本發(fā)明屬于腫瘤治療藥物制備技術(shù)領(lǐng)域。特別涉及一類以六氫螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮為母核的吲哚螺吡咯衍生物，經(jīng)環(huán)糊精裝載后，在體外、體內(nèi)模型中均可以抑制肝癌細(xì)胞的增殖、促進(jìn)其凋亡。

背景技術(shù)：

隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，部分腫瘤(霍奇金淋巴瘤、人絨毛膜癌等)已經(jīng)得到良好的救治，但大部分惡性腫瘤的治療仍然是世界性的難題。由于不斷對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制的深入探討和理解，治療藥物也從特異性低、毒副作用大逐漸向靶標(biāo)性強(qiáng)、副作用低的方向發(fā)展，自此掀起了對(duì)惡性腫瘤的分子靶向藥物研究的熱潮。如多激酶抑制劑索拉非尼等分子靶向藥物應(yīng)用于臨床。因此，繼續(xù)開發(fā)分子靶向藥物，將對(duì)腫瘤患者的治療及預(yù)后具有重要的意義。

采用一鍋法合成的以六氫螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮為母核的一類新型吲哚螺吡咯衍生物，經(jīng)高通量篩選提示mdm2為其作用靶點(diǎn)之一，通過mdm2-p53負(fù)反饋循環(huán)，抑制mdm2，上調(diào)p53，激活p53信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。這已得到前期實(shí)驗(yàn)的證實(shí)。但由于此化合物具有水溶性差、溶劑dmso毒性大等缺點(diǎn)，使得該化合物僅局限于體外模型的研究應(yīng)用。

環(huán)糊精是由6-8個(gè)葡萄糖(命名為α、β、γ環(huán)糊精)經(jīng)c1與c4鍵共價(jià)鏈接的環(huán)狀多糖。它包含疏水的內(nèi)環(huán)、和親水的外環(huán)，能將不溶性小分子化合物嵌合到內(nèi)環(huán)，增加其溶解性、穩(wěn)定性，同時(shí)，它親水性表面也有利于增加膜通透性。因此，是常用的食品、藥物添加劑。2-羥丙基-β-環(huán)糊精，2-羥丙基-γ-環(huán)糊精，磺丁基-β-環(huán)糊精是幾種近年發(fā)展的衍生物，與母體相比，其水溶性更好、毒性更低，已被美國(guó)藥品食品管理局(fda)批準(zhǔn)為增溶劑用于藥物遞送。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一類以六氫螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮為母核的吲哚螺吡咯衍生物，經(jīng)環(huán)糊精裝載后，將其作為一種新的抗腫瘤藥物。

本發(fā)明所述的環(huán)糊精裝載吲哚螺吡咯衍生物的制備方法為：用雙蒸水配制濃度為300-600mg/ml的環(huán)糊精溶液，然后逐滴加入鹽酸，調(diào)節(jié)ph至0.5-3；再加入吲哚螺吡咯衍生物，超聲震蕩溶解，吲哚螺吡咯衍生物與環(huán)糊精的質(zhì)量比為1:300-1:1200；最后加堿液調(diào)節(jié)溶液ph值到7.0，獲得澄清透明藥液。

所述的吲哚螺吡咯衍生物為以六氫螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮為母核的吲哚螺吡咯衍生物。具體為1'-(2-氯苯基)-2'-(2-吡啶甲?；?-1',2',5',6',7',7a'-六氫螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮

(1'-(2-chlorophenyl)-2'-picolinoyl-1',2',5',6',7',7a'-hexahydrospiro[indoline-3,3'-pyrrolizin]-2-one，命名為cphsp)，結(jié)構(gòu)式如下：

所述的環(huán)糊精為α、β、γ環(huán)糊精及其任衍生物中的任意一種或幾種。具體為2-羥丙基-β-環(huán)糊精、2-羥丙基-γ-環(huán)糊精、磺丁基-β-環(huán)糊精、hd-β-環(huán)糊精、rm-β-環(huán)糊精、sbe-β-環(huán)糊精、hd-γ-環(huán)糊精中的一種或幾種。

所述的rm-β-環(huán)糊精的結(jié)構(gòu)式如下：

所述的sbe-β-環(huán)糊精的結(jié)構(gòu)式如下：

所述的hd-γ-環(huán)糊精的結(jié)構(gòu)式如下：

所述的堿液為naoh或nahco3溶液。

將上述制備的環(huán)糊精裝載吲哚螺吡咯衍生物作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用。

將上述制備的環(huán)糊精裝載吲哚螺吡咯衍生物通過cck-8法檢測(cè)，結(jié)果顯示其對(duì)肝癌細(xì)胞系的增殖有抑制作用。隨著吲哚螺吡咯衍生物劑量的增加，對(duì)肝癌細(xì)胞系的抑制增殖作用也越明顯，表現(xiàn)出劑量依賴性。

建立裸小鼠皮下hepg2移植瘤模型，將上述制備的環(huán)糊精裝載吲哚螺吡咯衍生物采用3種途經(jīng)(灌胃口服)給藥，檢測(cè)其體內(nèi)抗腫瘤活性情況，結(jié)果顯示其在體內(nèi)可抑制腫瘤組織生長(zhǎng)。

吲哚螺吡咯衍生物分子結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)氮原子，可以在酸性條件下溶于水，如果直接將溶液ph值再調(diào)至中性后，化合物會(huì)重新析出；本發(fā)明通過調(diào)變ph值，使其先溶于酸，然后用環(huán)糊精裝載，使化合物嵌合入環(huán)糊精分子篩孔中，這樣即使將溶液ph值改變?yōu)橹行?，也不?huì)有沉淀析出，從而增強(qiáng)其溶解性，將難溶于水的吲哚螺吡咯衍生物裝載到環(huán)糊精，有效克服了藥物的溶解度差的問題；重要的是，在小鼠腫瘤模型上，環(huán)糊精裝載的以六氫螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮為母核的吲哚螺吡咯衍生物表現(xiàn)了明確的抗腫瘤效果，而且?guī)缀鯖]有毒性。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明制備的環(huán)糊精裝載吲哚螺吡咯衍生物具有溶解度好、抑制腫瘤細(xì)胞增殖效果明顯、毒副作用低等優(yōu)點(diǎn)。其治療的腫瘤類型包括但不限于：肝癌、腎癌、皮膚癌、鼻咽癌、胃腸癌等。

附圖說明

圖1：cphsp抑制肝癌細(xì)胞系hepg2、huh7細(xì)胞增殖的劑量效果圖。

圖2：實(shí)施例1制備的2-羥丙基-β-環(huán)糊精裝載cphsp抑制肝癌細(xì)胞系hepg2增值的效果圖。

圖3：對(duì)比例1制備的2-羥丙基-β-環(huán)糊精與cphsp的懸濁液的抑制肝癌細(xì)胞系hepg2增值的效果圖，結(jié)果顯示沒有明顯的抗癌效果。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

稱取600mg的2-羥丙基-β-環(huán)糊精溶于1ml雙蒸水中；然后逐滴加入濃鹽酸，調(diào)節(jié)ph至2；再加入1mg的cphsp，超聲震蕩溶解；最后加入堿液(naoh溶液，濃度為40％m/v)調(diào)節(jié)溶液ph值到7.0，獲得澄清透明的2-羥丙基-β-環(huán)糊精裝載cphsp藥液。

將上述制備的2-羥丙基-β-環(huán)糊精裝載cphsp進(jìn)行抗癌效果測(cè)試：

建立皮下嫁接hepg2肝癌細(xì)胞的裸鼠肝癌模型，在腫瘤達(dá)到50-100mm直徑時(shí)，隨機(jī)分為溶劑對(duì)照組和治療組。治療組灌胃2-羥丙基-β-環(huán)糊精裝載cphsp，50mg/kg，溶劑對(duì)照組給予30g/kg的2-羥丙基-β-環(huán)糊溶液，每?jī)商煲淮?，持續(xù)3周。治療兩周后，治療組腫瘤體積明顯小于對(duì)照組，說明2-羥丙基-β-環(huán)糊精裝載cphsp能明顯抑制肝癌腫瘤的生長(zhǎng)。

對(duì)比例1

稱取600mg的2-羥丙基-β-環(huán)糊精溶于1ml雙蒸水中；再加入1mg的cphsp，超聲震蕩混勻，得到懸濁液。

將上述制備的2-羥丙基-β-環(huán)糊精與cphsp的懸濁液進(jìn)行抗癌效果測(cè)試：

建立皮下嫁接hepg2肝癌細(xì)胞的裸鼠肝癌模型，在腫瘤達(dá)到50-100mm直徑時(shí)，隨機(jī)分為溶劑對(duì)照組，低劑量治療組和高劑量治療組。低劑量治療組和高劑量治療組分別灌胃配制的懸濁液，50mg/kg，100mg/kg，溶劑對(duì)照組給予30g/kg的2-羥丙基-β-環(huán)糊溶液，每?jī)商煲淮?，持續(xù)3周。治療3周后，50mg/kg灌胃治療組裸小鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)與對(duì)照組相比，變化不大；100mg/kg灌胃治療組皮下腫瘤生長(zhǎng)速度相對(duì)減慢，但沒有顯著差異。