本發(fā)明屬于水產(chǎn)動(dòng)物藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種中華鱉生物藥餌的制備方法，同時(shí)還涉及一種生物藥餌在中華鱉中的用途，它適用于以活體生物為藥物載體,誘導(dǎo)中華鱉攝食生物藥餌研究藥物在中華鱉體內(nèi)的藥理學(xué)規(guī)律。
背景技術(shù)：
中華鱉(Trionyx sinensis)又名水魚、甲魚、團(tuán)魚等，肉食性，以魚、蝦、軟體動(dòng)物等為主食，多夜間覓食，是我國主要的龜鱉類養(yǎng)殖品種。2013年全國中華鱉養(yǎng)殖產(chǎn)量約有33萬噸，采用的養(yǎng)殖模型有溫室養(yǎng)殖模型、溫室+外塘養(yǎng)殖模式等。在人工養(yǎng)殖條件下，養(yǎng)殖戶為了提高中華鱉的產(chǎn)量，不斷增加中華鱉的養(yǎng)殖密度，中華鱉的疾病也隨之增多，養(yǎng)殖戶為了防治中華鱉的疾病也不得不使用藥物，而目前由于缺乏藥物在中華鱉體內(nèi)的處置過程和藥理學(xué)作用研究，無法對中華鱉進(jìn)行合理用藥。而中華鱉因具有牙齒，且咬勁大，傳統(tǒng)的口灌給藥方法研究藥物的藥理學(xué)作用不易開展是中華鱉藥理學(xué)研究的技術(shù)難點(diǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的是在于提供了一種中華鱉生物藥餌的制備方法。制備過程簡單，操作方便，在藥物溶液中添加誘食劑一方面可以誘導(dǎo)中華鱉攝食生物藥餌，另一方面可以掩蔽藥物的特殊氣味，使中華鱉更易接受生物藥餌；以中華鱉喜食的生物為載體，使藥物在中華鱉胃腸道中的吸收更接近實(shí)際情況。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是在于提供了一種生物藥餌在中華鱉藥理學(xué)研究中的應(yīng)用，采用生物藥餌喂食中華鱉避免了對中華鱉直接強(qiáng)行口灌藥物溶液給中華鱉帶來的損傷；使用生物藥餌更接近中華鱉胃內(nèi)的實(shí)際情況(藥物與中華鱉攝食的食物共存的狀態(tài))，更有利于揭示藥物在中華鱉胃腸道中吸收的真實(shí)狀態(tài)。適于通過生物載體給中華鱉給藥，研究藥物在中華鱉體內(nèi)的藥理學(xué)作用。
為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施：
一種中華鱉生物藥餌的制備方法，其步驟是：
A、選取適宜規(guī)格(8－12cm)的生物載體A；
B、稱取一定量(0.2g～5g)的藥物B(用公式(1)計(jì)算出稱取的藥量)，用溶劑C將藥物溶解；
C、向藥物溶液中加入0.1～0.5g誘食劑D，用蒸餾水稀釋該混合液至100mL；
D、用1～2mL玻璃注射器抽取0.5～1.5mL藥物溶液，(本發(fā)明以平均體重為300g的中華鱉為例，按20mg/kg中華鱉體重的給藥劑量計(jì)算抽取的體積)；
E、將藥物溶液緩慢注射到生物載體A的體內(nèi)制成了一種生物藥餌。
所述的生物載體A是蚯蚓、小蝦、黃粉蟲、蠅蛆、蚌類、螺類、大型水潘中的任意一種生物載體；
所述的藥物B是鹽酸強(qiáng)力霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、硫酸新霉素、鹽酸氯苯胍、甲苯咪唑、阿苯噠唑、替米考星中的任意一種溶劑；
所述的溶劑C是乙腈、甲醇、N,N–二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、蒸餾水中的任意一種溶劑；
所述的誘食劑D是L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸(L-氨基琥珀酸)、甘氨酸(氨基乙酸)、L-組氨酸、L-異亮氨酸、二甲基-β-丙酸噻亭、硫代甜菜堿、魚肝油、丙酸、核苷酸、酰胺、三甲基胺內(nèi)脂中的任意一種誘食劑；
其中：稱取的藥量單位為g；給藥劑量的單位為mg/kg中華鱉體重；中華鱉平均體重的單位為kg；配制藥液的定容體積的數(shù)值。
一種生物藥餌在中華鱉藥理學(xué)研究中的應(yīng)用，其步驟是：
a、將中華鱉翻過來，腹甲朝天，背甲朝下，中華鱉會將脖子會從甲殼中伸出；
b、用鑷子夾起生物藥餌放到中華鱉的口邊，中華鱉會主動(dòng)咬食生物藥餌；
c、按照中華鱉的用藥劑量給中華鱉喂食了生物藥餌后，將中華鱉翻過來；
d、用藥后，按照設(shè)計(jì)的時(shí)間點(diǎn)0.5h～2h、3h～9h、10h～24h、36h～72h、96h～144h、168h～196h等進(jìn)行采樣，將中華鱉翻過來，腹甲朝天，背甲朝下，將中華鱉的頭部抵在豎直的平板上，避免中華鱉伸頭出來咬傷操作者，一手按住中華鱉的腹部，一手將中華鱉的一條腿拉出，用注射器吸取中華鱉的血液，3500r/min，離心4－6min，取上層血漿，置-20℃冰箱中冷凍保存?zhèn)溆茫?/p>
e、取中華鱉的肌肉、裙邊、肝臟、腎臟等組織，用勻質(zhì)器將組織勻漿，置-20℃冰箱中冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>
本發(fā)明從中華鱉的食性考慮以喜食的生物餌料做藥物載體，通過誘食的方式讓中華鱉主動(dòng)采食生物藥餌，此方式更接近中華鱉胃腸內(nèi)食物和藥物共存的實(shí)際情況，因此，獲得的中華鱉的藥理學(xué)數(shù)據(jù)更接近于藥物在中華鱉體內(nèi)真實(shí)的吸收、分布和排泄規(guī)律，獲得的具體藥理學(xué)參數(shù)如吸收速率(Ka)、達(dá)峰時(shí)間(Tpeak)、峰濃度(Cmax)、消除半衰期(T1/2)等。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果：
(1)該發(fā)明針對難以對中華鱉進(jìn)行口灌的技術(shù)難點(diǎn)，提供了一種藥物生物載體誘導(dǎo)中華鱉攝食的方法；
(2)本發(fā)明從中華鱉的食性考慮以喜食的生物餌料做藥物載體較以往采用藥物溶液或在飼料中添加藥物的給藥方式更接近藥物在中華鱉體內(nèi)的實(shí)際情況；
(3)本發(fā)明在藥物溶液中添加誘食劑或避味劑避免了藥物本身的異味對中華鱉攝食的影響。
(4)本發(fā)明采用生物藥餌對藥物在中華鱉體內(nèi)起到了緩釋的作用，使藥物的吸收速率變小、達(dá)峰時(shí)間變長、峰濃度變小、消除半衰期變長，例如生物藥餌中藥物的吸收速率(Ka)為藥物溶液的1/5～1/3倍，達(dá)峰時(shí)間(Tpeak)是1～8倍，峰濃度(Cmax)是3/5～1倍，消除半衰期(T1/2)為1～3倍。
(5)中華鱉生物藥餌的給藥的操作時(shí)間短約是強(qiáng)行口灌藥物溶液操作時(shí)間的1/5。
(6)生物藥餌的制備時(shí)間短約是制備飼料藥餌時(shí)間的1/10。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1：
一種中華鱉生物藥餌的制備方法，其步驟是：
A、取10cm長活體生物載體A用作藥物的載體；
B、按照公式(1)計(jì)算出稱取的藥物量，如中華鱉強(qiáng)力霉素的給藥劑量為20mg/kg體重時(shí)，應(yīng)稱取0.6g鹽酸強(qiáng)力霉素，并用蒸餾水對鹽酸強(qiáng)力霉素進(jìn)行溶解；
C、向藥物溶液中加入0.1g誘食劑D二甲基-β-丙酸噻亭，用蒸餾水稀釋并定容至100mL，配制成含鹽酸強(qiáng)力霉素為6mg/mL，誘食劑D的濃度二甲基-β-丙酸噻亭為1mg/mL的藥物溶液；
D、用玻璃注射器抽取1mL藥物溶液，(本發(fā)明以平均體重為300g的中華鱉為例，按20mg/kg中華鱉體重的給藥劑量計(jì)算抽取的體積)；
E、將藥物溶液緩慢注射到生物載體A的蚯蚓體內(nèi)制成了一種生物藥餌。
采用該方法制備的生物藥餌充分考慮了中華鱉的食性，避免了藥物的異味，誘導(dǎo)中華鱉主動(dòng)攝食，克服了對中華鱉口灌藥物的技術(shù)難點(diǎn)，使藥物在中華鱉體內(nèi)的藥理學(xué)過程更接近實(shí)際。本發(fā)明采用生物藥餌對藥物在中華鱉體內(nèi)起到了緩釋的作用，使藥物的吸收速率(Ka)變小、達(dá)峰時(shí)間(Tpeak)變長、峰濃度(Cmax)變小、消除半衰期(T1/2)變長，例如生物藥餌中藥物的吸收速率(Ka)為藥物溶液的1/5～1/3倍，達(dá)峰時(shí)間(Tpeak)是1～8倍，峰濃度(Cmax)是3/5～1倍，消除半衰期(T1/2)為1～3倍；中華鱉生物藥餌的給藥的操作時(shí)間短約是強(qiáng)行口灌藥物溶液操作時(shí)間的1/5；生物藥餌的制備時(shí)間短約是制備飼料藥餌時(shí)間的1/10。
所述的生物載體A是蚯蚓、小蝦、黃粉蟲、蠅蛆、蚌類、螺類、大型水潘中的任意一種生物載體；
所述的藥物B是鹽酸強(qiáng)力霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、硫酸新霉素、鹽酸氯苯胍、甲苯咪唑、阿苯噠唑、替米考星中的任意一種溶劑；
所述的溶劑C是乙腈、甲醇、N,N–二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、蒸餾水中的任意一種溶劑；
所述的誘食劑D是L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸(L-氨基琥珀酸)、甘氨酸(氨基乙酸)、L-組氨酸、L-異亮氨酸、二甲基-β-丙酸噻亭、硫代甜菜堿、魚肝油、丙酸、核苷酸、酰胺、三甲基胺內(nèi)脂中的任意一種誘食劑；
其中：稱取的藥量單位為g；給藥劑量的單位為mg/kg；中華鱉平均體重的單位為kg；配制藥液的定容體積的數(shù)值。例如藥物的給藥劑量為20mg/kg，中華鱉的平均體重為0.3kg，藥液的體積的數(shù)值為100，按照公式(1)計(jì)算的稱取的藥量應(yīng)為0.6g。
實(shí)施例2：
一種生物藥餌在中華鱉藥理學(xué)研究中的應(yīng)用，其步驟是：
a、將中華鱉翻過來，腹甲朝天，背甲朝下，中華鱉會將脖子會從甲殼中伸出，這時(shí)我們用鑷子夾住的含藥物的蚯蚓放到中華鱉嘴邊，中華鱉會很快咬住含藥餌的蚯蚓，松開鑷子讓中華鱉將藥餌吞下；
b、給中華鱉喂食生物藥餌后，將中華鱉翻過來，腹甲朝下，背甲朝上；
c、中華鱉被誘食生物藥餌后于0.5h或1或2h、3h或4或6或9h、10h或14或18或20或24h、36h或45或64或68或72h、96h或115或133或138或144h、168h或172或180或196h分別采集其血液、肌肉、裙邊、肝臟、腎臟等組織；
d、中華鱉血漿和組織的采集方法：將中華鱉翻過來，腹甲朝天，背甲朝下，將中華鱉的頭部抵在豎直的平板上，避免中華鱉伸頭出來咬傷操作者，一手按住中華鱉的腹部，一手將中華鱉的一條腿拉出，用注射器吸取中華鱉的血液，3500r/min，離心4或5或6min，取上層血漿，置-20℃冰箱中冷凍保存?zhèn)溆茫?/p>
e、取中華鱉的肌肉、裙邊、肝臟、腎臟等組織，用勻質(zhì)器將組織勻漿，置-20℃冰箱中冷凍保存?zhèn)溆茫?/p>
本發(fā)明從中華鱉的食性考慮以喜食的生物餌料做藥物載體較以往采用藥物溶液或在飼料中添加藥物的給藥方式更接近藥物在中華鱉體內(nèi)的實(shí)際情況；生物藥餌對藥物在中華鱉體內(nèi)起到了緩釋的作用，使藥物的吸收速率(Ka)變小、達(dá)峰時(shí)間(Tpeak)變長、峰濃度(Cmax)變小、消除半衰期(T1/2)變長，例如生物藥餌中藥物的吸收速率(Ka)為藥物溶液的1/5～1/3倍，達(dá)峰時(shí)間(Tpeak)是1～8倍，峰濃度(Cmax)是6/10～1倍，消除半衰期(T1/2)為1～3倍。
實(shí)施例3：
一種中華鱉生物藥餌的制備方法，其步驟是：
A、取10cm長活體生物載體A用作藥物的載體；
B、按照公式(1)計(jì)算出稱取的藥物量，如中華甲砜霉素的給藥劑量為17.5mg/kg體重時(shí)，應(yīng)稱取0.525g甲砜霉素，用溶劑C溶解；
C、向藥物溶液中加入0.1g誘食劑D二甲基-β-丙酸噻亭，用蒸餾水稀釋并定容至100mL，配制成含甲砜霉素為5.25mg/mL的藥物溶液，誘食劑D的濃度二甲基-β-丙酸噻亭為1mg/mL的溶液；
D、玻璃注射器抽取1mL藥物溶液，(本發(fā)明以平均體重為300g的中華鱉為例，按17.5mg/kg中華鱉體重的給藥劑量計(jì)算抽取的體積)；
E、將藥物溶液緩慢注射到生物載體A蚯蚓體內(nèi)制成生物藥餌；
采用該方法制備的生物藥餌充分考慮了中華鱉的食性，避免了藥物的異味，誘導(dǎo)中華鱉主動(dòng)攝食，克服了對中華鱉口灌藥物的技術(shù)難點(diǎn)，使藥物在中華鱉體內(nèi)的藥理學(xué)過程更接近實(shí)際。
所述的生物載體A是蚯蚓、小蝦、黃粉蟲、蠅蛆、蚌類、螺類、大型水潘中的任意一種生物載體；
所述的藥物B是鹽酸強(qiáng)力霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、硫酸新霉素、鹽酸氯苯胍、甲苯咪唑、阿苯噠唑、替米考星中的任意一種溶劑；
所述的溶劑C是乙腈、甲醇、N,N–二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、蒸餾水中的任意一種溶劑；
所述的誘食劑D是L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸(L-氨基琥珀酸)、甘氨酸(氨基乙酸)、L-組氨酸、L-異亮氨酸、二甲基-β-丙酸噻亭、硫代甜菜堿、魚肝油、丙酸、核苷酸、酰胺、三甲基胺內(nèi)脂中的任意一種誘食劑；
其中：稱取的藥量單位為g；給藥劑量的單位為mg/kg中華鱉體重；中華鱉平均體重的單位為kg；配制藥液的定容體積的數(shù)值。例如藥物的給藥劑量為17.5mg/kg，中華鱉的平均體重為0.3kg，藥液的體積的數(shù)值為100，按照公式(1)計(jì)算的稱取的藥量應(yīng)為0.525g。
實(shí)施例4：
一種生物藥餌在中華鱉藥理學(xué)研究中的應(yīng)用，其步驟是：
a、將中華鱉翻過來，腹甲朝天，背甲朝下，中華鱉會將脖子會從甲殼中伸出，這時(shí)用鑷子夾住的含藥物的蚯蚓放到中華鱉嘴邊，中華鱉會很快咬住含藥餌的蚯蚓，松開鑷子讓中華鱉將含藥餌的蚯蚓吞下；
b、給中華鱉喂食生物藥餌后，將中華鱉翻過來；
c、中華鱉被誘食生物藥餌后于0.5h或1或3h、3h或4.5或6.5或9h、10h或15或19或22或24h、36h或46或65或69或72h、96h或116或135或140或144h、168h或171或185或196h分別采集其血液、肌肉、裙邊、肝臟、腎臟等組織；
d、中華鱉血漿和組織的采集方法：將中華鱉翻過來，腹甲朝天，背甲朝下，將中華鱉的頭部抵在豎直的平板上，避免中華鱉伸頭出來咬傷操作者，一手按住中華鱉的腹部，一手將中華鱉的一條腿拉出，用注射器吸取中華鱉的血液，3500r/min，離心4或5或6min，取上層血漿，置-20℃冰箱中冷凍保存?zhèn)溆茫?/p>
e、取中華鱉的肌肉、裙邊、肝臟、腎臟等組織，用勻質(zhì)器將組織勻漿，置-20℃冰箱中冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>
本發(fā)明從中華鱉的食性考慮以喜食的生物餌料做藥物載體較以往采用藥物溶液或在飼料中添加藥物的給藥方式更接近藥物在中華鱉體內(nèi)的實(shí)際情況；生物藥餌對藥物在中華鱉體內(nèi)起到了緩釋的作用，使藥物的吸收速率(Ka)變小、達(dá)峰時(shí)間(Tpeak)變長、峰濃度(Cmax)變小、消除半衰期(T1/2)變長，例如生物藥餌中藥物的吸收速率(Ka)為藥物溶液的1/5～1/3倍，達(dá)峰時(shí)間(Tpeak)是1～8倍，峰濃度(Cmax)是3/5～1倍，消除半衰期(T1/2)為1～3倍。