用于治療癡呆癥的藥物組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種用于治療癡呆癥的藥物組合物及其制備方法，所述藥物組合物包括白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯A、C中的任一種或兩種的組合。本發(fā)明提供的含有白果內(nèi)酯的藥物組合物具有多方面的神經(jīng)保護(hù)作用，包括促進(jìn)神經(jīng)生長、改善老年記憶功能、防止老年癡呆的發(fā)生等。實(shí)驗(yàn)表明，在治療癡呆方面，本品對(duì)小鼠記憶障礙有一定改善作用。
【專利說明】用于治療癡呆癥的藥物組合物及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物組合物，具體地說，涉及一種用于治療癡呆癥的藥物組合物 及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 癡呆包括阿爾茨海默氏癥（AD)和腦血管性癡呆（VD)，其中阿爾茨海默氏癥是最 常見的一種癡呆形式，這一神經(jīng)退行性疾病可造成記憶喪失、認(rèn)知功能受損，并最終導(dǎo)致死 亡。AD的臨床治療是一個(gè)尚未攻破的世界性難題，目前臨床上使用的抗癡呆藥物多為對(duì)癥 治療（以改善認(rèn)知功能為主），如膽堿酯酶抑制劑、多肽類、促智藥、抗氧化劑等。所顯示的 效果也只能部分和暫時(shí)改善認(rèn)知功能，但不能阻礙病程的進(jìn)行性過程。由于西藥在治療AD 上表現(xiàn)出治療范圍狹窄、副作用明顯等缺陷，許多研究者開始將目光投向了治療AD的中藥 上來。
[0003] 銀杏內(nèi)酯化合物屬于萜類化合物，由倍半萜內(nèi)酯和二萜內(nèi)酯組成，即白果內(nèi)酯和 銀杏內(nèi)酯A、B、C、J、M，是銀杏葉中一類重要的活性成分。白果內(nèi)酯（hilobalide ;BB)屬 倍半萜內(nèi)酯，是目前從銀杏葉中發(fā)現(xiàn)的唯一的倍半萜內(nèi)酯化合物。銀杏內(nèi)酯A(ginkg〇lide A ;GA)、銀杏內(nèi)酯 B(ginkgolide B ;GB)、銀杏內(nèi)酯 C(ginkgolide C ;GC)、銀杏內(nèi)月旨 M(ginkg〇lideM;GM)、銀杏內(nèi)脂J(ginkgolide J;GJ)為二萜類化合物，其差別在于含有的 羥基數(shù)目和羥基連接的位置不同。
[0004] 銀杏內(nèi)酯分子具有獨(dú)特的十二碳骨架結(jié)構(gòu)，嵌有一個(gè)叔丁基和六個(gè)五元環(huán)，包括 一個(gè)螺壬烷，一個(gè)四氫呋喃環(huán)和三個(gè)內(nèi)酯環(huán)。
[0005] 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，含有白果內(nèi)酯的銀杏內(nèi)酯組合物對(duì)腦血管疾病的治療，具有一定的 作用。在銀杏內(nèi)酯中，銀杏內(nèi)酯B的活性生理活性最強(qiáng)，是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的血小板活化因 子拮抗劑，對(duì)損傷神經(jīng)元也有保護(hù)作用，然而隨著研究的逐漸深入，對(duì)其安全性的研究也日 漸增多。例如，銀杏內(nèi)酯B注射液在Beagle犬的毒代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果顯示，連續(xù)給藥后銀 杏內(nèi)酯B在Beagle犬體內(nèi)出現(xiàn)蓄積，且較高劑量可能對(duì)Beagle犬產(chǎn)生毒性作用，影響其體 內(nèi)藥物代謝過程（參見宋浩靜等，銀杏內(nèi)酯B注射液在Beagle犬藥代及毒代動(dòng)力學(xué)研究， 中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2011年9月第25卷增刊）。
[0006] 注射用銀杏內(nèi)酯B毒性試驗(yàn)研究表明，小鼠靜脈注射銀杏內(nèi)酯B的LD50 (95 %置信 限）為424mg · kg-1(371-552mg · kg-1);對(duì)犬靜脈滴注3個(gè)月，80mg · kg-1 · (Γ1弓丨起肺臟和 腎臟的可逆性毒性反應(yīng)（參見余啟枝等，注射用銀杏內(nèi)酯B毒性試驗(yàn)研究，中國藥師，2011 年第14卷第11期）。
[0007] 白果內(nèi)酯對(duì)血管性癡呆小鼠的保護(hù)研究表明，白果內(nèi)酯具有一定的抗氧化、清除 自由基，擴(kuò)張腦血管，并且能夠改善血管癡呆小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，對(duì)血管性癡呆小鼠中樞 神經(jīng)系統(tǒng)的損害有較明顯的保護(hù)和治療作用（參見黃歡等，白果內(nèi)酯對(duì)血管性癡呆小鼠的 保護(hù)作用，安徽醫(yī)藥，2013年第17卷第3期）。
[0008] 銀杏內(nèi)酯組合物可降低急性不完全性腦缺血大鼠的腦水腫及腦毛細(xì)血管通透性， 降低全腦缺血大鼠的血液黏度，改善血液流變學(xué)指標(biāo)；改善腦組織神經(jīng)細(xì)胞缺血后病理改 變，具有明顯的腦保護(hù)作用（參見陳西娟等，銀杏葉化學(xué)成分及其應(yīng)用研究進(jìn)展，生物質(zhì)化 學(xué)工程，2008年第42卷第4期）。
[0009] CN103494802A公開了白果內(nèi)酯在制備促進(jìn)銀杏二萜類內(nèi)酯抗血小板凝集活性的 藥物中的用途。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的是提供一種用于治療癡呆癥的藥物組合物及其制備方法。
[0011] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種用于治療癡呆癥的藥物組合物，所述藥物組 合物包括白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯A、C中任一種或兩種的組合。
[0012] 所述藥物組合物中：
[0013] (1)白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯A的重量比為6-9:1-4 ;或
[0014] ⑵白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯C的重量比為6-9:1-4;或
[0015] (3)白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯A、C的重量比為6-9:1-4:1-4。
[0016] 本發(fā)明中所述癡呆癥為阿爾茨海默氏癥（AD)或腦血管性癡呆（VD)。優(yōu)選為阿爾 茨海默氏癥。
[0017] 本發(fā)明還提供上述藥物組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0018] 1)取銀杏葉提取物，用有機(jī)溶劑萃取，減壓蒸干即得銀杏總內(nèi)酯；
[0019] 2)將上述銀杏總內(nèi)酯加水溶解后，加樣于D101吸附樹脂，吸附時(shí)間0.5_2h，然后 用10-20%乙醇洗脫1-4個(gè)柱體積，收集洗脫液減壓回收至干，得白果內(nèi)酯粗品；
[0020] 3)取上述白果內(nèi)酯粗品，加入10-80%乙醇，加熱溶解，過濾后，于2-KTC放置 12-48h，析出結(jié)晶；最后在60°C真空條件下烘干，即得。
[0021] 前述制備方法中，步驟1)中所述銀杏葉提取物由黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司 提供，其中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的重量比為1-5:1-2:1-3:1-10。
[0022] 前述制備方法中，步驟1)中所述有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙 酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或異丁醇等中的一種或兩種以上混合。有機(jī)溶劑的加入 量為銀杏葉提取物重量的8-20倍。
[0023] 優(yōu)選地，步驟1)中所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯或丙酮，萃取次數(shù)為1-6次。更優(yōu)選 地，萃取次數(shù)為3次。
[0024] 前述制備方法中，步驟2)中將收集的洗脫液于55-65°C，_0. 09?-0. IMPa條件下 減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。
[0025] 前述制備方法中，步驟3)中向白果內(nèi)酯粗品中加入乙醇，加熱至40°C _70°C溶解， 趁熱過濾。
[0026] 本發(fā)明提供的藥物組合物在使用過程中，其用量范圍為每天0. 5_500mg/kg體重， 優(yōu)選為l_200mg/kg體重。
[0027] 本發(fā)明的用于治療癡呆癥的藥物組合物，還可用于改善記憶障礙。
[0028] 本發(fā)明進(jìn)一步提供上述藥物組合物在制備用于改善記憶障礙的藥物中的應(yīng)用。
[0029] 經(jīng)藥效研究，急性毒性研究及臨床統(tǒng)計(jì)證明，與含有銀杏內(nèi)酯B組分的銀杏內(nèi)酯 組合物相比，本發(fā)明藥物組合物的藥效相當(dāng)，但急性毒性、異常毒性大幅降低，不良反應(yīng)發(fā) 生率亦隨之大為下降。
[0030] 本發(fā)明提供的含有白果內(nèi)酯的銀杏內(nèi)酯組合物具有多方面的神經(jīng)保護(hù)作用，包括 促進(jìn)神經(jīng)生長、改善老年記憶功能、防止老年癡呆的發(fā)生等。實(shí)驗(yàn)表明，在治療癡呆方面，本 品對(duì)小鼠記憶障礙有一定改善作用。

【具體實(shí)施方式】
[0031] 以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例 中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。
[0032] 實(shí)施例1用于治療癡呆癥的藥物組合物（白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯A)及其制備方法
[0033] 取銀杏葉提取物100g (銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的重量比 為1:1:1:1)，加2000ml乙酸乙酯萃取3次，減壓蒸干，即得銀杏總內(nèi)酯；將銀杏總內(nèi)酯用 200ml水溶解，通過D101吸附樹脂，吸附時(shí)間lh，然后用200ml 10%的乙醇洗脫1-4個(gè)柱體 積，收集洗脫液，將收集的洗脫液于60°C，-0. 09MPa條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得白果內(nèi)酯 粗品；將白果內(nèi)酯粗品用400ml80%乙醇加熱至50°C，溶解后趁熱過濾，4°C冷藏放置12h， 析出結(jié)晶，于60°C真空烘干，即得白果內(nèi)酯組合物43g。
[0034] 經(jīng)檢測，總銀杏酸：HPLC法測定總銀杏酸含量小于5ppm。
[0035] 含量：HPLC法測定，按干燥品計(jì)算，含白果內(nèi)酯（C15H180 8) 36. 96g、銀杏內(nèi)酯 八((：2(|!12409) 4.118，且白果內(nèi)酯及銀杏內(nèi)酯六的總量大于95(%。
[0036] 實(shí)施例2用于治療癡呆癥的藥物組合物（白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯C)及 其制備方法
[0037] 取銀杏葉提取物80g(銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的重量比為 5:2:3:10)，加1600ml正丁醇萃取6次，減壓蒸干，即得銀杏總內(nèi)酯；將銀杏總內(nèi)酯用200ml 水溶解，通過D101吸附樹脂，吸附時(shí)間2h，用300mll0%的乙醇洗脫1-4個(gè)柱體積，收集洗 脫液，將收集的洗脫液于55°C，-0. IMPa條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，減壓回收溶劑至干，得 白果內(nèi)酯粗品；將白果內(nèi)酯粗品用300ml60%乙醇加熱至70°C，溶解后趁熱過濾，4°C冷藏 放置24h，析出結(jié)晶，于60°C真空烘干，即得白果內(nèi)酯組合物35g。
[0038] 經(jīng)檢測，總銀杏酸：HPLC法測定總銀杏酸含量小于5ppm。
[0039] 含量：HPLC法測定，按干燥品計(jì)算，含白果內(nèi)酯（C15H180 8) 19. 95g、銀杏內(nèi)酯 A (C2QH2409) 8. 3lg、銀杏內(nèi)酯C (C2QH240n) 4. 98g，且白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A及銀杏內(nèi)酯C總量大 于 95 %。
[0040] 實(shí)施例3用于治療癡呆癥的藥物組合物（白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯C)及其制備方法
[0041] 取銀杏葉提取物l〇〇g (銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的重量比 為1:2:3:10)，加800ml丙酮萃取3次，減壓蒸干，即得銀杏總內(nèi)酯；將銀杏總內(nèi)酯用200ml 水溶解，通過D101吸附樹脂，吸附時(shí)間0. 5h，用200ml20%的乙醇洗脫1-4個(gè)柱體積，收集 洗脫液，將收集的洗脫液于65°C，-0. 09MPa條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，減壓回收溶劑至干， 得白果內(nèi)酯粗品；將白果內(nèi)酯粗品用400ml40%乙醇加熱至60°C，溶解后趁熱過濾，4°C冷 藏放置18h，析出結(jié)晶，于60°C真空烘干，即得白果內(nèi)酯組合物37g。
[0042] 經(jīng)檢測，總銀杏酸：HPLC法測定總銀杏酸含量小于5ppm。
[0043] 含量：HPLC法測定，按干燥品計(jì)算，含白果內(nèi)酯（C15H180 8) 31. 97g、銀杏內(nèi)酯 C (C2QH24On) 3. 55g，且白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯C總量大于95 %。
[0044] 實(shí)施例4用于治療癡呆癥的藥物組合物（白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯C)及 其制備方法
[0045] 取銀杏葉提取物100g (銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的重量 比為3:2:3:8)，加1200ml異丁醇萃取4次，減壓蒸干，即得銀杏總內(nèi)酯；將銀杏總內(nèi)酯用 300ml水溶解，通過D101吸附樹脂，吸附時(shí)間0. 5h，用300ml20%的乙醇洗脫1-4個(gè)柱體積， 收集洗脫液，將收集的洗脫液于65°C，-0. 09MPa條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，減壓回收溶劑 至干，得白果內(nèi)酯粗品；將白果內(nèi)酯粗品用600ml60%乙醇加熱至60°C，溶解后趁熱過濾， 4°C冷藏放置12h，析出結(jié)晶，于60°C真空烘干，即得白果內(nèi)酯組合物33g。
[0046] 經(jīng)檢測，總銀杏酸：HPLC法測定總銀杏酸含量小于5ppm。
[0047] 含量：HPLC法測定，按干燥品計(jì)算，含白果內(nèi)酯（C15H180 8) 17. 24g、銀杏內(nèi)酯 A (C2QH2409) 9. 41g、銀杏內(nèi)酯C (C2QH240n) 4. 70g，且白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A及銀杏內(nèi)酯C總量大 于 95 %。
[0048] 實(shí)驗(yàn)例1白果內(nèi)酯組合物急性毒性研究
[0049] 1.材料與方法
[0050] 1. 1 儀器
[0051] 稱量毒麻藥品天平：S型METTLER TOLEDO,感量：0. lmg ;編號(hào)：GLP146(TC)，瑞士梅 特勒公司。
[0052] 稱量大鼠體重天平：型號(hào)TP-2101，感量：0. lg，編號(hào)：GLP342(A)，北京賽多利斯儀 器系統(tǒng)有限公司。
[0053] 1.2 藥品
[0054] 實(shí)施例2中制備的白果內(nèi)酯組合物。
[0055] 銀杏葉提取物由黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司提供，其中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯 B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的重量比為5:2:3:10。
[0056] 對(duì)比例：參照CN103494802A中的試驗(yàn)例2,銀杏內(nèi)酯AC+白果內(nèi)酯組[銀杏內(nèi)醋 A (含量：5. Omg/ml)，銀杏內(nèi)醋C (含量：5. Omg/ml)白果內(nèi)醋（含量：5. Omg/ml)，銀杏內(nèi)酯 AC與白果內(nèi)酯的重量比為52:48]。
[0057] 1. 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0058] SD大鼠 SPF級(jí)，雌雄各半。
[0059] 1. 4 方法
[0060] 1. 4. 1劑量的選擇：
[0061] 按照預(yù)試驗(yàn)的Dm(最大致死量）和Dn (最小致死量）結(jié)果，白果內(nèi)酯組合物Dm取 1000mg/kg，Dn 取 729mg/kg ;銀杏葉提取物 Dm 取 800mg/kg，Dn 取 582mg/kg ;對(duì)比例組合 物1000mg/kg，Dn取729mg/kg，采用均衡設(shè)計(jì)（即劑量組之間相等劑量間距，每組動(dòng)物數(shù)相 等）。
[0062] 在1000mg/kg與729mg/kg之間，按照劑量間距為1:0. 92分成5個(gè)組。如果白果 內(nèi)酯組合物920mg/kg劑量組大鼠在給藥后至1000mg/kg劑量組給藥前全部死亡，lOOOrng/ kg劑量組大鼠則按照659mg/kg(716mg/kgX0. 92)劑量給藥（表1)。
[0063] 在743mg/kg與508mg/kg之間，按照劑量間距為1:0. 92分成5個(gè)組。如果銀杏葉 提取物680mg/kg劑量組大鼠在給藥后至743mg/kg劑量組給藥前全部死亡,743mg/kg劑量 組大鼠則按照467mg/kg(508mg/kgX0. 92)劑量給藥（表2)。
[0064] 在900mg/kg與667mg/kg之間，按照劑量間距為1:0· 92分成5個(gè)組。如果對(duì)比例 組合物840mg/kg劑量組大鼠在給藥后至900mg/kg劑量組給藥前全部死亡，900mg/kg劑量 組大鼠則按照614mg/kg(667mg/kgX0. 92)劑量給藥（表3)。
[0065] 表1白果內(nèi)酯組合物對(duì)SD大鼠灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)
[0066]

【權(quán)利要求】
1. 一種用于治療癡呆癥的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括白果內(nèi)酯與 銀杏內(nèi)酯A、C中任一種或兩種的組合。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物中： (1) 白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯A的重量比為6-9:1-4;或 (2) 白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯C的重量比為6-9:1-4;或 (3) 白果內(nèi)酯與銀杏內(nèi)酯A、C的重量比為6-9:1-4:1-4。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于，所述癡呆癥為阿爾茨海默氏癥 或腦血管性癡呆癥。
4. 權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述藥物組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 取銀杏葉提取物，用有機(jī)溶劑萃取，減壓蒸干即得銀杏總內(nèi)酯； 2) 將上述銀杏總內(nèi)酯加水溶解后，加樣于D101吸附樹脂，吸附時(shí)間0.5-2h，然后用 10-20%乙醇洗脫1-4個(gè)柱體積，收集洗脫液減壓回收至干，得白果內(nèi)酯粗品； 3) 取上述白果內(nèi)酯粗品，加入10-80%乙醇，加熱溶解，過濾后，于2-10°C放置12-48h， 析出結(jié)晶；最后在60°C真空條件下烘干，即得。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中所述的銀杏葉提取物，其中 銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的重量比為1-5:1-2:1-3:1-10。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中所述有機(jī)溶劑選自乙酸乙 酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或異丁醇中的一種或兩種混 合；有機(jī)溶劑的加入量為銀杏葉提取物重量的8-20倍。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯 或丙酮，萃取次數(shù)為1-6次。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中將收集的洗脫液于 55-65°C，-0. 09?-0. IMPa條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。
9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中向白果內(nèi)酯粗品中加入乙 醇，加熱至40°C -70°C溶解，趁熱過濾。
10. 權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述藥物組合物在制備用于改善記憶障礙的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K31/365GK104042607SQ201410227687
【公開日】2014年9月17日 申請(qǐng)日期:2014年5月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月27日
【發(fā)明者】方同華, 馬麗梅, 李振宇, 周廣紅, 范玉奇, 趙春麗 申請(qǐng)人:黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司