臭靈丹提取物及組合物在抗甲型病毒性流感藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明是一種臭靈丹提取物及其組合物在抗甲型病毒性流感藥物中的應(yīng)用。該臭靈丹提取物對呼吸道甲型病毒性流感病毒有較強的抑制作用。該臭靈丹提取物活性成分用乙醇、甲醇或脂溶性溶劑提取或再萃取、沉淀、層析獲得。本發(fā)明所述的臭靈丹提取物通過細胞病變、血凝效價、RealTimeRT-PCR等一系列實驗，對臭靈丹提取物的樣品進行甲型流感病毒的體外中和作用和增殖抑制作用檢測，臭靈丹提取物及其活性成份具有抗甲型流感病毒活性，具有開發(fā)成單方、復(fù)方抗甲型流感病毒藥物的前景。
【專利說明】臭靈丹提取物及組合物在抗甲型病毒性流感藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說是臭靈丹提取物及其組合物在抗甲型病毒性流感藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]臭靈丹(Laggera Pterodonta (DC.) Benth)為菊科六棱菊屬藥用植物，別名獅子草、臭葉子、六棱菊等，分布于云南、四川、西藏等地，主產(chǎn)于我國云南省，藥源豐富?！对颇现胁菟帯贰ⅰ独ッ髅耖g常用草藥》及《滇南本草》等大量收載了云南民間使用臭靈丹的經(jīng)驗，該藥具有良好的抗菌消炎、清熱解毒的作用，被廣泛用于治療感冒、咽喉炎、支氣管炎、瘧疾等病癥。目前已經(jīng)從該屬植物中鑒定的化合物主要為桉烷型倍半萜及黃酮醇類化合物。
[0003]從植物中發(fā)現(xiàn)天然抗病毒藥物，是開發(fā)抗病毒藥物的重要途徑。臭靈丹藥材資源十分豐富，現(xiàn)已開發(fā)成為抗細菌類的咽喉腫痛、肺熱咳嗽類藥物，但對病毒作用尚無系統(tǒng)基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究。目前未見臭靈丹提取物用于抗甲型病毒性流感的文獻報導(dǎo)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種臭靈丹提取物及其組合物在抗甲型流感病毒中的應(yīng)用，以及所述臭靈丹提取物的提取方法。
[0005]本發(fā)明對臭靈丹進 行藥物活性成分的富集和提取分離，并且進行呼吸道合胞病毒及甲型流感病毒株的體外培養(yǎng)，研究臭靈丹活性成分的體內(nèi)外抗病毒作用，發(fā)揚和利用我國中藥的優(yōu)勢和特色，對有效成分的深入藥理機理研究，進一步尋找具有生物活性的化合物，研制出療效確切、副作用小、經(jīng)濟有效和能廣泛應(yīng)用于臨床的抗甲型病毒性流感的臭靈丹提取物的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明的臭靈丹提取物及其組合物在抗甲型流感病毒中的應(yīng)用是將臭靈丹提取物及其組合物制備成抗甲型病毒性流感的藥物。
[0007]所述的臭靈丹提取物活性成分含以下化合物:3，4-二-O-咖啡酰奎寧酸、3，5- 二 -O-咖啡?？鼘幩?、4，5- 二 -O-咖啡?？鼘幩?、4’，5- 二羥基_6，7- 二甲氧基黃酮、5，6- 二羥基-3，4’，7-三甲氧基黃酮、4’，5- 二羥基-3，6，7-三甲氧基黃酮、5-羥基_3，3’，4’，6，7-五甲氧基黃酮、4’，5-二羥基-3，3’，6，7-四甲氧基黃酮、3’，5-二羥基_3，4’，6，7-四甲氧基黃酮。
[0008]所述的臭靈丹提取物組合物為:臭靈丹提取物可配以貫眾、金銀花、藥用賦形劑組合成藥物組合物。各組份的重量份為:臭靈丹提取物70~80、貫眾10~15、金銀花10~15，必要的藥用賦形劑(其用量可按現(xiàn)有技術(shù))。
[0009]所述藥物為:片劑、膠囊劑、注射劑、氣霧劑、散劑、丸劑、合劑、顆粒劑、沖劑、滴丸劑、膏劑、口服液，或控釋、緩釋、納米制劑。
[0010]所述的臭靈丹提取物的提取方法:用臭靈丹藥材，加入臭靈丹藥材10倍重量乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種，用冷浸或滲濾、回流加熱、超聲提取回收溶劑得到初提物；該初提物按以下方法處理:加初提物2~3倍重量的水，放置2~3小時，濾去不溶物葉綠素、樹脂狀物，水液減壓濃縮，加入濃縮物2~3倍量的無水乙醇，放置4~5小時，濾除醇不溶物；醇溶液再次重復(fù)去除水不溶物，或直接回收溶劑至干得臭靈丹提取物；或者初提物上大孔樹脂柱或活性炭柱,水洗,除去水溶性雜質(zhì),再用20%-95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收溶劑至干即可得臭靈丹提取物；或者初提物溶液通過聚酰胺柱或葡聚糖凝膠柱，依次用水、95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收溶劑至干即可得臭靈丹提取物。
[0011]本發(fā)明所述的臭靈丹提取物通過細胞病變、血凝效價、Real Time RT-PCR等一系列實驗，對臭靈丹提取物的樣品進行甲型流感病毒的體外中和作用和增殖抑制作用檢測，臭靈丹提取物其活性成份具有抗甲型流感病毒活性，具有開發(fā)成單方、復(fù)方抗甲型流感病毒藥物的前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1是3，4- 二 -O-咖啡?？鼘幩峤Y(jié)構(gòu)圖。
[0013]圖2是3，5- 二 -O-咖啡?？鼘幩峤Y(jié)構(gòu)圖。
[0014]圖3是4，5- 二 -O-咖啡?？鼘幩峤Y(jié)構(gòu)圖。
[0015]圖4是4’，5_ 二羥基-6，7-二甲氧基黃酮結(jié)構(gòu)圖。
[0016]圖5是5，6_二羥基_3，4’，7_三甲氧基黃酮結(jié)構(gòu)圖。
[0017]圖6是4’，5-二羥基- 3，6，7-三甲氧基黃酮結(jié)構(gòu)圖。
[0018]圖7是5-羥基-3，3’，4’，6，7_五甲氧基黃酮結(jié)構(gòu)圖。
[0019]圖8是4’，5-二羥基-3，3’，6，7_四甲氧基黃酮結(jié)構(gòu)圖。
[0020]圖9是3’，5_ 二羥基-3，4’，6，7_四甲氧基黃酮結(jié)構(gòu)圖。
[0021]圖10是臭靈丹提取物HPLC色譜圖，所用色譜條件如下:色譜柱:島津VP-ODS 150L X 4.6，流動相:甲醇-0.1%甲酸梯度洗脫(時間O — 40 — 50min ；甲醇30% — 70% — 100% ；0.1% 甲酸 70% — 30% — 0%)，波長:254nm，流速:lml/min，柱溫:30°C。
[0022]圖11是流感病毒感染后病變的MDCK細胞圖，a正常MDCK細胞，b病變MDCK細胞。
[0023]圖12是實驗樣品血凝效價實驗照片。
[0024]圖13是實驗樣品RT-PCR實驗照片)。
[0025]圖14是72N組的擴增曲線。
[0026]圖15是72N組的溶解曲線I。
[0027]圖16是72N組的溶解曲線2。
[0028]圖17是72M組的擴增曲線。
[0029]圖18是72M組的溶解曲線I。
[0030]圖19是72M組的溶解曲線2。
[0031]圖20是96N組的擴增曲線。
[0032]圖21是96N組的溶解曲線I。
[0033]圖22是96N組的溶解曲線2。
[0034]圖23是96M組的擴增曲線。
[0035]圖24是96M組的溶解曲線I。[0036]圖25是96M組的溶解曲線2。
[0037]圖26是各組小鼠每日的體重變化(平均值)。
[0038]圖27是臭靈丹藥物體內(nèi)抗病毒的鼠肺病理檢查(200X)，A:正常對照；B:病毒對照組；C:利巴韋林；D:臭靈丹藥物高劑量組(1600mg/kg.d) ；E:臭靈丹藥物中劑量組(800mg/kg.d) ；F:臭靈丹藥物低劑量組(400mg/kg.d)。
[0039]圖1-9中:1為3，4- 二 _0_咖啡?？鼘幩幔?為3，5_ 二 _0_咖啡酰奎寧酸；3為4，5-二-O-咖啡?？鼘幩幔?為4’，5-二羥基-6，7-二甲氧基黃酮；5為5，6-二羥基-3，4’，7-三甲氧基黃酮；6為4’，5-二羥基-3，6，7-三甲氧基黃酮；7為5-羥基_3，3’，4’，6，7-五甲氧基黃酮；8為4’，5-二羥基-3，3’，6，7-四甲氧基黃酮；9為3’，5- 二羥基-3，4’，6，7-四甲氧基黃酮。
【具體實施方式】
[0040]實施例1:
臭靈丹提取物的提取方法:用臭靈丹藥材，加入臭靈丹藥材10倍重量乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種，用冷浸或滲濾、回流加熱、超聲提取得到初提物；該初提物按以下方法處理:加初提物2倍重量的水，放置2小時，濾去不溶物葉綠素、樹脂狀物，水液減壓濃縮，加入濃縮物2倍量的無水乙醇，放置4小時，濾除醇不溶物；醇溶液再次重復(fù)去除水不溶物，或直接回收溶劑至干得臭靈丹提取物；或者初提物上大孔樹脂柱或活性炭柱，水洗，除去水溶性雜質(zhì)，再用20%-95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收溶劑至干即可得臭靈丹提取物；或者初提物溶液通過聚酰胺柱或葡聚糖凝膠柱，依次用水、95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收溶劑至干即可得臭靈丹提取物。
[0041]所述的臭靈丹提取物活性成分含以下化合物:3，4-二-O-咖啡?？鼘幩?、3，5- 二 -O-咖啡?？鼘幩?、4，5- 二 -O-咖啡?？鼘幩?、4’，5- 二羥基_6，7- 二甲氧基黃酮、5，6- 二羥基-3，4’，7-三甲氧基黃酮、4’，5- 二羥基-3，6，7-三甲氧基黃酮、5-羥基_3，3’，4’，6，7-五甲氧基黃酮、4’，5-二羥基-3，3’，6，7-四甲氧基黃酮、3’，5-二羥基_3，4’，6，7-四甲氧基黃酮。
[0042]以上化合物可以采用以下方法分離得到:
取上述方法得到的臭靈丹提取物用硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(10、:1)，得到廣20的組份；第20組份用C18柱色譜分離，以甲醇-0.1%甲酸梯度洗脫，得到化合物1、2和3 ;第16組份用C18柱色譜分離，以甲醇-水梯度洗脫，得到化合物4、5、8、9 ；7組份用硅膠柱分離，以氯仿-甲醇(95:5)洗脫，得到化合物6 ；5組份用硅膠柱分離，以氯仿洗脫，得到化合物7?；衔?、5、9系首次從臭靈丹得到。
[0043]將上述臭靈丹提取物按現(xiàn)有技術(shù)的方法加藥用賦形劑，制成片劑、膠囊劑、注射劑、氣霧劑、散劑、丸劑、合劑、顆粒劑、沖劑、滴丸劑、膏劑、口服液，或控釋、緩釋、納米制劑。
[0044]實施例2:
臭靈丹提取物可配以貫眾、金銀花、藥用賦形劑組合成藥物組合物。各組份的重量份為(千克):臭靈丹提取物80、貫眾10、金銀花10，必要的藥用賦形劑(其用量可按現(xiàn)有技術(shù)配制)。
[0045]實施例3:臭靈丹提取物藥物組合物各組份的重量份為(千克):臭靈丹提取物70、貫眾15、金銀花15，必要的藥用賦形劑(其用量可按現(xiàn)有技術(shù)配制)。
[0046]實施例4:
臭靈丹提取物藥物組合物各組份的重量份為(千克):臭靈丹提取物75、貫眾15、金銀花10，必要的藥用賦形劑(其用量可按現(xiàn)有技術(shù)配制)。
[0047]將上述臭靈丹提取物藥物組合物加加入必要的藥用賦形劑，制成片劑、膠囊劑、注射劑、氣霧劑、散劑、丸劑、合劑、顆粒劑、沖劑、滴丸劑、膏劑、口服液，或控釋、緩釋、納米制劑。
[0048]以下是臭靈丹提取物對于抗甲型病毒性流感的試驗研究。
[0049]取臭靈丹及其組合物的組方藥物各400克、200克，乙醇提取后回收溶劑，殘留液分別用一定量的石油醚(PE)、乙酸乙酯(EA)、正丁醇(BU)萃取二次，回收溶劑得到臭靈丹提取物和殘留水部分共8個部分。8部分藥品標號如下:A，臭靈丹提取物正丁醇部分、B，臭靈丹提取物乙酸乙酯部分、C，臭靈丹提取物水部分、D，臭靈丹提取物石油醚部分、E，臭靈丹正丁醇部分、F，臭靈丹乙酸乙酯部分、G，臭靈丹水部分、H，臭靈丹石油醚部分。
[0050]刮取適量臭靈丹提取物樣品加乙醇或水溶解成濃度為100ug/ul的母液。對照藥品達菲溶解:取I粒達菲(75mg)，棄膠囊外殼，藥品溶解于750uIMEM中(100ug/uI)。作如下實驗研究。
[0051]—、病毒分離培養(yǎng)和滴度測定
1、MDCK細胞培養(yǎng)方法:DMEM培養(yǎng)基，37°C，5%C02培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。胰酶消化傳代。
[0052]2、病毒擴增條件:
A:配制病毒吸附液:空DMEM+TPCK胰酶(1%)，以此比例配所需用量。
[0053]B:將長至單層的MDCK細胞棄去培養(yǎng)液，PBS洗細胞面3次，加入病毒吸附液，置34土 1°C吸附1-1.5h，每20分鐘搖晃I次，使病毒液均勻作用于細胞面(以T25細胞培養(yǎng)瓶為例每瓶加Iml病毒吸附液)。
[0054]C:配制維持液:在剩余病毒吸附液中補加1%BSA，加適當NaHC03調(diào)節(jié)PH，成為維持液。
[0055]D:向吸附好的培養(yǎng)瓶中補加9ml維持液，34土 1°C培養(yǎng)，3_4天會出現(xiàn)病變。反復(fù)凍融3次后，收取懸液于15ml離心管中，4000rpm離心lOmin，收集上清分裝于1.5ml離心管中，_80°C保存。
[0056]病變程度判斷標準如圖11所示。
[0057]3、病毒滴度測定:
I):病毒梯度稀釋:
取IOul病毒液入ep.管中,加培養(yǎng)基至lml,混勻后取IOOul入新ep.管中,加培養(yǎng)基900ul，即為10-3稀釋度，混勻后從中再取IOOul至新印.管中，加培養(yǎng)基900ul，即為10-4稀釋度，如此依次稀釋至10-8。
[0058]2):將梯度稀釋的病毒液加入96孔板，IOOul/孔。同時設(shè)空白細胞對照(NC)
3):病毒滴度計算-J2小時后取出96孔板，數(shù)病變孔數(shù)。
[0059]在10-廣10-2梯度下8孔完全病變，10-3梯度下6孔病變，10-5梯度下無病變。
[0060]病毒的50%組織細胞感染量(TCID50)計算:TCID50=10_4.25/ml4、病毒血凝效價(HA)測定(微量法):
以現(xiàn)有A型流感病毒毒種測血凝效價。
[0061]抗凝劑配制:(酸性)檸檬酸葡萄糖溶液B (A⑶)
檸檬酸鈉:1.32% (M/V)
檸檬酸:0.48% (M/V)
葡萄糖:1.47% (M/V) 雞血球細胞制備:抗凝劑20ml+新鮮公雞血20ml,混勻后1000rpm*10min離心，棄上清，加入20ml生理鹽水,混勻后1000rpm*10min離心，棄上清，如此洗3遍,獲得雞血球細胞。
[0062]實驗流程:1):在U形板中加生理鹽水50ul/孔，加24孔。其中12孔為陰性對照。
[0063]2):加樣品于第一孔50ul，換新槍頭吹打混勻，取50ul于下一孔，依次對倍稀釋至第12孔，棄去50ul。
[0064]3):雞血按1%稀釋，即Iml雞血+99ml生理鹽水，混勻。
[0065]4):取雞血50ul/孔，加入上述樣品及陰性對照孔中。
[0066]5):置室溫45分鐘~I小時，觀察結(jié)果。
[0067]結(jié)果:病毒的血凝效價為1:1028
5、最適種毒條件探索:
以現(xiàn)有A型流感病毒毒種稀釋各個梯度以摸索最適種毒條件。
[0068]種I塊48孔板，上半部24孔保留病毒液直至產(chǎn)生病變，以模擬中和實驗，下半部24孔種毒后24小時去掉病毒液，加培養(yǎng)基，以模擬抗增殖實驗。以48孔板篩選流感病毒最適種毒濃度。
[0069]觀察種毒后48小時觀察病變結(jié)果、種毒后72小時觀察病變結(jié)果、種毒后96小時觀察病變結(jié)果。
[0070]實驗結(jié)果表明:最適合用于中和實驗和抗增殖實驗的種毒稀釋度為10-廣10-3，擬定以10-2為種毒稀釋度，最適結(jié)果觀測時間為72小時。
[0071]二、對病毒具有中和殺傷作用和增殖抑制作用的臭靈丹提取物藥物粗篩 1、藥物對流感病毒中和殺傷作用:
病毒終稀釋度為10-2，中藥終濃度為5 ug/ml、20ug/ml、50ug/ml、100ug/ml，同時作用
于細胞。
[0072]實驗流程:1)將復(fù)蘇后傳1-2代的MDCK細胞種3塊96孔板，長至單層。
[0073]2)病毒稀釋:取A型流感病毒500ul溶于25ml維持液中，稀釋度為2*10_2。
[0074]3)藥物稀釋:用維持液將藥物稀釋成10 ug/ml、40ug/ml、100ug/ml、200ug/ml四個濃度梯度。
[0075]4) MDCK細胞用PBS洗2遍，將80ul各濃度稀釋的藥液與80ul病毒液混合，接種長滿單層細胞的96孔板，另設(shè)病毒對照C+V、細胞對照C和達菲對照DF。以上每孔設(shè)三個復(fù)孔。將板子于37°C，5%C02培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天觀察記錄病變情況。
[0076]在中和實驗中，病毒陽性對照在種毒后第48小時出現(xiàn)輕微病變，而加藥孔均無，明顯病變；在種毒后72小時，病毒陽性對照18孔有14孔完全病變，乙酸乙酯、石油醚部分、臭靈丹乙酸乙酯、石油醚部分有中和病毒作用。在種毒后96小時，乙酸乙酯部分、石油醚部分病毒陽性對照孔完全病變，藥物有中和病毒作用。
[0077]2、藥物對流感病毒增殖抑制作用:
病毒終稀釋度為10-2，先加入細胞作用24小時后棄掉病毒液，加入中藥。中藥終濃度為 5 ug/ml 、20ug/ml、50ug/ml、100ug/mlo
[0078]實驗流程:1)將復(fù)蘇后傳1-2代的MDCK細胞種3塊96孔板，長至單層。
[0079]2)病毒稀釋:取A型流感病毒400ul溶于39.6ml維持液中，稀釋度為10_2。
[0080]3) MDCK細胞用PBS洗2遍，將病毒液接種長滿單層細胞的96孔板，IOOul/孔，細胞對照孔和藥品對照孔加培養(yǎng)基IOOul/孔，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時。
[0081]4)藥品稀釋:用維持液將8個藥品和達菲稀釋成5 ug/ml、20ug/ml、50ug/ml、100ug/ml四個濃度梯度:
5)培養(yǎng)24小時后將板子中溶液棄盡，加入各濃度稀釋的藥液，細胞對照C和病毒對照C+V加維持液。濃度同4，以上每孔設(shè)三個復(fù)孔。將板子于37°C，5%C02培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天觀察記錄病變情況。
[0082]在增殖抑制實驗中，病毒陽性對照在種毒后第48小時完全出現(xiàn)病變，而加藥孔部分出現(xiàn)病變，組方藥乙酸乙酯部分、臭靈丹乙酸乙酯、石油醚部分有抑制病毒增殖作用；在種毒后72小時，臭靈丹乙酸乙酯、石油醚部分有抑制病毒增殖作用，在種毒后96小時，所有藥品均無抑制病毒增殖作用。
[0083]結(jié)果:乙酸乙酯部分、石油醚部分提取物具有抗流感、保護細胞的作用。在本實驗中達菲無抗流感、保護細胞的·作用，陽性對照不成立。
[0084]三、粗篩的臭靈丹提取物對流感病毒中和殺傷作用和增殖抑制作用研究
1、中和實驗和抗增殖實驗
實驗流程:1)將復(fù)蘇后傳1-2代的MDCK細胞種6塊6孔板，長至單層。
[0085]2)病毒稀釋:取A型流感病毒600ul溶于30ml維持液中，稀釋度為2*10-2。從中取IOml病毒液加入IOml維持液對倍稀釋，稀釋度即為10_2。
[0086]3)藥品稀釋:用維持液將3個樣品稀釋成其最佳濃度(100ug/ml)。
[0087]4)中和試驗:3板長滿單層的MDCK細胞6孔板用PBS洗2遍，每孔加入1.5ml病毒液(稀釋度為2*10-2)，每孔再加入各藥品1.5ml ;病毒對照孔(V)加病毒1.5ml和維持液
1.5ml ;藥品對照孔(O)加藥品1.5ml和維持液1.5ml ;細胞對照孔(C)加維持液3ml。
[0088]5)增殖抑制試驗:3板長滿單層的MDCK細胞6孔板用PBS洗2遍，每孔加入2ml病毒液(稀釋度為10-2)，藥品對照孔和細胞對照孔加入2ml維持液。將板子于37°C，5%C02培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，棄掉病毒液，加入各藥品2ml ;藥品對照孔(O)加藥品2ml ;病毒對照孔(V)和細胞對照孔(C)加維持液2ml。
[0089]2、實驗樣品血凝效價(HA)測定(微量法)
血球吸附試驗步驟見前述，測得的樣品血凝效價結(jié)果見下表:
【權(quán)利要求】
1.一種臭靈丹提取物及其組合物在抗甲型病毒性流感藥物中的應(yīng)用，將臭靈丹提取物及其組合物制備成抗甲型病毒性流感的藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的臭靈丹提取物及其組合物在抗甲型病毒性流感中的應(yīng)用，其特征在于所述的臭靈丹提取物活性成分含以下化合物:3，4-二-O-咖啡?？鼘幩?、3，5- 二 -O-咖啡?？鼘幩?、4，5- 二 -O-咖啡酰奎寧酸、4’，5- 二羥基-6，7- 二甲氧基黃酮、5，6- 二羥基-3，4’，7-三甲氧基黃酮、4’，5- 二羥基_3，6，7-三甲氧基黃酮、5-羥基_3，3’，4’，6，7-五甲氧基黃酮、4’，5-二羥基-3，3’，6，7-四甲氧基黃酮、3’，5-二羥基_3，4’，6，7-四甲氧基黃酮。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的臭靈丹提取物及其組合物在抗甲型病毒性流感中的應(yīng)用，其特征在于所述的臭靈丹提取物組合物為:臭靈丹提取物70~80、貫眾10~15、金銀花10~15，必要的藥用賦形劑組合成藥物組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的臭靈丹提取物及其組合物在抗甲型病毒性流感中的應(yīng)用，其特征在于所 述藥物為:片劑、膠囊劑、注射劑、氣霧劑、散劑、丸劑、合劑、顆粒劑、沖劑、滴丸劑、膏劑、口服液，或控釋、緩釋、納米制劑。
5.如權(quán)利要求1所述的臭靈丹提取物的提取方法，其特征在于用臭靈丹藥材，加入臭靈丹藥材10倍重量乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種，用冷浸或滲濾、回流加熱、超聲提取回收溶劑后得到初提物；該初提物按以下方法處理:加初提物2~3倍重量的水，放置2~3小時，濾去不溶物葉綠素、樹脂狀物，水液減壓濃縮，加入濃縮物2~3倍量的無水乙醇，放置4~5小時，濾除醇不溶物；醇溶液再次重復(fù)去除水不溶物，或直接回收溶劑至干得臭靈丹提取物；或者初提物上大孔樹脂柱或活性炭柱，水洗，除去水溶性雜質(zhì)，再用20%-95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收溶劑至干即可得臭靈丹提取物；或者初提物溶液通過聚酰胺柱或葡聚糖凝膠柱，依次用水、95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收溶劑至干即可得臭靈丹提取物。
【文檔編號】A61P31/16GK103735599SQ201410044424
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月30日
【發(fā)明者】張榮平, 王新華, 夏曉玲, 孫強明, 楊子峰, 于浩飛, 潘錫平 申請人:昆明醫(yī)科大學