專利名稱：用于治療過敏的乳酸菌菌株的食品組合物以及醫(yī)藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是有關(guān)一種食品組合物以及醫(yī)藥組合物，特別是一種包含抗過敏的乳酸菌菌株的食品組合物以及醫(yī)藥組合物。
背景技術(shù)：
一般食用含乳酸菌(LAB)的產(chǎn)品僅具有調(diào)整腸道的健康效果，雖然有數(shù)以萬計(jì)的乳酸菌菌株存在于自然界，但僅有少數(shù)乳酸菌株具有抗過敏的特質(zhì)。少數(shù)這些細(xì)菌株所具有的耐酸與耐膽鹽能力、吸附黏膜表皮細(xì)胞的能力以及在通過腸胃道后仍可存活的能力等特性，是篩選有促進(jìn)健康效果的菌株時(shí)的重要依據(jù)。時(shí)至今日，僅有少數(shù)幾株經(jīng)證明其具有抗過敏健康效果的乳酸菌菌株被確認(rèn)出來，而乳酸菌對身體健康的功能在于菌株(strain) 的特異性而非菌種(species)，此種對于人的身體健康有特殊功效的菌株稱為功能性益生菌(Guidelines for the evaluation of probiotics in food ；Report of j oint FAO/ WHOworking group on drafting guidelines for the evaluation of probiotics in food ；London Ontario，Canada April 30and May l，2002:l_7)o國內(nèi)外有許多乳酸菌與過敏反應(yīng)有關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。在針對乳酸菌減低過敏的能力進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)的研究方面，熱致死的乳酸菌L. plantarum L-137所作的動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)軌蛘T導(dǎo) DBA/2鼠的巨噬細(xì)胞與脾臟細(xì)胞產(chǎn)生IL-12及IFN-Y，并且能抑制已具酪蛋白(casein)專一性的IgE，增加對酪蛋白專一性的IgGl抗體(Murosaki，1998)。針對OVA-TCR-Tg鼠喂食 L. casei Shirota四周，增加脾臟細(xì)胞分泌IFN-γ和IL-12，降低分泌IL-4和IL-5 (Shida et al.，2002)。OVA致敏BALB/c鼠喂食乳酸菌Lactobacillus發(fā)酵奶27天，可降低血清中具有 OVA 特異性 IgE(Ishida et al. ,2003) C3H/Hej 鼠經(jīng) OVA 與霍亂毒素(cholera toxin)致敏，喂食B. bifidum BGN4、L. casei 911，可使血清中具OVA特異性IgE、IgA及總 IgE、IgGl降低(Kim et al.，2005)，這些文獻(xiàn)證實(shí)在過敏模式的動(dòng)物試驗(yàn)上，喂食乳酸菌能夠降低血清中IgE的含量，藉此改善過敏的情形。乳酸菌在臨床實(shí)驗(yàn)上，具有過敏疾病的患者確實(shí)能改善過敏反應(yīng)，合并服用干燥的乳酸菌L. rhamnosus及L. reuteri六周，對過敏疾病有益處，以問卷調(diào)查家長評(píng)估益生菌對一至十三歲兒童異位性皮膚炎，發(fā)現(xiàn)56%的兒童異位性皮膚炎有改善(Rosenfeldt et al.，2003)。Ishida (2005)學(xué)者針對四十九位過敏性鼻炎患者，飲用L. acidophilus strain L-92，也發(fā)現(xiàn)過敏癥狀獲得改善。服用L. fermentum VRI 003 PCCTM八周，五十三位具有異位性皮膚炎癥狀的小孩可以增加PBMC細(xì)胞產(chǎn)生IFN- γ，并改善過敏情形(Prescott et al.，2005)。Foster-Hoist (2006)等學(xué)者研究指出針對五十四位具有異位性皮膚炎患者所作的試驗(yàn)，給予服用L. rhamnosus strain GG及安慰劑后，能有效改善過敏癥狀。研究指出乳酸菌細(xì)胞壁成分具有免疫調(diào)節(jié)能力，包括P印tidoglycans (PG)、 Lipoteichoic acids (LTA)、Phosphopolysaccharide。例如 L. Iactis 細(xì)胞壁中的 Phosphopolysaccharide 能刺激小鼠白血球產(chǎn)生 IFN- y , Teichoic acid 禾口 Muramyl dip印tide 增加刺激 PBMC 產(chǎn)生 IFN-Y (Cross et al. ,2001) ；L. paracasei KW3110 細(xì)胞
3壁成分LTA可影響NF-κ B訊號(hào)傳遞途徑，具有很強(qiáng)的免疫調(diào)控能力(Fujiwara et al., 2004)。益生菌株對于人體具有良好功效性，且有許多可能的機(jī)制被提出說明為何益生菌株對人體有良好的影響。這些機(jī)制大都集中在改善腸道黏膜細(xì)胞屏蔽功能來直接影響人體的免疫系統(tǒng)，例如抑制前發(fā)炎細(xì)胞激素的分泌、影響調(diào)節(jié)型τ細(xì)胞的活性以及調(diào)整Thl/Th2 之間的平衡。在嬰幼兒時(shí)期改善調(diào)整腸胃道共生菌的菌相是十分重要的，許多過敏的嬰幼兒腸道缺乏益生菌菌叢，且腸道菌叢皆存在有較多的產(chǎn)氣夾膜梭菌及較少的雙歧乳桿菌菌叢。因此益生菌叢存在腸道，對于人體的免疫能力建構(gòu)及具備健全的免疫調(diào)控能力是十分重要的關(guān)鍵。然而，對于益生菌影響人體的機(jī)制依舊尚未有定論，針對此點(diǎn)，在未來的發(fā)展上，仍需更多的體外及體內(nèi)試驗(yàn)去說明，對人體有如此良好影響的機(jī)制為何以及研究應(yīng)用于人體上最佳的條件(Michael et al. ,2008)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一方面廣義的包括由下列任一種生物性培養(yǎng)物羅伊氏乳酸桿菌 (Lactobacillus reuteri)GL_104菌株，中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏號(hào)M 209138菌株， 以及生理上可接受的賦形劑或稀釋劑所組成的食品組合物或醫(yī)藥組合物。在另一項(xiàng)具體實(shí)施例中，包括增強(qiáng)抗過敏能力的生理上可接受的下列任一種菌株的同種或突變種的生物性培養(yǎng)物羅伊氏乳酸桿菌(Lactobacillus reuteri)GL-104菌株，中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏號(hào)M 209138。又，另一項(xiàng)具體實(shí)施例中，本發(fā)明可廣義的包括經(jīng)由促進(jìn)細(xì)胞白介素-12 (IL-12) 或干擾素Y (IFN-gamma)調(diào)控Thl型免疫反應(yīng)而抑制免疫球蛋白IgE，改善Th2型過度免疫反應(yīng)的過敏現(xiàn)象，其是對哺乳動(dòng)物給予可達(dá)到刺激Thl型免疫效果劑量的任一種前述生物性培養(yǎng)物。本發(fā)明亦可廣義的包括本申請案說明書中分開或總合說明的部分、構(gòu)成要件與特征，及任何包含這些部分、構(gòu)成要件與特征中任何一種或多種的任何或全部組合，且若本文所述及的明確完整事物已于與本發(fā)明有關(guān)的相關(guān)技藝中出現(xiàn)已知的同等物時(shí)，這些已知的同等物將如同獨(dú)立事項(xiàng)并入本文中。


圖1顯示，當(dāng)分別以IO6至IO8Cfu的羅伊氏乳酸桿菌GL-104菌株M 209138與 IO5至IO7個(gè)小鼠脾臟細(xì)胞(Splenocyte)共同培養(yǎng)48小時(shí)，收取細(xì)胞上清液，以酶聯(lián)免疫分析法偵測干擾素Y (IFN-gamma)在上清液中的含量。其中以無抗過敏功能乳酸菌 (Lactobacillus casei BCRC17001)及實(shí)驗(yàn)背景值(Cell only)為負(fù)對照組，以發(fā)表多數(shù)文獻(xiàn)證明其有抗過敏功效的乳酸菌(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)及PHA 為正對照組，偵測干擾素Y受刺激濃度。結(jié)果顯示試驗(yàn)組可以顯著的刺激小鼠脾臟細(xì)胞 (Splenocyte)分泌干擾素Y與負(fù)對照組(Lactobacillus casei BCRC17001)有顯著性差異并比正對照組(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出近4倍。圖2顯示，當(dāng)分別以IO6至IO8Cfu的羅伊氏乳酸桿菌GL-104菌株M 209138與 IO5至IO7個(gè)人類外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)共同培養(yǎng)48小時(shí)，收取細(xì)胞上清液，以酶聯(lián)免疫分析法偵測干擾素Y (IFN-gamma)在上清液中的含量。其中以無抗過敏功能乳酸菌 (Lactobacillus casei BCRC17001)及實(shí)驗(yàn)背景值(Cell only)為負(fù)對照組，以發(fā)表多數(shù)文獻(xiàn)證明其有抗過敏功效的乳酸菌(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)及PHA為正對照組，偵測干擾素Y受刺激濃度。結(jié)果顯示試驗(yàn)組可以顯著的刺激人類外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)分泌干擾素Y與負(fù)對照組(Lactobacillus casei BCRC17001)有顯著性差異并比正對照組(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出 2. 2 倍。圖3顯示，當(dāng)分別以熱致死IO6至IO8Cfu的羅伊氏乳酸桿菌GL-104菌株M 209138 與IO5至IO7個(gè)人類樹突狀細(xì)胞(dendritic cell)共同培養(yǎng)48小時(shí)，收取細(xì)胞上清液，以酶聯(lián)免疫分析法偵測細(xì)胞白介素12p40在上清液中的含量。其中以無抗過敏功能乳酸菌 (Lactobacillus casei BCRC17001)及實(shí)驗(yàn)背景值(Cell only)為負(fù)對照組，以發(fā)表多數(shù)文獻(xiàn)證明其有抗過敏功效的乳酸菌(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)及LPS為正對照組，偵測細(xì)胞白介素12p40(IL-12p40)受刺激濃度。結(jié)果顯示試驗(yàn)組可以顯著的刺激人類樹突狀細(xì)胞分泌細(xì)胞白介素12p40(IL-12p40)與負(fù)對照組(Lactobacillus casei BCRC17001)有顯著性差異，并比正對照組(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出2倍。圖4顯示，羅伊氏乳酸桿菌GL-104菌株M 209138在培養(yǎng)基的活化后，總菌數(shù)經(jīng)由模擬胃酸溶液及膽鹽溶液處理不同時(shí)間，羅伊氏乳酸桿菌GL-104菌株M 209138的菌數(shù)并不受胃酸及膽鹽影響而急劇下降，證明本發(fā)明的抗過敏乳酸菌菌株可以通過人體消化系統(tǒng)嚴(yán)格環(huán)境的考驗(yàn)。圖5顯示，依據(jù)Jacobsen等學(xué)者(1999)的分析方法，當(dāng)每個(gè)視野的平均菌數(shù)少于 40時(shí)，判定為不附著(nonadhesive)；當(dāng)每個(gè)視野的平均菌數(shù)介于41至100時(shí)，判定為附著 (adhesive)；當(dāng)每個(gè)視野的平均菌數(shù)大于100時(shí)，判定為強(qiáng)烈附著(strongly adhesive) 0 顯示羅伊氏乳酸桿菌GL-104菌株M 209138判定為“強(qiáng)烈附著”。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明一方面廣義的包括下列生物性培養(yǎng)物羅伊氏乳酸桿菌(Lactobacillus reuteri) GL-104菌株，中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏號(hào)M 209138，以及生理上可接受的賦形劑或稀釋劑所組成的食品組合物或醫(yī)藥組合物。許多文獻(xiàn)指出增加第一型T細(xì)胞細(xì)胞激素包括細(xì)胞白介素(IL-12)、干擾素 Y (IFN-gamma)的分泌增加，可以有效改善過敏癥狀；進(jìn)一步的研究也指出特定的乳酸菌株和樹突狀細(xì)胞上類鐸受體(Toll-like receptor)結(jié)合，活化細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)譯蛋白移至核內(nèi)而釋放大量細(xì)胞激素，屬于先天免疫的一環(huán)，因此某些特定的乳酸菌菌株藉由其細(xì)胞壁多糖類物質(zhì)如肽聚糖(peptidoglycan)、多聚糖(polysaccharide)等，經(jīng)先天免疫系統(tǒng)，確實(shí)能活化體內(nèi)T細(xì)胞的發(fā)育。本發(fā)明所述的菌株的冷凍干燥培養(yǎng)物已保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址為中國，武漢，武漢大學(xué)430072。保藏的詳細(xì)資料如表1所示表 權(quán)利要求
1.一種食品組合物，包含刺激免疫細(xì)胞分泌抗過敏相關(guān)細(xì)胞激素的乳酸菌菌株羅伊氏乳酸桿菌 (Lactobacillus reuteri) GL-104菌株，中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏號(hào)M 209138;以及生理上可接受的賦形劑或稀釋劑。
2.如權(quán)利要求1所述的食品組合物，其中該賦形劑或稀釋劑為一種食品。
3.如權(quán)利要求2所述的食品組合物，其中該食品包含發(fā)酵乳、酸奶、奶酪、乳制飲品乳粉、茶、咖啡或以上的組合。
4.如權(quán)利要求1所述的食品組合物，其中該乳酸菌菌株為具有活性或去活性 (inactivated)的菌株。
5.一種用于治療過敏的醫(yī)藥組合物，包含刺激免疫細(xì)胞分泌抗過敏相關(guān)細(xì)胞激素的乳酸菌菌株羅伊氏乳酸桿菌 (Lactobacillus reuteri) GL-104菌株，中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏號(hào)M 209138;以及醫(yī)藥上可接受的賦形劑或稀釋劑。
6.如權(quán)利要求5所述的醫(yī)藥組合物，其中該乳酸菌菌株為具有活性或去活性 (inactivated)的菌株。
全文摘要
本發(fā)明是有關(guān)新穎的乳酸菌菌株及含過去未知可用于增進(jìn)它抗過敏能力的該菌株的新穎組合物，該組合物可呈食品或醫(yī)藥組合物形式存在。其中亦說明如何篩選測定該乳酸菌株組合物而增進(jìn)Th1型免疫能力藉此調(diào)控因過敏而反應(yīng)過度的Th2型的免疫反應(yīng)的方法。
文檔編號(hào)A61P37/08GK102309001SQ20101022673
公開日2012年1月11日 申請日期2010年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月1日
發(fā)明者蔡宜鈞, 謝佩珊, 郭仲偉 申請人:豐華生物科技股份有限公司