還原胺化。
任選在適宜的熱力學(xué)堿存在下，可將式Ⅲ、Ⅰ(c)或Ⅰ(e)化合物溶解于或懸浮于適宜的溶劑中并加入式Ⅰ(a)或Ⅳ化合物以得到亞胺中間體。也可任選使用路易斯酸催化劑例如異丙醇鈦(Ⅳ)，以促進(jìn)該反應(yīng)。一旦確定式Ⅰ(a)或Ⅳ化合物已經(jīng)基本消耗完全，所述亞胺中間體一般就地與適宜的還原劑反應(yīng)，以分別提供式Ⅰ(b)、Ⅰ(d)或Ⅰ(f)化合物?？稍诖蠹s0℃至該混合物的沸點(diǎn)下實施所有轉(zhuǎn)化，但是室溫為優(yōu)選的反應(yīng)溫度。所述亞胺的形成和亞胺還原成胺的單一步驟可花費(fèi)5分鐘至24小時。亞胺形成通常在15分鐘至1小時內(nèi)基本完成，而亞胺的還原通常在30分鐘至2小時內(nèi)完成。甲醇一般為優(yōu)選的溶劑。
當(dāng)式Ⅲ、Ⅰ(c)或Ⅰ(e)化合物為酸加成鹽時，一般使用熱力學(xué)堿以轉(zhuǎn)化所述鹽成為其游離胺形式。為了這個目的，優(yōu)選的熱力學(xué)堿為N-甲基嗎啉和三乙胺。優(yōu)選的路易斯酸催化劑為異丙醇鈦(Ⅳ)。適宜的還原劑包括(但不局限于)鈀或鉑炭加氫、硼烷或硼烷復(fù)合物如硼烷-吡啶、硼烷-叔丁基胺和硼烷-二甲基胺復(fù)合物、硼氫還原劑如硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉和氫化鋁鋰。氰基硼氫化鈉為優(yōu)選的還原劑。
一般使用以化學(xué)計量稍微過量的式Ⅲ、Ⅰ(c)或Ⅰ(e)化合物。例如，通常使用分別相對于式Ⅰ(a)或Ⅳ化合物的1.01至大約1.5當(dāng)量，而1.05至1.15當(dāng)量為通常使用的優(yōu)選的量。所述還原劑優(yōu)選使用相對于式Ⅰ(a)或Ⅳ化合物的化學(xué)計量，但是稍微過量，1.01至1.05當(dāng)量是可接受的。
如同在以下流程3中闡明的， 由式Ⅰ(c)和Ⅰ(e)化合物可制備其中R為(CH2)m’CHR1NHR2或O(CH2)2NHR2,R2為COR6’、SO2R7或式 的部分的式Ⅰ化合物，其中R10為COR6、SO2R7或式 的部分，R11為O或S，并且m、m’、R’、R1、R6、R6’、R7和R9如上所述。流程3 借助標(biāo)準(zhǔn)方法或者組合合成技術(shù)，可將式Ⅰ(c)和Ⅰ(e)化合物轉(zhuǎn)化為其它的本發(fā)明化合物。例如，任選在熱力學(xué)堿存在下，可用式Ⅳ化合物處理溶解于或懸浮于適宜的溶劑中的式Ⅰ(c)或Ⅰ(e)化合物，得到其中R10為COR6的式Ⅰ(g)或Ⅰ(h)化合物。優(yōu)選和便利的溶劑一般為二氯甲烷。當(dāng)使用堿時，三乙胺一般為優(yōu)選的堿。此外，當(dāng)使用堿時，一般以稍微化學(xué)計算過量使用堿和式Ⅳ化合物。例如，通常使用相對于式Ⅰ(c)和Ⅰ(e)化合物1.01至1.40摩爾過量。大約1.15至大約1.25摩爾過量一般是優(yōu)選的。當(dāng)不使用堿時，一般以相對大的化學(xué)計算過量使用式Ⅳ化合物。例如，通常使用相對于式Ⅰ(c)或Ⅰ(e)化合物大約1.5至3摩爾過量。大約1.8至大約2.2摩爾過量一般是優(yōu)選的。所述反應(yīng)通常在大約0℃至大約溶劑的回流溫度下反應(yīng)10分鐘至18小時。所述反應(yīng)優(yōu)選在大約15℃至大約40℃下反應(yīng)5分鐘至大約1小時。
在如同先前段落的相同條件下，或者可用式Ⅴ或Ⅵ化合物處理式Ⅰ(c)或Ⅰ(e)化合物，得到其中R為(CH2)m’CHR1NHR2或O(CH2)2NHR2和R2為CONHR7、SO2R7或式 的部分的式Ⅰ化合物。
如同在以下流程4中闡明的，由式Ⅰ(i)化合物可制備其中R為(CH2)m’COR3和R3為C1-C6烷氧基、氨基酯或NR4R5的式Ⅰ化合物，其中R12為NR4R5、氨基酯或C1-C6烷氧基，并且m、m’、R’、R4、R5和R9如上所述。流程4
借助液相或者固相合成技術(shù)，如同在流程1中描述的那樣制備的式Ⅰ(i)化合物也可轉(zhuǎn)化為其它的本發(fā)明化合物。例如，通過化學(xué)領(lǐng)域熟知的方法，可將式Ⅰ(i)的酸活化，以形成活化的式Ⅶ的羧酸。參見例如肽、肽合成和以下的實施例和制備部分。
一般地，以相似于流程3中描述的式Ⅰ(c)或Ⅰ(e)和Ⅳ化合物的反應(yīng)方法進(jìn)行其中R12為NR4R5或氨基酯的式Ⅰ(j)化合物的制備。更具體地說，任選在適宜的熱力學(xué)堿存在下，通過將式Ⅶ化合物溶解于或懸浮于適宜的溶劑中，并且加入式Ⅲ或Ⅷ的胺來制備式Ⅰ(k)化合物。優(yōu)選和便利的溶劑一般為二氯甲烷。優(yōu)選的堿是三乙胺和哌啶基甲基聚苯乙烯樹脂。所述胺一般以摩爾過量使用。例如，相對于式Ⅷ化合物，通常使用大約1.5至大約3摩爾過量。大約1.8至大約2.2摩爾過量一般是優(yōu)選的。所述反應(yīng)通常在大約0℃至大約溶劑的回流溫度下進(jìn)行10分鐘至18小時。所述反應(yīng)優(yōu)選在大約15℃至大約40℃下進(jìn)行大約5分鐘至大約2.5小時。
或者，以如同在以下實施例41中描述的一步方法進(jìn)行活化式Ⅰ(i)化合物并且加入式Ⅲ、Ⅷ或Ⅸ化合物。
通過化學(xué)領(lǐng)域熟知的方法，可制備其中R12為C1-C6烷氧基的式Ⅰ(j)化合物。有關(guān)活化的羧酸轉(zhuǎn)化為酯的說明參見例如Larock在第978-979頁中?；蛘撸缤贚arock參考文獻(xiàn)第966-972中所述的那樣或者在以下實施例部分中公開的那樣，可直接從式Ⅰ(i)的酸制備這些式Ⅰ(j)化合物。
一般通過使式Ⅰ化合物與等摩爾的或過量的酸或堿反應(yīng)，形成本發(fā)明藥用的鹽。對于酸加成鹽而言，所述反應(yīng)物一般在互溶劑例如乙醚、四氫呋喃、甲醇、乙醇、異丙醇、苯等中混合，或者對于堿加成鹽而言，在水、醇或氯代溶劑如二氯甲烷中混合。在大約1小時至大約10天內(nèi)，這些鹽一般從溶液中沉淀出來，并且能夠通過過濾或其它常規(guī)方法來分離。
一般用于形成藥用酸加成鹽的酸為無機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸等和有機(jī)酸例如對甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、草酸、對溴苯基磺酸、碳酸、琥珀酸、枸櫞酸、酒石酸、苯甲酸、乙酸等。優(yōu)選的藥用酸加成鹽為那些與無機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸和硫酸形成的鹽和與有機(jī)酸例如馬來酸、酒石酸和甲磺酸形成的鹽。
一般用于形成藥用堿加成鹽的堿為無機(jī)堿例如銨或者堿金屬或堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等。因此，用于制備本發(fā)明鹽的這樣的堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈣、碳酸鈣等。鉀和鈉的鹽形式為特別優(yōu)選。
應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到形成本發(fā)明任何鹽的一部分的具體的相反離子性質(zhì)上不是嚴(yán)格的，只要作為整體的鹽是藥學(xué)上可接受的并且只要所述相反離子對于作為整體的鹽不引起不合乎要求的性質(zhì)即可。
可通過多種途徑得到原料和對本發(fā)明的其它化合物而言為中間體的本發(fā)明化合物。例如，可按照在流程5中顯示的途徑制備式Ⅱ、Ⅰ(a)、Ⅰ(c)、Ⅰ(e)和Ⅰ(i)化合物，其中R、R’和m如上所述。流程5 可通過將式Ⅹ化合物溶解于或懸浮于適宜的溶劑中并加入式Ⅺ化合物和適宜的熱力學(xué)堿制備式Ⅱ化合物。二氯甲烷為便利的溶劑并且一般為優(yōu)選。吡啶通常為優(yōu)選的熱力學(xué)堿。這個形成酰胺的反應(yīng)也優(yōu)選在二甲基氨基吡啶(DMAP)存在下進(jìn)行。式Ⅺ化合物一般并優(yōu)選以相對于式Ⅹ化合物的等摩爾量來使用，但是稍微過量(大約過量0.05至大約0.15摩爾)也是可以接受的。熱力學(xué)堿一般以稍微摩爾過量使用，例如一般使用相對于式Ⅹ化合物的大約1.01至大約1.2摩爾過量。大約1.05至大約1.15摩爾過量一般是優(yōu)選的。所述DMAP以催化方式來使用。例如，一般使用相對于式Ⅹ化合物的大約5％摩爾至15％摩爾。10％摩爾通常是優(yōu)選的。
其中R為(CH2)m’COR1、(CH2)m’NHPg、O(CH2)2NH-Pg或(CH2)m’CO2(C1-C6烷基)且被用來分別制備式Ⅰ(a)、Ⅰ(c)、Ⅰ(e)和Ⅰ(i)化合物的式Ⅹ化合物為本領(lǐng)域熟知的，并且在一定程度上不能市售得到，其通過本領(lǐng)域中通常使用的標(biāo)準(zhǔn)方法易于合成得到。例如，可通過還原相應(yīng)的市售硝基化合物制備這些式Ⅹ化合物。還原硝基為胺的方法是熟知的。參見例如Larock第412-415頁或以下制備和實施例部分，另外，可由市售硝基苯酚或如在以下實施例15和16中描述的硝基芐基醇制備其中R為O(CH2)2NH-Pg的式Ⅹ化合物。此外，可在流程1中描述的環(huán)合之前實施在流程2-5中描述的轉(zhuǎn)化，提供具有充分加工的R取代基的式Ⅹ化合物。
式Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ和Ⅺ化合物為本領(lǐng)域已知的，并且一定程度上不能市售得到，其通過本領(lǐng)域中通常使用的標(biāo)準(zhǔn)方法易于合成。
通過借助常規(guī)層析技術(shù)監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程，能夠確定實施流程1-5的反應(yīng)的最佳時間。此外，在惰性氣氛例如氬或者尤其是氮下，實施本發(fā)明的反應(yīng)是優(yōu)選的。溶劑的選擇一般是不嚴(yán)格的，只要所用溶劑對所述進(jìn)行的反應(yīng)是惰性的并且足以溶解反應(yīng)物質(zhì)以影響所要求的反應(yīng)。在它們用于后續(xù)反應(yīng)之前，優(yōu)選分離并純化式Ⅱ、Ⅰ(a)、Ⅰ(c)、Ⅰ(e)和Ⅰ(i)化合物。這些化合物在形成期間可從反應(yīng)溶液中結(jié)晶出來，然后經(jīng)過濾收集，或者通過提取、蒸發(fā)或傾析可除去反應(yīng)溶劑?？蛇M(jìn)一步純化這些中間體和式Ⅰ的最終產(chǎn)物，如果需要，通過常見的技術(shù)例如重結(jié)晶或經(jīng)固體載體例如硅膠或氧化鋁的層析法。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識到并非所有的取代基可與所有的反應(yīng)條件相適應(yīng)，例如，其中R’為羥基的本發(fā)明化合物。這些化合物可作為相應(yīng)的芐基醚來保護(hù)，然后在經(jīng)氫解或者通過其它本領(lǐng)域熟知的方法的合成中于便利的時機(jī)下轉(zhuǎn)化為羥基衍生物。
提供以下制備和實施例以更好地闡明本發(fā)明的實施，并不解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識到可進(jìn)行多種改進(jìn)而不背離本發(fā)明的精神和范圍。在本說明書中提及的所有出版物表示本領(lǐng)域技術(shù)人員的水平與本發(fā)明的內(nèi)容是相稱的。在本制備和實施例中使用的術(shù)語和縮寫具有它們正常的含義，除非另外指明。例如，“℃”、“N”、“mmol”、“g”、“mL”、“M”、“HPLC”、“IR”、“MS(FD)”、“MS(IS)”、“MS(FIA)”、“MS(FAB)”、“MS(EI)”、“UV”和“1H NMR”分別指的是攝氏度、當(dāng)量或當(dāng)量濃度、毫摩爾或毫摩爾數(shù)、克或克數(shù)、毫升或毫升數(shù)、摩爾或摩爾濃度、高效液相色譜、紅外光譜、場解吸質(zhì)譜、離子噴霧質(zhì)譜、流動注射分析質(zhì)譜、快速原子轟擊質(zhì)譜、電子碰撞質(zhì)譜、紫外光譜和核磁共振氫譜。此外，對于紅外光譜所列出的吸收最大值僅為那些重要的并且不是所有觀察到的最大值。制備制備1N-(5-甲基異噁唑-3-?；?-3-硝基芐胺當(dāng)加入463mg(3.18mmol)的5-甲基-3-異噁唑酰氯時，在室溫下攪拌含有500mg(2.65mmol)的3-硝基芐胺在20mL二氯甲烷中的溶液。向該溶液中加入0.92mL(6.62mmol)三乙胺。在室溫下，將反應(yīng)物攪拌另外1小時，用75mL乙酸乙酯稀釋并以1N鹽酸水溶液(兩次)、水(兩次)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(三次)洗滌有機(jī)相。生成的有機(jī)溶液經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾和濃縮，得到550mg(79％)黃色固體的標(biāo)題化合物。MS(FD)m/z 261(M+)。制備2N-(5-甲基異噁唑-3-?；?-3-氨基芐胺向含有260mg(1.00mmol)的N-(5-甲基異噁唑-3-?；?-3-硝基芐胺在20mL四氫呋喃的溶液中加入674mg(3.00mmol)氯化錫二水合物，隨后加入2mL濃鹽酸。在室溫下，將反應(yīng)物攪拌18小時，然后用100mL乙酸乙酯稀釋。以飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌有機(jī)溶液，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾和濃縮，得到200mg(86％)黃色泡沫的標(biāo)題化合物。MS(FD)m/z231(M+)。制備3N-(5-甲基異噁唑-3-?；?-N’-(5-甲基-3-(2-氯-6-氟苯基異噁唑-4-?；?-3-氨基芐胺在室溫下，向含有413mg(1.78mmol)的N-(5-甲基異噁唑-3-?；?-3-氨基芐胺在50mL二氯甲烷的溶液中加入538mg(1.96mmol)的3-(2-氯-6-氟苯基)5-甲基-4-異噁唑酰氯。向該溶液中加入0.157mL(1.96mmol)吡啶，隨后加入22mg(0.18mmol)的DMAP并在室溫下將反應(yīng)物攪拌3小時。然后用100mL乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物。該有機(jī)溶液以1N鹽酸水溶液(兩次)、鹽水(兩次)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(兩次)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮，得到755mg(90％)白色固體的標(biāo)題化合物。MS(FD)m/z468(M+)。制備4N-(5-甲基異噁唑-3-?；?-2-氨基芐胺根據(jù)制備1的方法，將2-氨基芐胺(490mg,4.01mmol)和5-甲基-3-異噁唑酰氯(437mg,3.01mmol)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物，得到250mg(36％)。MS(FD)m/z231(M+)。1H NMR與要求的產(chǎn)物相一致。制備5N-(5-甲基異噁唑-3-?；?-N’-2-(2-氯-6-氟苯基)-5-甲基異噁唑-4-酰基-2-氨基芐胺根據(jù)制備3的方法，將N-(5-甲基異噁唑-3-酰基)-2-氨基芐胺(160mg,0.692mmol)和3-(2-氯-6-氟苯基)5-甲基-4-異噁唑酰氯(208mg,0.761mmol)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物，得到275mg(85％)。MS(FD)m/z468(M+)。IR(KBr)ν=1669,1612,1590,1455,1250,898cm-1。制備6N-(5-甲基異噁唑-3-?；?-4-氨基芐胺根據(jù)制備1的方法，除了生成的單∶雙?；a(chǎn)物的2∶1混合物通過在100mL乙酸乙酯和100mL的1N鹽酸水溶液中的分配來分離以外，將4-氨基芐胺(265mg,2.17mmol)和5-甲基-3-異噁唑酰氯(316mg,2.17mmol)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。用酸將有機(jī)層提取另外兩次并且用飽和的碳酸氫鈉水溶液將合并的酸提取液堿化(大約pH8)。用乙酸乙酯提取堿性溶液。并且有機(jī)提取液經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到94mg單酰化標(biāo)題化合物(18.7％)。MS(FD)m/z231(M+)。IR(KBr)ν=3334,1646,1551,1519,1459cm-1。制備7N-(5-甲基異噁唑-3-酰基)-N’-2-(2-氯-6-氟苯基)-5-甲基異噁唑-4-?；?4-氨基芐胺根據(jù)制備3的方法，將N-(5-甲基異噁唑-3-?；?-4-氨基芐胺(74mg,0.32mmol)和3-(2-氯-6-氟苯基)5-甲基-4-異噁唑酰氯(96mg,0.35mmol)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物，得到150mg(100％)。MS(FD)m/z468(M+)。IR(KBr)ν=3310,1685,1655,1598,1250cm-1。制備8N-(5-甲基-3-苯基異噁唑-3-酰基)-3-硝基芐胺根據(jù)制備1的方法，將3-硝基芐胺(500mg,2.65mmol)和3-苯基-5-甲基-4-異噁唑酰氯(705mg,3.18mmol)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物，得到750mg(83.9％)。MS(FD)m/z337(M+)。IR(KBr)ν3307,1648,1524,1346cm-1。制備9N-(5-甲基-3-苯基異噁唑-3-酰基)-3-氨基芐胺根據(jù)制備2的方法，將N-(5-甲基-3-苯基異噁唑-3-?；?-3-硝基芐胺(650mg,1.92mmol)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物，得到555mg(94.2％)。MS(FD)m/z307(M+)。IR(KBr)ν 3444,1647,1612,1538,1180cm-1。制備10N-(5-甲基-3-苯基異噁唑-3-酰基)-N’-2-(2-氯-6-氟苯基)-5-甲基異噁唑-4-?；?3-氨基芐胺根據(jù)制備3的方法，將N-(5-甲基-3-苯基異噁唑-3-?；?-3-氨基芐胺(555mg,1.81mmol)和3-(2-氯-6-氟苯基)5-甲基-4-異噁唑酰氯(96mg,1.81mmol)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物，得到465mg(47.2％)。MS(FD)m/z544(M+)。IR(KBr)ν3284,1653,1610,1533,1443,897cm-1。制備11N-(5-甲基-3-(2-氯-6-氟苯基異噁唑-4-?；?-3-氨基苯乙酮在氮?dú)夥障?，?-氨基苯乙酮(4.0g,29.6mmol)在二氯甲烷(250mL)中的溶液中加入4-二甲基氨基吡啶(542mg,4.44mmol)隨后迅速滴加入吡啶(7.2mL,88.8mmol)。在冷卻至0℃后，在1小時內(nèi)滴加入3-(2-氯-6-氟苯基)-5-甲基異噁唑-4-甲酰氯(8.48g,31.0mmol)在二氯甲烷(125mL)中的溶液。撤除冰浴并將該反應(yīng)混合物攪拌4小時。所述反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(500mL)稀釋，并以1N鹽酸水溶液(3×125mL)、水(2×100mL)和鹽水(3×75mL)洗滌。干燥(硫酸鎂)乙酸乙酯層，并減壓下除去揮發(fā)物，得到標(biāo)題化合物(11.79g)，其用于下一步反應(yīng)。1H NMR(CDCl3)δ7.72-7.44(m,5H),7.38(dd,1H,J=8Hz),7.27(dd,1H,J=8Hz),7.11(brs,1H),2.86(s,3H),2.57(s,3H)。制備12N-(叔丁氧基羰基)-3-硝基芐胺向4-硝基芐胺鹽酸鹽(10.3g,54.7mmol)和三乙胺(11.1g,109mmol)在二氯甲烷(75mL)中的懸浮液中加入二叔丁基二碳酸酯(15.5g,71.1mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液。在室溫下攪拌過夜后，用10％枸櫞酸(2×250mL)洗滌反應(yīng)物，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾，并減壓下除去溶劑。從乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶殘余物，得到13.80g標(biāo)題化合物(100％)。制備13N-(叔丁氧基羰基)-3-氨基芐胺向N-(叔丁氧基羰基)-3-硝基芐胺(13.8g,54.7mmol)在二甲基甲酰胺(200mL)中的溶液中加入氯化錫(Ⅱ)二水合物(74.1g,328mmol)并在室溫下將反應(yīng)物攪拌48小時。真空除去二甲基甲酰胺。將殘余物再懸浮于二氯甲烷(300ml)中，用鹽水(200mL)洗滌，經(jīng)硅藻土墊過濾，并除去溶劑，得到12.2g標(biāo)題化合物(100％)。制備14N-(叔丁氧基羰基)-N’-(5-甲基-3-(2-氯-6-氟苯基異噁唑-4-?；?-3-氨基芐胺將3-(2-氯-6-氟苯基)-5-甲基異噁唑-4-酰氯(15g,54.7mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液加入到N-(叔丁氧基羰基)-3-氨基芐胺(12.2g,54.7mmol)和三乙胺(13.8g,137mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液中。在室溫下攪拌過夜后，用10％枸櫞酸(2×200mL)洗滌反應(yīng)物，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾，并除去溶劑。殘余物經(jīng)液相色譜法(10％乙酸乙酯/己烷)純化，得到18.96g標(biāo)題化合物(75％)。制備15N-叔丁氧基羰基-1-氨基乙氧基-3-硝基苯在室溫下，向在100mL四氫呋喃中含有3.0g(21.6mmol)的3-硝基苯酚的溶液中加入3.8g(23.8mmol)的N-(叔丁氧基羰基)-氨基乙醇和7.4g(28.1mmol)三苯基膦。攪拌下向該溶液中滴加入4.4mL(28.1mmol)偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)。在室溫下，將生成的溶液攪拌另外2小時，然后用200mL乙酸乙酯稀釋。該有機(jī)溶液用1N氫氧化鈉水溶液、鹽水和1N鹽酸各洗滌兩次，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，并真空濃縮，得到黃色的油。使用50％乙酸乙酯-己烷作為洗脫劑，經(jīng)硅膠柱上的快速層析法純化殘余物。合并主要部分并濃縮，得到5.50g(90％)透明黃色油的標(biāo)題化合物。MS(FD)m/z282(M+)。制備16N’-叔丁氧基羰基-3-氨基乙氧基苯胺向3.00g(10.6mmol)的N-叔丁氧基羰基-1-氨基乙氧基-3-硝基苯在25mL甲醇中的溶液中加入25mg的10％鈀炭。在30磅/平方英寸(psi)氫下，于帕爾搖動器中將該混合物氫化15小時。隨后經(jīng)硅藻土過濾混合物并真空濃縮，得到2.20g(82％)米黃色油的標(biāo)題化合物。MS(FD)m/z252(M+)。制備17N’-(叔丁氧基羰基)-N-(5-甲基-3-(2-氯-6-氟苯基異噁唑-4-?；?-3-氨基乙氧基苯胺當(dāng)加入2.17g(7.93mmol)的3-(2-氯-6-氟苯基)5-甲基-4-異噁唑酰氯時，在室溫下攪拌含有2.00g(7.93mmol)的N’-叔丁氧基羰基-3-氨基乙氧基苯胺在50mL二氯甲烷中的溶液。向該溶液中加入0.70mL(8.7mmol)吡啶，隨后加入97mg(0.79mmol)的DMAP并在室溫下把該反應(yīng)物攪拌3小時。然后用100mL乙酸乙酯稀釋并且該有機(jī)溶液以1N鹽酸水溶液、鹽水和飽和的碳酸氫鈉水溶液各洗滌兩次，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，并真空濃縮，得到3.55g(91％)米黃色固體的標(biāo)題化合物。MS(FD)m/z489(M+)。制備18N-(5-甲基-3-(2-氯-6-氟苯基)異噁唑-4-?；?-3-氨基苯甲酸乙酯在0℃下，將3-(2-氯-6-氟苯基)5-甲基異噁唑-4-酰氯(7.9g,29.0mmol)分批加入到攪拌著的3-氨基苯甲酸乙酯(4.0g,29.0mmol)和三乙胺(4.04mL,29.0mmol)在干燥的二氯甲烷中的溶液中。加入完畢后，將該混合物溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度并攪拌1小時。用0.5M鹽酸水溶液、鹽水、碳酸氫鈉水溶液洗滌該溶液，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，得到泡沫體，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即進(jìn)入下一步反應(yīng)。制備19N-(5-甲基-3-(2-氯-6-氟苯基)異噁唑-4-?；?-3-氨基苯乙酸甲酯當(dāng)加入3.20g(11.7mmol)的3-(2-氯-6-氟苯基)5-甲基異噁唑-4-酰氯時，在室溫下攪拌在50mL二氯甲烷中含有1.93g(11.7mmol)3-氨基苯乙酸甲酯的溶液。向該溶液中先后加入1.03mL(12.9mmol)的吡啶和140mg(1.17mmol)的DMAP，并將該反應(yīng)物于室溫下攪拌3小時。然后以100mL乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)物。以1N鹽酸水溶液(兩次)、鹽水(兩次)和飽和碳酸氫鈉水溶液(兩次)洗滌該有機(jī)溶液，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，并真空濃縮，得到4.45g(94％)淡黃色固體的標(biāo)題化合物。MS(FD)m/z402(M+)。制備203-(異噁唑并[3,4-c]-1,2-二氫-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮-1-基)苯乙酰氯在室溫下，向在20mL二氯甲烷中含有107mg(0.290mmol)的3-(異噁唑并[3,4-c]-1,2-二氫-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮-1-基)苯乙酸的溶液中加入30mL(0.348mmol)的草酰氯。在室溫下，將該反應(yīng)物攪拌1小時，并真空濃縮得到白色固體的標(biāo)題化合物。該物質(zhì)無需進(jìn)一步純化即可使用。制備213-(異噁唑并[3,4-c]-1,2-二氫-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮-1-基)苯甲酰氯根據(jù)制備20的方法，將3-(異噁唑并[3,4-c]-1,2-二氫-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮-1-基)苯甲酸轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。制備22O-甲磺酰基-1-硝基-3-(1-羥基乙基)苯將硼氫化鈉(343mg,9.08mmol)分批加入到3-硝基苯乙酮(5g,30.3mmol)在甲醇中的溶液中。加入完畢后，將反應(yīng)混合物攪拌1小時并然后蒸發(fā)溶劑。在二氯甲烷和去離子水之間分配殘余物。分離有機(jī)物，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾，并蒸發(fā)至淺棕色膠。將其溶于含有三乙胺(4.2mL,30.3mmol)的二氯甲烷中，并于冰浴中冷卻。滴加甲磺酰氯(2.34mL,30.3mmol)，并在加完后，將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度并攪拌過夜。用鹽酸水溶液(0.5M)、碳酸氫鈉水溶液、鹽水順序洗滌該溶液，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，得到6.5g標(biāo)題化合物。該物質(zhì)無需進(jìn)一步純化即可使用。制備231-硝基-3-(1-疊氮乙基)苯將O-甲磺?；?1-硝基-3-(1-羥基乙基)苯(3.1g,12.6mmol)溶于無水二甲基亞砜中并加入疊氮化鈉(1.07g,16.4mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌18小時，用乙酸乙酯稀釋并以鹽水洗滌幾次，然后有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)并層析(硅膠，5∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到2.9g標(biāo)題化合物。制備243-硝基-α-甲基芐胺將1-硝基-3-(1-疊氮乙基)苯(1.3g,6.76mmol)溶于四氫呋喃當(dāng)中并加入三苯基膦(1.9g,7.4mmol)。在環(huán)境溫度下，將生成的溶液攪拌18小時。然后加入1M氫氧化鈉水溶液(1mL)并持續(xù)攪拌48小時。反應(yīng)物用乙酸乙酯稀釋，用鹽水洗滌幾次，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。將殘余物層析(硅膠，2∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到1.1g標(biāo)題化合物(99％)。1H NMR(CDCl3)δ1.41(3H,d,J=6.7Hz),1.60(2H,brs),4.28(1H,q,J=6.9Hz),7.50(1H,t,J=7.7Hz),7.70(1H,d,J=7.7Hz),8.09(1H,d,J=7.7Hz),8.25(1H,s)。制備25N-叔丁氧基羰基-3-硝基-α-甲基芐胺向3-硝基-α-甲基芐胺(1.12g,6.74mmol)在二氯甲烷(75mL)中的懸浮液中加入二碳酸二叔丁酯(1.76g,8.09mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液。在室溫下攪拌過夜之后，用10％枸櫞酸(2×250mL)洗滌反應(yīng)物，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即進(jìn)入下一步反應(yīng)。制備26N-叔丁氧基羰基-3-氨基-α-甲基芐胺向N-叔丁氧基羰基-3-硝基-α-甲基芐胺(1.79g,6.74mmol)在二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入氯化錫(Ⅱ)二水合物(9.12g,40.4mmol)并在室溫下將該反應(yīng)物攪拌48小時。真空除去二甲基甲酰胺，將殘余物再次懸浮于二氯甲烷(100mL)中，用鹽水(100mL)洗滌，經(jīng)硅藻土墊過濾，并除去溶劑，得到所述粗品苯胺。制備27N-(叔丁氧基羰基)-N’-(5-甲基-3-(2-氯-6-氟苯基異噁唑-4-?；?-3-氨基-α-甲基芐胺將3-(2-氯-6-氟苯基)-5-甲基異噁唑-4-酰氯(1.85g,6.74mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液加入到所述苯胺(1.59g,6.74mmol)和三乙胺(2.04g,20.2mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中。在室溫下攪拌過夜后，用10％枸櫞酸(2×50mL)洗滌反應(yīng)物，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并除去溶劑，得到標(biāo)題化合物，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即進(jìn)入下一步反應(yīng)。制備28N-(5-甲基-3-(2-氯-6-氟苯基異噁唑-4-?；?-3-硝基芐胺將3-硝基芐胺(511mg,2.71mmol)和3-(2-氯-6-氟苯基)-5-甲基異噁唑-4-酰氯(742mg,2.71mmol)懸浮于10mL二氯甲烷中并加入三乙胺(0.95mL,6.78mmol)，該反應(yīng)物變成透明并在室溫下攪拌2小時。然后該反應(yīng)物用100mL乙酸乙酯稀釋并用1N鹽酸水溶液和1N氫氧化鈉水溶液各洗滌有機(jī)層兩次。然后有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮，得到1.12g標(biāo)題化合物(＞100％)。MS(IE)m/z390(M+1)。IR 3280,1648,1532,1349,1251cm-1。制備291-(3-硝基芐基)-3-異噁唑并[3,4-c]-1,2-二氫-3-甲基-6-氯喹啉-2-酮將N-(5-甲基-3-(2-氯-6-氟苯基異噁唑-4-?；?-3-硝基芐胺(940mg)溶于5mL二甲基甲酰胺和5mL在甲醇中的2N氫氧化鈉中。在室溫下，將該反應(yīng)物攪拌1小時并另外加入二甲基甲酰胺，以溶解形成的沉淀。將反應(yīng)物攪拌另外1小時，然后傾入到2N鹽酸水溶液中。用乙酸乙酯提取該混合物幾次。用鹽水洗滌合并的提取液，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮，得到852mg標(biāo)題化合物。MS(IE)m/z370(M+1)。IR 3306,2952,1718,1638,1547,1211cm-1。
本發(fā)明化合物為MRP1抑制劑。因此，本發(fā)明化合物可用于抑制任何內(nèi)在的和/或部分或全部由MRP1授予的獲得的對一種腫瘤消解劑或者多種腫瘤消解劑具有抗性的腫瘤。換言之，用有效量的本發(fā)明化合物治療這樣的腫瘤將引起腫瘤對由MRP1使得療效較差的化學(xué)療法更敏感。
長春新堿、表柔比星、柔紅霉素、多柔比星和依托泊苷是作為MRP1底物的腫瘤消解劑。參見Cole，等，“多抗病性MRP轉(zhuǎn)染的人腫瘤細(xì)胞的藥理特性”，Cancer Research,54:5902-5910,1994。由于MRP1普遍存在于哺乳動物尤其是人當(dāng)中，Nooter,K,等，“多抗病性相關(guān)蛋白(MRP)基因在人癌中的表達(dá)”，Clin.Can.Res.,1:1301-1310,(1995)，其目標(biāo)為使用任何這些藥物抑制腫瘤的化學(xué)療法具有由MRP1授予療效較差的可能性。因此，用一種或多種上述腫瘤消解劑和本發(fā)明化合物的組合可抑制膀胱、骨、乳腺、肺(小細(xì)胞)、睪丸和甲狀腺的腫瘤和更特殊類型的癌癥如急性成淋巴細(xì)胞性和急性原始粒細(xì)胞性白血病、維耳姆斯氏瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、軟組織肉瘤、何杰金氏和非何杰金氏淋巴瘤及支氣管瘤。
使用在抑制MRP1或MDR1中迅速和準(zhǔn)確測量受試化合物活性的初步篩選試驗，評價本發(fā)明化合物的生物活性。用于評價該逆轉(zhuǎn)能力的試驗是本領(lǐng)域熟知的。參見例如T.McGrath等，BiochemicalPharmacology,38:3611,1989；D.Marquardt和M.S.Center,CancerResearch,52:3157,1992；D.Marquardt等，Cancer Research,50:1426,1990和Cole等，Cancer Research,54:5902-5910,1994。用于逆轉(zhuǎn)MRP1介導(dǎo)的多柔比星抗性和MDR1介導(dǎo)的長春新堿抗性的試驗HL60/ADR和HL60/VCR為通過培養(yǎng)人急性原始粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞系HL60，增加多柔比星或長春新堿的濃度直到得到高抗性變體，來分別選擇用于產(chǎn)生多柔比星和長春新堿抗性的傳代細(xì)胞系。
HL60/ADR和HL60/VCR細(xì)胞在含有10％胎牛血清(FBS)和250μg/ml的GENTAMICINTM(Sigma)的RPMI 1640(Gibco)中生長。收獲細(xì)胞，用試驗介質(zhì)(與培養(yǎng)基相同)洗滌兩次，計數(shù)，并在試驗介質(zhì)中稀釋至2×105細(xì)胞/ml。將50微升的細(xì)胞等份加入到96孔組織培養(yǎng)板的各孔中。每個96孔板中的一列作為陰性對照組并接受不含有細(xì)胞的試驗介質(zhì)。
將受試化合物和參比化合物以5mM的濃度溶于二甲基亞砜(DMSO)中。將樣品在試驗介質(zhì)中稀釋至20μM并將25μl的每個受試化合物加入到6個孔中。試驗標(biāo)準(zhǔn)以一式四份進(jìn)行。將25微升的0.4％DMSO加入4個孔中作為溶劑對照組。將試驗介質(zhì)加入到所有孔中，以得到最終體積是每孔100μl。
在37℃下，于具有5％二氧化碳?xì)夥盏臐駶櫡跤髦袑⑺霭宸跤?2小時。通過使用標(biāo)準(zhǔn)條件氧化四氮唑鹽來測量細(xì)胞生存力和活力。在37℃下，將所述板孵育3小時。在490nm下，使用微量滴定板讀出器測定吸收度。
通過將除了腫瘤消解劑(多柔比星)以外含有受試化合物的孔的吸收度與不含有受試化合物的腫瘤消解劑的孔的吸收度相比較，測定受試化合物逆轉(zhuǎn)對多柔比星產(chǎn)生抗性的HL60/ADR和HL60/VCR細(xì)胞的能力。對照組用于消除背景吸收并確保結(jié)果不是人為造成的。本試驗的結(jié)果以細(xì)胞生長的百分比抑制率來表示。在試驗濃度下，腫瘤消解劑單獨(dú)使用通常不抑制HL60/ADR或HL60/VCR細(xì)胞的生長。
式Ⅰ代表性化合物證實了在逆轉(zhuǎn)MRPl多重抗藥性中的顯著作用。與單獨(dú)的腫瘤消解劑相反，在與腫瘤消解劑組合中，許多化合物顯示非常明顯的活性增強(qiáng)作用。另外，大多數(shù)受試化合物呈現(xiàn)顯著程度的選擇性抑制HL60/ADR細(xì)胞系超過HL60/VCR細(xì)胞系。
在實施本發(fā)明方法中，當(dāng)給予腫瘤消解劑時，所使用腫瘤消解劑的量是可變化的。應(yīng)該理解的是根據(jù)有關(guān)情況由醫(yī)師來確定實際給予的腫瘤消解劑的量，有關(guān)情況包括打算治療的疾病、選擇的給藥途徑、給予的實際腫瘤消解劑、個體患者(哺乳動物)的年齡、體重和應(yīng)答以及患者癥狀的嚴(yán)重程度。當(dāng)然，應(yīng)該由患者的醫(yī)師決定和密切監(jiān)控所給予的腫瘤消解劑的量。在決定了給予的腫瘤消解劑之后，在決定給予腫瘤消解劑的量中，由Medical Economics CompanyMontvale,NJ 07645-1742出版的“The Physician’s Desk Reference”是對醫(yī)師有幫助的資源，并且該書每年更新。
優(yōu)選的制劑和本發(fā)明使用這些制劑的方法是那些不含有腫瘤消解劑的制劑和其使用方法。因此，給予不含有腫瘤消解劑的本發(fā)明化合物是優(yōu)選的。在本說明書中提及的腫瘤消解劑可市售得到并且可以預(yù)先配制的適宜于本發(fā)明方法的形式購買。
式Ⅰ化合物單獨(dú)或者任選與腫瘤消解劑組合通常以藥用制劑形式給藥。這些制劑能通過多種途徑包括口服、直腸、經(jīng)皮、皮下、靜脈、肌內(nèi)和鼻內(nèi)給藥。這樣的制劑以藥學(xué)領(lǐng)域熟知的方法制備并且包括至少一種式Ⅰ活性化合物。
本發(fā)明也包括使用藥用制劑的方法，該制劑含有與藥用載體一起的作為活性成分的式Ⅰ化合物和任選的一種腫瘤消解劑。在制備本發(fā)明的制劑中，活性組分一般與賦形劑混合，經(jīng)賦形劑稀釋或者包含在這樣的載體中，該載體能以膠囊、香囊、紙或其它的容器的形式存在。當(dāng)所述賦形劑用作稀釋劑時，其能為固體、半固體或液體材料，其作為用于活性組分的溶媒、載體或介質(zhì)起作用。因此，所述制劑能以片劑、丸劑、粉劑、錠劑、香囊劑、扁囊劑、酏劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、氣溶膠(作為固體或以液體介質(zhì)形式存在)、含有例如高達(dá)10％(重量)的所述活性化合物的軟膏劑、軟和硬明膠膠囊劑、栓劑、滅菌注射溶液和滅菌包裝的粉末的形式存在。
在制備制劑中，在與其它的組分混合之前，將活性化合物粉碎以提供適當(dāng)?shù)牧６仁潜匾?。如果活性化合物基本上不溶，一般將其粉碎成小?00目的粒度。如果活性化合物基本上是水溶性的，通過粉碎將粒度正常調(diào)整以在制劑中提供基本上均勻的分布，例如大約40目。
一些適宜的賦形劑的實例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿和甲基纖維素。所述制劑另外包括潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油，潤濕劑，乳化劑和懸浮劑，防腐劑如羥基苯甲酸甲酯和丙酯，甜味劑和矯味劑。可通過使用本領(lǐng)域已知的方法配制本發(fā)明制劑，以便給予患者后提供快速、持續(xù)或延遲釋放的活性組分。
所述制劑優(yōu)選以單位劑型配制，每劑量含有大約5至100mg，更經(jīng)常含有大約10至30mg的每種活性組分。術(shù)語“單位劑型”指的是與適宜的藥用賦形劑一起作為適宜用于人體和其它的哺乳動物的單位劑量的物理獨(dú)立單位，每單位含有經(jīng)計算產(chǎn)生要求的治療作用的預(yù)先確定量的活性物質(zhì)。
式Ⅰ化合物在廣泛劑量范圍內(nèi)是有效的。例如，每天劑量正常處于大約0.5至大約30mg/kg體重范圍內(nèi)。在成人治療中，以單次劑量或分開的劑量給予大約1至大約15mg/kg天的范圍是特別優(yōu)選的。然而，要理解的是按照有關(guān)情況由醫(yī)師來確定實際給予的化合物的量，有關(guān)情況包括打算治療的疾病、選擇的給藥途徑、給予的實際化合物、個體患者的年齡、體重和應(yīng)答及患者癥狀的嚴(yán)重程度，因此，以上劑量范圍不打算以任何方式限制本發(fā)明的范圍。在一些情況下，低于上述范圍下限的劑量水平可為更加適宜的，而在其它情況下可使用更大的劑量而不引起任何有害的副作用，條件是將這樣更大的劑量首先分成用于全天給藥的幾個更小的劑量。
為制備固體制劑例如片劑，將主要活性組分與藥用賦形劑混合，形成含有本發(fā)明化合物的均勻混合物的固體預(yù)制劑組合物。當(dāng)稱這些預(yù)制劑組合物均勻時，意味著活性組分均勻分散于整個制劑中，以至于所述制劑可易于再分為等效的單位劑型例如片劑、丸劑和膠囊劑。然后將該固體預(yù)制劑再分為以上描述類型的單位劑型，其含有0.1至大約500mg的本發(fā)明活性組分。
可將本發(fā)明的片劑或丸劑包衣或者將其復(fù)合以提供具有延長作用的優(yōu)點(diǎn)的劑型。例如，片劑或丸劑能夠包括內(nèi)層劑量和外層劑量的組分，后者以包封前者的形式存在。通過腸衣層可分開兩種組分，其用于抵御在胃中的崩解并使得內(nèi)組分完整進(jìn)入十二指腸或者延長釋放。多種材料能用于這樣的腸衣層或者包衣，這樣的材料包括多種聚合酸和聚合酸與這樣的材料如紫膠、十六烷醇和纖維素乙酸酯的混合物。
其為液體形式的新制劑可被摻合用于口服給藥或者注射給藥并且包括水溶液、適宜的矯味糖漿、水或油性的混懸液和矯味的乳劑(含有食用油例如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)以及酏劑和類似的藥用載體。
用于吸入或者吹入的制劑包括在藥用、含水或有機(jī)溶劑或它們的混合物中的溶液劑和混懸劑以及粉劑。所述液體或固體制劑可含有以上描述的適宜的藥用賦形劑。制劑優(yōu)選經(jīng)用于局部或全身作用的口或鼻呼吸途徑給藥。在優(yōu)選藥用溶劑中的組合物可通過使用惰性氣體霧化。霧化的溶液可從霧化裝置直接吸入或者將霧化裝置固定到面罩、帳篷或間歇式正壓呼吸機(jī)上。從其以適當(dāng)?shù)姆椒▊鬟f制劑的裝置，優(yōu)選經(jīng)口或鼻腔給予溶液劑、混懸劑或粉劑。
以下僅介紹制劑實施例，不打算以任何方式限制本發(fā)明的范圍?！盎钚越M分”意指任選與一種或多種腫瘤消解劑一起的式Ⅰ化合物或它們的藥用的鹽或溶劑合物。制劑實施例1制備含有以下組分的硬明膠膠囊用量組分(mg/膠囊)活性組分 30.0淀粉 305.0硬脂酸鎂 5.0將以上組分混合并以340mg的量填充到硬明膠膠囊中。制劑實施例2使用以下組分，制備片劑用量組分 (mg/片)活性組分 25.0微晶纖維素200.0膠態(tài)二氧化硅 10.0硬脂酸5.0將以上組分混合并壓制形成片劑，每片重240mg。制劑實施例3制備含有以下組分的干燥粉末吸入劑組分 重量％活性組分5乳糖95將活性組分與乳糖混合并將該混合物加入到干燥粉末吸入裝置中。制劑實施例4如下制備每片含有30mg活性組分的片劑用量組分 (mg/片)活性組分 30.0mg淀粉 45.0mg微晶纖維素 35.0mg聚乙烯吡咯烷酮 4.0mg(作為10％的水溶液)羧甲基淀粉鈉 4.5mg硬脂酸鎂 0.5mg滑石粉 1.0mg總計 120mg將活性組分、淀粉和纖維素通過20目U.S.篩并且充分混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與生成的粉末混合，然后將其通過16目U.S.篩。在50-60℃下，干燥這樣產(chǎn)生的顆粒并通過16目U.S.篩。將羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石粉預(yù)先通過30目U.S.篩，然后加入到所述顆粒中，在混合后，于壓片機(jī)上壓制，得到每片重120mg的片劑。制劑實施例5如下制備每粒膠囊含有40mg藥物的膠囊用量組分 (mg/膠囊)活性組分40.0mg淀粉109.0mg硬脂酸鎂1.0mg總計150.0mg將活性組分、纖維素、淀粉和硬脂酸鎂混合，通過20目U.S.篩，并且以150mg的量填充到硬明膠膠囊中。制劑實施例6如下制備每粒含有25mg活性組分的栓劑組分 用量活性組分 25mg飽和脂肪酸甘油酯加至 2,000mg將活性組分通過60目U.S.篩并且懸浮在預(yù)先熔融的飽和脂肪酸甘油酯中，必要時使用最低熱量。然后把該混合物倒入到標(biāo)稱2.0g容量的栓劑模具中并使之冷卻。制劑實施例7如下制備每5.0ml劑量含有50mg藥物的混懸劑組分 用量活性組分 50.0mg黃原膠4.0mg羧甲基纖維素鈉(11％)微晶纖維素鈉(89％)50.0mg蔗糖 1.75g苯甲酸鈉 10.0mg矯味劑和著色劑適量純水加至 5.0ml將活性組分、蔗糖和黃原膠混合，通過10目U.S.篩，然后與預(yù)先制備的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉在水中的溶液混合。用少許水稀釋苯甲酸鈉、矯味劑和著色劑并伴隨攪拌下加入。然后加入足夠的水，產(chǎn)生所需要的體積。制劑實施例8如下制備每粒含有15mg藥物的膠囊劑
用量組分 (mg/膠囊)活性組分 15.0mg淀粉 407.0mg硬脂酸鎂 3.0mg總計 425.0mg將活性組分、纖維素、淀粉和硬脂酸鎂混合，通過20目U.S.篩，并且以425mg的量填充到硬明膠膠囊中。制劑實施例9如下可制備靜脈注射劑組分 用量活性組分 250.0mg等滲鹽水 1000ml制劑實施例10如下可制備局部制劑組分 用量活性組分 1-10g乳化蠟 30g液體石蠟 20g白軟石蠟加至 100g將白軟石蠟加熱直至熔融。將液體石蠟和乳化蠟摻入并攪拌直到溶解。加入活性組分并持續(xù)攪拌直到分散。然后將該混合物冷卻直到成為固體。制劑實施例11如下可制備每劑量含有10mg活性組分的舌下或頰片劑
用量組分 每片活性組分 10.0mg甘油 210.5mg水143.0mg枸櫞酸鈉 4.5mg聚乙烯醇 26.5mg聚乙烯吡咯烷酮15.5mg總計 410.0mg將甘油、水、枸櫞酸鈉、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮通過持續(xù)攪拌混合在一起并維持溫度在大約90℃。當(dāng)該聚合物變成溶液時，把該溶液冷卻至大約50-55℃并緩慢混入活性組分。將該均勻的混合物傾入到惰性材料制備而成的模具中，生成含有藥物的具有大約2-4mm厚度的擴(kuò)散基質(zhì)。然后將該擴(kuò)散基質(zhì)切割成為具有適宜大小的單個片劑。
在本發(fā)明方法中使用的另一種優(yōu)選制劑使用經(jīng)皮傳遞裝置(“貼劑”)。這樣的經(jīng)皮貼劑可用于以控制的量提供連續(xù)的或者不連續(xù)的輸注本發(fā)明化合物。用于傳遞藥物的經(jīng)皮貼劑的構(gòu)成與用途在本領(lǐng)域中是熟知的。參見例如1991年6月11日授權(quán)的U.S.專利第5,023,252號，其通過引用結(jié)合到本文中。這樣的貼劑可被構(gòu)成為用于連續(xù)的、脈沖的或者按照要求傳遞藥物的形式。
通常，可要求或者必須直接地或間接地使藥用制劑導(dǎo)入大腦。直接技術(shù)通常包括把藥物傳遞導(dǎo)管置入宿主的腦室系統(tǒng)以透過血腦屏障。在1991年4月30授權(quán)的U.S.專利第5,011,472號中，描述了一個用于轉(zhuǎn)運(yùn)生物因子到人體的特定解剖學(xué)區(qū)域的這樣的可植入傳遞系統(tǒng)，其通過引用結(jié)合到本文中。
其通常是優(yōu)選的間接技術(shù)一般包括通過使親水性藥物轉(zhuǎn)化為脂溶性藥物或前藥配制組合物以提供藥物的潛伏化。一般通過封閉存在于藥物中的羥基、羰基、磺酸鹽和伯胺基團(tuán)來得到潛伏作用，使得藥物具有更好的脂溶性和易于轉(zhuǎn)運(yùn)透過血腦屏障?；蛘?，通過動脈內(nèi)輸注其能夠暫時打開血腦屏障的高滲溶液可增強(qiáng)親水性藥物的傳遞。
權(quán)利要求
1．式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物 其中R為(CH2)m,CHR1NHR2、O(CH2)2NHR2、(CH2)m,COR3、NHR2和(CH2)m,CHR1NR4R5；R’為氫、羥基或O(以苯基或C3-C7環(huán)烷基任選取代的C1-C6烷基)；m和m’在每種情況下獨(dú)立為0、1或2；R1在每種情況下獨(dú)立為氫或C1-C6烷基；R2為氫、COR6、CH2R6’、SO2R7或式 的部分；R3為氫、羥基、C1-C6烷氧基、氨基酯、氨基酸或NR4R5；R4為氫或C1-C6烷基；R5為氫、C1-C6烷基、C6-C10雙環(huán)烷基、CH2CH(CH3)苯基、CH(CH3)CH2CO2R1、芳基、取代的芳基、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nNH2、(CH2)2NHCOR6、(CH2)2OH、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)，或R4和R4合并形成吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、六亞甲基亞胺-1-基或嗎啉-4-基環(huán)；n為1、2、3或4；q為0、1、2或3；R6為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、叔丁氧基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC-(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2、(CH2)2NH-芳基或NHR7；R6’為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2或(CH2)2NH-芳基；r為0、1或2；R7為C1-C6烷基、苯基或取代的苯基；和R8為氫或CO2R1。
2．權(quán)利要求1的化合物或其藥用的鹽或溶劑合物，其中m為0和m’為0或1，并且R處于間位。
3．權(quán)利要求2的化合物或其藥用的鹽或溶劑合物，其中R為CHR1NHR2并且R1為甲基。
4．權(quán)利要求3的化合物或其藥用的鹽或溶劑合物，其中R2為4-氨基磺?；S基或3,4,5-三甲氧基芐基。
5．權(quán)利要求2的化合物或其藥用的鹽或溶劑合物，其中R為COR3或(CH2)COR3。
6．權(quán)利要求5的化合物或其藥用的鹽或溶劑合物，其中R3為(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基、(4-氨基磺?；交?氨基或(6-甲氧基喹啉-8-基)氨基。
7．權(quán)利要求2的化合物或其藥用的鹽或溶劑合物，其中R為(CH2)NR4R5和R4為氫。
8．權(quán)利要求7的化合物或其藥用的鹽或溶劑合物，其中R5為5-甲基異噁唑-3-?；?,4,5-三甲氧基苯甲?；?、3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲?；?,4,5-三甲氧基芐基。
9．抑制哺乳動物MRP1的方法，該方法包括給予需要的哺乳動物有效量的式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物 其中R為(CH2)m’CHR1NHR2、O(CH2)2NHR2、(CH2)m’COR3、NHR2和(CH2)m’CHR1NR4R5；R’為氫、羥基或O(以苯基或C3-C7環(huán)烷基任選取代的C1-C6烷基)；m和m’在每種情況下獨(dú)立為0、1或2；R1在每種情況下獨(dú)立為氫或C1-C6烷基；R2為氫、COR6、CH2R6’、SO2R7或式 的部分；R3為氫、羥基、C1-C6烷氧基、氨基酯、氨基酸或NR4R5；R4為氫或C1-C6烷基；R5為氫、C1-C6烷基、C6-C10雙環(huán)烷基、CH2CH(CH3)苯基、CH(CH3)CH2CO2R1、芳基、取代的芳基、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nNH2、(CH2)2NHCOR6(CH2)2OH、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)，或R4和R4合并形成吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、六亞甲基亞胺-1-基或嗎啉-4-基環(huán)；n為1、2、3或4；q為0、1、2或3；R6為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、叔丁氧基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2、(CH2)2NH-芳基或NHR7；R6’為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2或(CH2)2NH-芳基；r為0、1或2；R7為C1-C6烷基、苯基或取代的苯基；和R8為氫或CO2R1。
10．權(quán)利要求2的方法，其中所述哺乳動物是人。
11．權(quán)利要求10的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中m為0和m’為0或1且R處于間位的化合物。
12．權(quán)利要求11的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R為CHR1NHR2并且R1為甲基的化合物。
13．權(quán)利要求12的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R2為4-氨基磺?；S基或3,4,5-三甲氧基芐基的化合物。
14．權(quán)利要求11的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R為COR3或(CH2)COR3的化合物。
15．權(quán)利要求14的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R3為(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基、(4-氨基磺?；交?氨基或(6-甲氧基喹啉-8-基)氨基的化合物。
16．權(quán)利要求11的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R為(CH2)NR4R5和R4為氫的化合物。
17．權(quán)利要求16的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R5為5-甲基異噁唑-3-?；?、3,4,5-三甲氧基苯甲酰基、3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲酰基或3,4,5-三甲氧基芐基的化合物。
18．抑制哺乳動物的抗性腫瘤或?qū)剐悦舾械哪[瘤的方法，該方法包括給予需要的哺乳動物與有效量的一種或多種腫瘤消解劑組合的有效量的式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物 其中R為(CH2)m’CHR1NHR2、O(CH2)2NHR2、(CH2)m’COR3、NHR2和(CH2)m’CHR1NR4R5；R’為氫、羥基或O(以苯基或C3-C7環(huán)烷基任選取代的C1-C6烷基)；m和m’在每種情況下獨(dú)立為0、1或2；R1在每種情況下獨(dú)立為氫或C1-C6烷基；R2為氫、COR6、CH2R6’、SO2R7或式 的部分；R3為氫、羥基、C1-C6烷氧基、氨基酯、氨基酸或NR4R5；R4為氫或C1-C6烷基；R5為氫、C1-C6烷基、C6-C10雙環(huán)烷基、CH2CH(CH3)苯基、CH(CH3)CH2CO2R1、芳基、取代的芳基、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nNH2、(CH2)2NHCOR6、(CH2)2OH、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)，或R4和R5合并形成吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、六亞甲基亞胺-1-基或嗎啉-4-基環(huán)；n為1、2、3或4；q為0、1、2或3；R6為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、叔丁氧基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2、(CH2)2NH-芳基或NHR7；R6為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2或(CH2)2NH-芳基；r為0、1或2；R7為C1-C6烷基、苯基或取代的苯基；和R8為氫或CO2R1。
19．權(quán)利要求18的方法，其中所述哺乳動物是人。
20．權(quán)利要求19的方法，其中所述腫瘤消解劑選自多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、長春新堿和依托泊苷。
21．權(quán)利要求19的方法，其中所述腫瘤為維耳姆斯氏瘤、膀胱癌、骨癌、乳腺癌、肺(小細(xì)胞)癌、睪丸癌或甲狀腺癌，或者所述腫瘤與急性成淋巴細(xì)胞性和急性原始粒細(xì)胞性白血病、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、軟組織肉瘤、何杰金氏和非何杰金氏淋巴瘤及支氣管瘤有關(guān)。
22．權(quán)利要求19的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中m為0和m’為0或1且R處于間位的化合物。
23．權(quán)利要求22的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R為CHR1NHR2并且R1為甲基的化合物。
24．權(quán)利要求23的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R2為4-氨基磺?；S基或3,4,5-三甲氧基芐基的化合物。
25．權(quán)利要求22的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R為COR3或(CH2)COR3的化合物。
26．權(quán)利要求25的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R3為(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基、(4-氨基磺?；交?氨基或(6-甲氧基喹啉-8-基)氨基的化合物。
27．權(quán)利要求22的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R為(CH2)NR4R5和R4為氫的化合物
28．權(quán)利要求27的方法，其中式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物為其中R5為5-甲基異噁唑-3-?；?、3,4,5-三甲氧基苯甲?；?、3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲?；?,4,5-三甲氧基芐基的化合物。
29．藥用制劑包括式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物 其中R為(CH2)m’CHR1NHR2、O(CH2)2NHR2、(CH2)m’COR3、NHR2和(CH2)m’CHR1NR4R5；R’為氫、羥基或O(以苯基或C3-C7環(huán)烷基任選取代的C1-C6烷基)；m和m’在每種情況下獨(dú)立為0、1或2；R1在每種情況下獨(dú)立為氫或C1-C6烷基；R2為氫、COR6、CH2R6’、SO2R7或式 的部分；R3為氫、羥基、C1-C6烷氧基、氨基酯、氨基酸或NR4R5；R4為氫或C1-C6烷基；R5為氫、C1-C6烷基、C6-C10雙環(huán)烷基、CH2CH(CH3)苯基、CH(CH3)CH2CO2R1、芳基、取代的芳基、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nNH2、(CH2)2NHCOR6、(CH2)2OH、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)，或R4和R5合并形成吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、六亞甲基亞胺-1-基或嗎啉-4-基環(huán)；n為1、2、3或4；q為0、1、2或3；R6為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、叔丁氧基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2、(CH2)2NH-芳基或NHR7；R6’為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2或(CH2)2NH-芳基；r為0、1或2；R7為C1-C6烷基、苯基或取代的苯基；和R8為氫或CO2R1。
30．藥用制劑包括(a)式Ⅰ化合物或其藥用的鹽或溶劑合物 其中R為(CH2)m’CHR1NHR2、O(CH2)2NHR2、(CH2)m’COR3、NHR2和(CH2)m’CHR1NR4R5；R’為氫、羥基或O(以苯基或C3-C7環(huán)烷基任選取代的C1-C6烷基)；m和m’在每種情況下獨(dú)立為0、1或2；R1在每種情況下獨(dú)立為氫或C1-C6烷基；R2為氫、COR6、CH2R6’、SO2R7或式 的部分；R3為氫、羥基、C1-C6烷氧基、氨基酯、氨基酸或NR4R5；R4為氫或C1-C6烷基；R5為氫、C1-C6烷基、C6-C10雙環(huán)烷基、CH2CH(CH3)苯基、CH(CH3)CH2CO2R1、芳基、取代的芳基、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nNH2、(CH2)2NHCOR6、(CH2)2OH、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)，或R4和R5合并形成吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、六亞甲基亞胺-1-基或嗎啉-4-基環(huán)；n為1、2、3或4；q為0、1、2或3；R6為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、叔丁氧基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2、(CH2)2NH-芳基或NHR7；R6’為C1-C6烷基、取代的C3-C6環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、(CH2)q-雜環(huán)、(CH2)q-取代的雜環(huán)、(CH2)nS(O)rR1、C(CH3)2CH2N(R1)2、(CH2)nCHR8NHC(O)OC(CH3)3、(CH2)nCHR8NH2或(CH2)2NH-芳基；r為0、1或2；R7為C1-C6烷基、苯基或取代的苯基；和R8為氫或CO2R1；(b)一種或多種腫瘤消解劑；和(c)一種或多種藥用載體、稀釋劑或賦形劑。
31．權(quán)利要求30的制劑，其中所述腫瘤消解劑選自多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、長春新堿和依托泊苷。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于抑制抗性腫瘤的式(I)化合物,其中該抗性由MRP1部分或全部授予。
文檔編號A61K31/5377GK1304306SQ99807009
公開日2001年7月18日 申請日期1999年4月7日 優(yōu)先權(quán)日1998年4月8日
發(fā)明者J·M·格魯貝爾, J·S·克羅因, B·H·諾爾曼 申請人:伊萊利利公司