專利名稱：治療腫瘤的棉酚靜脈注射脂肪乳劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗腫瘤藥物組合物，特別涉及一種含棉酚的靜脈注射制劑。
背景技術(shù)：
棉酚(gossypol)，又稱為棉籽醇，是一種黃色的酚類化合物，天然存在于錦葵科棉 屬植物棉花的種子、葉、莖及根部等器官中的。常溫下，棉酚呈黃色結(jié)晶，易溶于乙醇、乙醚、 丙酮、三氯甲烷等有機(jī)溶劑，亦溶于油脂，但不溶于水、己烷及低沸點(diǎn)的石油醚，其中大部分 有機(jī)溶劑對(duì)人體毒性較大，不適于作為藥物載體。棉酚作為男性節(jié)育藥已為人們所熟知。近年來，其抗腫瘤作用日益也受到重視，其 對(duì)腫瘤細(xì)胞的具有廣泛的殺傷作用如子宮肌瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、肝癌、喉癌、頭頸 部腫瘤、膠質(zhì)瘤等。棉酚作為一種廣譜抗腫瘤藥物，具有來源豐富、成本低等優(yōu)勢(shì)，并可與化學(xué)治療、 放射治療等發(fā)揮協(xié)同治療作用。我國(guó)是產(chǎn)棉大國(guó)，棉酚來源豐富，加強(qiáng)棉酚腫瘤制劑的研發(fā) 將具有良好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。目前上市的棉酚制劑只有醋酸棉酚口服制劑，作口服男用避孕藥或用于治療婦科 疾病，包括月經(jīng)過多或失調(diào)、子宮內(nèi)膜異位癥等。但由于棉酚及醋酸棉酚不溶于水，其口服 制劑生物利用度低，對(duì)胃腸道刺激性食欲減退、惡心、嘔吐等胃腸道反應(yīng)，并出現(xiàn)“峰谷”現(xiàn)象。中國(guó)專利200510022777. 9 (申請(qǐng)人沈陽藥科大學(xué)，公開號(hào)CN1827117，
公開日
2006年09月06日，授權(quán)公告日期2009年12月16日)公開了一種醋酸棉酚緩釋片劑將 醋酸棉酚加入緩釋材料形成緩釋制劑避免出現(xiàn)“峰谷”現(xiàn)象，用于解決“峰谷”現(xiàn)象。但緩釋 制劑在加入眾多緩釋輔料后其載藥量受限且仍無法避免其對(duì)胃腸道的刺激作用。而醋酸棉 酚用于治療腫瘤的劑量相對(duì)較高，美國(guó)專利US5385936(申請(qǐng)日期1990年7月12日，公開 日1995年1月31日)公開的醋酸棉酚用于腫瘤的治療方法表明，醋酸棉酚用于治療腫瘤 的人用劑量為40-100mg/天。其一期臨床試驗(yàn)中對(duì)部分腫瘤劑量達(dá)到70mg/天仍無效果。 可見醋酸棉酚單位劑量至少為40-60mg，才能減少患者給藥次數(shù)并獲得較好的療效。并且上 述制劑無法實(shí)現(xiàn)靶向性給藥。脂肪乳劑是一種可以顯著提高藥物溶解度的藥物劑型，對(duì)改善水難溶性藥物的載 藥量及藥劑學(xué)特征具有很大幫助，目前國(guó)內(nèi)已研究了幾種藥物的脂肪乳劑。但是由于不同 藥物如要獲得穩(wěn)定的脂肪乳劑，對(duì)輔料即藥物載體的種類及用量的要求存在較大差異，需 要對(duì)組方進(jìn)行大量篩選實(shí)驗(yàn)才能獲得最佳的藥物載體及配比。目前，現(xiàn)有技術(shù)中并沒有關(guān) 于棉酚的脂肪乳劑的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種用于治療腫瘤的棉酚靜脈注射制劑，具體 地說是一種棉酚靜脈注射脂肪乳劑。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種治療腫瘤的棉酚靜脈注射脂肪乳劑，每IOOOml由以下組分組成棉酚的藥用 鹽40 80g，油酸乙酯或中鏈脂肪酸甘油三酸酯200 300g (作為油相)，大豆卵磷脂30 50g (作為表面活性劑)，無水乙醇或PEG400 10 40g (作為助表面活性劑)，余量為水。所述棉酚靜脈注射脂肪乳劑乳滴平均粒徑為70 150nm。
所述棉酚的藥用鹽為醋酸棉酚或甲酸棉酚。所述中鏈脂肪酸是指C8 ClO的脂肪酸。本發(fā)明的棉酚靜脈注射脂肪乳劑可以通過以下方式制備(1)將棉酚的藥用鹽溶于乙醚后與油相及表面活性劑和助表面活性劑加熱下攪拌 混勻，減壓蒸發(fā)去掉乙醚作為油相藥液，恒溫加熱備用；(2)將適量滅菌注射用水加熱至60 70°C，作為水相液；(3)在恒溫下將油相藥液緩慢滴入水相液，邊加入邊攪拌，至形成透明均一的溶 液，用滅菌注射用水定容，然后用均質(zhì)機(jī)反復(fù)勻化，即得。另外，制備時(shí)，也可將部分助表面活性劑與滅菌注射用水混合后作為水相液；還可 將棉酚的藥用鹽直接與油相及表面活性劑和助表面活性劑混合均勻作為油相，而不使用乙醚。本發(fā)明的棉酚脂肪乳劑經(jīng)研究表明，其藥物載體按照所述用量使用時(shí)對(duì)棉酚的載 藥量顯著高于口服制劑及普通注射制劑，每毫升棉酚靜脈注射制劑對(duì)棉酚的藥用鹽的載藥 量最大可達(dá)到90毫克，且穩(wěn)定均一，不易出現(xiàn)藥物結(jié)晶析出或分層。本發(fā)明的棉酚靜脈注 射制劑與口服制劑相比生物利用度顯著提高，乳滴平均粒徑為70 150nm時(shí)穩(wěn)定性最佳， 具有緩釋效果，且對(duì)腫瘤組織有顯著的靶向性，可避免藥物對(duì)胃腸道的刺激。本制劑制備工 藝簡(jiǎn)單，利于工業(yè)化生產(chǎn)。綜上，本發(fā)明具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。


圖1為醋酸棉酚靜脈注射脂肪乳劑大鼠單次尾靜脈注射后的藥時(shí)曲線；圖2為醋酸棉酚靜脈注射脂肪乳劑荷瘤小鼠單次尾靜脈注射后的組織含量。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明實(shí)施例1醋酸棉酚靜脈注射脂肪乳劑的配制組方醋酸棉酚 40g油酸乙酯 207g大豆卵磷脂35g無水乙醇 18g_無菌注射用水至IOOOml制備將處方量醋酸棉酚溶于乙醚，然后在60°C恒溫水浴下加入油酸乙酯、大豆卵磷脂、無水乙醇，邊加入邊攪拌，攪拌速度為1600rpm，攪拌2小時(shí)，減壓蒸發(fā)去掉乙醚，作為油相藥液，60°C恒溫水浴保存?zhèn)溆?；將適量滅菌注射用水，60°C恒溫水浴保存作為水相液；在60°C恒溫下將油相液緩慢滴入水相液，邊加入邊攪拌，攪拌速度為2200rpm，攪 拌1小時(shí)至形成透明均一的溶液，用滅菌注射用水定容至1000ml，然后用均質(zhì)機(jī)(NS10012k 高壓均質(zhì)機(jī)，意大利Niro Soavi S. p. Α.公司)60Mpa下反復(fù)勻化5次，0. 45 μ m微孔濾膜過 濾。分裝成1000份，滅菌保存。所得樣品，乳滴平均粒徑為104nm，包封率為87.2%。實(shí)施例2醋酸棉酚靜脈注射脂肪乳劑的配制組方醋酸棉酚60g油酸乙酯220g大豆卵磷脂43gPEG400 35g_無菌注射用水至IOOOml制備將處方量醋酸棉酚溶于乙醚，然后在70°C恒溫水浴下加入油酸乙酯、大豆卵磷脂、 PEG400,邊加入邊攪拌，攪拌速度為1700rpm，攪拌1. 5小時(shí)，減壓蒸發(fā)去掉乙醚，作為油相 液，70°C恒溫水浴保存?zhèn)溆茫粚⑦m量滅菌注射用水70°C恒溫水浴保存作為水相液；在70°C恒溫下將油相液緩慢滴入水相液，邊加入邊攪拌，攪拌速度為2000rpm，攪 拌1小時(shí)至形成透明均一的溶液，用滅菌注射用水定容至1000ml，然后用均質(zhì)機(jī)(NS10012k 高壓均質(zhì)機(jī)，意大利Niro Soavi S. p. Α.公司)60Mpa下反復(fù)勻化6次，0. 45 μ m微孔濾膜過 濾。分裝成1000份，滅菌保存。所得樣品，乳滴平均粒徑為142nm，包封率為93. 6 %。實(shí)施例3醋酸棉酚靜脈注射脂肪乳劑的配制組方醋酸棉酚80g中鏈脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯297g大豆卵磷脂36gPEG400 29g_無菌注射用水至IOOOml制備將處方量醋酸棉酚溶于乙醚，然后在70°C恒溫水浴下加入中鏈脂肪酸(C8-C10) 甘油三酸酯、大豆卵磷脂、PEG400，邊加入邊攪拌，攪拌速度為ISOOrpm，攪拌2小時(shí)，減壓蒸 發(fā)去掉乙醚，作為油相液，70°C恒溫水浴保存?zhèn)溆?；將適量滅菌注射用水70°C恒溫水浴保存作為水相液；
在70°C恒溫下將油相液緩慢滴入水相液，邊加入邊攪拌，攪拌速度為2400rpm，攪 拌1小時(shí)至形成透明均一的溶液，用滅菌注射用水定容至1000ml，然后用均質(zhì)機(jī)(NS10012k 高壓均質(zhì)機(jī)，意大利Niro Soavi S. p. Α.公司)40Mpa下反復(fù)勻化6次，0.45 μ m微孔濾膜過 濾。分裝成1000份，滅菌保存。所得樣品，乳滴平均粒徑為93nm，包封率為97. 4%。實(shí)施例4醋酸棉酚靜脈注射脂肪乳劑的配制組方醋酸棉酚50g中鏈脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯242g大豆卵磷脂47g無水乙醇24g_無菌注射用水至IOOOml制備70°C恒溫水浴下將處方量醋酸棉酚與中鏈脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯、大豆卵 磷脂、無水乙醇(15g)混合，邊加入邊攪拌，攪拌速度為ISOOrpm，攪拌1小時(shí)，作為油相液， 70°C恒溫水浴保存?zhèn)溆?；將適量滅菌注射用水，加入剩余量無水乙醇，70°C恒溫水浴保存作為水相液；在70°C恒溫下將油相液緩慢滴入水相液，邊加入邊攪拌，攪拌速度為2000rpm，攪 拌1小時(shí)至形成透明均一的溶液，用滅菌注射用水定容至1000ml，然后用均質(zhì)機(jī)(NS10012k 高壓均質(zhì)機(jī)，意大利Niro Soavi S. p. Α.公司)50Mpa下反復(fù)勻化6次，0. 45 μ m微孔濾膜過 濾。分裝成1000份，滅菌保存。所得樣品，乳滴平均粒徑為129nm，包封率為80. 1 %。實(shí)施例5甲酸棉酚靜脈注射脂肪乳劑的配制組方甲酸棉酚6Og中鏈脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯263g大豆卵磷脂35g無水乙醇20g_無菌注射用水至IOOOml制備70°C恒溫水浴下將處方量甲酸棉酚與中鏈脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯、大豆卵 磷脂、無水乙醇混合，邊加入邊攪拌，攪拌速度為1600rpm，攪拌2小時(shí)，作為油相液，70°C恒 溫水浴保存?zhèn)溆?；將適量滅菌注射用水，70°C恒溫水浴保存作為水相液；在70°C恒溫下將油相液緩慢滴入水相液，邊加入邊攪拌，攪拌速度為2400rpm，攪 拌1小時(shí)至形成透明均一的溶液，用滅菌注射用水定容至1000ml，然后用均質(zhì)機(jī)(NS10012k 高壓均質(zhì)機(jī)，意大利Niro Soavi S. p. Α.公司)40Mpa下反復(fù)勻化5次，0. 45 μ m微孔濾膜過濾。分裝成1000份，滅菌保存。所得樣品，乳滴平均粒徑為87nm，包封率為79. 4%。實(shí)施例6醋酸棉酚靜脈注射脂肪乳劑在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)Wister大鼠12只，180_240g，雌雄各半實(shí)驗(yàn)前禁食一夜，隨機(jī)分為2組，每組6只，實(shí)驗(yàn)組單次尾靜脈注射給予實(shí)施例1所制靜脈注射脂肪乳劑(以醋酸棉酚40mg/kg體重給 藥)，對(duì)照組將醋酸棉酚混懸與0. 25%的羧甲基纖維素制成混懸液經(jīng)口灌胃給藥(以醋酸 棉酚40mg/kg體重給藥)。給要后第0、30、60分鐘及第2、8、16、24小時(shí)分別采血測(cè)定血漿中醋酸棉酚含量， 繪制藥時(shí)曲線圖，結(jié)果見圖1。從藥時(shí)曲線圖可見，靜脈注射脂肪乳劑具有顯著的緩釋特點(diǎn)， 且生物利用度顯著高于口服給藥。實(shí)施例7醋酸棉酚靜脈注射脂肪乳劑在荷瘤小鼠體內(nèi)的組織分布實(shí)驗(yàn)荷Lewis肺癌C-57模型小鼠由陜西中醫(yī)研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購得，C-57小鼠由第 四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，4-6周齡，體重15-25g，共60只，雄性。將模型的腫瘤剪下， 研磨制成細(xì)胞勻漿，接種于C-57實(shí)驗(yàn)小鼠右前肢根部腹側(cè)皮下，每只接種2. OX IO7個(gè)腫瘤 細(xì)胞，總體積0.20ml。2周后腫塊長(zhǎng)大，用于實(shí)驗(yàn)。將荷瘤小鼠隨機(jī)分為2組，每組30只，實(shí)驗(yàn)組單次尾靜脈注射給予實(shí)施例2所制 靜脈注射脂肪乳劑(以醋酸棉酚40mg/kg體重給藥)，對(duì)照組將醋酸棉酚混懸于0. 25%的 羧甲基纖維素制成混懸液經(jīng)口灌胃給藥(以醋酸棉酚40mg/kg體重給藥)。給藥后1、2、8、 12、16、24小時(shí)每組各處死5只小鼠，取出腫瘤組織及心、肝、脾、肺、腎、腦測(cè)定其組織含量。 根據(jù)組織中藥物的濃度及組織重量計(jì)算其相對(duì)含量，結(jié)果見圖2。由組織分布圖可見醋酸棉酚靜脈注射劑給藥后腫瘤組織中醋酸棉酚含量顯著高 于經(jīng)口給藥制劑。醋酸棉酚靜脈注射脂肪乳劑對(duì)腫瘤組織具有一定的靶向性。實(shí)施例8醋酸棉酚靜脈注射脂肪乳劑的毒性實(shí)驗(yàn)SPF級(jí)KM小鼠100只，體重為30 40g，雌雄各半隨機(jī)分為5組每組20，實(shí)驗(yàn)組 三組，分別尾靜脈注射給予實(shí)施例1、3、4所制靜脈注射劑(以醋酸棉酚80mg/kg體重給 藥)，陽性對(duì)照組對(duì)照組將醋酸棉酚混懸于0. 25%的羧甲基纖維素制成混懸液經(jīng)口灌胃給 藥(以醋酸棉酚80mg/kg體重給藥)，空白對(duì)照組尾靜脈注射給予生理鹽水，2ml/只，每日 給藥1次，連續(xù)給藥7天，給藥期間及給藥后1-7天每日進(jìn)行進(jìn)行大體觀察、血液學(xué)、血生 化、尿生化檢查，給藥后第1、3、5、7天每天各組每天處死5只動(dòng)物進(jìn)行病理解剖，光學(xué)顯微 鏡下進(jìn)行病理檢查。大體觀察發(fā)現(xiàn)陽性對(duì)照組給藥后嘔吐發(fā)生率為65%，實(shí)驗(yàn)組嘔吐發(fā)生率為5% (實(shí)施例1所制靜脈注射劑)、0% (實(shí)施例3所制靜脈注射劑)、0% (實(shí)施例4所制靜脈注 射劑)，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組二者相比均差異顯著(P < 0. 05)。且實(shí)驗(yàn)組嘔吐癥狀相對(duì)較輕。 實(shí)驗(yàn)組與陽性對(duì)照組低血鉀癥狀發(fā)生率分別為35%實(shí)施例1所制靜脈注射劑)、20% (實(shí) 施例3所制靜脈注射劑)、40% (實(shí)施例4所制靜脈注射劑)、80%，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組二者 相比均差異顯著(ρ <0.05)。。病理解剖未見顯著的組織損傷。空白對(duì)照組無異常癥狀。結(jié)果表明棉酚靜脈注射脂肪乳劑靜脈給藥的不良反應(yīng)發(fā)生率顯著低于口服給藥。 其較低的胃腸道刺激性與給藥途徑有關(guān)，而較低的低血鉀發(fā)生率可能與藥物的釋放速度較 慢等有關(guān)。
實(shí)施例9棉酚靜脈注射脂肪乳劑的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)施例1-5所得靜脈注射脂肪乳劑進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。(1)強(qiáng)光照射試驗(yàn)將棉酚靜脈注射脂肪乳劑在40001x光照下分別放置5天和10 天后進(jìn)行觀測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與放置前相比，注射劑仍保持澄清透明，未見油水分層。(2)高濕度試驗(yàn)將棉酚靜脈注射脂肪乳劑放在密閉器皿中分別于25%、75%及 92. 5%相對(duì)濕度條件下放置，5天和10天后考察穩(wěn)定性。與放置前相比，靜脈注射劑仍保持 澄清透明，未見油水分層。(3)高溫試驗(yàn)將棉酚靜脈注射脂肪乳劑放在密閉器皿中并分別置于40、60、80°C 條件下，5天和10天后考察穩(wěn)定性。與放置前相比，仍保持澄清透明，未見油水分層。(4)加速試驗(yàn)將棉酚靜脈注射脂肪乳劑4000rpm離心lOmin，仍保持澄清透明，未 見油水分層。(5)常溫留樣考察將棉酚靜脈注射脂肪乳劑在溫度25°C、相對(duì)濕度75%條件下 分別放置1、2、3、6、12、24月，仍保持澄清透明，未見油水分層及藥物析出。
權(quán)利要求
一種治療腫瘤的棉酚靜脈注射脂肪乳劑，其特征在于所述棉酚靜脈注射脂肪乳劑每1000ml由以下組分組成棉酚的藥用鹽40～80g，油酸乙酯或中鏈脂肪酸甘油三酸酯200～300g，大豆卵磷脂30～50g，無水乙醇或PEG400 10～40g，余量為水。
2.權(quán)利要求1所述的治療腫瘤的棉酚靜脈注射脂肪乳劑，其特征在于，所述棉酚的藥 用鹽為醋酸棉酚或甲酸棉酚。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療腫瘤的棉酚靜脈注射脂肪乳劑，每1000ml由以下組分組成棉酚的藥用鹽40～80g，油酸乙酯或中鏈脂肪酸甘油三酸酯200～300g(作為油相)，大豆卵磷脂30～50g(作為表面活性劑)，無水乙醇或PEG400 10～40g(作為助表面活性劑)，余量為水。本發(fā)明的棉酚脂肪乳劑經(jīng)研究表明，其藥物載體按照所述用量使用時(shí)對(duì)棉酚的載藥量顯著高于口服制劑及普通注射制劑，且穩(wěn)定均一，不易出現(xiàn)藥物結(jié)晶析出或分層。與口服制劑相比生物利用度顯著提高，乳滴平均粒徑為70～150nm時(shí)穩(wěn)定性最佳，具有緩釋效果，且對(duì)腫瘤組織有顯著的靶向性，可避免藥物對(duì)胃腸道的刺激。
文檔編號(hào)A61K47/24GK101810577SQ201010164008
公開日2010年8月25日 申請(qǐng)日期2010年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月6日
發(fā)明者厲保秋 申請(qǐng)人:山東大學(xué)