專利名稱：用于硼中子捕獲療法的組合物及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總的來說涉及治療腫瘤的組合物和方法，尤其是涉及使用游離的和封入脂質(zhì)體的硼烷衍生物來治療腫瘤的組合物及方法。
發(fā)明的背景中子捕獲療法在癌癥治療中是一項(xiàng)很有吸引力的方法，特別是對(duì)于惡性腫瘤的治療。其一般反應(yīng)涉及一熱能化的中子(通常來源于帶有特殊減速劑和特殊閥門的核反應(yīng)堆)被一具有較大中子捕獲截面的適當(dāng)原子核所捕獲。隨后的衰變釋放出可殺死附近腫瘤細(xì)胞的高能粒子(α粒子)。由于高能和細(xì)胞毒性的α粒子在組織中僅能前進(jìn)大約為一個(gè)細(xì)胞直徑的距離，優(yōu)選的方法應(yīng)通過將α粒子前體僅置于腫瘤細(xì)胞上或腫瘤細(xì)胞其中的方法來標(biāo)明準(zhǔn)備殺死的細(xì)胞類型。
例如硼-10(也標(biāo)示為10B)就具有這樣一種適當(dāng)?shù)脑雍瞬⒕哂羞m于這一方案的良好特性。硼-10/熱能化中子捕獲反應(yīng)如下(*指出硼原子核的一個(gè)不穩(wěn)定的中間狀態(tài))
為了保證這一療法有效，在腫瘤內(nèi)必須引入足夠量的10B以產(chǎn)生所需密度的粒子。這一濃度有各種不同的估計(jì)，大約為每毫克腫瘤細(xì)胞10-50μg10B。另外，應(yīng)控制正常組織和血液中的10B的濃度并最好使其低于腫瘤中的濃度以減少對(duì)健康細(xì)胞和血管的損傷。H.Hatanaka(1986)Boron-Neutron Capture Therapyfor Tumors(腫瘤的硼中子捕獲療法)；Nishimura Co.，Ltd.p.1-16。
已試驗(yàn)過大量含有硼的化合物以考查其是否可以達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)。幾乎無一例外，所有的化合物均由于在腫瘤細(xì)胞內(nèi)定位的硼的量不足且血液中硼的濃度過高而不能滿足有效的中子捕獲療法的要求。在日本所做的Na2B12H11SH的人體臨床實(shí)驗(yàn)顯現(xiàn)出本方法的一些希望，但僅限于有限的腦腫瘤。Id.16-26。
如果可以獲得一種將高濃度的10B轉(zhuǎn)移到腫瘤中的通用方法的話，中子捕獲療法的可用性將會(huì)大大提高。如果聚集于腫瘤中的10B比血液中的高，則該方法更加可行。
最近，應(yīng)用具有特定組成結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)體將藥物和其它化合物選擇性地轉(zhuǎn)送至腫瘤中已成為可能。參見歐洲專利申請(qǐng)No.87311040.7，1988年6月22日公開；Presant的美國專利No.5,019,369；及″Liposomes from Biophysics to Therapeutics″，M.J.Ostro，Ed，Marcel Dekker，Inc.，New York(1987)，所有這些均作為本文的參考文獻(xiàn)。
作為有效的中子捕獲療法的必要條件，將具有較高滲透性的化合物結(jié)合于脂質(zhì)體的內(nèi)部空間而不是外部，依賴于在最大濃度地結(jié)合10B時(shí)不顯著改變脂質(zhì)體的有益的生物分布特性的可行性。這樣，可達(dá)到每克腫瘤組織至少10μg的10B(假設(shè)使用大于90％10B的濃縮物)。
Na2B20H18及它的氫氧化物已經(jīng)公知，參見M.F.Hawthorne，R.L.Philling，and P.M.Garrett，J.Am.Chem.Soc.87，4740(1965)。已知可使用含有硼的多聚磷酸來治療鈣化的腫瘤。參見歐洲專利申請(qǐng)No.82200784.5，1983年5月1日公開。用于中子捕獲療法的硼化卟啉化合物也已公知。參見Miura的美國專利No.4959，356，Gabel的美國專利No.5,116,980和Hadd的美國專利No.4,466,952。
對(duì)于可將治療濃度的10B選擇性地轉(zhuǎn)運(yùn)至腫瘤的方法，人們期待已久但一直未能找到。對(duì)于可用于硼中子捕獲療法的10B組合物和轉(zhuǎn)移載體也存在著類似的需求。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的之一是提供可用于中子捕獲腫瘤治療法組合物和方法以將有效治療濃度的含硼化合物轉(zhuǎn)運(yùn)至腫瘤中。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供硼烷和封入脂質(zhì)體的硼烷化合物，它們對(duì)脂質(zhì)體內(nèi)的硼烷化合物具有緩釋的作用且不明顯損壞脂質(zhì)體。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種癌癥的治療方法，該方法使用游離的和封入脂質(zhì)體的硼烷化合物并達(dá)到轉(zhuǎn)運(yùn)至動(dòng)物和人腫瘤中至少10毫克10B每克腫瘤組織，同時(shí)降低10B在血液中的濃度。
優(yōu)選實(shí)施方式概述上述目的可由本發(fā)明實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的一個(gè)方面是在硼烷框架上有兩個(gè)電子給體的有治療作用的硼的衍生物被封入脂質(zhì)體的內(nèi)部水質(zhì)空間，產(chǎn)生的脂質(zhì)體給予腫瘤患用。本發(fā)明的另一個(gè)方面是，有助于中子捕獲療法的某些自由硼烷經(jīng)發(fā)現(xiàn)具有有益的生物分布。自由態(tài)和封入脂質(zhì)體的Na3B20H17NH3均優(yōu)選應(yīng)用于本發(fā)明的這些方面。本發(fā)明的另一個(gè)方面是，有治療作用的碳硼烷衍生物包埋在脂質(zhì)體的雙層結(jié)構(gòu)中然后給藥。所產(chǎn)生的脂質(zhì)體具有增強(qiáng)了的腫瘤選擇性并可用作前面提到的硼烷衍生物和其它藥物的包封載體。本發(fā)明的另外一個(gè)方面是開發(fā)出了新的衍生硼烷以用于硼中子捕獲療法。


圖1給出了脂質(zhì)體膜的組成及其結(jié)構(gòu)。
圖2給出了帶有EMT6腫瘤的BALB/c小鼠體內(nèi)Na2B10H10和Na2B12H11SH的生物分布。
圖3為B10H9NCO2-與胞內(nèi)蛋白的預(yù)計(jì)反應(yīng)。
圖4給出了帶有EMT6腫瘤的BALB/c小鼠鼠體內(nèi)Na2B10H10和Na2B10H9NCO的生物分布。
圖5給出了由B10H102-衍生的多種可胞內(nèi)結(jié)合的硼試劑。
圖6給出了B20H17NH33-四甲基銨鹽的X射線衍射晶體結(jié)構(gòu)和11B的NMR譜。
圖7給出了帶有EMT6腫瘤的BALB/c小鼠體內(nèi)脂質(zhì)體Na3B20H17NH3的生物分布。
圖8給出了胞內(nèi)氧化反應(yīng)及隨后胞內(nèi)蛋白親核進(jìn)攻。
圖9給出了另一個(gè)帶有EMT6腫瘤的BALB/c小鼠體內(nèi)脂質(zhì)體Na3B20H17NH3的生物分布。
圖10給出了帶有EMT6腫瘤的BALB/c小鼠體內(nèi)自由態(tài)Na3B20H17NH3的生物分布。
圖11給出了帶有EMT6腫瘤的BALB/c小鼠體內(nèi)對(duì)脂質(zhì)體硼烷的腫瘤硼保留作用。
圖12所示為適于嵌入磷脂雙分子層的親脂性硼類化合物的合成。
圖13所示為適于嵌入磷脂雙分子層的親脂性硼類化合物的合成。
圖14所示為帶有EMT6腫瘤的BALB/c小鼠體內(nèi)脂質(zhì)體K[CH3(CH2)15C2B9H11]的生物分布。
圖15所示為帶有EMT6腫瘤的BALB/c小鼠體內(nèi)脂質(zhì)體K[CH3(CH2)15C2B9H11]的生物分布。
優(yōu)選實(shí)施方式的詳細(xì)說明下述為本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式的說明，其中包括發(fā)明人最近仔細(xì)考慮過的最佳方式。
“囊泡”指一種特定微團(tuán)，此微團(tuán)一般為球形，通常由形成雙層膜結(jié)構(gòu)并被稱作“脂質(zhì)體”的脂類物質(zhì)產(chǎn)生。脂質(zhì)體為含有部分磷脂的微觀構(gòu)造。制成這些脂質(zhì)體的方法目前為止，在此領(lǐng)域已非常熟悉，任何這樣的方法均可用于本發(fā)明之中。參見，例如Gamble的美國專利No.4,753,788，及Braken的美國專利No.4,953,171。代表性的做法是由磷脂來制備脂質(zhì)體，例如由二硬酯酰卵磷脂(也稱作“DSPC”)，也可包括其它物質(zhì)，例如中性脂類，如膽固醇，還可包括表面調(diào)節(jié)劑，例如帶正電荷或負(fù)電荷的化合物。磷脂由兩條脂肪酸鏈組成，這兩條鏈與甘油縮合，甘油上帶有一個(gè)磷酸酯首基的附加取代。通過與特定的磷脂分子結(jié)合，制成體內(nèi)穩(wěn)定的脂質(zhì)體。已知相轉(zhuǎn)變點(diǎn)是烴鏈長度的一個(gè)函數(shù)。參見Lanford，The Hydrophobic Effect，2nd Ed.(1980)。某些磷脂分子表現(xiàn)出較高的相轉(zhuǎn)變溫度(大于37℃)，在本文所述的組合物中使用這些磷脂可制成體內(nèi)穩(wěn)定性較高的脂質(zhì)體。
DSPC微團(tuán)的穩(wěn)定性可通過與膽固醇的結(jié)合而提高。帶有正電荷的分子，例如硬脂酸胺或甘露糖胺或膽固醇的甘露糖醇胺衍生物，或帶有負(fù)電荷的分子，例如二烷基磷酸酯也可結(jié)合入囊泡之中。[某些碳硼烷類化合物，如下文中所詳細(xì)討論的，也可接合入囊泡的雙層結(jié)構(gòu)中。]當(dāng)磷脂微團(tuán)被引入血流之后，微團(tuán)移動(dòng)至病人體內(nèi)腫瘤生長的特定部位。為了提高磷脂囊泡穩(wěn)動(dòng)至特定部位的能力，可靠先將帶有正電荷的磷脂囊泡引入病人的血流中以抑制病人體內(nèi)的巨噬細(xì)胞或其它吞噬細(xì)胞。結(jié)合于這些磷脂囊泡上的帶有正電荷的分子可以是甘露糖胺或膽固醇的甘露糖醇胺衍生物。同時(shí)或經(jīng)過一段合適的時(shí)間，例如約1小時(shí)，可將其它的磷脂囊泡引入病人的血流中以移動(dòng)至病人體內(nèi)的特定位置，這樣的磷脂囊泡可包括膽固醇并且可為中性或帶正電荷，如包括硬脂酰胺或甘露糖胺或膽固醇的甘露糖醇胺衍生物，或者可帶負(fù)電荷，如包括聯(lián)十六烷基磷酸酯。
多種脂類顆?？尚纬赊D(zhuǎn)運(yùn)囊泡，這種囊泡可以不影響封入物的胞胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)。例如，其它的磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)載體，如Vestar Inc.專利公告EP0272091號(hào)中所公開的內(nèi)容可以利用，在本文中已將其列為參考文獻(xiàn)。這些載體由一個(gè)封入物質(zhì)的單磷脂膜構(gòu)成，該磷脂膜與一個(gè)與雙親性關(guān)聯(lián)的底物有關(guān)。而脂質(zhì)顆粒優(yōu)選包括磷脂，最優(yōu)選為脂質(zhì)體。
如上面所提到的，無論是多層或單層囊泡，脂質(zhì)體已被證明作為動(dòng)物和人體內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的囊泡是很有價(jià)值的?；钚运幬?，包括小的親水性分子和多肽，可被捕獲于脂質(zhì)體的水性核心，而疏水物質(zhì)可溶于脂質(zhì)體的雙層膜中。脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)易于注射并可構(gòu)成緩釋和藥物轉(zhuǎn)運(yùn)至特定類型細(xì)胞或身體某部分的作用基礎(chǔ)。多層結(jié)構(gòu)，主要由于它們較大，通常很快被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)所吸收(肝和脾)。本發(fā)明所應(yīng)用的代表性的囊泡是可在循環(huán)系統(tǒng)中保持?jǐn)?shù)小時(shí)，在被靶細(xì)胞內(nèi)在化后分解的那些。為滿足這些要求，本發(fā)明中的腫瘤治療試劑優(yōu)選使用直徑小于250nm，更優(yōu)選小于100nm的單層結(jié)構(gòu)。
就圖1而言，當(dāng)水化時(shí)，磷脂形成雙層結(jié)構(gòu)，其脂肪酸烴基尾端指向內(nèi)部，極性頭部基團(tuán)指向外部。參見K.Shelly，D.A.Feakes，M.F.Hawthorne，P.G.Schmidt，T.A.Krisch，W.F.Bauer，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1992，89，9039，本文用作參考文獻(xiàn)。這些結(jié)構(gòu)中，膜的雙層分子通常封閉形成一水質(zhì)的空間，并在所封閉的空間和外部溶液之間形成一可滲透的隔離層。當(dāng)水化的磷脂懸浮液被攪拌時(shí)，可形成類似小洋蔥的多層囊泡，水將許多雙層結(jié)構(gòu)以類似于洋蔥的形式分開，其直徑為1-10μm(1000-10,000nm)。在MLV懸浮液中施加剪切力或均化力，例如近距離聲定位法(so-nication)，可產(chǎn)生大小范圍通常為平均直徑30-250nm，優(yōu)選為50至100nm的小的單層囊泡。單層結(jié)構(gòu)一般指包括一至三層，優(yōu)選一層和兩層。本發(fā)明中封入硼烷腫瘤治療劑的脂質(zhì)體的直徑與聲處理的時(shí)間和制備脂質(zhì)體的方法有關(guān)。50至100nm范圍從最大體內(nèi)循環(huán)時(shí)間和更好的腫瘤特異性方面考慮是優(yōu)選的。另外，如果脂質(zhì)體過大，則肝和脾會(huì)吸收過多的包封在脂質(zhì)體內(nèi)的硼腫瘤治療劑。實(shí)際的平衡直徑在很大程度上取決于所使用的脂質(zhì)體的性質(zhì)和所結(jié)合的其它脂類(如膽固醇)的量。
在硼中子捕獲治療中所應(yīng)用的脂質(zhì)體可在囊泡的水質(zhì)內(nèi)部空間承載本發(fā)明中多面體硼離子的親水鹽。如下面將要討論的，為轉(zhuǎn)運(yùn)硼所使用的脂質(zhì)體的類型能以靜脈注射的方式很好地定位于多種腫瘤中。
其它的脂類也可加入磷脂中以制取具有特殊性質(zhì)的脂質(zhì)體。需特別指出的是，甾醇類例如膽固醇有助于穩(wěn)定血漿中雙層結(jié)構(gòu)的泄露和破壞部分。在脂質(zhì)體中加入磷脂重量5～50％的膽固醇可制成穩(wěn)定的脂質(zhì)體。帶有電荷的脂類或帶有特殊配位體功能的脂類也可以加入。例如，雖然圖1所示的脂質(zhì)體含有在其極性末端無剩余電荷的磷脂，依照本領(lǐng)域中人們熟知的技術(shù)也可制備有帶有負(fù)電荷或正電荷的脂質(zhì)體。含有3∶1至1∶1摩爾比，優(yōu)選1∶1摩爾比DSPC和膽固醇的小的單層囊泡在轉(zhuǎn)運(yùn)本發(fā)明的硼烷化合物至腫瘤部位方面具有突出的優(yōu)點(diǎn)。
依據(jù)本發(fā)明應(yīng)用于中子捕獲療法的硼化合物每個(gè)分子中可有兩個(gè)或多個(gè)硼原子，但優(yōu)選每個(gè)分子含有至少10個(gè)硼原子，更為優(yōu)選每個(gè)分子含有至少20個(gè)硼原子。硼的同位素的含量可由自然豐度的19.78％10B至高度濃縮化合物中的大于95％10B。自然豐度的物質(zhì)對(duì)封入，生物分布，穩(wěn)定性及等方面的實(shí)驗(yàn)研究非常有用。高度濃縮的物質(zhì)有助于需要最大可行濃度的治療。
就本發(fā)明的一個(gè)方面來講，含有硼的化合物對(duì)于治療腫瘤有效是由于它們的高水溶性，在生理pH條件下帶有很少或不帶電荷，對(duì)于脂質(zhì)體的磷脂雙層結(jié)構(gòu)較不易滲透，及對(duì)于治療主體不具有或僅具較低的毒性。這樣的硼烷的例子，無論自由態(tài)的和封入脂質(zhì)體的，包括具有分子式XyB20H17L的化合物。X選自由堿金屬和四烷基胺組成的組，優(yōu)選X為Na，K，Cs或Rb，以及烷基，包括甲基，乙基和其它不導(dǎo)致所制成的鹽不可溶的烷基。L不任意的2電子給體，y為1至4。優(yōu)選的L基團(tuán)選自-NHR1R2，其中，R1和R2可相同或不同，并且選自由氫，芐基，烷基和二胺基(例如，乙烯基二胺)所組成的組；-SR1R2，其中R1和R2可相同或不同，它們選自氫或烷基；-CN；-CO；-NCO；-CH2OH；-CO2R1；烷基；-NHCONHR1；-COOH和-CONHR1，其中R1選自由氫，辛基，烷基和二胺基所組成的組。更優(yōu)選的L選自由-NH3，-Ph￣CH2-NH2，-NH2CH2CH2NH2和-NH2(CH2)7CH3所組成的組。最優(yōu)選L為-NH3。
本發(fā)明中包封腫瘤治療劑的脂質(zhì)體包括單層脂質(zhì)體，其中脂質(zhì)體具有至少一個(gè)包封雙層結(jié)構(gòu)和一個(gè)由包封雙層結(jié)構(gòu)所限定的內(nèi)部空間。一種硼烷化合物封于該內(nèi)部空間中。硼烷化合物選自上文所述的XyB20H17L和XsB10H9L，其中X和L與上文所定義的一樣，s為1或2。最優(yōu)選的方案為，封入的硼烷選自NayB20H17NH3，其中y為1或3，和Na2B10H9NCO。
脂質(zhì)體內(nèi)的硼烷濃度應(yīng)為至少100mM，優(yōu)選為150mM至400mM，更優(yōu)選為200mM至250mM，在增大脂質(zhì)體內(nèi)含硼成分的含量時(shí)降低滲透壓對(duì)于每個(gè)分子帶有至少10個(gè)硼原子的含硼化合物是必要的。當(dāng)然，每個(gè)分子中所含硼原子數(shù)越少，所需濃度越高。所制成的脂質(zhì)體溶液對(duì)于封于其中的物質(zhì)的泄漏應(yīng)當(dāng)是穩(wěn)定的，以便在大于3.5個(gè)月的時(shí)間漏出少于10％的含硼物質(zhì)。
本發(fā)明通過以下方法擴(kuò)展了硼中子捕獲療法(BNCT)給予病人上文所述的自由態(tài)硼烷和含有硼烷的脂質(zhì)體，然后將病人置于中子源中。這樣的中子源已有描述，例如，Russell.Jr的美國專利No.4,516,535。
脂質(zhì)體包封的硼烷化合物的制備方法采用探頭近距離聲波定位(probe sonication)的方法處理優(yōu)選包括等摩爾量的磷脂和膽固醇的干燥層和水化溶液(通常為5ml，250-300mM的含有硼烷的鹽)。水化的脂類樣品可以用一個(gè)Sonics & Materials公司的“Vibracell″探頭近距離聲波定位器進(jìn)行處理，該定位器帶有一個(gè)微型尖端，操作時(shí)使用該微型尖端的最大功率。溶液保持在65℃氮?dú)猸h(huán)境中，聲波定位處理約15-30分鐘。然后可將溶液冷卻至室溫以制成小的單層囊泡，其平均直徑優(yōu)選小于250nm，更優(yōu)選為50-100nm。
囊泡與余下的自由態(tài)硼烷鹽的分離方法為在一個(gè)Sephadex G-25-80(中等)柱上進(jìn)行洗脫，洗脫液為等滲的磷酸緩沖液或滲透壓約等于生理滲透壓的乳糖溶液。所分離的脂質(zhì)體餾分以適當(dāng)?shù)木彌_液稀釋出脂類濃度為23-24mg/ml，然后以濾過0.22μm微孔濾膜的方法進(jìn)行滅菌。所封入的硼烷鹽分子的完整性可通過160MHz11B核磁共振波譜法加以下確證。
脂質(zhì)體大小的測定使用動(dòng)態(tài)光散射法，所用方法是該領(lǐng)域的熟練人員所熟知的。所封入的硼的濃度可通過測量各樣品中硼的總濃度，然后測量超濾后濾液中硼的濃度較正扣除脂質(zhì)體外的硼來測定。硼濃度的測量可使用電感偶合等離子體原子放射光譜法(inductivelycoupled plasma atomic emission spectroscopy，ICP-AES)。
本發(fā)明硼試劑的療效可以以小鼠的生物分布研究來表示，所有的小鼠生物分布研究均使用雌性BALB/c小鼠(16-20g)，實(shí)驗(yàn)前7-10天在小鼠右脅植入EMT6腫瘤。在殺死小鼠時(shí)腫瘤質(zhì)量為125-350mg。尾靜脈注射脂質(zhì)體乳劑(200μl)。宰殺前，每只小鼠均以氟烷麻醉，經(jīng)心臟穿刺吸血入經(jīng)肝素處理過的注射器內(nèi)。然后將血置入已稱了重量的低溫試管中。麻醉下，通過頸椎錯(cuò)位無痛處死小鼠。解剖下腫瘤、肝和脾，并降其置入已稱重的低溫試管中。血液和組織冷凍儲(chǔ)存至分析時(shí)。
生物分布圖的繪制方法為Y軸為硼的濃度，單位為每克組織中硼的毫克數(shù)，X軸為時(shí)間，單位為小時(shí)。通常分析四種組織腫瘤和血液，這是由于它們的治療意義，及肝臟和脾臟，由于這些組織已知在體內(nèi)可與脂質(zhì)體競爭性結(jié)合。
圖2給出了帶有EMT6腫瘤的BALB／c小鼠體內(nèi)Na2B10H10和Na2B12H11SH的生物分布。該圖表明，這兩種化合物均無治療作用，這是由于腫瘤中硼活性成分的濃度起始時(shí)非常低而且下降非常快。
我們相信本發(fā)明的硼烷化合物包括那些B10H102-的衍生物，由于胞內(nèi)蛋白接合作用比現(xiàn)有技術(shù)中的Na2B10H10更具反應(yīng)活性。因此，本發(fā)明包括這樣一個(gè)治療腫瘤的方法，它包括給予病人體內(nèi)可被胞內(nèi)蛋白親核進(jìn)攻的硼烷化合物，然后以熱能化中子處理腫瘤。參見圖3，該圖給出了B10H9NCO2-與胞內(nèi)蛋白的反應(yīng)。
就圖4而言，我們可以很容易地看到，脂質(zhì)體Na2B10H9NCO衍生物遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于母體Na2B10H10部分。腫瘤攝入Na2B10H10開始于10μg/g的濃度；而脂質(zhì)體Na2B10H9NCO開始于約20。這樣，由于后面的部分，腫瘤攝入了更多的，約2倍的硼。同時(shí)，濃度的降低也不象原來那樣快，因此加入NCO官能團(tuán)使得硼試劑更有活性。B10H102-離子證明了以硼化合物在所有組織，包括腫瘤中快速清除為特征的生物分布。
B10H9NCO2-的生物分布證明了初始腫瘤內(nèi)硼濃度約為每克組織20毫克硼。這一濃度經(jīng)過30小時(shí)的時(shí)間仍保持較穩(wěn)定。
本發(fā)明中某些優(yōu)選B10H102-衍生物的一種機(jī)理在圖5中給出。這些衍生物的制備方法的一般描述在Shelly，Hawthorne，and Knobler，Inorg.Chem.31，2889(1992)，本文用作參考文獻(xiàn)。
本發(fā)明中XB10H9L類化合物可由下述物質(zhì)制備[2-B10H9CO]1-，它本身的制備通過作為本發(fā)明另一方面的一個(gè)新反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)。經(jīng)發(fā)現(xiàn)，乙二酰氯(COCl)2與[B10H10]2-的反應(yīng)進(jìn)行的非?？烨以谑覝叵禄旧隙康剡M(jìn)行，反應(yīng)中生成的一氧化碳最終生成羰基衍生物[2-B10H9CO]-，在下文的機(jī)理1中給出，優(yōu)選方案為B10H102-采用[Ph3PMe]B10H10的形式。
機(jī)理1 B10H9CO-離子的轉(zhuǎn)變使用溶于CH2Cl2中的[Ph3PMe][B10H10]觀察到了消除反應(yīng)，但該反應(yīng)可使用多種B10H10]2-的鹽，包括優(yōu)選的銫，四甲基銨和三乙基銨，并可使用其它的溶劑，例如乙腈和四氫呋喃。反應(yīng)產(chǎn)物在2129cm-1處具有很強(qiáng)的紅外峰。CH2Cl2中的反應(yīng)混合物的11B{1H}光譜有7個(gè)信號(hào)，與赤道鍵上的取代反應(yīng)相符，而且顯示出只具有痕量的副產(chǎn)物。被取代的硼可由-43.8ppm處的高場信號(hào)(相對(duì)于BF3·Et2O)指示出該信號(hào)在質(zhì)子偶合光譜中是唯一的。[Ph3PMe][2-B10H9CO]可以以淡褐色的固體形式被分離出，產(chǎn)率為85％，或者將反應(yīng)混合物直接用于下一步反應(yīng)。[2-B10H9CO]-的結(jié)構(gòu)已用X-射線晶體學(xué)方法測定，它顯示出線性的B-C-O分布，C-O的距離為1.13A。
如上文的機(jī)理1和圖5所描述的，使用[2-B10H9CO]-陰離子是由于它易于轉(zhuǎn)變成多種有助于BNCT療法的其它類物質(zhì)。雖然[2-B10H9CO]-在固體狀態(tài)或溶液狀態(tài)時(shí)對(duì)水分比較不敏感，但它在水性溶劑混合物中很容易水化形成[2-B10H9CO2H]2-。[Ph3PMe]2[2-B10H9CO2H]已由晶體學(xué)分析法所確證。
-與一種胺(RNH2)反應(yīng)可生成一種酰胺([2-B10H9CONHR]2-)，同時(shí)多余胺的存在可吸收反應(yīng)生成的酸。R為一親脂性烷基，優(yōu)選的基團(tuán)選自乙基，丙基和己基。[2-B10H9CO]-與醇的結(jié)合可形成酯；在這種情況下，反應(yīng)很慢或不完全，除非加入一種輔助堿，例如三乙胺，以吸收所形成的酸。
當(dāng)與乙腈中的疊氮化合物離子反應(yīng)時(shí)，[2-B10H9CO]-會(huì)發(fā)生一種很有用的轉(zhuǎn)化。羰基經(jīng)一個(gè)庫爾提斯型重排反應(yīng)形成一個(gè)異氰酸離子[2-B10H9NCO]2-，它可由2304cm-1處的紅外吸收所指示。這個(gè)結(jié)構(gòu)已由X-射線晶體學(xué)法所確定了的離子在中性水溶液中很穩(wěn)定，但在酸性介質(zhì)中很快水解。因此，[2-B10H9CO]-離子提供了一個(gè)高產(chǎn)率制備多種用于硼中子捕獲療法的富含硼原子的化合物。制備某種這些化合物的詳細(xì)步驟如下[Ph3PMe][closo-2-B10H9CO]([Ph3PMe]·1)[Ph3PMe]2[closo-B10H10](6.73g，mmol)的混合物，這種物質(zhì)可由(Et3NH)2B10H10很容易制得，將其加入125ml，在冰浴中致冷并攪拌的干CH2Cl2中，用注射器加入(COCl)2的CH2Cl2(5.1ml，10.2mmol)的溶液，混合物在0℃攪拌30分鐘。將溶液升溫至室溫并繼續(xù)攪拌30分鐘。以機(jī)械真空泵將溶液的體積減至約15ml。所得溶液通過一根25×30cm的硅膠柱，以CH2Cl2洗脫，洗脫液真空揮干溶劑。殘?jiān)訡H2Cl2/Et2O重結(jié)晶制成3.59g(8.5mmol，85％)淡褐色的[Ph3PMe]·1。C20H27B10OP的分析數(shù)據(jù)C，56.85；H，6.44；B，25.59。實(shí)測C，57.01；H，6.30；B，25.50。IR(cm-1KBr片)2519(s)，2501(s)，2129(s)。11B{1H}NMR(ppm，CH2Cl2，括號(hào)內(nèi)為相對(duì)面積)6.4(1)，6.0(1)，-17.9(1)，-25.9(2)，-28.4(2)，-28.9(2)，-43.8(1)。-43.8ppm處的共振信號(hào)在質(zhì)子偶合光譜中是單重態(tài)。
2[closo-2-B10H9CO2H]([Ph3PMe]2·2)[Ph3PMe]2[closo-2-B10H10](5.52g，8.2mmol)的混合物，溶于100ml CH2Cl2中，以如上文所述的方法與4.2ml(COCl)2反應(yīng)。真空揮發(fā)出溶劑后，殘?jiān)苡?00ml熱丙酮中，溶液中加入3g活性炭攪拌。將混合物過濾，在濾液中加入150ml水。在溶液中加入0.5N的NaOH將其中和，并在室溫下蒸去丙酮。過濾出所得的晶體并將其干燥，制得4.21g[Ph3PMe]2·2(5.9mmol，72％)。C39H46B10O2P2的分析數(shù)據(jù)C，65.35；H，6.47；B，15.08。實(shí)測C，65.18；H，6.43；B，15.20。IR(cm-2，KBr片)2458(s)，1694(m)，1256(m)。11B{1H}NMR(ppm，CH2c12，括號(hào)內(nèi)為相對(duì)面積)-0.5(1)，-1.3(1)，-25.5(1)，-28.6(3)，-29.6(4)。
2[closo-2-B10H9NCO](Et3NH2·3)[Et3NH]2[closo-2-B10H9NCO](3.22g，10mmol)溶于150ml MeCN的溶液，以上文所述的方法與5ml(COCl)2反應(yīng)。加入固態(tài)的NaN3(1.4g，21mmol)，將混合物攪拌過夜。然后將混合物過濾，加入200ml乙醚，將溶液致冷至-20℃過夜。過濾出沉淀物真空下干燥，制得2.73g[Et3NH2]2·3(7.5mmol，75％)。以丙酮/戊烷重結(jié)晶以進(jìn)一步純化用于分析和晶體檢驗(yàn)的樣品。C13H41B10N3O的分析數(shù)據(jù)C，42.94；H，11.37；N，11.56；B，29.73。實(shí)測C，42.81；H，11.18；N，11.71；B，29.50。IR(cm-1，KBr片)2538(s)，2505(s)，2475(s)，1013(m)，967(m)，597(w)，577(w)。11B{1H}NMR(ppm，MeCN，括號(hào)內(nèi)為相對(duì)面積)-2.3(2)，-16.8(1)，-25.2(2)，-25.6(2)，-28.3(2)，-31.6(1)。-16.8ppm處的共振信號(hào)在質(zhì)子偶合光譜中是單重態(tài)。
-的合成方法如上文所述。這一離子也可以用下述起始物來合成溶于乙腈中的Cs2[B10H10]，[Et3NH2]2[B10H10]，[(CH3)4N]2[B10H10]或[Ph3PCH3]2[B10H10]；或[Et3NH]2[B10H10]；溶于二氯甲烷中的[(CH3)4N]2[B10H10]或[Ph3PCH3]2[B10H10]。[B10H9NCO]2-的合成可用上述任意的一個(gè)陰離子來進(jìn)行，但經(jīng)發(fā)現(xiàn)，反應(yīng)僅在乙腈中平穩(wěn)進(jìn)行。
如果合成[B10H9CO2C2H5]2-和[B10H9CO2CH3]-，將[Et3NH][B10H9CO](2.5mmol)溶于50ml合適的醇中，在0.5mlEt3N存在的條件下攪拌30分鐘，真空下將醇蒸去，以乙腈/乙醚作為溶劑將殘?jiān)亟Y(jié)晶。[Et3NH]2[B10H9CO2C2H5](溶于乙腈)11B{1H}0.8，-0.4，-23.4，-27.2；[Et3NH]2[B10H9CO2CH3](溶于乙腈)的11B{1H}0.8，-0.4，-23.9，-27.5。
如果合成[B10H9CONHC3H7]2-，將[Et3NH][B10H9CO](2.5mmol溶于丙胺中攪拌30分鐘。真空蒸去丙胺后將殘?jiān)苡诤幸掖嫉腫(CH3)4N]Cl中，以乙醚沉降。[(CH3)4N]2[B10H9CONHC3H7](溶于乙腈)11B{1H}0.3，-24.7，-26.7，-27.3。
如上文所計(jì)論的，本發(fā)明的一個(gè)方面是在BNCT療法中使用帶有可經(jīng)受親核進(jìn)攻的硼烷部分的試劑。這些化合物具有可與胞內(nèi)蛋白部分反應(yīng)的能力。例如，已知B10H102-陰離子可承受氧化偶聯(lián)而生成B20H184-?？砂麅?nèi)結(jié)合的化合物包括上文討論的B10H102-離子的單羰基取代衍生物，B10H182-的取代衍生物，例如下文討論的氨衍生物，還原的B20H182-的衍生物，此衍生物可于胞內(nèi)被氧化以生成相應(yīng)的活性B20H182-衍生物，可與蛋白-NH2基反應(yīng)的B10H102-和B20H184-的羰基取代物(酰基離子類似物)。無論以自由態(tài)或封入脂質(zhì)體的形式使用時(shí)，[B20H17NH3]3-的鹽均顯示特別適用于BNCT療法。圖6所示為[B20H17NH3]3-的四甲銨鹽。
如想制備[B20H17NH3]3-的另一種鹽Na3B20H17NH3，在含有3mmol干Na2(n-B20H18)的燒瓶中加入約175ml液體氨進(jìn)行濃縮，然后以干冰/丙酮浴和冷凝管進(jìn)行冷卻。通過注射器逐滴加入18％乙炔鈉的二甲苯/輕質(zhì)礦物油懸濁液(2.0ml，8mmol NaC2H)。將干冰/酮浴從反應(yīng)燒瓶的底部移走，保留冷凝管繼續(xù)反應(yīng)3小時(shí)。在氮?dú)夥障聦闭羧?。剩下的溶劑真空蒸去。加入無水乙醇(50ml)并將所得溶液過濾。使用以(CH3)4NCl飽合的無水乙醇將產(chǎn)物沉降下來。過濾出固體并以水/乙醇重結(jié)晶，產(chǎn)率為70％。使用標(biāo)準(zhǔn)方法將陽離子交換為鈉。160MHz11BNMR(CHCl3，參照外標(biāo)BF3·OEt2的δ值)9.4(s，1B)，3.0(d，1B)，-1.4(d，1B)，-7.1(d，1B)，-14.9(s，1B)，-24.8(d)，-26.2(d)，-29.0(d)，-31.0(d)。
圖7給出了帶有EMT6腫瘤的BALB/c小鼠體內(nèi)的封入上述1∶1DSPC/膽固醇脂質(zhì)體的Na3B20H17NH3的生物分布特征。很明顯，腫瘤內(nèi)硼濃度在約30小時(shí)的時(shí)間內(nèi)持續(xù)上升，然后慢慢下降，最終腫瘤內(nèi)硼的濃度仍為最初腫瘤內(nèi)硼濃度的94％，所有其它組織中經(jīng)40小時(shí)的時(shí)間平穩(wěn)清除。48小時(shí)時(shí)較低的血液硼濃度使腫瘤與血液中硼的比為5.3。最終腫瘤內(nèi)硼濃度為每克組織中25.4毫克硼，約等于起始時(shí)腫瘤中的硼濃度，很好地落于治療濃度之內(nèi)?？梢韵嘈?，B20H17NH33-類化合物在細(xì)胞內(nèi)按下述機(jī)理2氧化，并且所產(chǎn)生的離子與親核試劑具有很高的反應(yīng)活性，例如，與腫瘤細(xì)胞內(nèi)有末端氨基。所產(chǎn)生的B20H17NH3-的單個(gè)負(fù)電荷使得其與B20H182-離子相比有較高的親電性和較好的胞內(nèi)結(jié)合性。
一般來講，除NH3外，其它還原的、取代B20H182-衍生物據(jù)信在如機(jī)理2所述的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)運(yùn)之后要經(jīng)受胞內(nèi)氧化。如圖8中所示，B20H17L1-類離子與親核試劑，例如腫瘤細(xì)胞內(nèi)的胞內(nèi)蛋白具有特別強(qiáng)的反應(yīng)活性。
因此，本發(fā)明包括如上文所述具有高反應(yīng)活性的硼烷化合物XyB20H17L和相應(yīng)的封入脂質(zhì)體的化合物，其中y為1至4。制備某個(gè)XyB20H17L衍生物的方法如下[B20H18]2-，[B20H17NH2R]3-的胺衍生物以下述方式合成在氮?dú)猸h(huán)境下將干的Na2[n-B20H18](3mmol)的溶于所設(shè)計(jì)的胺中(30ml)。通過注射器向溶液中加入炔鈉NaC2H(2.0ml，18％的二甲苯/輕質(zhì)礦物油懸濁液)。將混合物在室溫下攪拌約一天，真空蒸去胺然后向殘?jiān)屑尤霟o水乙醇(50ml)，加入以(CH3)4NCl飽和的無水乙醇，以四甲基銨鹽的形式沉降出產(chǎn)物。以水/乙醇重結(jié)晶沉降物得到想要的產(chǎn)物，產(chǎn)率為約70％。芐胺，(B20H17NH2CH2C6H5)U11B{1H}10.0，2.7，-2.0，-8.2，-13.0，-26.7，-29.6；辛胺，(B20H17NH2(CH2)7CH3)3-11B{1H}9.0，3.0，-1.0，-6.5，-12.5，-25.9，-28.8；及乙二胺，(B20H17NH2CH2CH2NH2)3-11B{1H}9.0，2.8，-0.9，-3.9，-6.3，-12.4，-2.8。
如制備[B20H17NH3]1-的氧化胺類化合物，于0℃向溶有0.7g[(CH3)4N][B20H17NH3]的40ml蒸餾水溶液中緩慢加入20ml0.35M的氯化鐵溶液(FeCl3·6H2O)。反應(yīng)混合物攪拌約一天。將從溶液中沉降出的產(chǎn)物，過濾出來并干燥。
如合成[B20H17CN]4-，將[Et3NH]2[n-B20H18](0.54g，1.2mmol)溶于15ml蒸餾過的乙腈中。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加入0.86g(5.5mmol)的Et4NCN，將該溶液回流約24小時(shí)。氰基衍生物，[B20H17CN]4-11B{1H}10.4，0.8，-2.5，-4.5，-12.9，-23.2，-26.2，-27.1。
如果合成[B20H17SH]4-，將干燥的Na2[n-B20H18](2.5mmol)溶于重蒸乙腈(50ml)和重蒸乙醚(20ml)的混合溶劑中。該溶液經(jīng)過套管轉(zhuǎn)移至含有無水NaSH(0.31g，5.5mmol)的燒瓶中。將溶液回流約一周。然后真空蒸去溶劑。向其中加入無水乙醇(50ml)，加入以(CH3)4NCl飽和的無水乙醇，以四甲基銨鹽的形式沉降出產(chǎn)物。硫醇衍生物，[B20H17SH]4-11B{1H}4.1，1.6，-0.7，-23.2，-24.6，-27.2。
上述實(shí)施例和圖7涉及了將Na3B20H17NH3封入平均直徑約110nm的脂質(zhì)體中。我們發(fā)現(xiàn)封有活性硼化合物的較大的脂質(zhì)體，或可能是聚集而成的相似大小的脂質(zhì)體，直徑范圍在100至200nm，優(yōu)選小于250nm，也同樣顯示具有治療價(jià)值。在這里參考圖9，其腫瘤中硼的濃度由30μg/g開始，經(jīng)過一段時(shí)間升至60μg/g。
關(guān)于有治療作用或治療價(jià)值或治療量或治療濃度含意是指所述量的硼烷類化合物當(dāng)分布于腫瘤細(xì)胞內(nèi)并經(jīng)熱能化中子照射時(shí)可導(dǎo)致殺死腫瘤細(xì)胞。這一濃度范圍的前提是使用95％的濃縮10B。如使用自然豐度或較低含量的濃縮10B，需要較高的使用濃度，這一濃度可通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是，我們發(fā)現(xiàn)，自由態(tài)的Na3B20H17NH3同樣顯示出較高的硼活性和腫瘤特異性。自由態(tài)是指該化合物未封入脂質(zhì)體中。當(dāng)加入緩沖液中給藥時(shí)，它的存在形式很簡單，這樣的緩沖液如磷酸緩沖的乳糖溶液或鹽水溶液，并以注射方式給藥。如圖10所示，這一化合物經(jīng)過較長的時(shí)間，通過融合可產(chǎn)生有治療作用的轉(zhuǎn)運(yùn)，因而可導(dǎo)致在腫瘤內(nèi)累積。應(yīng)該看到，一般來講，其它現(xiàn)有游離態(tài)硼的衍生物當(dāng)以相同的劑量注射時(shí)，從未表現(xiàn)出超過2ppm的初始積累；而如圖所示，在腫瘤中初始分布為約為8ppm。
封入脂質(zhì)體的硼烷化合物療效的對(duì)比在圖11中給出。脂質(zhì)體包封的硼烷化合物的制備和生物分布的測定如上文所述。可以看出B20H17NH33-類化合物遠(yuǎn)較其它化合物有效。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及親脂性的硼烷類化合物在脂質(zhì)體的磷脂雙層結(jié)構(gòu)中的包埋。已知上文所述類型的單層脂質(zhì)體如硼轉(zhuǎn)運(yùn)載體以這樣一種方式優(yōu)選轉(zhuǎn)運(yùn)它們的成分至動(dòng)物和人體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞，這種方式是腫瘤內(nèi)效應(yīng)分子的濃度為正常組織，包括血液中的5-10倍。由于本發(fā)明的這一方面，我們發(fā)現(xiàn)，將某種碳硼烷類化合物包埋在脂質(zhì)體雙層結(jié)構(gòu)中提高了脂質(zhì)體的腫瘤特異性。通過在親脂性雙層膜中包埋碳硼烷腫瘤治療劑，通過帶有硼烷腫瘤治療劑的脂質(zhì)體所轉(zhuǎn)運(yùn)的硼的總量也提高了。
本發(fā)明的這一方面是脂質(zhì)體優(yōu)選具有至少一個(gè)包封用雙層結(jié)構(gòu)和一個(gè)包封雙層結(jié)構(gòu)所限定的內(nèi)部空間，并且在雙層結(jié)構(gòu)中包埋碳硼烷化合物的單層結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的這一方面還涉及在BNCT療法治療腫瘤時(shí)應(yīng)用這種包埋碳硼烷的脂質(zhì)體，以提高脂質(zhì)體的特異性和在脂質(zhì)體中封入治療成分，如上文所討論的硼烷類化合物和本領(lǐng)域人員所知道的其他化合物。
雙層結(jié)構(gòu)中包埋硼化合物的脂質(zhì)體是通過在所要包埋的硼化合物存在的條件下將磷脂水化的方法來制備的。需特別指出的是，脂質(zhì)體懸浮液的制備采用探針近距離聲定位法處理下列物質(zhì)，含有所期望量親脂性硼類化合物的干層和等摩爾的磷脂和膽固醇，將它們與水化溶液(通常含有250-300mM含硼鹽)在65℃處理15-30分鐘。干層的制備方法為，將親脂性硼化合物和膽固醇DSPC混合物溶于氯仿，然后在真空中蒸去溶劑。通過近距離聲定位處理將囊泡均一化，然后以在Sephadex G-25(中等)柱上洗脫的方法從剩余的自由態(tài)硼烷鹽中分離出來，洗脫劑采用等滲的磷酸緩沖的鹽水或乳糖。所制備的脂質(zhì)體以適當(dāng)?shù)木彌_液稀釋出脂類濃度為20-30mg/ml并通過0.22μm Millipore濾膜過濾滅菌。
包埋在雙層結(jié)構(gòu)中的硼的量實(shí)際上由加入DSPC膽固醇脂類混合物中硼化合物的量來控制。假設(shè)硼化合物不溶于水，所有的硼化合物均應(yīng)被包埋，雖然實(shí)際情況并不總是如此。當(dāng)含有硼的化合物均未被包封時(shí)，包埋入脂質(zhì)體的硼的量可由ICP-AES分析法測定。
一般來講，為提高脂質(zhì)體的特異性和適于BNCT療法，包埋在雙層結(jié)構(gòu)中的量優(yōu)選為0.5％至10％，更優(yōu)選為1％至5％。較好的方法為雙層結(jié)構(gòu)中含有一種磷脂，例如DSPC和膽固醇，其中DSPC與膽固醇的摩爾比為1∶1至3∶1，優(yōu)選1∶1。
依照本發(fā)明，包埋在脂質(zhì)體的碳硼烷通常選自由下述(a)，(b)，(c)，(d)，(e)，(f)，和(g)組成的組和其混合物(a)具有如下分子式的碳硼烷
R為親脂性烷基，優(yōu)選-(CH2)xCH3，這里x為11至19，更為優(yōu)選R選自n-C16H33和n-C18H37。較長的碳鏈，例如帶有16個(gè)碳原子的R基可提高雙層結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，這是由于這種化合物和磷脂DSPC的相似性所產(chǎn)生的，如極性首基和長的親脂性側(cè)鏈所示。
(b)具有下述分子式的碳硼烷 參照?qǐng)D12，雙尾的碳硼烷類A比上文所討論的單尾的碳硼烷(a)能更好地包埋在雙層結(jié)構(gòu)中。
如圖12所示的帶有一個(gè)極性首基和兩個(gè)脂肪酸尾基為特征的硼烷類化合物包埋在脂質(zhì)體雙層結(jié)構(gòu)中后可穩(wěn)定雙層膜結(jié)構(gòu)，這是由于它更好地模擬了所利用的磷脂的結(jié)構(gòu)。帶有雙尾的化合物的合成基于下文中所述，即，Li，Ji；Logan，C.F；Jones，M.Jr；Inorg.Chem(1991)，30，4866。將原碳酸鹽碘化，然后以合適的格式試劑烷基化制成一個(gè)二烷基化閉合型碳酸鹽類化合物。將此化合物降解可制成帶有一極性首基，即巢狀碳硼烷，和兩條脂肪酸尾部，即兩條C18H37鏈的化合物。
(c)具有如下分子式的金屬碳硼烷 M為一種過渡金屬，優(yōu)選FeIII，CrIII，和CoIII。鈷衍生物及其合成步驟在圖13中給出。
(d)具有下述分子式的碳硼烷
(b)，(c)和(d)類碳硼烷的R1和R2可相同或不同，且選自上文所述的(a)類碳硼烷中的親脂性基團(tuán)R，或者R1或R2為氫，R1或R2的另一個(gè)為這樣一個(gè)親脂性烷基。
(e)上仍下述分子式的碳硼烷 其中n優(yōu)選12，14，16，或18。
(a)—(e)中的陽離子X優(yōu)選的基團(tuán)包括上文就XyB20H17L所討論的堿金屬和四烷基銨。
(f)具有下述分子式的籠型碳硼烷
R如上文中所定義。本圖用于R＝n-C16H33，如下文中所討論。
(g)具有下述分子式的籠型碳硼烷 R1和R2如上文所定義，優(yōu)選-(CH2)xCH3，其中x為5至19。本圖用于R＝n-C16H33，如下文中所討論。
如上文中所討論的，單層脂質(zhì)體的特異性可通過在脂質(zhì)體的雙層結(jié)構(gòu)中包埋碳硼烷而提高。優(yōu)選的碳硼烷選自上述(a)-(g)或它們的混合物。
制備這些碳硼烷中某一種的方法如下制備二碳硼烷的二價(jià)陰離子(Dicarbollide Di-anion)，NaK-(3)-1，2-B9C2H10R
在75ml四氫呋喃中溶入5.0g(25.9mmol)的NaK-1，2-B9C2H11R，這種物質(zhì)很容易得到，將制成的溶液緩慢加入攪拌著的氫化鈉基懸濁液中，所說的懸濁液中氫化鈉為1.51g(63mmol，2.70g56％的氫化鈉分散于經(jīng)30ml四氫呋喃洗過兩遍的礦物油中)，懸濁液采用的溶劑也為四氫呋喃，量為90ml。反應(yīng)混合物在回流溫度，氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌3小時(shí)，然后停止攪拌將反應(yīng)混合物冷卻至室溫。當(dāng)多余的氫化鈉沉淀后，收集NaK-1，2-C2B9H10R的澄清四氫呋喃溶液。
制備(3)-1，2-二碳硼烷鈷(III)((3)-1，2-Diacarbollycobalt(III))衍生物，Cs[(3)-1，2-B9C2H10R]2Co向攪拌著的1.20(9.2mmoles)無水氯化鈷的干燥四氫呋喃(50ml)懸濁液中加入NaK-(3)-1，2-B9C2H10R(5.2mmoles)的四氫呋喃溶液，同時(shí)以氮?dú)獗Ｗo(hù)。如上文提到的，NaK-(3)-1，2-B9C2H10R很容易得到。所得的黑色混合物在氮?dú)獗３窒禄亓?小時(shí)，冷卻，過濾除去金屬鈷和氯化鈉。真空蒸去溶劑后，以熱水萃取殘?jiān)?，過濾所得的水溶液，以氯化銫處理濾液。
如制備9，12-[CH3(CH2)17]2-1，2-C2B10H10，將2.31g鎂(95mmol)和31.7gCH3(CH2)17Br在200ml THF中回流3小時(shí)。將格氏試劑緩慢加入9，12-C2B10H10I2(5.01g，12.7mmol)，Pd[P(C5H5)3]2Cl2(227mg)和CuI(65mg)于50ml0℃THF中所形成的懸濁液中，然后回流90小時(shí)。冷卻后，真空蒸去溶劑。殘?jiān)?50ml乙醚中消化，然后以50ml水，50mlNHCl和50ml水洗滌。以硫酸鎂干燥所得乙醚溶液，然后以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑。粗產(chǎn)物以硅膠色譜法純化，以己烷洗脫，制得2.4g9，12-[CH3(CH2)17]2-1，2-C2B10H10(30％)。160MHz11BNMR(CHCl3，δ值參照外標(biāo)BF3·OEt2)8.7(s，2B)，-8.8(d，4B)，-14.8(d，4B)，-16.0(d，2B)。
如制備K+[5，6-CH3(CH2)17]2，8-C2B9H10]-，將1.04g 9，12-[CH3(CH2)17]2-1，2-C2B10H10(1.6mmol)加入有1g KOH60ml乙醇溶液中，回流24小時(shí)。將該溶液冷卻，以二氧化碳飽和，過濾，直空下除去溶劑。殘?jiān)员街亟Y(jié)晶，制成1.02g(94％)K+[5，6-[CH3(CH2)17]2-7，8-C2B9H10]-。160MHz11BNMR(CHCl3，δ值參考照外標(biāo)BF3·OEt2)-5.0(s，2B)，-11.6(d，2B)，-18.9(d，1B)，-21.0(d，2B)，-29.5(d，1B)，-35.6(d，1B)。
如制備1-CH3(CH2)15-1，2-C2B10H11，將12.27g B10H14(100mmol)，150ml苯和42ml乙腈的混合物回流過夜。向回流液中逐滴加入十八碳炔(25.00g，100mmol)，溶液繼續(xù)回流36小時(shí)。冷卻后真空除去溶劑。將殘?jiān)?∶1的乙醚∶戊烷溶解，然后以1N NaOH5×100ml萃取，收集有機(jī)相，以Mg2SO4干燥，然后以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑。粗產(chǎn)物以硅膠色譜法純化，以戊烷洗脫，分離產(chǎn)物，產(chǎn)率為30％。160MHz11B NMR(戊烷，δ值參照外標(biāo)BF3·OEt2)-1.7(d，1B)，-5.1(d，1B)，-8.6(d，2B)，-10.7(d，2B)，-11.5(d，2B)，-12.4(d，2B)。
如果制備K+[7-[CH3(CH2)15]-7，8-C2B9H10，將5.19g 1-CH3(CH2)15-1，2-C2B10H11(14mmol)加入1.8g KOH溶于100ml乙醇所制成的溶液中并回流24小時(shí)，將溶液冷卻，以二氧化碳飽和，過濾，真空除去溶劑，殘?jiān)员皆赟oxhlet萃取器中萃取并將產(chǎn)物分離，產(chǎn)率為90％。160MHz11B NMR(C6H6，δ值參照外標(biāo)BF3·OEt2)-9.4(d，2B)，-12.4(d，1B)，-15.8(d，1B)，-16.5(d，2B)，-20.7(d，1B)，-31.7(d.，1B)，-35.6(d，1B)。
就圖13而言，當(dāng)鉀碳硼烷衍生物類13A包埋入雙結(jié)構(gòu)時(shí)，所得的脂質(zhì)體為帶負(fù)電荷的脂質(zhì)體，這可以提高脂質(zhì)體的選擇性和改善其生物分布。
對(duì)于包埋碳硼烷的脂質(zhì)體，我們進(jìn)行了生物分布的研究。就圖14而言，在脂質(zhì)體內(nèi)部空間封入了一種等滲緩沖液，例如，磷酸緩沖的乳糖，在脂質(zhì)體內(nèi)還摻雜有K[CH3(CH2)15C2B9H11]，它是(a)類碳硼烷的一例。6小時(shí)時(shí)腫瘤內(nèi)的值為約每克腫瘤約18毫克硼，這一硼濃度維持30小時(shí)的時(shí)間，然后開始下降，使得最終腫瘤內(nèi)硼濃度為每克腫瘤中9.5毫克硼，最終腫瘤中與血液中硼的比為6.6。
就圖15而言，在脂質(zhì)體的水質(zhì)中心或內(nèi)部空間中封入高滲的緩沖液(375mM NaCl/10％HEPES緩沖液)，脂質(zhì)體中摻雜有K(C2B9H11)(CH2)15CH3。高滲緩沖液更好地模擬了由于封入硼烷溶液而引起的作用于脂質(zhì)體上的實(shí)際滲透壓。脂質(zhì)體的平均直徑(99nm)落在適于BNCT療法的脂質(zhì)體正常直徑范圍內(nèi)。這些脂質(zhì)體的注射劑量(6.3mg/kg體重)略高于圖14中所用的等滲緩沖液的例子。6小時(shí)時(shí)腫瘤內(nèi)的值約為22μg硼/g腫瘤。這一硼濃度上升約12小時(shí)，然后在其余的時(shí)間內(nèi)下降，使得最終腫瘤內(nèi)硼濃度為25.2μg硼/g腫瘤，最終腫瘤與血液中硼的比為8.4，這兩個(gè)值均較好地落入了治療值范圍內(nèi)(20μg硼/g腫瘤和腫瘤與血液中硼的比為3)。
圖14和圖15中，肝臟和脾臟中硼的濃度明顯低于所觀察到的其它體內(nèi)分布位置的濃度。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及以下述方法治療腫瘤，給予病人有治療作用量的單層脂質(zhì)體，這一脂質(zhì)體具有至少一層包封用雙層結(jié)構(gòu)和一個(gè)由該包封雙層結(jié)構(gòu)所限定的內(nèi)部空間，而且在雙層結(jié)構(gòu)中包埋有(a)-(e)類碳硼烷或其混合物。本發(fā)明的另一個(gè)方面是，上文所述包埋碳硼烷的脂質(zhì)體包括在脂質(zhì)體內(nèi)部空間中的硼烷化合物。這樣，當(dāng)使用包封有硼烷的脂質(zhì)體時(shí)，可增加適用于BNCT療法的10B的量。被包封的硼烷化合物可選自上文所討論的硼烷，即XyB20H17L和XsB10H9L，或其它欲轉(zhuǎn)運(yùn)至腫瘤的藥物。最優(yōu)選的是硼烷選自NayB20H17NH3其中y為1或3，和Na2B10H9NCO。按照本發(fā)明的這一方面治療腫瘤的方法包括，將包埋有碳硼烷的上文所述脂質(zhì)體給予病人然后將腫瘤暴露于熱能化中子中。
在按照本發(fā)明的所有方法中，化合物以靜脈注射的方式給藥，腫瘤內(nèi)濃度的監(jiān)測采用在選擇的時(shí)間點(diǎn)將小鼠處死。優(yōu)選腫瘤內(nèi)硼的起始濃度至少為10μg/g腫瘤，最好為20-30，但同時(shí)，盡可能高的濃度也是我們所希望的。如果預(yù)期的腫瘤內(nèi)硼濃度未達(dá)到治療濃度，可經(jīng)一較長時(shí)間輸入含有硼試劑的藥物懸濁液或以多次注射的方式給藥。
雖然本發(fā)明僅就特定的應(yīng)用加以描述，所涉及的原則可被用于本領(lǐng)域熟練人員認(rèn)為很顯然的其他應(yīng)用中，相應(yīng)地，本發(fā)明僅受所附權(quán)利要求中所提范圍的限制。
所要求的排它的產(chǎn)權(quán)或特權(quán)的本發(fā)明的實(shí)施方式由權(quán)利要求書所定義。
權(quán)利要求
1.一種含有脂質(zhì)體的用于硼中子捕獲療法的腫瘤治療劑，該脂質(zhì)體具有至少一層包封用雙層結(jié)構(gòu)和一個(gè)由該包封雙層結(jié)構(gòu)所限定的內(nèi)部空間；以及在此內(nèi)部空間中的硼烷，其中硼烷化合物選自下述基團(tuán)(a)XyB20H17L，其中X選自堿金屬和四烷基銨，y為1至4，L為任意的2電子給體；(b)XsB10H9L，其中X選自堿金屬和四烷基銨，S為1或2，L為任意的2電子給體；及(c)(a)和(b)的混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腫瘤治療劑，其特征在于硼烷選自NayB20H17NH3，其中y為1或3，和Na2B10H9NCO。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腫瘤治療劑，其特征在于，堿金屬選自Na，K，Cs和Rb。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腫瘤治療劑，其特征在于，X選自四甲基銨和四乙基銨。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腫瘤治療劑，其特征在于，L選自-NHR1R2，其中R1和R2相同或不同，且選自氫、芐基、烷基和二胺基；-SR1R2，其中R1和R2相同或不同，且選自氫或烷基；-CN；-CO；-NCO；-CH2OH；-CO2R1；烷基；-NHCONHR1；-COOH和-CONHR1，其中R1選自氫、芐基、烷基和二胺基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腫瘤治療劑，其特征在于X為四甲基銨。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腫瘤治療劑，其特征在于L為氨類。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的腫瘤治療劑，其特征在于L為NH3。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腫瘤治療劑，其特征在于脂質(zhì)體含有1∶1摩爾比的DSPC和膽固醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的腫瘤治療劑，其特征在于脂質(zhì)體含有1∶1摩爾比的DSPC和膽固醇，并且為單層結(jié)構(gòu)。
11.一種治療腫瘤的方法，包括給予由下述物質(zhì)組成的腫瘤治療劑一種脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體含有至少一層包封用雙層結(jié)構(gòu)和該包封雙層結(jié)構(gòu)所限定的內(nèi)部空間，和位于該內(nèi)部空間內(nèi)的一種硼烷化合物，其中硼烷選自(a)XyB20H17L，其中X選自堿金屬和四甲基銨，y為1至4，L為任意的2電子給體；(b)XsB10H9L，其中X選自堿金屬和四烷基銨，s為1或2，L為任意2電子給體；及(c)(a)和(b)的混合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，硼烷選自NayB20H17NH3，其中y為1或3，和Na2B10H9NCO。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于硼烷為Na3B20H17NH3或Na2B10H9NCO，其中，當(dāng)腫瘤治療劑轉(zhuǎn)運(yùn)至腫瘤并暴露于熱能化中子之中時(shí)，該腫瘤治療劑具有治療作用。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于硼烷為Na3B20H17NH3或Na2B10H9NCO，其中，當(dāng)腫瘤治療劑轉(zhuǎn)運(yùn)到腫瘤并暴露于熱能化電子之中時(shí)，該腫瘤治療劑具有治療作用。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，特征在于，使用95％的富集10B，每克腫瘤中至少有10μg的10B。
16.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，L選自-NHR1R2，其中R1和R2可相同或不同，并選自氫、芐基，烷基和二胺；-SR1R2，其中R1和R2可相同或不同，并選自H或烷基；-CN；-CO；-NCO；-CH2OH；-CO2R1；烷基；-NHCONHR1；-COOH；和-CONHR1，其中R1選自氫、芐基，烷基和二胺。
17.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，X為四甲基銨。
18.根據(jù)權(quán)利要求11所述的腫瘤治療劑，其特征在于堿金屬選自Na，K，Cs和Rb。
19.根據(jù)權(quán)利要求11所述的腫瘤治療劑，其特征在于，X選自四甲基銨和四乙基銨。
20.化合物NayB20H17NH3，其中y為1或3。
21.一種水溶性的B20H17NHR1R2-2，其中R1和R2相同或不同，且選自氫、芐基、烷基和二胺，z為1或3。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的鹽，其特征在于，其陽離子選自堿金屬和四烷基銨，其中的烷基是使該鹽的水溶性仍能保持的任何烷基。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的鹽，其特征在于，其陽離子為四甲基銨。
24.根據(jù)權(quán)利要求21所述的鹽，其特征在于，R1和R2為乙二胺。
25.封入脂質(zhì)體的硼烷化合物，其中的硼烷是胺官能化的。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的封入脂質(zhì)體的硼烷，其特征在于所述脂質(zhì)體中包埋有碳硼烷。
27.一個(gè)治療腫瘤的方法，包括給予具分子式X1B20H17L的化合物的步驟，其中X選自堿金屬和四烷基銨，L為任意的二電子給體，y為1至4。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，L選自-NHR1R2，其中R1和R2相同或不同，且選自氫，芐基，烷基和二胺；-SR1R2，其中R1和R2相同或不同，且選自H或烷基；-CN；-CO；-NCO；-CH2OH；-CO2R1；烷基；-NHCONHR1；-COOH和-CONHR1，其中R1選自氫，芐基，烷基和二胺。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其特征在于，L選自-NH2-CH2-Ph，-NH2CH2CH2NH2和-NH2(CH2)7CH3。
30.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，X為Na，K，Cs或Rb。
31.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，X為四甲基銨。
32.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其特征在于，二胺為乙二胺。
33.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，L為NH3。
34.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，L為NH3，y為3，脂質(zhì)體是單層結(jié)構(gòu)的。
35.一種治療腫瘤的方法，包括給予硼烷化合物的步驟，該硼烷化合物在體內(nèi)可被胞內(nèi)蛋白親核進(jìn)攻。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于硼烷選自XyB20H17L和XsB10H9L，其中X選自堿金屬和四烷基銨，s為1或2，y為1至4，L為任意的二電子給體。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其特征在于，L選自-NHR1R2，其中R1和R2相同或不同，且選自氫、芐基、烷基和二胺；-SR1R2，其中R1和R2相同或不同，且選自H或烷基；-CN；-CO；-NCO；-CH2OH；-CO2R1；烷基；-NHCONHR1；-COOH；和-CONHR1，這里R1選自氫，芐基、烷基和二胺。
38.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于硼烷被封入脂質(zhì)體中。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其特征在于脂質(zhì)體中包埋有硼烷。
40.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，硼烷為XyB20H17NH3。
41.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，硼烷為X2B10H9NCO。
42.一種具有至少一層包封用雙層結(jié)構(gòu)和一個(gè)由包封雙層結(jié)構(gòu)所限定的內(nèi)部空間的脂質(zhì)體，其特征在于碳硼烷包埋在它的雙層結(jié)構(gòu)中。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的脂質(zhì)體，其特征在于，在脂質(zhì)體的雙層結(jié)構(gòu)中存在0.05％至20％(重量)的硼。
44.根據(jù)權(quán)利要求42所述的脂質(zhì)體，其特征在于，在脂質(zhì)體的雙層結(jié)構(gòu)中存在0.5％至10％(重量)的硼。
45.根據(jù)權(quán)利要求42所述的脂質(zhì)體，其特征在于，雙層結(jié)構(gòu)中含有DSPC和膽固醇。
46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的脂質(zhì)體，其特征在于，DSPC和膽固醇的摩爾比為1∶1至3∶1。
47.根據(jù)權(quán)利要求42所述的脂質(zhì)體，其特征在于，雙層結(jié)構(gòu)中含有磷脂。
48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的脂質(zhì)體，其特征在于該雙層結(jié)構(gòu)進(jìn)一步包含膽固醇。
49.根據(jù)權(quán)利要求42所述的脂質(zhì)體，其特征在于碳硼烷選自(a)具有下述分子結(jié)構(gòu)的碳硼烷 其中X選自堿金屬和四烷基銨，R為親脂性的烷基；(b)具有下述分子結(jié)構(gòu)的碳硼烷 其中R為一親脂性烷基；(c)具有下述分子結(jié)構(gòu)的碳硼烷 其中R1和R2相同或不同，它們均為親脂性的烷基，或者，R1或R2為H，R1或R2的另一個(gè)為一親脂烷基；和(d)具有下述分子結(jié)構(gòu)的碳硼烷 其中X選自堿金屬和四烷基銨，其中R1和R2相同或不同并為親脂性烷基，或者R1或R2為H，R1或R2的另一個(gè)為親脂性烷基。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的脂質(zhì)體，其特征在于，R、R1和R2為-(CH2)xCH3，x為11至19。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的脂質(zhì)體，其特征在于，R為n-C16H33。
52.根據(jù)權(quán)利要求49所述的脂質(zhì)體，其特征在于，R1和R2為n-C18H37。
53.根據(jù)權(quán)利要求42所述的脂質(zhì)體，其特征在于碳硼烷為 這里M選自FeIII，CrIII和CoIII，R1和R1為相同或不同的親脂性烷基。
54.根據(jù)權(quán)利要求53所述的脂質(zhì)體，其特征在于，R1和R2為-(CH2)xCH3，x為11至19。
55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的脂質(zhì)體，其特征在于，R1和R2為n-C16H33。
56.根據(jù)權(quán)利要求53所述的脂質(zhì)體，其特征在于，R1和R2為n-C18H37。
57.根據(jù)權(quán)利要求42所述的脂質(zhì)體，其特征在于碳硼烷為 其中，R1和R2為相同或不同的親脂性烷基。
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的脂質(zhì)體，其特征在于R1和R2為-(CH2)xCH3，x為11至19。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的脂質(zhì)體，其特征在于，R1和R2為n-C16H33。
60.根據(jù)權(quán)利要求57所述的脂質(zhì)體，其特征在于，R1和R2為n-C18H37。
61.根據(jù)權(quán)利要求42所述的單層脂質(zhì)體，其特征在于碳硼烷為 這里n為12，14或16或18。
62.一種提高脂質(zhì)體特異性的方法，它包括在脂質(zhì)體的雙層結(jié)構(gòu)中包埋一種碳硼烷的步驟。
63.根據(jù)權(quán)利要求62所述的方法，其特征在于，碳硼烷選自權(quán)利要求49，53，57和61中的碳硼烷。
64.一種治療腫瘤的方法，它給予具有至少一層包封用雙層結(jié)構(gòu)和一個(gè)由該雙層結(jié)構(gòu)所限定的內(nèi)部空間的脂質(zhì)體，其中在雙層結(jié)構(gòu)中包埋有碳硼烷。
65.根據(jù)權(quán)利要求64所述的方法，其特征在于，在脂質(zhì)體雙層結(jié)構(gòu)中含有0.05％至20％(重量)的硼。
66.根據(jù)權(quán)利要求64所述的脂質(zhì)體，其特征在于，在脂質(zhì)體雙層結(jié)構(gòu)中含有0.5％至10％(重量)的硼。
67.根據(jù)權(quán)利要求64所述的脂質(zhì)體，其特征在于，雙層結(jié)構(gòu)中含有DSPC和膽固醇。
68.根據(jù)權(quán)利要求67所述的脂質(zhì)體，其特征在于，DSPC與膽固醇的摩爾比為1∶1至3∶1。
69.根據(jù)權(quán)利要求64所述的脂質(zhì)體，其特征在于，雙層結(jié)構(gòu)中含有磷脂。
70.根據(jù)權(quán)利要求69所述的脂質(zhì)體，其特征在于，雙層結(jié)構(gòu)中還含有膽固醇。
71.根據(jù)權(quán)利要求64所述的脂質(zhì)體，其特征在于，碳硼烷選自權(quán)利要求49，53，57，和61中的碳硼烷。
72.一種含有脂質(zhì)體的腫瘤治療劑，脂質(zhì)體具有至少一層包封用雙層結(jié)構(gòu)和一個(gè)由該包封雙層結(jié)構(gòu)所限定的內(nèi)部空間，其中，在內(nèi)部空間中有一種硼烷化合物，在雙層結(jié)構(gòu)中包埋有碳硼烷。
73.根據(jù)權(quán)利要求72所述的腫瘤治療劑，其特征在于，硼烷化合物選自(a)XB20H17L，其中X選自堿金屬和四烷基銨，L為任意二電子給體；(b)XsB10H9L，其中X選自堿金屬和四烷基銨；s為1或2，L為任意的2電子給體；和(c)(a)和(b)的混合物。
74.根據(jù)權(quán)利要求72所述的腫瘤治療劑，其特征在于，硼烷選自NayB20H17NH3，其中y為1或3，和Na2B10H9NCO。
75.一種治療腫瘤的方法，它包括給予含有脂質(zhì)體的腫瘤治療劑，所述脂質(zhì)體具有至少一層包封用雙層結(jié)構(gòu)和一個(gè)由該包封雙層結(jié)構(gòu)所限定的內(nèi)部空間，其中，在內(nèi)部空間中有硼烷化合物，同時(shí)在雙層結(jié)構(gòu)中包埋有碳硼烷。
76.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其特征在于，硼烷化合物選自(a)XB20H17L，其中X選自堿金屬和四烷基銨，L為任意的二電子給體；(b)XsB10H9L，其中X選自堿金屬和四烷基銨，s為1或2，L為任意的二電子給體；和(c)(a)和(b)的混合物。
77.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其特征在于碳硼烷選自權(quán)利要求49，53，57和61中的碳硼烷。
78.一種制備包埋碳硼烷的單層脂質(zhì)體的方法，該方法包括的步驟有提供DSPC，膽固醇和碳硼烷；將DSPC，膽固醇和碳硼烷溶于一種溶劑中；揮發(fā)去溶劑以制成含有DSPC，膽固醇和碳硼烷的脂質(zhì)層；在水質(zhì)溶劑中水化所得的脂質(zhì)層以形成懸濁液；和將懸濁液均質(zhì)化。
79.制備XB10H9CO的方法，其中X選自Ph3PMe和Et3NH，Cs和(CH3)4N，該方法包括將草酰氯與X2B10H10反應(yīng)的步驟。
80.根據(jù)權(quán)利要求79所述的方法，其特征在于，反應(yīng)在CH2Cl2中進(jìn)行。
全文摘要
硼中子捕獲療法可使用X
文檔編號(hào)A61K51/00GK1124921SQ94192350
公開日1996年6月19日 申請(qǐng)日期1994年5月27日 優(yōu)先權(quán)日1993年6月3日
發(fā)明者弗里德里克·M·霍索恩, 黛布拉·阿琳·費(fèi)克斯, 肯尼恩·約翰·謝利 申請(qǐng)人:加州大學(xué)董事會(huì)