用免疫刺激劑治療癌癥的制作方法
相關(guān)申請的交叉引用
本申請要求于2014年10月21日提交的美國臨時專利申請第62/066,862號、于2015年9月8日提交的美國臨時專利申請第62/215,433號的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益，這些申請各自出于所有目的以引用的方式并入本文中。
發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及用于治療癌癥(諸如黑素瘤)或其轉(zhuǎn)移的組合物和方法。
發(fā)明背景
已研發(fā)用于治療各種癌癥的許多藥物或候選藥物，包括一些小分子化合物。然而，當前對許多癌癥的治療在特定癌癥子集的患者中并不非常有效，或者在此類患者中或一般而言毒性過大。
皮膚癌在美國為最常見的癌癥形式。在2007年，美國癌癥學會估計將因黑素瘤產(chǎn)生約8,110例死亡，且預期在此國家中要再診斷出59,940例黑素瘤。
黑素瘤為黑素細胞的惡性腫瘤，其主要發(fā)現(xiàn)于皮膚中，但還發(fā)現(xiàn)于腸和眼睛(葡萄膜黑素瘤)中。其為較罕見皮膚癌類型之一，但引起大部分皮膚癌相關(guān)死亡。
當前可獲得的治療包括手術(shù)移除腫瘤；輔助治療；化學和免疫治療或放射治療。尤其危險者是一級黑素瘤腫瘤的轉(zhuǎn)移。然而，本領(lǐng)域中對改進的黑素瘤治療仍存在需要。
發(fā)明概要
本發(fā)明提供治療受試者的癌癥或癌癥組合的組合物和方法。在一些實施方案中，受試者為哺乳動物。在一些實施方案中，哺乳動物為人。
在一些實施方案中，所述方法包括向受試者施用包含治療有效量的第一免疫刺激劑和第二免疫刺激劑的組合物。在一些實施方案中，所述第一免疫刺激劑為α胸腺素肽。在一些實施方案中，第二免疫刺激劑為不為il-2、干擾素-α或irx-2的化合物。在一些實施方案中，第二免疫刺激劑包含特異性免疫刺激劑。在一些實施方案中，第二免疫刺激劑包含非特異性免疫刺激劑。
在一些實施方案中，第二免疫刺激劑為有效治療敗血病的免疫刺激劑。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(gm-csf)、程序化細胞死亡-1(pd-1)抑制劑和/或白介素-7(il-7)。
在一些實施方案中，組合物還包含另一抗癌劑。在一些實施方案中，另一抗癌劑為化學治療劑。
在一些實施方案中，第二免疫刺激劑是以每天約0.01-1000mg的劑量向所述受試者施用。
在一些實施方案中，第二免疫刺激劑包含gm-csf，且gm-csf的劑量為約10至500mcg/m2，諸如約125至約25010至500mcg/m2。
在一些實施方案中，第二免疫刺激劑包含pd-1抑制劑。在一些實施方案中，pd-1抑制劑為抑制pd-1的試劑，諸如針對pd-1的抗體。在一些實施方案中，pd-1抑制劑為抑制pd-1的配體的試劑，諸如針對pd-1的配體的抗體。在一些實施方案中，pd-1抑制劑的劑量為約0.1至10mg/kg，諸如約1-5mg/kg，或約2-3mg/kg。在一些實施方案中，pd-1抑制劑為抗pd-l1抗體，且劑量為約15-20mg/kg。在一些實施方案中，抗pd-l1抗體是以每兩周、三周或四周1200mg固定劑量使用。
在一些實施方案中，第二免疫刺激劑包含不為il-2的白介素。在一些實施方案中，白介素為il-7。在一些實施方案中，il-7的劑量為約0.1至100mcg/kg，諸如約1至50mcg/kg，或約3至30mcg/kg。
在一些實施方案中，α胸腺素肽是在至少一部分所述治療期間以每天約0.1至100mg(諸如每天約0.5-50mg或每天約0.1-10mg)范圍內(nèi)的劑量向受試者施用。
在一些實施方案中，α胸腺素肽為胸腺素α1(ta1)。
在一些實施方案中，所述方法包括每天施用ta1持續(xù)約1-10天的時間段，隨后約1-5天不施用ta1。在一些實施方案中，ta1是每天施用持續(xù)約3-5天，隨后約2-4天不施用ta1。在一些實施方案中，ta1是每天施用持續(xù)約4天，隨后約3天不施用ta1。
在一些實施方案中，所述方法還包括施用激酶抑制劑。在一些實施方案中，激酶抑制劑包含索拉非尼(sorafenib)。在一些實施方案中，激酶抑制劑是以每天約10-200mg/kg范圍內(nèi)的劑量向所述患者施用。
在一些實施方案中，所述方法還包括施用抗腫瘤熱休克凋亡活化劑(hsaa)。在一些實施方案中，hsaa包含sta-4783(伊利司莫(elesclomol))。在一些實施方案中，hsaa是以每天約0.01-100mg/kg范圍內(nèi)的劑量向所述患者施用。
在一些實施方案中，所述方法還包括施用細胞毒性t淋巴細胞相關(guān)抗原4(ctla4)的抑制劑，諸如針對ctla4的抗體。在一些實施方案中，ctla4抗體包括9h10、mdc010、1f4、bni3、q01、a01、m08、1b8、wkh203、ab9984、ab13486、伊匹單抗(ipilimumab)、替西木單抗(ticilimumab)或其組合。在一些實施方案中，ctla4抗體是以每天約0.001-50mg/kg范圍內(nèi)的劑量向所述患者施用。
在一些實施方案中，所述方法還包括施用烷化抗腫瘤劑(alkaa)。在一些實施方案中，烷化抗腫瘤劑(alkaa)包含達卡巴嗪(dacarbazine)(dtic)。在一些實施方案中，烷化抗腫瘤劑(alkaa)是以每天約700-1300mg/kg范圍內(nèi)的劑量向所述患者施用。
在一些實施方案中，所述方法還包括向受試者施用化學治療劑。在一些實施方案中，化學治療劑為達卡巴嗪(dtic)或順鉑。
在一些實施方案中，癌癥為黑素瘤。
本發(fā)明還提供治療受試者的癌癥或其轉(zhuǎn)移的方法，其包括施用包含治療有效量的免疫刺激劑的組合物，其中免疫刺激劑有效治療敗血病。在一些實施方案中，癌癥為黑素瘤。在一些實施方案中，受試者為哺乳動物。在一些實施方案中，哺乳動物為人。在一些實施方案中，有效治療敗血病的免疫刺激劑包含粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(gm-csf)、程序化細胞死亡-1(pd-1)抑制劑和/或白介素-7(il-7)或其任何組合。
在一些實施方案中，組合物還包含另一抗癌劑。在一些實施方案中，另一抗癌劑為α胸腺素肽。在一些實施方案中，α胸腺素肽為胸腺素α1(ta1)。
在一些實施方案中，所述方法還包括向受試者施用化學治療劑。在一些實施方案中，化學治療劑為達卡巴嗪(dtic)或順鉑。
本發(fā)明還提供用于確定人類受試者對癌癥治療的反應的方法。在一些實施方案中，癌癥為黑素瘤。在一些實施方案中，所述方法包括確定在來自人類受試者的生物樣品中一種或多種生物標記物的活性水平。在一些實施方案中，生物標記物選自由以下組成的組：il-1β、il-4、il-6和il-10。在一些實施方案中，癌癥治療是根據(jù)本文所描述的方法來進行。
在一些實施方案中，高于正常il-1β活性水平指示人類受試者對治療有反應。
在一些實施方案中，低于正常il-4活性水平指示人類受試者對治療有反應。
在一些實施方案中，高于正常il-6活性水平指示人類受試者對治療有反應。
在一些實施方案中，高于正常il-10活性水平指示人類受試者對治療有反應。
本發(fā)明還提供用于確定用于治療人類受試者的癌癥的劑量或方案的方法。在一些實施方案中，癌癥為黑素瘤。在一些實施方案中，所述方法包括確定在來自正在治療的人類受試者的生物樣品中一種或多種生物標記物的活性水平。在一些實施方案中，生物標記物選自由以下組成的組：il-1β、il-4、il-6和il-10。
在一些實施方案中，在治療之后降低的il-1β活性水平指示治療有效。在一些實施方案中，在治療之后不變或增加的il-1β活性水平指示治療無效?？梢虼诵薷闹委煹膭┝炕蚍桨?。
在一些實施方案中，在治療之后增加的il-4活性水平指示人類受試者對治療有反應。在一些實施方案中，在治療之后不變或降低的il-4活性水平指示治療無效?？梢虼诵薷闹委煹膭┝炕蚍桨?。
在一些實施方案中，在治療之后降低的il-6活性水平指示治療有效。在一些實施方案中，在治療之后不變或增加的il-6活性水平指示治療無效?？梢虼诵薷闹委煹膭┝炕蚍桨?。
在一些實施方案中，在治療之后降低的il-10活性水平指示治療有效。在一些實施方案中，在治療之后不變或增加的il-10活性水平指示治療無效。可因此修改治療的劑量或方案。
附圖簡述
圖1a繪示了順鉑在b16f10鼠黑素瘤模型的治療中如由腫瘤接種后的腫瘤體積所指示的抗腫瘤作用。
圖1b繪示了在腫瘤接種后在b16f10鼠黑素瘤模型中用媒介物或順鉑處理的小鼠的體重變化。
圖2繪示了胸腺素的抗腫瘤活性。將具有b16f10衍生腫瘤的動物用zadaxintm(胸腺法新(thymalfasin))處理。在所有所測試劑量下，動物展現(xiàn)與媒介物處理組相比減緩的腫瘤生長。
圖3繪示了在若干不同劑量下胸腺素的抗腫瘤活性。在所有所測試劑量下，胸腺素提供與媒介物處理組相比統(tǒng)計學上顯著減緩的腫瘤生長。
圖4a繪示了對在皮下b16f10鼠黑素瘤模型中在用胸腺素處理的c57bl/6小鼠中的il-1β的評估。將zadaxintm(胸腺法新)以0.02、0.06、0.2、0.3、2或6mg/kg10μl/g一天兩次向小鼠皮下施用持續(xù)6天。在開始給藥之后第4天和第7天，與媒介物處理組相比，在zadaxintm(胸腺法新)處理組中il-1β水平較低。
圖4b繪示了對在皮下b16f10鼠黑素瘤模型中在用胸腺素處理的c57bl/6小鼠中的il-4的評估。將zadaxintm(胸腺法新)以0.02、0.06、0.2、0.3、2或6mg/kg10μl/g一天兩次向小鼠皮下施用持續(xù)6天。在開始給藥之后第4天和第7天，與媒介物處理組相比，在zadaxintm(胸腺法新)處理組中il-4水平較高。
圖4c繪示了對在皮下b16f10鼠黑素瘤模型中在用胸腺素處理的c57bl/6小鼠中的il-6的評估。將zadaxintm(胸腺法新)以0.02、0.06、0.2、0.3、2或6mg/kg10μl/g一天兩次向小鼠皮下施用持續(xù)6天。在開始給藥之后第4天和第7天，與媒介物處理組相比，在zadaxintm(胸腺法新)處理組中il-6水平較低。
圖4d繪示了對在皮下b16f10鼠黑素瘤模型中在用胸腺素處理的c57bl/6小鼠中的il-10的評估。將zadaxintm(胸腺法新)以0.02、0.06、0.2、0.3、2或6mg/kg10μl/g一天兩次向小鼠皮下施用持續(xù)6天。在開始給藥之后第4天和第7天，與媒介物處理組相比，在zadaxintm(胸腺法新)處理組中il-10水平較低。
圖4e繪示了對在系統(tǒng)性b16f10鼠黑素瘤模型中在使用不同治療的c57bl/6小鼠中的ifn-γ的評估。
圖4f繪示了對在系統(tǒng)性b16f10鼠黑素瘤模型中在使用不同治療的c57bl/6小鼠中的il-1β的評估。
圖4g繪示了對在系統(tǒng)性b16f10鼠黑素瘤模型中在使用不同治療的c57bl/6小鼠中的il-4的評估。
圖4h繪示了對在系統(tǒng)性b16f10鼠黑素瘤模型中在使用不同治療的c57bl/6小鼠中的il-5的評估。
圖4i繪示了對在系統(tǒng)性b16f10鼠黑素瘤模型中在使用不同治療的c57bl/6小鼠中的il-6的評估。
圖4j繪示了對在系統(tǒng)性b16f10鼠黑素瘤模型中在使用不同治療的c57bl/6小鼠中的il-10的評估。
圖4k繪示了對在系統(tǒng)性b16f10鼠黑素瘤模型中在使用不同治療的c57bl/6小鼠中的il-12的評估。
圖4l繪示了對在系統(tǒng)性b16f10鼠黑素瘤模型中在使用不同治療的c57bl/6小鼠中的tnf-α的評估。
圖5繪示了b16f10小鼠肺轉(zhuǎn)移性黑素瘤模型和實驗設(shè)計。在第0天將b16f10黑素瘤細胞接種至小鼠中。
圖6a繪示了在第16天，在用媒介物、單獨胸腺素、單獨抗pd-1、胸腺素加上抗pd-1或環(huán)磷酰胺處理的小鼠中肺轉(zhuǎn)移的組分布。
圖6b繪示了在用媒介物、單獨胸腺素、單獨抗pd-1、胸腺素加上抗pd-1或環(huán)磷酰胺處理的b16met小鼠中相對于第1天的組平均體重變化百分比。
圖7a繪示了在第15天，在以不同劑量用處理媒介物、單獨胸腺素、單獨抗pd-1、胸腺素加上抗pd-1或環(huán)磷酰胺的小鼠中肺轉(zhuǎn)移的組分布。
圖7b繪示了在b16f10小鼠肺轉(zhuǎn)移性黑素瘤模型中，在以不同劑量用媒介物、單獨胸腺素、單獨抗pd-1、胸腺素加上抗pd-1或環(huán)磷酰胺處理之后的il-1α。
圖7c繪示了在用媒介物、單獨胸腺素、單獨抗pd-1、胸腺素加上抗pd-1或環(huán)磷酰胺處理的b16f10小鼠中相對于第1天的組平均體重變化百分比。
圖8繪示了在腫瘤接種后第13天，在用媒介物、單獨胸腺素、單獨抗pd-1、胸腺素加上抗pd-1或環(huán)磷酰胺處理的不同組中的肺轉(zhuǎn)移病灶。
發(fā)明詳述
本發(fā)明是有關(guān)治療和/或預防受試者的癌癥的方法。在一些實施方案中，癌癥為黑素瘤或其轉(zhuǎn)移。在一些實施方案中，所述方法包括向受試者施用包含治療至少一種免疫刺激劑的組合物。
在一些實施方案中，本發(fā)明的方法可在治療早期癌癥(包括早期腫瘤形成，其可能為小的、緩慢生長的、局部化的且/或非侵襲性的，其例如以治愈疾病或引起癌癥消退為目的)時以及在治療中期癌癥和在治療晚期癌癥(包括晚期和/或轉(zhuǎn)移性和/或侵襲性腫瘤形成，例如用以減緩疾病的進展、減少轉(zhuǎn)移或增加患者的存活率)時施用。類似地，所述組合可用于治療低級別癌癥、中等級別癌癥和或高級別癌癥。
在一些實施方案中，本發(fā)明的方法還可用于治療惰性癌癥、復發(fā)性癌癥(包括局部復發(fā)性、遠距離復發(fā)性和/或難治性癌癥，即尚未對治療有反應的癌癥)、轉(zhuǎn)移性癌癥、局部晚期癌癥和侵襲性癌癥。因此，“晚期”癌癥包括局部晚期癌癥和轉(zhuǎn)移性癌癥，且是指患者的明顯疾病，其中此類明顯疾病不便于通過諸如手術(shù)或放射治療的局部治療形態(tài)來治愈。術(shù)語“轉(zhuǎn)移性癌癥”是指已從身體的一部分擴散至另一部分的癌癥。晚期癌癥還可為不可切除的，即其已擴散至周圍組織且不能手術(shù)移除。
在一些實施方案中，本發(fā)明的方法還可用于治療抗藥性癌癥，包括多藥抗性腫瘤。如本領(lǐng)域中已知，癌細胞對化學治療的抗性為癌癥管理的中心問題之一。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將了解這些類別中有許多可重迭，例如侵襲性癌癥典型地還為轉(zhuǎn)移性癌癥。如本文所用，“侵襲性癌癥”是指迅速生長的癌癥。本領(lǐng)域技術(shù)人員將了解，對于一些癌癥，諸如乳癌或前列腺癌，術(shù)語“侵襲性癌癥”將指在給定癌癥的復發(fā)時間譜的約前三分之二以內(nèi)已復發(fā)的晚期癌癥，而對于其它類型的癌癥，幾乎所有的情況呈現(xiàn)迅速生長的癌癥，其被視為侵襲性的。因此，該術(shù)語可覆蓋某一癌癥類型的子部分或其可涵蓋所有其它癌癥類型。
在一些實施方案中，要通過本發(fā)明的方法治療的癌癥包括但不限于艾滋病相關(guān)癌癥、腎上腺皮質(zhì)癌、肛門癌、膀胱癌、腸癌、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、乳癌、類癌、宮頸癌、軟骨肉瘤、絨毛膜癌、結(jié)腸直腸癌、內(nèi)分泌癌、子宮內(nèi)膜癌、尤因氏肉瘤(ewing′ssarcoma)、眼癌、胃癌、胃腸癌、泌尿生殖器癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、婦科癌癥、頭頸癌、肝細胞癌、霍奇金氏病(hodgkin′sdisease)、下咽癌、胰島細胞癌、卡波西氏肉瘤(kaposi′ssarcoma)、腎癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌(例如非小細胞肺癌)、淋巴瘤、黑素瘤、基質(zhì)細胞癌、間皮瘤、骨髓瘤、鼻咽癌、神經(jīng)母細胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、食管癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、垂體癌、腎細胞癌、前列腺癌、視網(wǎng)膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、皮膚癌、鱗狀細胞癌、胃癌、睪丸癌、胸腺癌、甲狀腺癌、移行細胞癌、滋養(yǎng)層癌、子宮癌、陰道癌、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥(waldenstrom′smacroglobulinemia)、維爾姆斯氏癌(wilm′scancer)和白血病。
根據(jù)本發(fā)明的方法，如本文所用的術(shù)語“受試者”和其變化形式包括具有、懷疑具有或處于具有疾病或病狀的危險之中的任何受試者。適合的受試者(或患者)包括哺乳動物，諸如實驗室動物(例如小鼠、大鼠、兔、豚鼠)、農(nóng)場動物和家庭動物或?qū)櫸?例如貓、狗)。包括非人類靈長類動物，且優(yōu)選為人類患者?！疤幱谖ｋU之中”的受試者在本文所描述的診斷或治療方法之前可能或可能不具有可檢測疾病，且可能或可能不具有經(jīng)展示的可檢測疾病?！疤幱谖ｋU之中”指示受試者具有一種或多種所謂的危險因子，其為本文所描述的與本文所描述的病狀的發(fā)展有關(guān)的可測量參數(shù)。具有這些危險因子中的一者或多者的受試者與不具有這些危險因子的受試者相比具有較高的發(fā)展本文所描述的病狀的概率。在一些實施方案中，受試者為哺乳動物。在一些實施方案中，受試者為人。在一些實施方案中，受試者為診斷為具有黑素瘤的人。在一些實施方案中，受試者為懷疑具有黑素瘤的人。在一些實施方案中，受試者為具有高發(fā)展黑素瘤風險的人。在一些實施方案中，受試者為具有轉(zhuǎn)移的黑素瘤患者。在一些實施方案中，受試者為具有高轉(zhuǎn)移風險的黑素瘤患者。
在一些實施方案中，本發(fā)明的方法用于治療黑素瘤。在一些實施方案中，黑素瘤為以下中的一者：惡性小痣、惡性小痣黑素瘤、表面擴散性黑素瘤、肢端雀斑樣黑素瘤、粘膜黑素瘤、結(jié)節(jié)性黑素瘤、息肉狀黑素瘤、促結(jié)締組織增生性黑素瘤、無黑色素性黑素瘤、軟組織黑素瘤、具有小痣樣細胞的黑素瘤、具有斯皮茨痣(spitznevus)特征的黑素瘤、葡萄膜黑素瘤或其組合。
在一些實施方案中，人類患者具有階段0、i、ii、iii或iv或其相應小類的黑素瘤。在某些實施方案中，所治療的黑素瘤為惡性轉(zhuǎn)移性黑素瘤。在某些實施方案中，正在治療的黑素瘤為階段i、階段ii、階段iii或階段iv黑素瘤。在其它實施方案中，正在治療的黑素瘤為階段m1a、m1b或m1c黑素瘤。對于詳細階段劃分信息，參見balch等人(2001，“finalversionoftheamericanjointcommitteeoncancerstagingsystemforcutaneousmelanoma”.jclinoncol19(16)：3635-48.pmid11504745)，其以引用的方式整體并入本文中。
在一些實施方案中，人類患者具有一種或多種黑素瘤早期跡象，諸如現(xiàn)有痣的形狀或顏色的改變，包括但不限于不對稱、邊界不規(guī)則、顏色多樣化、直徑大于約6mm、隨時間推移發(fā)展、發(fā)癢、潰爛或流血。在一些實施方案中，人類患者具有結(jié)節(jié)性黑素瘤，且早期跡象包括但不限于皮膚上任何地方出現(xiàn)新的腫塊、升高超過皮膚表面、觸摸堅硬且連續(xù)生長。
轉(zhuǎn)移或轉(zhuǎn)移性疾病為癌癥從一個器官擴散至另一器官。一些癌細胞獲得穿透淋巴和/或血管壁的能力，此后其能夠在血流中循環(huán)至體內(nèi)的其它位點和組織。在腫瘤細胞在另一位點停下來之后，其再穿透血管或壁且繼續(xù)增殖，最終形成另一臨床上可檢測腫瘤。
在一些實施方案中，黑素瘤為惡性轉(zhuǎn)移性黑素瘤。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)移性黑素瘤在患者中引起非特異性伴腫瘤癥狀，包括但不限于食欲不振、惡心、嘔吐和疲勞。在一些實施方案中，患者具有腦轉(zhuǎn)移。在一些實施方案中，黑素瘤擴散至肝臟、骨骼、腹部和/或遠處淋巴結(jié)。
在一些實施方案中，所要治療的受試者具有高發(fā)展黑素瘤風險。在一些實施方案中，人類受試者為高加索人。在一些實施方案中，人類患者生活在陽光充足的環(huán)境中且充分曝露于uv光。在一些實施方案中，所要治療的受試者具有一種或多種遺傳突變，其增加受試者對黑素瘤的敏感性。在一些實施方案中，遺傳突變位于braf、mc1r、cdkn2a、cdk4、核苷酸切除修復(ner)酶(也稱為著色性干皮病，xp)、多腫瘤抑制劑1(mts1)和/或mdm2中。
用于診斷黑素瘤的方法為熟知的，諸如wurmandsoyer(2010年10月，“scanningformelanoma”.australianprescriber(33)：150-5)中所描述的那些，該文獻以引用的方式整體并入本文中。在一些實施方案中，診斷是通過有效檢驗來進行。在一些實施方案中，診斷是通過x射線、ct掃描、mri、pet和pet/ct、超聲波、ldh測試和/或光聲檢測來進行。
已診斷黑素瘤之后，可使用其它測試來確定癌細胞是否已擴散至皮膚內(nèi)或身體的其它部分。測試包括但不限于體檢和病史、淋巴結(jié)顯像和前哨淋巴結(jié)活檢、ct掃描、pet掃描、mri和血液化學研究。
如本文所用的術(shù)語“治療(treating/treatment)”是指用于獲得有益或所需結(jié)果(包括臨床結(jié)果)的方法，且甚至可包括正在治療的疾病或病狀的一種或多種可測量標記的極小變化或改善。治療通常有效減輕病狀、疾病、病癥、損傷或損害的至少一種癥狀。示例性臨床改善標記對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將顯而易知。實例包括但不限于以下中的一者或多者：降低由疾病引起的一種或多種癥狀的嚴重性和/或頻率、減低疾病的程度、穩(wěn)定疾病(例如防止或延遲疾病惡化)、延遲或減緩疾病進展、改善疾病狀態(tài)、降低為治療疾病所需的一種或多種其它藥物的劑量和/或提高生活質(zhì)量等。
“預防”、“預防性治療”或“預防性處理”是指預防一種或多種癥狀和/或其潛在病因或降低其發(fā)生率或嚴重性，例如預防易于發(fā)展疾病或病狀(例如由于遺傳易感性、環(huán)境因素、易感疾病或病癥或其類似原因而處于較高的風險之中)的受試者的疾病或病狀。
在一些實施方案中，所述方法包括向受試者施用治療有效量和/或預防有效量的包含至少一種免疫刺激劑的組合物。如本文所用的術(shù)語“治療有效量”是指為治療病狀或減輕或預防損傷或損害而任選不引起顯著負面或不良副作用所需的一種或多種試劑的水平或量?！邦A防有效量”是指試劑當向敏感的和/或可發(fā)展疾病或病狀的受試者施用時足以預防將來疾病或病狀或減輕其嚴重性的量。
免疫刺激劑(也稱為免疫刺激劑(immunostimulant/immunostimulator))是指刺激免疫系統(tǒng)的物質(zhì)。在一些實施方案中，本發(fā)明的免疫刺激劑可誘導免疫系統(tǒng)的一種或多種正調(diào)節(jié)劑的活化或增加其活性。在一些實施方案中，本發(fā)明的免疫刺激劑可誘導免疫系統(tǒng)的一種或多種負調(diào)節(jié)劑的鈍化或降低其活性。如本文所用，術(shù)語活性是指給定靶標在基因組dna階段、轉(zhuǎn)錄階段、轉(zhuǎn)錄后階段、轉(zhuǎn)譯階段、轉(zhuǎn)譯后階段上的活性，包括但不限于基因拷貝數(shù)、mrna轉(zhuǎn)錄速率、mrna豐度、mrna穩(wěn)定性、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)譯速率、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、蛋白質(zhì)修飾、蛋白質(zhì)活性、蛋白質(zhì)復合物活性等。在一些實施方案中，免疫刺激劑可為特異性免疫刺激劑。特異性免疫刺激劑為在免疫反應中提供抗原特異性的物質(zhì)，諸如疫苗或抗原。在一些實施方案中，免疫刺激劑可為非特異性免疫刺激劑。非特異性免疫刺激劑不管抗原特異性如何均發(fā)揮作用以加強其它抗原的免疫反應或刺激免疫系統(tǒng)的組分而沒有抗原特異性，諸如助劑。用于本發(fā)明的方法中的免疫刺激劑可為重組、合成、天然制備或其組合。
在一些實施方案中，至少一種免疫刺激劑有效治療敗血病。
在一些實施方案中，至少一種免疫刺激劑為胸腺素肽(胸腺素)。胸腺素為小蛋白質(zhì)且存在于許多動物組織中。胸腺素起初分離自胸腺，但現(xiàn)已知大多數(shù)存在于許多其它組織中。如本文所用，胸腺素包括胸腺素α、胸腺素β、胸腺素γ和其功能性變體。在某些實施方案中，胸腺素為胸腺素α(或α胸腺素)。在某些實施方案中，胸腺素為前胸腺素α(ptma)。在某些實施方案中，胸腺素為胸腺素α1(“ta1”，也稱為胸腺素α-1、胸腺素a-1、胸腺素α-1或α胸腺素)和與ta1具有結(jié)構(gòu)同源性的功能性變體。在一些實施方案中，ta1為具有以下氨基酸的肽：(n-acetyl)-ser-asp-ala-ala-val-asp-thr-ser-ser-glu-ile-thr-thr-lys-asp-leu-lys-glu-lys-lys-glu-val-val-glu-glu-ala-glu-asn-oh(seqidno：1)。ta1的氨基酸公開于美國專利4,079,137中，該專利的公開內(nèi)容以引用的方式并入本文中。ta1為非糖基化28-氨基酸肽，其具有乙酰基化n端和約3108的分子量。在一些實施方案中，使用合成型式的ta1。在一些實施方案中，合成型式的ta1可在某些國家以商標名zadaxin(胸腺法新)商購獲得。如本文所用，術(shù)語ta1還指衍生自seqidno：1的功能性變體或片段。
在一些實施方案中，至少一種免疫刺激劑為胸腺素α1(ta1)。α胸腺素肽包含胸腺素α1(ta1)肽，其包括天然存在的ta1以及具有天然存在的ta1的氨基酸、與其基本上類似的氨基酸或其縮短形式的合成ta1或重組ta1，以及其具有基本上類似于ta1的生物活性且具有經(jīng)取代、缺失、拉長、置換或以其它方式修飾的的生物活性類似物，例如ta1衍生肽，其與ta1具有充足氨基酸同源性，使得其與ta1以基本上相同的活性以基本上相同的方式發(fā)揮作用。α胸腺素肽的適當劑量可在每天約0.001-10mg/kg范圍內(nèi)。在一些實施方案中，ta1具有美國專利第4,079,137號中所公開的氨基酸，該專利的公開內(nèi)容以引用的方式并入本文中。已測序且化學合成了起初分離自胸腺素級分5(tf5)的ta1。ta1是分子量為3108的28氨基酸肽。
在一些實施方案中，α胸腺素肽的有效量為可為對應于約0.01-20mg的ta1、約1-10mg的ta1、約2-10mg的ta1、約2-7mg的ta1或約3-6.5mg的ta1的范圍內(nèi)的劑量單位的量，且可包含約1.6、3.2或6.4mg的ta1或約3.2或6.4mg的ta1。劑量單位可每天施用一次，或每天多次。在一些實施方案中，ta1是以每天約0.5-10mg范圍內(nèi)的劑量向受試者施用。在某些實施方案中，ta1劑量在每天約1.5-7mg的范圍內(nèi)或每天約1.6-6.4mg的范圍內(nèi)。在某些實施方案中，ta1劑量在每天約1.7-10mg、每天約1.7-7mg或每天約3-7mg的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，有效劑量包括每天約1.6、3.2或6.4mg。在一些實施方案中，ta1是以約0.01至約6mg/kg的劑量向受試者施用。在一些實施方案中，ta1是一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次或更多次向受試者施用。在一些實施方案中，ta1是單獨或與一種或多種其它免疫刺激劑一起向受試者施用。
ta1肽包括天然存在的ta1以及具有天然存在的ta1的氨基酸、與其基本上類似的氨基酸或其縮短形式的合成ta1或重組ta1，以及其具有基本上類似于ta1的生物活性且具有經(jīng)取代、缺失、伸長、置換或以其它方式修飾的的生物活性類似物，例如ta1衍生肽，其與ta1具有充足氨基酸同源性，使得其以與ta1基本上相同的活性以基本上相同的方式發(fā)揮作用。在一些實施方案中，胸腺素的適當劑量可在每天約0.001-10mg/kg的范圍內(nèi)，諸如每天0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0mg/kg或更多。在一些實施方案中，ta1具有美國專利第4,079,137號中所公開的氨基酸，該專利的公開內(nèi)容以引用的方式并入本文中。
已測序且化學合成了起初分離自胸腺素級分5(tf5)的ta1。ta1是分子量為3108的28氨基酸肽。術(shù)語ta1還包括天然存在、合成或重組胸腺素ta1的功能性變體和功能性片段。ta1起初分離自牛胸腺，其中其顯示在切除胸腺的動物模型中恢復“免疫功能”。在一些實施方案中，胸腺素包含seqidno：1的氨基酸(其中任選存在酰基化(例如乙?；?n端)。在一些實施方案中，胸腺素包含基本上類似于ta1的氨基酸，且維持ta1的免疫調(diào)節(jié)活性?；旧项愃频目上鄬τ趖a1具有例如約1至約10個氨基酸缺失、插入和/或取代(總體來講)。舉例來說，胸腺素可相對于ta1具有約1至約5(例如1、2或3)個氨基酸插入、缺失和/或取代(總體來講)。
因此，胸腺素可包含縮短ta1，其例如相對于ta1具有1至約10個氨基酸或約1至5個氨基酸或1、2或3個氨基酸缺失。此類缺失可位于n端或c端和/或內(nèi)部，只要肽的免疫調(diào)節(jié)活性基本上得以維持即可?；蛘呋虼送猓旧项愃频目上鄬τ趖a1具有約1至約5個氨基酸插入(例如1、2或3個氨基酸插入)，其中ta1的免疫調(diào)節(jié)活性基本上得以維持?；蛘呋虼送?，基本上類似的可具有1至約10個氨基酸取代，其中免疫調(diào)節(jié)活性基本上得以維持。舉例來說，基本上類似的可具有1至約5或1、2或3個氨基酸取代，其可包括保守和非保守取代。在一些實施方案中，取代為保守的。一般而言，保守取代包括化學上類似的氨基酸(例如極性、非極性或帶電荷)的取代。經(jīng)取代氨基酸可選自20個標準氨基酸或可為非標準氨基酸(例如保守非標準氨基酸)。
在一些實施方案中，胸腺素包含與seqidno：1具有至少70％一致性同時維持ta1的免疫調(diào)節(jié)活性的氨基酸。舉例來說，胸腺素可包含與seqidno：1具有至少80％、85％、90％、95％一致性的氨基酸。胸腺素可包含與seqidno：1具有100％一致性的氨基酸。在一些實施方案中，n端可任選例如經(jīng)c1-10或c1-c7?；蛲榛；?例如乙?；?或烷化。
在某些實施方案中，上文所描述的基本上類似和同源肽可以相對于ta1(seqidno：1)至少約50％、70％、80％、90％或約100％的水平發(fā)揮作用。
胸腺素可例如通過固相合成來合成制備或可重組制備且通過已知技術(shù)加以純化。胸腺素還可以凍干形式提供，且在施用之前用無菌(例如水性)稀釋劑復原。胸腺素的制劑可通過皮下注射，或其它有效途徑施用。
在某些實施方案中，將胸腺素聚乙二醇化以增加其在循環(huán)中的半衰期。此類用于增加治療性蛋白質(zhì)的半衰期的策略為熟知的。
胸腺素被認為在發(fā)炎和先天免疫反應中起作用，且促成對自身與哺乳動物中的非自身的辨別。胸腺素對pamp(病原體相關(guān)分子模式)配體的活化導致對細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑的刺激，從而引起共刺激分子、促發(fā)炎細胞因子、一氧化氮和類二十烷酸的表達。胸腺素可影響例如樹突細胞、t細胞、b細胞和nk細胞。
在一些實施方案中，ta1與第二免疫刺激劑組合。
在一些實施方案中，第二免疫刺激劑為有效治療敗血病的免疫刺激劑。在一些實施方案中，第二免疫刺激劑為gm-csf、干擾素(例如干擾素-γ)、白介素7、白介素15或pd-1抑制劑。在一些實施方案中，有效治療敗血病的免疫刺激劑能夠降低受試者中的t細胞耗竭。在一些實施方案中，免疫刺激劑為能夠增加gm-csf、干擾素(例如干擾素-γ)或白介素7或白介素15的活性的物質(zhì)，參見boomer(“thechangingimmunesysteminsepsis：isindividualizedimmuno-modulatorytherapytheanswer？”，virulence5：1，45-56；2014年1月1日)，其以引用的方式整體并入本文中。
在一些實施方案中，第二免疫刺激劑為檢查點蛋白的抑制劑(也稱為檢查點抑制劑、免疫檢查點調(diào)節(jié)劑或cpm)。如本文所用，檢查點蛋白為保持免疫系統(tǒng)不攻擊細胞的蛋白質(zhì)。檢查點抑制劑是設(shè)計成減小檢查點蛋白的有效性。在一些實施方案中，檢查點蛋白包括但不限于pd1、pdl1、ctla4、kir、ido1、4-1bb(cd137)、ox40(cd134)和lag3。
在一些實施方案中，第二免疫刺激劑能夠減弱受試者中的異常免疫抑制。在一些實施方案中，異常免疫抑制是歸因于在免疫系統(tǒng)中異常高的免疫抑制劑活性。在一些實施方案中，在受試者中具有異常高活性的免疫抑制劑為程序化死亡受體(pd-1)、程序化死亡配體(pd-l)、b和t淋巴細胞衰減子(btla)、皰疹病毒進入介導子(hvem)或細胞因子il-10。在一些實施方案中，有效治療敗血病的第二免疫刺激劑為在敗血病患者中在低發(fā)炎階段期間具有異常高活性的免疫抑制劑的抑制劑，參見boomer(“thechangingimmunesysteminsepsis：isindividualizedimmuno-modulatorytherapytheanswer？”，virulence5∶1，45-56；2014年1月1日)，其出于所有目的以引用的方式整體并入本文中。在一些實施方案中，第二免疫刺激劑為pd-1、pd-l、btla、hvem和/或il-10的抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑降低pd-1、pd-l、btla、hvem和/或il-10在dna階段、mrna階段和/或蛋白質(zhì)階段上的活性。在一些實施方案中，抑制劑為針對pd-1、pd-l、btla、hvem或il-10的抗體。在一些實施方案中，抑制劑為針對pd-1的抗體，諸如美國專利第8552154號、第8741295號、第8008449號、第8460886號和第7029674號，或美國專利申請公開第20110171220號、第20110271358號、第20140044738號中所描述的那些，這些專利各自以引用的方式整體并入本文中。在一些實施方案中，抑制劑為針對pd配體的抗體。在一些實施方案中，抑制劑抑制pd-1與其配體之間的相互作用。
在一些實施方案中，pd-1抑制劑為針對pd-1的抗體。在一些實施方案中，pd-1抗體的劑量為約0.1至10mg/kg，諸如約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0或10mg/kg。在一些實施方案中，pd-1抗體的劑量為約1-5mg/kg，或約2-3mg/kg。
如本文所用，詞組“pd-1的抑制劑”是指抑制由pd-1介導的信號傳導通路的化合物，諸如針對pd-1信號傳導通路中的組分的抑制劑。pd-1信號傳導通路描述于riley(immunolrev.2009年5月；229(1)：114-125)中，該文獻以引用的方式整體并入本文中。如本文所用，術(shù)語pd-1信號傳導通路中的組分的“活性”可為在基因組dna階段、轉(zhuǎn)錄階段、轉(zhuǎn)錄后階段、轉(zhuǎn)譯階段、轉(zhuǎn)譯后階段上的參數(shù)，包括但不限于基因活性、rna活性和蛋白質(zhì)活性。基因活性可為基因拷貝數(shù)、基因擴增數(shù)或啟動子活性等。rna活性可為mrna豐度、合成速率和/或穩(wěn)定性等。蛋白質(zhì)活性可為蛋白質(zhì)豐度、合成速率、穩(wěn)定性、酶活性、磷酸化速率、修飾、結(jié)合活性等。在一些實施方案中，抑制劑降低pd-1的活性。在一些實施方案中，抑制劑降低pd-1配體的活性。在一些實施方案中，抑制劑為pd-1抑制劑，諸如抗pd-1抗體，或pd-1配體(也稱為pdl-1)的抑制劑，諸如抗pdl-1抗體?？贵w可為單株抗體、多株抗體或其組合。
在一些實施方案中，第二免疫刺激劑為細胞因子。在一些實施方案中，細胞因子包括但不限于趨化因子、干擾素、白介素、淋巴因子、腫瘤壞死因子。
在一些實施方案中，作為第二免疫刺激劑的細胞因子為集落刺激因子(csf)。如本文所用，術(shù)語csf是指分離、合成或重組csf，包括其功能性衍生物和功能性片段。如本文所用，術(shù)語csf是指物質(zhì)包含全長集落刺激因子多肽、其功能性片段和/或其功能性衍生物。集落刺激因子為經(jīng)分泌糖蛋白，其結(jié)合于造血干細胞表面上的受體蛋白，由此活化使得細胞增殖和/或分化成特定種類的血細胞(諸如白血細胞)的細胞內(nèi)信號傳導通路。
在一些實施方案中，csf包含以下多肽：巨噬細胞集落刺激因子(例如csf1或m-csf)、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(例如csf2，也稱為gm-csf)、粒細胞集落刺激因子(例如csf3，也稱為gcsf或g-csf)和/或其類似物，諸如幼巨核細胞生成素(promegapoietin)或非格司亭(filgrastim)，或其能夠刺激受試者的免疫系統(tǒng)的功能性片段。
在一些實施方案中，作為第二免疫刺激劑的細胞因子為gm-csf。如本文所用術(shù)語gm-csf是指分離、合成或重組gm-csf，包括其功能性衍生物和功能性片段。天然地，gm-csf可由巨噬細胞、t細胞、肥大細胞、nk細胞、內(nèi)皮細胞和纖維母細胞分泌。在一些實施方案中，免疫刺激劑可為天然gm-csf的類似物，諸如沙格司亭(sargramostim)和莫拉司亭(molgramostim)。在一些實施方案中，gm-csf呈同源二聚體或異源二聚體形式。在一些實施方案中，gm-csf是使用重組技術(shù)制造(例如莫拉司亭或沙格司亭(也稱為leukine))。
在一些實施方案中，gm-csf的劑量為約1至1000mcg/m2，諸如約5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000mcg/m2。在一些實施方案中，gm-csf的劑量為約125至約250mcg/m2。
在一些實施方案中，作為第二免疫刺激劑的細胞因子為干擾素。如本文所用，術(shù)語干擾素是指分離、合成或重組干擾素，包括其功能性衍生物和功能性片段。如本文所用，干擾素(ifn)是指由宿主細胞響應于病原體(諸如病毒、細菌、寄生蟲或腫瘤細胞)的存在而制備和釋放的多肽。在一些實施方案中，干擾素活化免疫細胞。在一些實施方案中，干擾素活化自然殺傷細胞和巨噬細胞。在一些實施方案中，干擾素增加主要組織相容性復合物(mhc)抗原的活性。在一些實施方案中，干擾素屬于i型ifn、ii型ifn或iii型ifn。在一些實施方案中，i型ifn為ifn-α、ifn-β、ifn-ε、ifn-κ或
在一些實施方案中，作為第二免疫刺激劑的細胞因子為腫瘤壞死因子(tnf)。如本文所用，術(shù)語tnf是指分離、合成或重組tnf，包括其功能性衍生物和功能性片段。在一些實施方案中，tnf可由經(jīng)活化巨噬細胞、cd4+淋巴細胞、nk細胞、中性粒細胞、肥大細胞、嗜酸性粒細胞或神經(jīng)元制備。
在一些實施方案中，作為第二免疫刺激劑的細胞因子為白介素。如本文所用，術(shù)語白介素是指分離、合成或重組白介素，包括其功能性衍生物和功能性片段。在一些實施方案中，白介素可由輔助cd4t淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞或內(nèi)皮細胞合成。在一些實施方案中，白介素促進t淋巴細胞、b淋巴細胞和/或造血細胞的發(fā)育和/或分化。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含白介素1、白介素3、白介素4、白介素5、白介素6、白介素7、白介素8、白介素9、白介素10、白介素11、白介素12、白介素13、白介素14、白介素15、白介素16或白介素17。如本文所用，術(shù)語白介素是指兩種白介素分離、合成或重組的白介素，包括其功能性衍生物和功能性片段。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含il-7、il-9和/或il-15。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含可充當淋巴樣細胞(諸如b細胞譜系、t細胞譜系和/或nk細胞)的生長因子的白介素。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含可支持輔助t細胞的生長的白介素。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含可刺激且維持細胞免疫反應的白介素。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含可刺激淋巴樣細胞(諸如b細胞譜系和/或t細胞譜系)增殖的白介素。
在一些實施方案中，第二免疫刺激劑包含可增強il受體活性的物質(zhì)。在一些實施方案中，il受體為il-7受體。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含可增強il-7與il-7受體的相互作用的物質(zhì)。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含白介素-7受體α。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含共同的γ鏈受體，其與白介素-7受體α形成異源二聚體。在一些實施方案中，il受體為il-9受體。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含可增強il-9與il-9受體的相互作用的物質(zhì)。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含白介素-9受體。在一些實施方案中，il受體為il-15受體。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含可增強il-15與il-15受體的相互作用的物質(zhì)。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含白介素-15受體β鏈(cd122)。在一些實施方案中，免疫刺激劑包含白介素-15受體共同的γ鏈(γ-c，cd132)。
在一些實施方案中，第二免疫刺激劑包含白介素。在一些實施方案中，白介素為il-7。在一些實施方案中，il-7的劑量為約0.1至100mcg/kg，諸如約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100mcg/kg。在一些實施方案中，劑量為約1至50mcg/kg，或約3至30mcg/kg。
可使用其它免疫刺激劑。在一些實施方案中，免疫刺激劑可充當白血細胞生長因子。在一些實施方案中，免疫刺激劑刺激干細胞產(chǎn)生粒細胞(例如中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞)和/或單核細胞。在一些實施方案中，免疫刺激劑可預防在化學治療之后的中性白細胞減少。在一些實施方案中，免疫刺激劑可刺激中性粒細胞前體和成熟中性白細胞存活、增殖、分化和/或發(fā)揮作用。在一些實施方案中，免疫刺激劑通過使用包括但不限于以下的一種或多種信號傳導通路來發(fā)揮作用：janus激酶(jak)、信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄活化因子(stat)、經(jīng)ras/分裂素活化的蛋白激酶(mapk)、磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)和蛋白激酶b(akt)信號轉(zhuǎn)導通路。
在一些實施方案中，本申請的免疫刺激劑或至少兩種免疫刺激劑的組合與抗癌劑組合。
在一些實施方案中，可與本申請的免疫刺激劑組合使用的抗癌劑可包括但不限于雌激素受體拮抗劑、受體酪氨酸激酶抑制劑、癌細胞復制抑制劑、癌細胞信號傳導抑制劑或沉默劑和腫瘤細胞表面的癌細胞生長、癌細胞抗凋亡性和/或癌細胞轉(zhuǎn)移中所涉及的內(nèi)部細胞信號傳導分子的其它抑制劑。
在一些實施方案中，本申請的免疫刺激劑與雌激素受體拮抗劑(erant)、雌激素受體抑制劑或雌激素受體配體抑制劑組合使用。
在一些實施方案中，本申請的免疫刺激劑與受體酪氨酸激酶抑制劑組合使用。酪氨酸激酶抑制劑代表靶向諸如腫瘤細胞的細胞中的受體和/或非受體酪氨酸激酶的一類治療劑或藥物。在某些情況下，酪氨酸激酶抑制劑為基于抗體(例如抗酪氨酸激酶單克隆抗體等)或基于多核苷酸(例如酪氨酸激酶反義寡核苷酸、小干擾核糖核酸等)形式的靶向治療。在一些實施方案中，酪氨酸激酶抑制劑為通過結(jié)合于酶的atp結(jié)合位點而抑制靶向酪氨酸激酶的小分子。
在一些實施方案中，本申請的免疫刺激劑與癌細胞復制抑制劑組合使用，癌細胞復制抑制劑為諸如抗微管劑，其是指通過防止微管功能而阻斷細胞分裂的化學品。
在一些實施方案中，本申請的免疫刺激劑與癌細胞信號傳導抑制劑組合使用。在一些實施方案中，癌細胞信號傳導抑制劑包括可抑制egfr(表皮生長因子受體)反應的試劑，諸如egfr抗體、egf抗體和作為egfr抑制劑的分子；vegf(血管內(nèi)皮生長因子)抑制劑；和erbb2受體抑制劑，諸如結(jié)合于erbb2受體的有機分子或抗體。
在一些實施方案中，其它抗癌劑可在施用本發(fā)明的第一免疫刺激劑之前、同時或之后施用。
在一些實施方案中，抗癌劑包含如美國專利第7,611,702號、第7,741,345號和第8,088,770號中所描述的伊匹單抗或衍生物，這些專利以引用的方式整體并入本文中。
在一些實施方案中，抗癌劑包含信號轉(zhuǎn)導抑制劑。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)導抑制劑為braf抑制劑，諸如維羅非尼(vemurafenib)和達拉菲尼(dabrafenib)。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)導抑制劑為mek抑制劑，諸如曲美替尼(trametinib)。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)導抑制劑為c-kit抑制劑，諸如伊馬替尼(imatinib)。
在一些實施方案中，抗癌劑包含激酶抑制劑。在一些實施方案中，激酶抑制劑包含如美國專利第7,235,576號中所描述的索拉非尼或衍生物。激酶抑制劑可連續(xù)(即，每天)、每天多次、每隔一天等進行施用，且可在施用本發(fā)明的免疫刺激劑之前、同時或之后施用，例如在治療方案過程期間在相同的日子或在不同的日子施用。在某些實施方案中，激酶抑制劑是以例如每天施用約10-2000mg、每天約50-1000mg或每天約50-800mg的劑量范圍進行施用。日劑量可為例如約50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg等。
在一些實施方案中，抗癌劑包含抗腫瘤熱休克凋亡活化劑(hsaa)，參見美國專利申請公開第20100317583號，其以引用的方式整體并入本文中。在一些實施方案中，hsaa包含sta-4783(伊利司莫)。hsaa可連續(xù)(即，每天)、每天多次、每隔一天等進行施用，且可在施用本發(fā)明的免疫刺激劑之前、同時或之后施用，例如在治療方案過程期間在相同的日子或在不同的日子施用。在某些實施方案中，hsaa是以例如每天約0.01-1000mg/kg、每天約0.1-500mg/kg或每天約1-200mg/kg的劑量范圍進行施用。日劑量可為例如25mg/kg、100mg/kg等。
在一些實施方案中，抗癌劑包含針對細胞毒性t淋巴細胞相關(guān)抗原4(ctla4)的抑制劑，參見美國專利申請公開第20100330093號，其以引用的方式整體并入本文中。在一些實施方案中，抑制劑為針對ctla4的抗體。在一些實施方案中，ctla4抗體包括但不限于9h10(ebioscience)、mdx010(medarex)、1f4(genetex)、bni3(genetex)、q01(abnova)、a01(abnova)、m08(abnova)、1b8(abcam)、wkh203(abcam)、ab9984(abcam)、ab13486(abcam)、伊匹單抗、替西木單抗或其組合。在一些實施方案中，ctla4抗體可連續(xù)(即，每天)、每天多次、每隔一天等進行施用，且可在施用本發(fā)明的免疫刺激劑之前、同時或之后施用，例如在治療方案過程期間在相同的日子或在不同的日子施用。在一些實施方案中，ctla4抗體是以例如每公斤患者體重每天施用0.001-50mg或約0.01-20mg/kg或約1-15mg/kg的劑量范圍進行施用。
在某些實施方案中，抗癌劑包含一種或多種抗腫瘤劑。在一些實施方案中，抗腫瘤劑為化學治療劑。在一些實施方案中，化學治療劑選自烷化劑、抗代謝物、抗微管劑、拓撲異構(gòu)酶抑制劑和細胞毒性抗生素。
如本文所用，術(shù)語“烷化劑”是指具有將受試者中包括蛋白質(zhì)、rna和dna的分子烷化的能力的試劑。烷化劑的非限制性實例包括氮芥、亞硝基脲、四嗪、氮丙啶、順鉑和衍生物和非經(jīng)典烷化劑。氮芥包括二氯甲基二乙胺、環(huán)磷酰胺、美法侖(melphalan)、苯丁酸氮芥、異環(huán)磷酰胺和白消安(busulfan)。
如本文所用，術(shù)語“抗代謝物”是指阻礙dna、rna或蛋白質(zhì)合成的分子。在一些實施方案中，抗代謝物類似于核堿基或核苷(不具有磷酸基的核苷酸)，但具有經(jīng)改變的化學基團。這些藥物通過阻斷為dna合成所需的酶或變得并入dna或rna中來發(fā)揮其作用。通過抑制參與dna合成的酶，其阻止有絲分裂，因為dna不能自己復制。另外，在分子錯誤并入dna中之后，可發(fā)生dna損害且誘發(fā)程序化細胞死亡(凋亡)。在一些實施方案中，抗代謝物為抗葉酸劑、氟嘧啶、脫氧核苷類似物和硫嘌呤。在一些實施方案中，抗代謝物選自氨甲喋呤、培美曲塞(pemetrexed)、氟尿嘧啶、卡培他濱(capecitabine)、阿糖胞苷、吉西他濱(gemcitabine)、地西他濱(decitabine)、維達扎(vidaza)、氟達拉濱(fludarabine)、奈拉濱(nelarabine)、克拉屈濱(cladribine)、氯法拉濱(clofarabine)、噴司他丁(pentostatin)、硫鳥嘌呤和巰基嘌呤。
如本文所用，術(shù)語“抗微管劑”是指通過阻止微管功能而阻斷細胞分裂的化學品。
在一些實施方案中，抗腫瘤劑為有絲分裂抑制劑。
如本文所用，術(shù)語“拓撲異構(gòu)酶抑制劑”是指可調(diào)節(jié)拓撲異構(gòu)酶i和/或拓撲異構(gòu)酶ii的活性的試劑。在一些實施方案中，本發(fā)明的拓撲異構(gòu)酶抑制劑可為拓撲異構(gòu)酶i抑制劑。在本發(fā)明的其它實施方案中，拓撲異構(gòu)酶抑制劑為拓撲異構(gòu)酶ii抑制劑。
如本文所用，術(shù)語“細胞毒性抗生素”細胞毒性抗生素包括但不限于放射菌素(antinomycin)、博來霉素(bleomycin)、絲裂霉素(mitomycin)、普卡霉素(plicamycin)及其類似物。酪氨酸激酶抑制劑的實例包括但不限于尼羅替尼(nilotinib)、伊馬替尼、吉非替尼(gefitinib)、埃羅替尼(erlotinib)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panimmumab)、扎魯木單抗(zalutumumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、馬妥珠單抗(matuzuman)及其類似物。
在一些實施方案中，其它抗癌劑為單株抗體，諸如阿侖單抗(alemtuzumab)、貝伐單抗(bevacizumab)、西妥昔單抗、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、利妥昔單抗(rituximab)和曲妥珠單抗(trastuzumab)；光敏劑，諸如氨基乙酰丙酸、氨基乙酰丙酸甲酯、卟吩姆鈉(porfimersodium)和維替泊芬(verteporfin)；和其它藥劑，諸如阿利維甲酸(alitretinoin)、六甲蜜胺(altretamine)、安吖啶(amsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、三氧化砷、天冬酰胺酶、蓓薩羅丁(bexarotene)、硼替佐米(bortezomib)、塞來昔布(celecoxib)、地尼白介素-毒素連接物(denileukindiftitox)、埃羅替尼、雌莫司汀(estramustine)、吉非替尼、羥基脲(hydroxycarbamide)、伊馬替尼、噴司他丁、馬索羅酚(masoprocol)、米托坦(mitotane)、培門冬酶(pegaspargase)和維甲酸(tretinoin)。
在一些實施方案中，抗腫瘤劑包含烷化抗腫瘤劑(aikaa)。在一些實施方案中，aikaa包含達卡巴嗪(dtic)。在一些實施方案中，烷化抗腫瘤劑可以例如每天約700-1300mg/m2的劑量范圍內(nèi)、更優(yōu)選每天約800-1200mg/m2的劑量范圍內(nèi)且最優(yōu)選每天約1000mg/m2向患者施用。
在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可以臨床相關(guān)、統(tǒng)計學上顯著和/或持續(xù)的方式緩解、治療和/或預防黑素瘤的一種或多種癥狀。在一些實施方案中，施用本發(fā)明的藥物組合物提供關(guān)于緩解、治療和/或預防黑素瘤的一種或多種癥狀的統(tǒng)計學上顯著的治療效果。在一個實施方案中，統(tǒng)計學上顯著的治療效果是基于由美國的一個或多個管理機構(gòu)(例如fda)或其它國家提供的一個或多個標準或準則來確定。在一些實施方案中，統(tǒng)計學上顯著的治療效果是基于獲自管理機構(gòu)批準的臨床試驗裝備和/或程序的結(jié)果來確定。在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物提供如通過無復發(fā)存活率(rfs，復發(fā)或死亡之前的持續(xù)時間)所測量的統(tǒng)計學上顯著的治療效果。在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物提供如通過轉(zhuǎn)移的頻率和/或嚴重性所測量的統(tǒng)計學上顯著的治療效果。
在一些實施方案中，統(tǒng)計學上顯著的治療效果是基于具有至少50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或更多個成員的患者群體來確定。在一些實施方案中，統(tǒng)計學上顯著的治療效果是基于獲自隨機化和雙盲臨床試驗裝置的數(shù)據(jù)來確定。在一些實施方案中，統(tǒng)計學上顯著的治療效果是基于p值小于或等于約0.05、0.04、0.03、0.02或0.01的數(shù)據(jù)來確定。在一些實施方案中，統(tǒng)計學上顯著的治療效果是基于置信區(qū)間大于或等于95％、96％、97％、98％或99％的數(shù)據(jù)來確定。在一些實施方案中，統(tǒng)計學上顯著的治療效果是在例如由美國的fda批準由本發(fā)明提供的方法的iii期臨床試驗后確定。
在一些實施方案中，統(tǒng)計學上顯著的治療效果是通過具有至少50、100、200、300或350個成員的患者群體的隨機化雙盲臨床試驗來確定；用本發(fā)明的藥物組合物處理，但不與用于治療md癥狀的任何其它試劑組合。在一些實施方案中，統(tǒng)計學上顯著的治療效果是通過具有至少50、100、200、300或350個成員的患者群體的隨機化臨床試驗且使用任何通常接受的md癥狀評估準則(諸如本文所描述的準則)來確定。
一般而言，統(tǒng)計分析可包括管理機構(gòu)(例如美國的fda)或中國或任何其它國家允許的任何適合的方法。在一些實施方案中，統(tǒng)計分析包括非分層分析、對數(shù)秩分析(例如來自kaplan-meier、jacobson-truax、gulliken-lord-novick、edwards-nunnally、hageman-arrindel)和分層線性模型化(hlm)和cox回歸分析。
在一些實施方案中，所述方法包括在特定黑素瘤進展階段施用免疫刺激劑。在一些實施方案中，免疫刺激劑是在受試者中的t細胞凋亡開始時向受試者施用。檢測t細胞凋亡的方法為熟知的，諸如使用fitc膜聯(lián)蛋白v的那些。在一些實施方案中，免疫刺激劑是在受試者歸因于t細胞凋亡而經(jīng)歷t細胞耗竭時向受試者施用。t細胞定量的方法為熟知的，諸如使用流式細胞術(shù)的那些。在一些實施方案中，免疫刺激劑是為在受試者中維持預定水平的活性t細胞群體而向受試者施用。在一些實施方案中，活化t細胞為cd8+t細胞和/或cd4+t細胞。
在某些實施方案中，治療方案包括多天的包含本發(fā)明的免疫刺激劑的藥物組合物，且免疫刺激劑可在至少一部分的治療方案期間向受試者施用。
在某些實施方案中，治療方案包括施用藥物組合物持續(xù)約1-10天、約1-20天、約1-30天、約1-40天、約1-50天、約1-60天、約1-70天、約1-80天、約1-90天、約1-100天或更多天的時間段。
在某些實施方案中，治療方案還包括約1-5天、約5-10天、約10-20天、約20-30天或更多天不施用藥物組合物。在一些實施方案中，藥物組合物可每天施用持續(xù)1-10天、約1-20天、約1-30天、約1-40天、約1-50天、約1-60天、約1-70天、約1-80天、約1-90天、約1-100天或更多天，隨后約1-5天、約5-10天、約10-20天、約20-30天不施用α胸腺素肽。
在一些實施方案中，所述方法還包括在投藥之后監(jiān)測受試者的反應，以避免歸因于過度活化和增殖的嚴重和/或致命的免疫介導不良反應。在一些實施方案中，將免疫刺激劑的施用加以修改，諸如如果患者顯示持續(xù)中度不良反應，則減少、暫?；蚪K止。在一些實施方案中，如果患者從施用第一劑量起在約1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周或更多周以內(nèi)未能作出反應，則修改劑量。在一些實施方案中，如果患者顯示包括但不限于以下的嚴重或危急生命的不良反應：伴有腹痛、發(fā)熱、腸梗阻或腹膜跡象的結(jié)腸炎；大便頻率增加(高于基線≥7次)、大便失禁、需要靜脈補液持續(xù)＞24小時、胃腸道出血和胃腸道穿孔、ast或alt＞5倍正常值上限(uln)或總膽紅素＞3倍uln、史蒂芬斯-強森綜合征(stevens-johnsonsyndrome)、中毒性表皮壞死松解或伴發(fā)全厚度皮膚潰瘍或壞死性、大皰性或出血性表現(xiàn)的皮疹、嚴重運動或感覺性神經(jīng)病、格林-巴利綜合征(guillain-barrésyndrome)、重癥肌無力、涉及對局部免疫抑制治療無反應的任何器官系統(tǒng)免疫介導眼部疾病的嚴重免疫介導反應，則修改劑量。
在一些實施方案中，所述方法包括在施用本發(fā)明的免疫刺激劑之前、期間和/或之后，確定免疫系統(tǒng)中一種或多種組分的活性。在一些實施方案中，本發(fā)明的治療方案可基于免疫系統(tǒng)中一種或多種組分的活性進行修改。在一些實施方案中，免疫系統(tǒng)中的組分包括但不限于t細胞凋亡、cd+8t細胞和cd+4t細胞。在一些實施方案中，所述方法包括測定指示t細胞凋亡、cd+8t細胞和/或cd+4t細胞的活性的一種或多種生物標記物。在一些實施方案中，所述方法包括測定效應t細胞的活性。在一些實施方案中，所述方法包括測定輔助t細胞的活性。
在一些實施方案中，將受試者免疫系統(tǒng)中的一種或多種組分的活性與預定標準相比較，以判定是否應向受試者施用本發(fā)明的藥物組合物和/或何時可向受試者施用藥物組合物。在一些實施方案中，組分可為il-2、il-2受體、il-7、il-7受體、il-15、il-15受體、cd69、ifnγ、il-6、tnf、il-1、gm-csf、pd-l、pd-1、il-10、btla、hvem、il-1β、il-4、il-6、il-10或其組合。在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是在pd-l、pd-1、il-10tla和/或hvem的活性與預定標準相比較高時向受試者施用。在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是在il-2、il-2受體、il-7、il-7受體、il-15、il-15受體、cd69、ifnγ、il-6、tnf和/或gm-csf的活性與預定標準相比較低時向受試者施用。在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是在il-1β的活性與預定標準相比較高時向受試者施用。在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是在il-4的活性與預定標準相比較低時向受試者施用。在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是在il-6的活性與預定標準相比較高時向受試者施用。在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是在il-10的活性與預定標準相比較高時向受試者施用。
在一些實施方案中，本發(fā)明的治療方法與一種或多種其它癌癥治療組合。在一些實施方案中，其它治療為手術(shù)。在一些實施方案中，其它治療為輔助治療。在一些實施方案中，其它治療為化學治療。在一些實施方案中，其它治療為免疫治療。在一些實施方案中，其它治療為放射治療。在一些實施方案中，其它治療為靶向治療，諸如過繼細胞治療或基因治療。
在某些實施方案中，受試者為免疫缺陷受試者。免疫缺陷受試者(例如人類受試者)展現(xiàn)與傳染性疾病斗爭的能力降低和/或?qū)Σ≡w暴露作出反應的能力降低。此類免疫缺陷受試者的實例包括年長患者、初生兒、白血病或中性粒細胞減少患者、進行血液透析(例如為治療慢性腎病)的患者、接受免疫抑制治療的患者、aids患者、糖尿病患者、因癌癥而接受化學治療或放射治療的患者、由遺傳缺陷、營養(yǎng)不良、濫用藥物、酒精中毒或其它免疫抑制病或病狀引起的免疫缺陷。
在某些實施方案中，免疫抑制受試者為年長受試者。隨動物年齡增長，其免疫反應降低，且免疫反應的穩(wěn)健性歸因于低親和力抗體反應的普遍存在而有所降低。因此，這些實施方案中的受試者可為超過45歲或超過50歲的人類患者。在一些實施方案中，受試者為60歲以上、65歲以上或70歲以上的人類患者。
在某些實施方案中，治療方案還包括確定患者在治療期間的反應。在一些實施方案中，評估一種或多種與感染相關(guān)的癥狀以確定受試者對治療方案的反應。
在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物在受試者或受試者群中誘發(fā)針對病原體的強而快速的免疫反應。如本文所描述的胸腺素方案為患者提供對病原體暴露更穩(wěn)健的免疫反應，包括但不限于較高抗體效價和/或更快速抗體反應。在一些實施方案中，在少到一次、兩次、三次或四次投藥的情況下，所述方案提供此類優(yōu)點持續(xù)長達約10天、20天、30天、40天、50天或更久。
在一些實施方案中，受試者已診斷為具有癌癥。在一些實施方案中，癌癥為黑素瘤。
在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物是通過本領(lǐng)域中已知的任何適合的方法來施用。在一些實施方案中，施用本發(fā)明的組合物可經(jīng)口、非腸道、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、通過鼻內(nèi)滴入、通過植入、通過腔內(nèi)或膀胱內(nèi)滴入、眼內(nèi)、動脈內(nèi)、病灶內(nèi)、經(jīng)皮或通過施加于粘膜來進行。抑制劑可與藥學上可接受的載劑一起施用。在一些實施方案中，胸腺素是通過注射(例如肌肉內(nèi)、動脈內(nèi)、血管內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下)向受試者施用?！八帉W上可接受”意謂一物質(zhì)為生物學或以其它方式不需要的，即，所述質(zhì)可并入向患者施用的藥物組合物中，而不會引起任何顯著的不需要的生物效應或以有害方式與包含其的組合物的其它組分中的任一者相互作用。當術(shù)語“藥學上可接受”用于指藥學載劑或賦形劑時，其意味所述載劑或賦形劑已滿足毒理學和制造測試的所需標準，或者其是根據(jù)由美國食品和藥物管理局(u.s.foodanddrugadministration)制作的非活性成分指導而被包括。
在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物可提供于包含諸如以下的媒介物的藥物組合物中：人工膜囊(包括脂質(zhì)體、脂質(zhì)膠束及其類似物)、微?；蛭⒛z囊。
意在口服使用的組合物可制備成固體或流體單位劑型。流體單位劑型可根據(jù)本領(lǐng)域中已知用于制造藥物組合物的程序來制備，且此類組合物可含有一種或多種選自由以下組成的組的試劑：甜味劑、調(diào)味劑、染色劑和防腐劑，以提供藥學上精美的且可口的制劑。酏劑是通過使用水醇(例如乙醇)媒介物加上適合的甜味劑(諸如糖和糖精)以及芳族調(diào)味劑來制備。懸浮液可使用水性媒介物借助于諸如阿拉伯膠、黃蓍膠、甲基纖維素及其類似物的懸浮劑來制備。
諸如片劑的固體制劑含有與適合用于制造片劑的無毒的藥學上可接受的賦形劑混合的活性成分。這些賦形劑可為例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉：造粒劑和崩解劑，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合劑，例如淀粉、明膠或阿拉伯膠；和潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石和其它常規(guī)成分，諸如磷酸二鈣、硅酸鎂鋁、硫酸鈣、淀粉、乳糖、甲基纖維素和功能上類似的物質(zhì)。片劑可未包覆包衣或其可通過已知技術(shù)包覆包衣，以延遲在胃腸道中的崩解和吸收，且由此在較長時期內(nèi)提供持續(xù)作用。舉例來說，可使用時間延遲材料，諸如單硬脂酸甘油酯或雙硬脂酸甘油酯。
供口服使用的制劑還可以硬明膠膠囊形式存在，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合；或以軟明膠膠囊形式存在，其中活性成分與水或油介質(zhì)(例如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。軟明膠膠囊是通過將化合物與可接受的植物油、輕質(zhì)液狀石蠟或其它惰性油的漿料機器封裝來進行制備。
水性懸浮液含有與適合用于制造水性懸浮液的賦形劑混合的活性材料。此類賦形劑為懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯膠：分散或潤濕劑，其可為天然存在的磷脂(例如卵磷脂)或環(huán)氧烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)或環(huán)氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產(chǎn)物(例如十七乙烯氧基十六醇或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物(諸如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯)或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的偏酯的縮合產(chǎn)物(例如聚乙烯脫水山梨醇單油酸酯)。水性懸浮液還可含有一種或多種防腐劑，例如對羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯；一種或多種著色劑；一種或多種調(diào)味劑；或一種或多種甜味劑，諸如蔗糖或糖精。
油性懸浮液可通過將活性成分懸浮于植物油(例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油(諸如液體石蠟)中來進行配制。油性懸浮液可含有增稠劑，例如蜂蠟、固體石蠟或十六烷醇?？商砑犹鹞秳?諸如上文所闡述的那些)和調(diào)味劑以提供可口的口服制劑。這些組合物可通過添加諸如抗壞血酸的抗氧化劑來進行保存。
適合用于通過添加水來制備水性懸浮液的可分散性粉末和顆粒提供與分散或潤濕劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混合的活性成分。適合的分散或潤濕劑和懸浮劑是通過上文已提及的那些來例示。還可存在其它賦形劑，例如甜味劑、調(diào)味劑和著色劑。
本發(fā)明的藥物組合物還可呈水包油乳液形式。油相可為植物油，例如橄欖油或花生油；或礦物油，例如液體石蠟；或這些油的混合物。適合的乳化劑可為天然存在的樹膠，例如阿拉伯膠或黃蓍膠；天然存在的磷脂，例如大豆卵磷脂；和衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的酯或偏酯，例如脫水山梨醇單油酸酯；和所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯。乳液還可含有甜味劑和調(diào)味劑。
藥物組合物可呈無菌可注射水性或油性懸浮液的形式。此懸浮液可根據(jù)已知技術(shù)使用上文已提及的那些適合的分散或潤濕劑和懸浮劑加以配制。無菌可注射制劑還可為于無毒非經(jīng)腸可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如呈1，3-丁二醇溶液形式。在可接受的媒介物和溶劑之中，可使用的為水、林格氏溶液(ringer′ssolution)和等滲氯化鈉溶液。此外，常規(guī)使用無菌、固定油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，可使用任何溫和固定油，包括合成的甘油單酯或甘油二酯。此外，諸如油酸的脂肪酸在可注射物的制備中獲得應用。諸如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑的助劑還可包括于可注射溶液或懸浮液中。
在一些實施方案中，適合的遞送系統(tǒng)包括限時釋放、延遲釋放、持續(xù)釋放或控制釋放遞送系統(tǒng)。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物可在控制釋放系統(tǒng)(諸如持續(xù)釋放基質(zhì))中進行遞送。持續(xù)釋放基質(zhì)的非限制性實例包括聚酯、水凝膠(例如如由langer等人，1981，j.biomed.mater.res.，15：167-277和langer，1982，chem.tech.，12：98-105描述的聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)，或聚(乙烯醇)]、聚丙交酯(美國專利第3,773,919號；ep58,481)、l-谷氨酸和l-谷氨酸γ乙酯的共聚物(sidman等人，1983，biopolymers，22：547-556)、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯(langer等人，同上)、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物(諸如luprondepottm，由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)組成的可注射微球)和聚d-(-)-3-羥丁酸(ep133,988)。在一些實施方案中，組合物可使用靜脈輸注、可植入滲透泵、經(jīng)皮貼片、脂質(zhì)體或其它施用模式進行施用。在一個實施方案中，可使用泵(參見langer，同上；sefton，crccrit.ref.biomed.eng.14：201(1987)；buchwald等人，surgery88：507(1980)；saudek等人，n.engl.j.med.321：574(1989)。在另一實施方案中，可使用聚合材料。在另一實施方案中，控制釋放系統(tǒng)可能靠近治療靶標(例如肝臟)放置，因此僅需要全身劑量的一小部分(參見例如goodson，medicalapplicationsofcontrolledrelease，同上，第2卷，第115-138頁(1984)。其它控制釋放系統(tǒng)論述于langer的綜述(science249：1527-1533(1990)中。在一些實施方案中，組合物可通過皮下注射施用。
在一些實施方案中，組合物的釋放一陣一陣地進行。一陣一陣進行釋放的系統(tǒng)的實例包括例如組合物俘獲于囊封于聚合物基質(zhì)中的脂質(zhì)體中的系統(tǒng)，脂質(zhì)體對特定刺激(例如溫度、ph值、光或還原酶)敏感；和組合物由具有降解酶的微膠囊核心的經(jīng)離子涂覆微膠囊囊封的系統(tǒng)。
在一些實施方案中，組合物的釋放為逐漸/連續(xù)釋放。抑制劑的釋放為逐漸和連續(xù)釋放的系統(tǒng)的實例包括例如浸蝕系統(tǒng)，其中組合物以于基質(zhì)內(nèi)的形式被包含；和滲出系統(tǒng)，其中組合物例如通過聚合物以控制速率釋放。此類持續(xù)釋放系統(tǒng)可例如呈團?；蚰z囊形式。
根據(jù)本發(fā)明施用的組合物的其它實施方案摻有顆粒形式、保護層、蛋白酶抑制劑或用于各種投藥途徑(諸如非經(jīng)腸、經(jīng)肺、鼻內(nèi)和口服)的滲透增強劑。制備藥物組合物的其它藥物組合物和方法為本領(lǐng)域中已知的，且描述于例如“remington：thescienceandpracticeofpharmacy”(以前為“remingtonspharmaceuticalsciences”)；gennaro，a.，lippincott，williams&wilkins，philidelphia，pa.(2000)中。在一些實施方案中，藥物組合物可還包括藥學上可接受的稀釋劑、賦形劑、載劑或助劑。
所要施用的劑量不受所規(guī)定限制約束，但其通常將為有效量或治療/藥學有效量。術(shù)語“有效量”是指一種或多種化合物提供所需治療結(jié)果的量。有效量可包含于一種或多種劑量內(nèi)，即，單次劑量或多次劑量可為達成所需治療終點所需的。如本文所用的術(shù)語“治療/藥學有效量”是指一種或多種藥劑治療病狀或減輕或預防損傷或損害而任選不會引起顯著負面或有害副作用所需的水平或量。其通常將為以由劑量制劑在活性游離藥物代謝釋放以達成其所需藥理學和生理效應后所產(chǎn)生藥理學活性游離形式的摩爾數(shù)為基礎(chǔ)的當量。在一些實施方案中，組合物可配制成單位劑型。術(shù)語“單位劑型”是指適合作為用于人類受試者和其它哺乳動物的單一劑量的物理離散單元，各單元含有與適合的藥物賦形劑締合的經(jīng)計算產(chǎn)生所需治療效果的預定量的活性材料。
在一些實施方案中，胸腺素的給藥方案包括但絕不限于每個劑量的量、給藥頻率(例如每天、周或月)、每個給藥循環(huán)的總量、給藥時間間隔、給藥變化、每個給藥循環(huán)的模式或修改、最大累積給藥或升溫給藥或其任何組合。在另外一些實施方案中，胸腺素的給藥方案包括給藥頻率，例如每天或每周。
在另一些實施方案中，給藥方案包括與此類劑量的頻率組合的預定或固定的每個劑量的量。舉例來說，胸腺素的給藥方案包括與向受試者施用的此類胸腺素劑量的頻率組合的固定的每個劑量的量。
在一些實施方案中，胸腺素的有效量為可為對應于約0.1-20mg的ta1、約1-10mg的ta1、約2-10mg的ta1、約2-7mg的ta1或約3-6.5mg的ta1的范圍內(nèi)的劑量單位的量，且可包含約1.6、3.2或6.4mg的ta1或約3.2或6.4mg的ta1。劑量單位可每天施用一次，或每天多次。在一些實施方案中，ta1是以每天約0.5-10mg范圍內(nèi)的劑量向受試者施用。在某些實施方案中，ta1劑量在每天約1.5-7mg的范圍內(nèi)或每天約1.6-6.4mg的范圍內(nèi)。在某些實施方案中，ta1劑量在每天約1.7-10mg、每天約1.7-7mg或每天約3-7mg的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，有效劑量包括每天約1.6、3.2或6.4mg。
在一些實施方案中，投藥提供約0.1至1.0ng/ml的胸腺素血清水平。在一些實施方案中，投藥在注射約100ng/ml之后提供峰值血漿水平。在一些實施方案中，循環(huán)中ta1的半衰期為約2小時。
在某些實施方案中，治療方案包括多天包含ta1的藥物組合物，或ta1可在至少一部分所述治療方案期間向受試者施用。
在某些實施方案中，治療方案包括施用藥物組合物持續(xù)約1-10天、約1-20天、約1-30天或更多天的時間段。
在某些實施方案中，治療方案還包括約1-5天、約5-10天、約10-20天、約20-30天或更多天不施用藥物組合物。在一些實施方案中，藥物組合物可每天、每兩天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每周一次施用，持續(xù)約1-10天、約1-20天或更多天，隨后約1-5天、約5-10天不施用胸腺素。
在一些實施方案中，所述方法還包括在投藥之后監(jiān)測受試者的反應，以避免歸因于過度活化和增殖的嚴重和/或致命的免疫介導不良反應。在一些實施方案中，將免疫刺激劑的施用加以修改，諸如如果患者顯示持續(xù)中度不良反應，則減少、暫停或終止。在一些實施方案中，如果患者在從施用第一劑量約1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周或更長時間內(nèi)未能作出反應，則修改劑量。
本發(fā)明的藥物組合物還可緩解與黑素瘤相關(guān)的癥狀中的一種或多種、減輕其嚴重性或降低其發(fā)生率。在一些實施方案中，此類癥狀包括但不限于黑素瘤的早期跡象為現(xiàn)有痣的形狀或顏色的改變，或者在結(jié)節(jié)性黑素瘤的情況下，在皮膚上任何地方出現(xiàn)新的腫塊(此類病變應毫不遲延地向皮膚科醫(yī)生求助)。在更晚期階段，痣可能發(fā)癢、潰爛或流血。黑素瘤的早期跡象包括但不限于形狀不對稱、邊界不規(guī)則、顏色多樣化、直徑大于6mm和隨時間推移而發(fā)展。
在一些實施方案中，本發(fā)明的方法預防轉(zhuǎn)移，或降低轉(zhuǎn)移的速率和/或嚴重性。
本發(fā)明還提供一組生物標記物的活性概況的集合。如本文所用，術(shù)語“活性概況”是指代表一種或多種生物標記物的區(qū)別性特征或特性的一組數(shù)據(jù)。此類特征或特性包括但不限于轉(zhuǎn)錄物豐度、轉(zhuǎn)錄物穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)錄速率、轉(zhuǎn)譯速率、轉(zhuǎn)譯后修飾、蛋白質(zhì)豐度、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和/或蛋白質(zhì)酶活性等。在一些實施方案中，活性概況包含與各生物標記物的基因表達水平有關(guān)的數(shù)據(jù)。在一些實施方案中，包含活性概況的集合是獲自特定受試者群。在一些實施方案中，特定受試者群由臨床上正常的受試者組成。在一些實施方案中，所述群體由對一種或多種本發(fā)明的抗黑素瘤劑有反應的患者組成。在一些實施方案中，所述群體由對一種或多種本發(fā)明的抗黑素瘤劑不敏感的患者組成。
在一些實施方案中，所述集合包含在一個或多個方面中在統(tǒng)計學上均勻、例如在描述活性概況的特征和特性的一個或多個定量或半定量參數(shù)中在統(tǒng)計學上均勻的活性概況。在一些實施方案中，定量參數(shù)包括但不限于轉(zhuǎn)錄物豐度、轉(zhuǎn)錄物穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)錄速率、轉(zhuǎn)譯速率、轉(zhuǎn)譯后修飾、蛋白質(zhì)豐度、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和/或蛋白質(zhì)酶活性等。一組活性概況在一個或多個方面中在統(tǒng)計學上均勻與否可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適合的統(tǒng)計檢驗和/或算法來確定。
在一些實施方案中，生物標記物中的一者或多者響應于治療而增加其活性。在一些實施方案中，生物標記物中的一者或多者響應于治療而降低其活性。在一些實施方案中，生物標記物中的一者或多者響應于治療而保持其活性。如本文所用，生物標記物的活性可為在基因組dna階段、轉(zhuǎn)錄階段、轉(zhuǎn)錄后階段、轉(zhuǎn)譯階段、轉(zhuǎn)譯后階段的參數(shù)，包括但不限于基因活性、rna活性和蛋白質(zhì)活性?；蚧钚钥蔀榛蚩截悢?shù)、基因擴增數(shù)或啟動子活性等。rna活性可為mrna豐度、合成速率和/或穩(wěn)定性等。蛋白質(zhì)活性可為蛋白質(zhì)豐度、合成速率、穩(wěn)定性、酶活性、磷酸化速率、修飾、結(jié)合活性等。
如本文所用，當生物標記物的水平達到預定標準水平的水平準時，稱其為歸一化。
如本文所用，當生物標記物的水平使其離開預定標準水平的水平的速度降低時，稱其為穩(wěn)定化。
在一些實施方案中，確定在受試者中本發(fā)明的一種或多種生物標記物的活性概況，且將其與預定標準水平相比較。如本文所用，術(shù)語“預定標準水平”或“預定活性概況”是指代表在特定群體中一種或多種生物標記物的平均、代表性特征或特性的標準化數(shù)據(jù)或數(shù)據(jù)集。此類特征或特性包括但不限于基因拷貝數(shù)、基因擴增、轉(zhuǎn)錄物豐度、轉(zhuǎn)錄物穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)錄速率、轉(zhuǎn)譯速率、轉(zhuǎn)譯后修飾、蛋白質(zhì)豐度、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和/或蛋白質(zhì)酶活性等。在一些實施方案中，受試者的特定群體是由約5、約10、約20、約50、約100、約200、約300、約400、約500、約1000、約5000、約10k或更多個別受試者組成。預定活性概況可為在受試者的特定群體已全部暴露于藥物之前、期間或之后收集的標準化數(shù)據(jù)或數(shù)據(jù)集。在一些實施方案中，特定群體是由對給定藥物有反應的受試者組成。
在一些實施方案中，當受試者暴露于藥物時，當本發(fā)明的生物標記物中的一者或多者的水平朝向預定標準水平增加或降低時，或者當藥物修改本發(fā)明的一種或多種生物標記物與安慰劑相比的水平變化速度時，受試者對用于治療的藥物“有反應”。關(guān)于與檢測、定量和比較生物標記物水平有關(guān)的方法，參見例如currentprotocolsinmolecularbiology，編者ausubel，frederickm.(2010)；currentprotocolsinproteinsciencelast，編者coligan，johne.等人(2010)；currentprotocolsinnucleicacidchemistry，編者egli，martin(2010)；currentprotocolsinbioinformatics，編者baxevanis，andreasd.(2010)；和molecularcloning：alaboratorymanual，第三版，sambrook，joseph(2001)，全部文獻均以引用的方式整體并入本文中。
在某些實施方案中，當測量生物標記物或其它治療指示物時，“增加”或“降低”量或水平可包括“統(tǒng)計學上顯著的”量。如果一個結(jié)果不可能偶然發(fā)生，則典型地將其稱為統(tǒng)計學上顯著的。檢驗的顯著性水平或結(jié)果傳統(tǒng)上與為接受一個事件不可能偶然產(chǎn)生所需的證據(jù)的量有關(guān)。在某些情況下，統(tǒng)計顯著性可定義為當虛無假設(shè)實際上真實時作出排除虛無假設(shè)的決定(一種稱為i型錯誤或“假陽性確定”的決定)的概率。此決定往往是使用p值來作出：如果p值小于顯著性水平，則排除虛無假設(shè)。p值越小，結(jié)果越顯著。還可使用貝葉斯因子(bayesfactor)來確定(參見例如goodmans.，anninternmed.130：1005-13，1999)。在一些實施方案中，“增加”或“降低”的量或水平比預定標準的量高或低約1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍或50倍，或為一個測定時間點相對于上一個時間點或早期時間點的量。
還提供用于監(jiān)測活性劑在癌癥治療中的功效的方法。這些方法包括測定在來自患者的生物樣品中本發(fā)明的一種或多種生物標記物的活性，且將關(guān)于生物標記物的該信息提供給一個實體，所述實體基于生物標記物信息提供對治療或功效的判定或評估。在一些實施方案中，生物標記物活性是在攝入至少一種劑量的本發(fā)明活性劑期間或在其之后測定。在一些實施方案中，如果人類受試者滿足一個或多個以下所描述的選擇準則，則所述實體可提供應使用或應繼續(xù)使用活性劑進行治療的判定：
·人類受試者在當同一人類受試者在治療之前相比時具有降低水平的il-1β活性，和/或當比較對本發(fā)明的治療有反應的人類受試者或一組人類受試者時具有il-1β活性的歸一化或穩(wěn)定化；
·人類受試者當與同一人類受試者在治療之前相比時具有增加水平的il-4活性，和/或當比較對本發(fā)明的治療有反應的人類受試者或一組人類受試者時具有il-4活性的歸一化或穩(wěn)定化；
·人類受試者當與同一人類受試者在治療之前相比時具有降低水平的il-6活性，和/或當比較對本發(fā)明的治療有反應的人類受試者或一組人類受試者時具有il-1β活性的歸一化或穩(wěn)定化；
·人類受試者當與同一人類受試者在治療之前相比時具有降低水平的il-10活性，和/或當比較對本發(fā)明的治療有反應的人類受試者或一組人類受試者時具有il-1β活性的歸一化或穩(wěn)定化。
用于檢測諸如rna或dna的核酸的水平的方法已充分描述，且為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。用于檢測rna的方法可包括但不限于rt-pcr、northern印跡分析、基因表達分析、微陣列分析、基因表達芯片分析、雜交技術(shù)(包括fish)、表達珠粒芯片陣列和色譜法以及本領(lǐng)域中已知的任何其它技術(shù)。用于檢測dna的方法可包括但不限于pcr、實時pcr、數(shù)字pcr、雜交(包括fish)、微陣列分析、snp檢測測定、snp基因分型測定和色譜法以及本領(lǐng)域中已知的任何其它技術(shù)。
用于檢測蛋白質(zhì)和多肽的方法可包括但不限于蛋白質(zhì)濃度的分光光度測定、定量氨基酸分析、蛋白質(zhì)濃度測定、色譜測定、western印跡分析、凝膠電泳(繼之以包括但不限于考馬斯藍(coomassieblue)、銀染色、賽博綠(sybergreen)、賽博金(sybergold)的染色程序)、雜交、多重細胞因子測定、免疫測定、elisa、二喹啉甲酸(bca)蛋白質(zhì)測定、布拉德福蛋白質(zhì)測定(bradfordproteinassay)和勞里蛋白質(zhì)測定(lowryproteinassay)以及本領(lǐng)域中已知的任何其它技術(shù)。蛋白質(zhì)檢測還可包括檢測穩(wěn)定或活性蛋白質(zhì)的水平，且還可使用諸如以下的方法：動態(tài)測定、激酶測定、酶測定和轉(zhuǎn)譯后修飾測定(例如用于確定磷酸化和糖基化狀態(tài)的測定)。
關(guān)于與檢測、定量和比較生物標記物水平有關(guān)的更多方法，參見例如currentprotocolsinmolecularbiology，編者ausubel，frederickm.(2010)；currentprotocolsinproteinsciencelast，編者coligan，johne.等人(2010)；currentprotocolsinnucleicacidchemistry，編者egli，martin(2010)；currentprotocolsinbioinformatics，編者baxevanis，andreasd.(2010)；和molecularcloning：alaboratorymanual，第三版，sambrook，joseph(2001)，所有所述文獻均以引用的方式整體并入本文中。
在一些實施方案中，關(guān)于生物標記物的信息是獲自一個或多個測試。測試可由受試者自己、由醫(yī)生、由護士、由測試實驗室、由健康護理提供者或能夠進行測試的任何其它參與者來進行。然后，含有生物標記物信息的測試結(jié)果可由相同參與者或由諸如以下的第二參與者進行分析：受試者自己、醫(yī)生、護士、測試實驗室、健康護理提供者、醫(yī)師、臨床試驗員工、醫(yī)院、實驗室、研究所或能夠分析測試以確定受試者是否對藥物有反應的任何其它參與者。
之后實施例說明本發(fā)明的各個方面。當然，所述實施例應理解為僅僅說明本發(fā)明的僅某些實施例，且不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成限制。
實施例
實施例1
在皮下b16f10鼠黑素瘤模型中通過胸腺素治療黑素瘤
b16f10鼠黑素瘤模型是通過連續(xù)選擇轉(zhuǎn)移性克隆而衍生自mb16細胞株。產(chǎn)生b16f1至b16f10(atcc編號crl-6475tm)，其中f10在小鼠中傳代10次，且因此具高度轉(zhuǎn)移性。此模型廣泛用于研究轉(zhuǎn)移機制、評估癌癥治療劑。其也是用于癌癥免疫治療的最常見同基因模型之一。皮下與實驗轉(zhuǎn)移模型均非常適用。
為研究胸腺素在治療黑素瘤中的作用，在兩次分開的研究中向接種b16f10的小鼠施用胸腺素α肽(zadaxin)：
表1.1號研究設(shè)計
表2.2號研究設(shè)計
在整個研究中監(jiān)測腫瘤體積和體重。在分開的歷史對照研究中，向陽性對照組施用順鉑。在所有研究中，陰性對照組僅施用媒介物。
用順鉑處理的b16f10小鼠典型地顯示減小的腫瘤體積(圖1a和表3)。然而，這些小鼠還因順鉑的毒性而具有顯著減輕的體重(圖1b)。
表3用順鉑處理的b16f10小鼠的腫瘤尺寸
用zadaxintm(胸腺法新)進行給藥的具有b16f10衍生腫瘤的動物在所有所測試劑量下均展現(xiàn)與媒介物處理組相比有所減緩的腫瘤生長(圖2和圖3)。
在研究i中，在腫瘤接種后第14天，媒介物處理組的平均腫瘤尺寸(組1)達到1,995mm3。用0.2mg/kg和2mg/kg的ta1處理在腫瘤接種后第14天產(chǎn)生顯著抗腫瘤活性。平均腫瘤尺寸為1,148mm3(t/c值＝57.56％，p值＜0.001)和1,384mm3(t/c值＝69.36％，p值＝0.006)，且在1,140mm3的腫瘤尺寸下腫瘤生長分別延遲1.5和0.5天。用6mg/kg的ta1處理可延遲腫瘤生長，但降低程度未達到顯著差異(p值＝0.146)。此外，0.2mg/kg下的ta1與6mg/kg下的ta1相比產(chǎn)生更佳抗腫瘤活性。
此外，未在組間觀測到顯著重量變化。因此，胸腺素可用于治療黑素瘤。
實施例2
生物標記物研究
在上文所描述的研究中，測試了一組可能的生物標記物，其包括il-7、il-18、trem-1、ifn-α、降鈣素原、gm-csf、il-1α、ifn-γ、tnfα、il-2、il-4、il-5、il-6、il-10、il-12p70和il-1β。在通過媒介物或zadaxintm(胸腺法新)處理的小鼠中的一些特定生物標記物的濃度顯示于圖4a至圖4d中。結(jié)果表明這些生物標記物可用于評估癌癥治療(單一藥劑或組合療法)的功效，以選擇進行有效治療的患者，且優(yōu)化臨床研究或治療的劑量和/或方案。
在另一研究中，通過elisa分析使用不同處理的c57bl/6小鼠中在系統(tǒng)性b16f10鼠黑素瘤模型的血清樣品中的8種細胞因子(ifnγ、il-1β、il-4、il-5、il-6、il-10、il-12、tnfα)。處理為：
1.媒介物，每天兩次，10天，皮下
2.pd-1抗體，每只小鼠100ug，每周兩次，2周，腹膜內(nèi)
3.ta1，每只小鼠0.486ug，每天兩次，10天，皮下
4.ta1，每只小鼠4.86ug，每天兩次，10天，皮下
5.ta1，每只小鼠48.6ug，每天兩次，10天，皮下
6.pd-1抗體+ta1(每只小鼠100ug+每只小鼠0.486ug；每周兩次，2周+每天兩次，10天，腹膜內(nèi)+皮下)
7.pd-1抗體+ta1(每只小鼠100ug+每只小鼠4.86ug，每周兩次，2周+每天兩次，10天，腹膜內(nèi)+皮下)
8.pd-1抗體+ta1(每只小鼠100ug+每只小鼠48.6ug；每周兩次，2周+每天兩次，10天，腹膜內(nèi)+皮下)
9.環(huán)磷酰胺，300mg/kg，每天一次，1天，腹膜內(nèi)
在處理之后小鼠中的這些生物標記物的濃度顯示于圖4e至4l中。結(jié)果表明這些生物標記物可受束縛于胸腺素作用機制，或用作藥效動力學標記物。
實施例3
在b16f10小鼠肺轉(zhuǎn)移黑素瘤模型中通過胸腺素治療黑素瘤
材料和方法
小鼠：在研究第1天雌性b6d2f1/crl小鼠(charlesriver)為9周齡且具有19.2至24.5g的體重范圍。為動物飼喂不限量的水(逆滲透，1ppmcl)和由18.0％粗蛋白、5.0％粗脂肪和5.0％粗纖維組成的經(jīng)nih31改善且經(jīng)照射的lab
體內(nèi)植入：如表1中所示，將測試小鼠分為五個處理組(n＝10)。包括第六組動物作為“查看(look-see)”組(n＝9)。在對數(shù)生長階段期間收獲b16-f10細胞，且以每毫升7.5x105個細胞的濃度再懸浮于pbs中。在研究第1天，各小鼠接受1.5x105個b16-f10細胞(0.2ml細胞懸浮液)靜脈內(nèi)(i.v.)尾部靜脈注射。
測試制品：抗pd1α肽(編號為抗pd-1-sce，批號5177/0214)和胸腺素α-1肽(胸腺法新，編號命名為sr1，批號1402-224)。drs-nc在內(nèi)部測試期間出于保密的目的分配編號名。包括環(huán)磷酰胺(baxterpharmaceutical，批號2e718f，接收于6/7/2013)作為參考對照。sr1是以凍干粉末(90.7％游離堿)形式提供且溶解于pbs中以產(chǎn)生22.051mg/ml給藥溶液，其以10ml/kg的給藥體積提供220.51mg/kg劑量。不根據(jù)體重調(diào)整給藥。將抗pd-1-sce抗體稀釋于pbs中，產(chǎn)生10.0mg/ml給藥溶液，其以10ml/kg的給藥體積提供100mg/kg劑量。不根據(jù)體重調(diào)整給藥。將環(huán)磷酰胺稀釋于鹽水中，產(chǎn)生15.0mg/ml給藥溶液，其以15ml/kg的給藥體積提供300mg/kg劑量。根據(jù)體重調(diào)整給藥。環(huán)磷酰胺是在研究開始時一次性制備且儲存于4℃下。
處理：表4a呈現(xiàn)處理計劃的概述：
組1動物皮下接受pbs(每天兩次直至結(jié)束)且充當對照處理組。
組2以220.51mg/kg(200mg/kg游離堿)皮下接受sr1(每天兩次直至結(jié)束)。
組3接受以100mg/kg腹膜內(nèi)施用的抗pd-1-sce(每周兩次，3周)。
組4接受分別以220.51mg/kg皮下(每天兩次直至結(jié)束)和100mg/kg腹膜內(nèi)(每周兩次，3周)施用的sr1與抗pd-1-sce。
組5設(shè)定為陽性對照組，且以300mg/kg腹膜內(nèi)接受環(huán)磷酰胺(每天一次，1天)。
組6設(shè)定為“查看”動物且未接受處理。
終點：b16met-e117研究的終點定義為每一幅肺(perlungset)100處轉(zhuǎn)移。在第9天開始以三天時間間隔將“查看”組的兩至三只動物安樂死，且對肺遷移性病灶進行計數(shù)。通過將在右肺的上腔、中腔、下腔和后腔靜脈葉中所計算的病灶數(shù)目加上左肺中所計算的病灶數(shù)目獲得總計數(shù)。在第16天終止研究，且將所有動物安樂死且對其轉(zhuǎn)移進行計數(shù)。抑制百分比定義為指定對照組的遷移性病灶數(shù)目與藥物處理組的遷移性病灶數(shù)目之間的差異，以指定對照組的遷移性病灶數(shù)目的百分比表示：
抑制％＝[1-(藥物處理組病灶數(shù)目/對照組病灶數(shù)目)]x100
毒性：在研究的頭五天中的每天和其后每周兩次將動物稱重。經(jīng)常觀測小鼠是否有任何有害、治療相關(guān)副作用的明顯跡象，且當觀測到時，記錄毒性臨床跡象?？山邮艿亩拘远x為在研究期間組平均體重減輕小于20％，且在十個所處理動物中不超過一例治療相關(guān)(tr)死亡。產(chǎn)生較大毒性的任何給藥方案均視為超過最大耐受劑量(mtd)。如果如由臨床跡象和/或尸檢所證實，死亡可歸因于治療副作用，或者如果其歸因于在給藥期期間或最后劑量十四天內(nèi)的未知原因，則將死亡歸類為tr。如果不存在死亡與治療副作用有關(guān)的證據(jù)，則將死亡歸類為非治療相關(guān)(ntr)。
統(tǒng)計和圖解分析：使用用于windows6.02的prism(graphpad)來進行所有圖解表示和統(tǒng)計分析。使用用于分析中值的曼惠特尼u檢驗(mann-whitneyu-test)來確定對照組與處理組中的第16天b16f10遷移性病灶之間的統(tǒng)計顯著性。在p＝0.05下進行雙尾統(tǒng)計分析。創(chuàng)建“盒須”圖來顯示在第16天所計算的各處理組的遷移性病灶的分布。
prism在p＞0.05下將結(jié)果報告為非顯著(ns)，在0.01＜p≤0.05下為顯著(用符號“*”表示)，在0.001＜p≤0.01下為非常顯著(“**”)，且在p≤0.001下為極其顯著(“***”)。由于曼惠特尼u檢驗為對顯著性的檢驗，且不提供對各組之間的差異大小的估計，故在表4b中將各顯著性等級報告為顯著或非顯著。
程序：
·在研究開始之前(1)天植入細胞。
·為59個cr雌性b6d2f1小鼠靜脈注射提供于0％matrigel中的1.5x105個b16met腫瘤細胞
·尾部靜脈。
·細胞注射體積為每只小鼠0.2ml。
·開始日期的年齡：8至12周。
·體重：5/2然后每兩周一次至結(jié)束
·轉(zhuǎn)移計數(shù)：在終點時
·緊接著報告任何不良反應或死亡為rm、sd、rd或sh。
·單次觀測到＞30％體重損失或連續(xù)三次測量到＞25％體重損失的任何個體動物將安樂死。
·平均體重損失＞20％或死亡率＞10％的任一組將停止給藥。
·該組不安樂死且使其恢復。在重量減輕＞20％的組內(nèi)，達到個體體重損失終點的個體將安樂死。若干組處理相關(guān)體重損失恢復至原重量的10％以內(nèi)，則可以較低劑量或較不頻繁的給藥時程恢復給藥。非處理體重恢復％的例外情況可根據(jù)個別情況而被允許。
·終點：每一幅肺約100處轉(zhuǎn)移。
·根據(jù)crl-ncsop#687將垂死動物安樂死。顯示呼吸窘迫跡象的動物還將如上文所述進行安樂死。
腫瘤細胞培養(yǎng)：使b16met細胞在含有10％胎牛血清、10mmhepes、2mm谷氨酰胺、每毫升100單位青霉素g鈉、0.075％碳酸氫鈉、25μg/ml慶大霉素和100μg/ml硫酸鏈霉素的rpmi1640培養(yǎng)基中生長至對數(shù)生長中期。將腫瘤細胞在組織培養(yǎng)燒瓶中在濕潤孵育器中在37℃下在5％co2和95％空氣的氛圍中加以培養(yǎng)。
研發(fā)b16f10小鼠肺轉(zhuǎn)移性黑素瘤模型。使約1.5x105個b16-f10細胞(0.2ml細胞懸浮液)在體外生長且向雌性b6d2f1/crl小鼠靜脈內(nèi)施用(第0天)。在第1天開始用測試藥劑進行給藥。
“查看”未處理組設(shè)定為經(jīng)15天的時間評估轉(zhuǎn)移數(shù)目。在第9天，將“查看”組的三只動物安樂死且對肺轉(zhuǎn)移進行計數(shù)(我們的歷史數(shù)據(jù)表明在此時我們將能夠在未處理小鼠的肺中發(fā)現(xiàn)約＞50處轉(zhuǎn)移)。三天后，檢查另外三只小鼠。當轉(zhuǎn)移計數(shù)達到約50-100計數(shù)時，將研究中的所有組處死且確定最終轉(zhuǎn)移計數(shù)?！安榭础苯M計數(shù)不包括在最終功效分析中。50-100處轉(zhuǎn)移計數(shù)定義為目標數(shù)目，因為個別轉(zhuǎn)移中的大多數(shù)可容易地計數(shù)且轉(zhuǎn)移很少會與計數(shù)中的困難彼此合并。參見圖5。
在一項研究中(研究i)，向小鼠施用媒介物(陰性對照)、環(huán)磷酰胺(陽性對照)、ta1、抗pd-1或ta1+抗pd-1，且評估轉(zhuǎn)移計數(shù)。結(jié)果在下表4b和圖6a和圖6b中給出。
表4a研究1設(shè)計
aμg/動物
媒介物＝pbs
在b16met-e117小鼠中相對于第1天的組平均體重變化百分比顯示于圖6b中。
結(jié)果表明胸腺素使黑素瘤模型中向肺部的轉(zhuǎn)移減少，但在這些特定劑量下不與抗pd-1存在相加作用。
在第二研究(研究ii)中，以不同劑量向小鼠施用媒介物(陰性對照)、環(huán)磷酰胺(陽性對照)、ta1、抗pd-1或ta1+抗pd-1。研究設(shè)計和結(jié)果在以下表5a和表5b中和圖7a至圖7c中給出。
研究ii的處理計劃：在此研究中，根據(jù)表5a中的方案為十三組雌性b6d2f1小鼠給藥。sr1和媒介物各自為每天兩次皮下(s.c.)施用持續(xù)該研究的持續(xù)時間(每天兩次直至結(jié)束)?？筽d1抗體是每周兩次腹膜內(nèi)施用(i.p.)持續(xù)兩周(每周兩次，2周)。腹膜內(nèi)施用單次劑量的環(huán)磷酰胺(每天一次，1天)。表5a呈現(xiàn)處理計劃的概述。
組1動物接受pbs且充當對照處理組。
組2-4分別接受每只小鼠0.4862、4.862和48.62μg(每只小鼠0.441、4.41和44.1μg游離堿)的sr1。
組5和6分別接受以每只小鼠33.33和100μg施用的抗pd-1。
組7-9接受分別與以每只小鼠33μg施用的抗pd-1組合的每只小鼠0.4862、4.862和48.62μg的sr1。
組10-12接受分別與以每只小鼠100μg施用的抗pd-1組合的每只小鼠0.4862、4.862和48.62μg的sr1。
組13設(shè)定為陽性對照組，且以300mg/kg接受環(huán)磷酰胺。
組14設(shè)定為“查看”動物且未接受處理。
表5a研究ii設(shè)計
#-對照組
*-mg/kg
結(jié)果表明在某些劑量下zdx(ta1)+抗pd-1的組合處理的組與單獨用tal或抗pd-1處理的組相比展現(xiàn)較少的轉(zhuǎn)移。此類結(jié)果支持在與抗pd-1抗體組合的功效趨勢下，胸腺素處理可在b16f10鼠肺轉(zhuǎn)移模型中提供轉(zhuǎn)移的正性統(tǒng)計學上顯著減少。
將在各處理下小鼠中的44種生物標記物的活性加以分析。在這些生物標記物之中，若干生物標記物在僅單獨用ta1或抗pd-1處理的小鼠與用ta1與抗pd-1的組合處理的小鼠之間顯示統(tǒng)計學上顯著差異的活性。此類生物標記物包括但不限于載脂蛋白a-i、瘦素、淋巴細胞趨化因子、巨噬細胞集落刺激因子-1(m-csf-1)、單核細胞趨化蛋白-5(mcp-5)、干細胞因子(scf)和血管細胞粘附分子-1(vcam-1)。
在一個獨立實驗室中進行類似研究以證實結(jié)果。結(jié)果顯示于表6和圖8中。有趣的是，在此研究中，抗pd-1不像以上研究一般工作，但ta1與以上研究中一樣。此可歸因于兩個實驗室獲得抗pd-1抗體的批次差異，以及在肺轉(zhuǎn)移模型中b16f10不總是對抗pd-1作出反應的事實。重要的是尤其在低劑量的ta1下抗pd-1與ta1的組合顯示肺轉(zhuǎn)移的統(tǒng)計學上顯著減少，且在另外兩個組合組中存在正性趨勢。因此，這些初步研究證實組合中的兩者的相加作用或可能存在的協(xié)同作用，尤其是當兩者中的一者似乎不作為單一藥劑工作時。
表6在系統(tǒng)性b16f10鼠黑素瘤模型的處理中胸腺法新作為單一藥劑和與pd-1抗體組合的抗腫瘤活性
除非另外定義，否則本文中的所有技術(shù)和科學術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解相同的含義。雖然類似或等效于本文所描述的方法和材料的任何方法和材料均可用于實踐或測試本發(fā)明，但本文描述了優(yōu)選方法和材料。所列舉的所有出版物、專利和專利公開出于所有目的以引用的方式整體并入本文中。
本文所論述的出版物僅僅由于其公開內(nèi)容在本申請?zhí)峤蝗掌谥岸峁?。不應將本文中的任何?nèi)容理解為承認本發(fā)明由于先前發(fā)明而無權(quán)先于此類出版物。
雖然已結(jié)合本發(fā)明的特定實施方案描述了本發(fā)明，但應了解其能夠進一步修改，且本申請意在涵蓋本發(fā)明的任何變化、使用或改進，其大體上遵循本發(fā)明的原理且包括對本發(fā)明的偏離，所述偏離在本發(fā)明所屬技術(shù)內(nèi)在已知或慣用的范圍內(nèi)且可適用于上文所闡述的基本特征且屬于所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
序列表
<110>sciclonepharmaceuticals,inc.
king,roberts.
tuthill,cynthia
blobel,friedhelm
<120>用免疫刺激物治療癌癥
<130>代理人案號scic-113/01wo191485-3185
<150>62/066,862
<151>2014-10-12
<150>62/215,433
<151>2015-09-08
<160>1
<170>patentin版本3.5
<210>1
<211>28
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>胸腺素α1肽
<400>1
seraspalaalavalaspthrsersergluilethrthrlysaspleu
151015
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2025
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