專利名稱：糙葉敗醬苷元提取物及其制備方法和抗結(jié)腸癌用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥、食品、飲料技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是涉及中藥提取物及其制備方法和用途，更具體地說是涉及中藥糙葉敗醬苷元提取物及其制備方法和用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品的用途。
背景技術(shù)：
(一)糙葉敗醬的研究概況1、植物資源和應(yīng)用概況糙葉敗醬(Patrinia scabra Bunge.)為敗醬科敗醬屬植物，多年生草本，高20～40厘米。莖叢生，莖上部多分枝，分枝處有節(jié)紋。葉對生；革質(zhì)，羽狀分裂，裂片倒披針形、狹披針形或長圓形，有牙齒，頂端裂片較側(cè)裂片略大，葉緣及葉面被毛。聚傘花序頂生，呈傘房狀排列；花軸及花梗上生細(xì)毛；苞片狹窄，寓生；花小，黃色，花冠合瓣，5裂；雄蕊4；子房3室，柱頭頭狀。果實翅狀，卵形或近圓形，扁薄如紙，直徑約6毫米，有網(wǎng)紋，種子位于中央。產(chǎn)于分布中國河南、河北、山西及東北等地，野生于墓地及荒地邊。
始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。原名“敗醬”。陶弘景注“生江夏川谷，八月采根，暴干?！瓪馊鐢《贯u，故以為名?！短菩卤静荨份d敗醬多生岡嶺間。葉似水莨及薇銜，叢生，花黃根紫，作陳醬色?！庇纱丝芍疟静菟d敗醬用根，秋季刨采，洗凈，曬干，生用。干燥根呈不規(guī)則的圓柱形，長短不一，根較粗，直徑4～12mm；外皮棕褐色或棕黑色，皺縮易剝落，剝?nèi)ネ馄ず蟪释咙S色。體輕質(zhì)松，根外觀斷面呈放射狀裂紋，外層為黃棕色的環(huán)狀紋；根的橫切面木質(zhì)部導(dǎo)管群呈放射狀排列，皮層及髓射線薄壁組織中簇晶少較大，直徑17～28～45μm。以條長、肥實、色棕褐者為佳。
《廣西中藥志》味辛，性溫；入心、肝二經(jīng)。敗毒抗癌、涂濕祛瘀，民間用于治療傷寒、溫癥、跌打損傷、婦女崩中、赤白帶下等癥，臨床上糙葉敗醬粗提物被用于治療急慢性白血病、子宮癌、宮頸癌、大腸癌等。
現(xiàn)在中醫(yī)開方多用敗醬草，市場供應(yīng)的也為全草，其品種較為復(fù)雜；敗醬草多在民間使用。
為了與敗醬草區(qū)別起見，將敗醬的根莖與根稱為敗醬根，而不用古本草中“敗醬”的名稱。商品敗醬根僅見于中國河北承德地區(qū)藥材公司。
糙葉敗醬常與其同屬植物異葉敗醬(P.heterophylla Bunge.)混用，俗稱墓頭回(異名墓頭灰，見《山西中藥志》；箭頭風(fēng)，見《廣西中藥志》，亦稱追風(fēng)箭、腳汗劃)，表示有起死回生的功效。異葉敗醬(Patrinia heterophylla Bge.)根莖細(xì)，直徑1～4mm，根莖中不含淀粉粒。
其他的同屬植物尚有白花敗醬(Patrinia villosa Juss.)根莖細(xì)長，直徑2～4mm，節(jié)間長3～6cm(敗醬不超過2cm)。根莖橫切面皮層狹窄；木質(zhì)部無薄壁組織環(huán)帶；髓部寬，呈圓形；草酸鈣簇晶少，存在于韌皮部之間及髓部有的薄壁細(xì)胞中。
2、化學(xué)成分世界各國學(xué)者對糙葉敗醬的化學(xué)成分進行了廣泛研究，發(fā)現(xiàn)其含有木脂素類化學(xué)成分(參見 李延釗、張衛(wèi)東、顧正兵等.中成藥，2005.36(3)338～340；李延釗、張衛(wèi)東、顧正兵等.藥學(xué)學(xué)報，2003.38(7)520～522)、環(huán)烯醚萜成分(參見Kouno，I.；Yasuda，I.；Mizoshiri，H.et al.Phytochemistry，1994，37(2)，467～472；Kouno，I.；Yasuda，I.；Jiang ZH.et al.Phytochemistry，1995，40(5)，1567～1568；)、多糖成分(參見 揚建萍、何福江、李洪剛.中草藥，1996，27(11)660～661)、皂甙及揮發(fā)油(揮發(fā)油中主成分為β-蒎烯、δ-欖香烯)，另外還含有生物堿、curvularin、黃酮、β-谷甾醇、胡蘿卜苷、齊墩果酸、十六烷酸α-單甘酯等(參見顧正兵、楊根金、叢海英.中草藥，2002，33(9)781～782；顧正兵、楊根金、叢海英.藥學(xué)學(xué)報，2002，37(11)867～869)。但是其具體抗結(jié)腸癌的活性成分還不明確。
3、藥理活性中國對糙葉敗醬的藥理作用進行了較廣泛的研究，通過藥理研究及臨床觀察，證明敗醬根有明顯的鎮(zhèn)靜作用，現(xiàn)已生產(chǎn)敗醬根莖及根的浸膏片應(yīng)用，收載于中國藥典1977年版。還發(fā)現(xiàn)糙葉敗醬根和根莖的揮發(fā)油具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛作用，其醇提物具有止血作用；研究其抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用發(fā)現(xiàn)糙葉敗醬的乙醇提取物可增加小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬作用和細(xì)胞毒效應(yīng)，提高酸性-醋酸萘酚酯酶(簡稱ANAE)陽性淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及Ea玫瑰花環(huán)形成百分率，并對小鼠肉瘤S180生長有抑制作用，與其能提高非特異性免疫功能有關(guān)(參見王蔭棠，王學(xué)江，燕玉霞等.蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1988；4(1)11-14)；其水提液腹腔注射，可使小鼠巨噬細(xì)胞吞噬及細(xì)胞毒性均明顯提高，有促進主動免疫的功能；其水提物瘤內(nèi)注射，對小鼠S180肉瘤抑制率達(dá)62.5％，并觀察到是直接殺傷作用(參見張元杏，王惠芬，黃澤菘等.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1984；4(2)109-110)。
糙葉敗醬能增強機體抗腫瘤的免疫機能，體外試驗證明，水提取物不論口服或腹腔注射，對移植性小鼠肉瘤S-180及艾氏腹水癌，均有抑制作用；其中對艾式腹水癌有明顯抑制作用和治療作用，尤以腹腔給藥療效較明顯；局部注射可使小鼠實體型腹水癌局部腫瘤逐漸變硬變干，從根部脫落，潰瘍面逐漸修復(fù)而治愈。
有報道墓頭回總甙片對艾氏腹水型腫瘤和S180肉瘤有較強的抑制作用(參見陳金秀.中國中醫(yī)藥科技1999，6(5)299；張立偉，趙春貴，楊頻.山西大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)1996，19(2)161-164)。臨床研究表明墓頭回總甙片結(jié)合手術(shù)、化療治療50例大腸癌患者，患者1年、2年、3年的生存率分別為79％、61％、40％；可明顯提高大腸癌患者生活質(zhì)量、近期有效期、生存期，該制劑能明顯增強患者的免疫功能，顯著降低癌胚抗原(CEA)水平，能夠提高T細(xì)胞免疫功能，增強體內(nèi)NK殺傷細(xì)胞的活性；與5-氟尿嘧啶合用減毒增效作用明顯(參見陳金秀，馬培志，王懷璋.中草藥，1999；30(7)528-529；王懷章，王迎紅，陳金秀，王守章.中國腫瘤臨床與康復(fù)，2001；8(1)37-39)。但是墓頭回總甙仍然是粗提物，成分復(fù)雜，具體抗結(jié)腸癌的活性成分尚未見報道。
據(jù)北京醫(yī)學(xué)院系藥理實驗表明，本品的揮發(fā)油也有鎮(zhèn)靜作用。糙葉敗醬根及根莖中揮發(fā)油能顯著延長戊巴比妥鈉引起的小鼠睡眠時間，但弱于黃花敗醬揮發(fā)油；對P-450有激活作用。
最新的研究成果表明，糙葉敗醬中含有的環(huán)烯醚萜苷元PS-I可顯著抑制人前列腺癌細(xì)胞株DU145和PC3生長，并呈時間、劑量相關(guān)，是糙葉敗醬抗腫瘤活性成分之一(參見李鐵軍、邱彥、芮耀誠等.解放軍藥學(xué)學(xué)報，2004，20(2)101～102)。但是該研究并未闡明PS-I是否也具有抗結(jié)腸癌的活性。
4、單方及復(fù)方的臨床應(yīng)用《本草原始》治傷寒，溫瘧?！逗幽现兴幨謨浴废茨_，治腳痛?！渡轿髦兴幹尽窋扛卧餄瘢寡?。治婦人髖疽，赤白帶下?！稄V西中藥志》祛瘀，消腫。治跌打。
(1)《董炳集驗方》選方治崩中，赤白帶下墓頭回一把，酒水各半盞，新紅花一捻，煎七分，臥時溫服。日近者一服，久則三服。內(nèi)服煎湯，2～3錢。外用煎水洗。
(2)敗毒抗癌，用于癌瘤積毒肝癌墓頭回15克，七葉一枝花、半枝蓮各30克；切碎，水煎3次分服，日1劑。能使臨床癥狀緩解，腫塊軟縮，延長生存期。
白血病墓頭回15克，羊蹄根30克 水煎服，日1劑。能使規(guī)則出血與發(fā)熱消除，肝、脾腫塊軟縮，癥狀緩解。
宮頸癌墓頭回、生薏仁、丹皮、黃柏、蚤休各9克，龍膽草6克，土茯苓15克，蜀羊泉、半枝蓮、白花蛇舌草各30克。切碎，水煎3次分服。能使白帶夾血、小腹墜痛等癥狀緩解，癌腫縮小，逐漸平復(fù)。
胃癌墓頭回、紅糖各30克，生姜3片。煎湯代茶，日1劑。能使痛脹、嘔血等癥狀減少，癌腫縮小，飲食好轉(zhuǎn)。
食管癌墓頭回30克，全瓜蔞15克，山慈姑、莪術(shù)、枳殼各9克，紅花6克。切碎，濃煎，沖單糖漿，分多次口服，日1劑。能使臨床癥狀顯著改善，癌腫逐漸消失，吞咽順利。
大腸癌墓頭回、魚腥草、山豆根各15克，土茯苓、六月雪各12克，木槿花、黑木耳、槐花、樗根皮各9克，皂刺6克。切碎，水煎2次，早、晚分服，日1劑，每次沖服醒消丸1丸乳香(去油)、沒藥(去油)各30克，雄黃15克，麝香45克共研細(xì)末，用黃米飯約30克，搗和為醒消丸，丸重9克。堅持服用，能使大便下血，腸梗阻導(dǎo)致的諸種癥狀緩解，癌腫逐漸縮小，潰瘍修復(fù)。亦可配合其它綜合治療。宜于結(jié)腸癌與直腸癌。
(3)除濕祛瘀，用于濕熱瘀血濕熱白帶墓頭回15克，紅花1.5克 水煎服。
風(fēng)濕骨痛墓頭回9克，水煎服。同時用適量，煎熱湯熏洗。赤痢淤滯 墓頭回30克，馬齒莧、金銀花各15克，甘草9克 切碎，水煎服。
崩漏血滯墓頭回45克，茜草9克 水煎服。帶下夾血 墓頭回，石見穿各30克。水煎3次分服，連服1周。
便下膿血墓頭回15克，生地炭、地榆、槐角各9克，焦白術(shù)、防風(fēng)各6克。水煎服，日1劑。
(二)常用中草藥有效成分的提取分離方法1、溶劑提取法(1)原理溶劑提取法是根據(jù)中草藥中各種化學(xué)成分在溶劑中的溶解性質(zhì)，選用對活性成分溶解度大，對不需要溶出的成分溶解度小的溶劑，將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來的方法。當(dāng)溶劑加到中草藥原料(需適當(dāng)粉碎)中時，溶劑由于擴散、滲透作用逐漸通過細(xì)胞壁透入到細(xì)胞內(nèi)，溶解了可溶性物質(zhì)，而造成細(xì)胞內(nèi)外的濃度差，于是細(xì)胞內(nèi)的濃溶液不斷向外擴散，溶劑又不斷進入藥材組織細(xì)胞中，如此多次往返，直至細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度達(dá)到動態(tài)平衡時，將此飽和溶液濾出，繼續(xù)多次加入新溶劑，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草藥成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有關(guān)。溶劑可分為親水性有機溶劑及親脂性有機溶劑，被溶解物質(zhì)也有親水性及親脂性的不同。有機化合物分子結(jié)構(gòu)中親水性基團多，其極性大而疏于油；有的親水性基團少，其極性小而疏于水。各類溶劑的性質(zhì)，同樣也與其分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。這樣，發(fā)明人就可以通過對中草藥成分結(jié)構(gòu)分析，去估計它們的此類性質(zhì)和選用的溶劑?？偟恼f來，只要中草藥成分的親水性和親脂性與溶劑的此項性質(zhì)相當(dāng)，就會在其中有較大的溶解度，即所謂“相似相溶”的規(guī)律。這是選擇適當(dāng)溶劑自中草藥中提取所需要成分的依據(jù)之一。
(2)溶劑的選擇運用溶劑提取法的關(guān)鍵，是選擇適當(dāng)?shù)娜軇?。溶劑選擇適當(dāng)，就可以比較順利地將需要的成分提取出來。選擇溶劑要注意以下三點①溶劑對有效成分溶解度大，對雜質(zhì)溶解度??；②溶劑不能與中藥的成分起化學(xué)變化；③溶劑要經(jīng)濟、易得、使用安全等。常見的提取溶劑可分為以下三類①水水是一種強的極性溶劑。中草藥中親水性的成分，如無機鹽、糖類、分子不太大的多糖類、鞣質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機酸鹽、生物堿鹽及苷類等都能被水溶出。為了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水及堿水作為提取溶劑。
②親水性的有機溶劑也就是一般所說的與水能混溶的有機溶劑，如乙醇(又稱酒精)、甲醇(又稱木精)、丙酮等，以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比較好，對中草藥細(xì)胞的穿透能力較強。親水性的成分除蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。難溶于水的親脂性成分，在乙醇中的溶解度也較大。還可以根據(jù)被提取物質(zhì)的性質(zhì)，采用不同濃度的乙醇進行提取。用乙醇提取比用水量較少，提取時間短，溶解出的水溶性雜質(zhì)也少。乙醇為有機溶劑，雖易燃，但毒性小，價格便宜，來源方便，有一定設(shè)備即可回收反復(fù)使用，而且乙醇的提取液不易發(fā)霉變質(zhì)。由于這些原因，用乙醇提取的方法是歷來最常用的方法之一。甲醇的性質(zhì)和乙醇相似，沸點較低(64℃)，但有毒性，使用時應(yīng)注意。
③親脂性的有機溶劑也就是一般所說的與水不能混溶的有機溶劑，如石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。這些溶劑的選擇性能強，不能或不容易提出親水性雜質(zhì)。但這類溶劑揮發(fā)性大，多易燃(氯仿除外)，一般有毒，價格較貴，設(shè)備要求較高，且它們透入植物組織的能力較弱，往往需要長時間反復(fù)提取才能提取完全。如果藥材中含有較多的水分，用這類溶劑就很難浸出其有效成分，因此，大量提取中草藥原料時，直接應(yīng)用這類溶劑有一定的局限性。
(3)提取方法用溶劑提取中草藥成分，常用浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法及連續(xù)回流提取法等。同時，原料的粉碎度、提取時間、提取溫度、設(shè)備條件等因素也都能影響提取效率，必須加以考慮。
①浸漬提取法(簡稱浸漬法)浸漬法系將中草藥粉末或碎塊裝入適當(dāng)?shù)娜萜髦?，加入適宜的溶劑(如乙醇、稀醇或水)，浸漬藥材以溶出其中成分的方法。本法比較簡單易行，但浸出率較差，且如用水為溶劑，其提取液易發(fā)霉變質(zhì)，須注意加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎?br> ②滲漉提取法(簡稱滲漉法)滲漉法是將中草藥粉末裝在滲漉器中，不斷添加新溶劑，使其滲透過藥材，自上而下從滲漉器下部流出浸出液的一種浸出方法。當(dāng)溶劑滲進藥粉、溶出成分比重加大而向下移動時，上層的溶液或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴散能較好地進行，故浸出效果優(yōu)于浸漬法。但應(yīng)控制流速，在滲渡過程中隨時自藥面上補充新溶劑，使藥材中有效成分充分浸出為止?；虍?dāng)滲滴液顏色極淺或滲涌液的體積相當(dāng)于原藥材重的10倍時，便可認(rèn)為基本上已提取完全。在大量生產(chǎn)中常將收集的稀浸出液作為另一批新原料的溶劑之用。
③煎煮提取法(簡稱煎煮法)煎煮法是中國最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法。所用容器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。直火加熱時最好時常攪拌，以免局部藥材受熱太高，容易焦糊。有蒸汽加熱設(shè)備的藥廠，多采用大反應(yīng)鍋、大銅鍋、大木桶，或水泥砌的池子中通入蒸汽加熱。還可將數(shù)個煎煮器通過管道互相連接，進行連續(xù)煎浸。
④加熱回流提取法應(yīng)用有機溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。小量操作時，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。瓶內(nèi)裝藥材約為容量的20％～60％，溶劑浸過藥材表面約1～2cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰3～6小時，放冷過濾，再在藥渣中加溶劑，作第二、三次加熱回流分別約半小時，或至基本提盡有效成分為止。此法提取效率較冷浸法高，大量生產(chǎn)中多采用連續(xù)提取法。
⑤連續(xù)回流提取法應(yīng)用揮發(fā)性有機溶劑提取中草藥有效成分，不論小型實驗或大型生產(chǎn)，均以連續(xù)提取法為好，而且需用溶劑量較少，提取成分也較完全。實驗室常用脂肪提取器或稱索氏提取器。連續(xù)提取法，一般需數(shù)小時才能提取完全。提取成分受熱時間較長，遇熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜采用此法。
2、分離和純化方法上述提取法所得到的中草藥提取液或提取物仍然是混合物，需進一步除去雜質(zhì)，分離并進行精制。
(1)溶劑分離法一般是將上述總提取物，選用三、四種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步進行提取分離。水浸膏或乙醇浸膏常為膠狀物，難以均勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全，可拌入適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取，使總提取物中各組成成分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。利用中草藥化學(xué)成分，在不同極性溶劑中的溶解度進行分離純化，是最常用的方法。
(2)溶劑萃取法①萃取法溶劑提取萃取法又簡稱萃取法，是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的方法。萃取時如果各成分在溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高；如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚進行萃取，如果有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，在親脂性溶劑中難溶解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。還可以在氯仿、乙醚中加入適量乙醇或甲醇以增大其親水性。提取黃酮類成分時，多用乙酸乙脂和水萃取。提取親水性強的皂苷則多選用正丁醇、異戊醇和水作萃取。不過，一般有機溶劑親水性越大，與水作萃取的效果就越不好，因為能使較多的親水性雜質(zhì)伴隨而出，對有效成分進一步精制影響很大。
②逆流連續(xù)萃取法是一種連續(xù)的溶劑萃取法。其裝置可具有一根、數(shù)根或更多的萃取管。管內(nèi)用小瓷圈或小的不銹鋼絲圈填充，以增加溶劑萃取時的接觸面。如果一種中草藥的水浸液需要用比水輕的苯、乙酸乙酯等進行萃取，則需將水提濃縮液裝在萃取管內(nèi)，而苯、乙酸乙酯貯于高位容器內(nèi)。萃取是否完全，可取樣品用薄層層析、紙層析及顯色反應(yīng)或沉淀反應(yīng)進行檢查。
③逆流分配法逆流分配法又稱逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法與溶劑逆流萃取法原理一致，但加樣量一定，并不斷在一定容量的溶劑中，經(jīng)多次移位萃取分配而達(dá)到混合物的分離。
④液滴逆流分配法液滴逆流分配法又稱液滴逆流層析法。為近年來在逆流分配法基礎(chǔ)上改進的溶劑萃取法。對溶劑系統(tǒng)的選擇基本同逆流分配法，但要求能在短時間內(nèi)分離成，并可生成有效的液滴。由于移動相形成液滴，在細(xì)的分配萃取管中與固定相有效地接觸、摩擦不斷形成新的表面，促進溶質(zhì)在溶劑中的分配，故其分離效果往往比逆流分配法好。
(3)大孔吸附樹脂法大孔吸附樹脂是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的一類有機高聚物吸附劑，具有良好的吸附性能，近十余年來逐漸被應(yīng)用于中草藥化學(xué)成分的提取分離和中藥新藥的開發(fā)研制。
大孔吸附樹脂為吸附和篩選原理相結(jié)合的分離材料。它的吸附性是由于范德華引力或生成氫鍵的結(jié)果。篩選原理是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定。由于吸附和篩選原理，有機化合物根據(jù)吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹脂上經(jīng)一定的溶劑洗脫而分開。這使得有機化合物尤其是水溶性化合物的提純得以大大簡化。大孔吸附樹脂的骨架由苯乙烯和二乙烯苯縮聚而生成，由于改性劑的加入，大孔吸附樹脂的極性發(fā)生改變，按照樹脂的表面性質(zhì)，吸附樹脂一般分為非極性、中極性和極性三類。
非極性吸附樹脂是由偶極矩很小的單體聚合物制得的不帶任何功能基的吸附樹脂。典型的例子是苯乙烯-二乙烯苯體系的吸附樹脂，如D101、XAD-1、DiaionHP-10大孔吸附樹脂。
中極性吸附樹脂指含酯基的吸附樹脂，如丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸酯等交聯(lián)的一類共聚物。它是在非極性大孔吸附樹脂的基礎(chǔ)上，加入丙烯酸甲酯或丙烯腈縮聚而成，如中國國內(nèi)經(jīng)常使用的AB-8大孔吸附樹脂。
極性吸附樹脂是指含酰胺基、腈基、酚羥基等含氮、氧、硫極性功能基的吸附樹脂。此外，有時把含氮、氧、硫等配體基團的離子交換樹脂稱作強極性吸附樹脂，強極性吸附樹脂與離子交換樹脂的界限很難區(qū)別。極性大孔吸附樹脂可以由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酰胺或亞砜類縮聚而成，如日本三菱化工的Diaion HP 2MG、美國Rohm-hass公司的XAD-10，XAD-9大孔吸附樹脂。
與活性炭和其它吸附劑相比，大孔吸附樹脂具有很多的優(yōu)點，如對某種物質(zhì)的吸附選擇性較高；物理化學(xué)穩(wěn)定性和機械強度較好；品種規(guī)格較多，可根據(jù)需要改變樹脂物理或化學(xué)結(jié)構(gòu)；吸附樹脂一般為球狀顆粒，流體阻力較小等等。因而被廣泛應(yīng)用于化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域，近年來關(guān)于大孔吸附樹脂在天然產(chǎn)物提取分離中的應(yīng)用研究報道越來越多。大孔吸附樹脂對中草藥化學(xué)成分如生物堿、黃酮、皂苷、香豆素及其他一些苷類成分都有一定的吸附作用。對糖的吸附能力很差，對色素的吸附能力較強。
(4)沉淀法是在中草藥提取液中加入某些試劑使產(chǎn)生沉淀，以獲得有效成分或除去雜質(zhì)的方法。如鉛鹽沉淀法鉛鹽沉淀法為分離某些中草藥成分的經(jīng)典方法之一。由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中，能與多種中草藥成分生成難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽沉淀，故可利用這種性質(zhì)使有效成分與雜質(zhì)分離。然后將鉛鹽沉淀懸浮于新溶劑中，通以硫化氫氣體，使分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛而沉淀。
(5)鹽析法鹽析法是在中草藥的水提液中，加入無機鹽至一定濃度，或達(dá)到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質(zhì)分離。常用作鹽析的無機鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。
(6)透析法透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。反之也可將大分子的雜質(zhì)留在半透膜內(nèi)，而將小分子的物質(zhì)通過半透膜進入膜外溶液中，而加以分離精制。
(7)結(jié)晶、重結(jié)晶和分步結(jié)晶法鑒定中草藥化學(xué)成分，研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)，必須首先將中草藥成分制備成單體純品。在常溫下，物質(zhì)本身性質(zhì)是液體的化合物，可分別用分餾法或?qū)游龇ㄟM行分離精制。一般地說，中草藥化學(xué)成分在常溫下多半是固體的物質(zhì)，都具有結(jié)晶體的通性，可以根據(jù)溶解度的不同用結(jié)晶法來達(dá)到分離精制的目的。
3、常用干燥方法(1)真空干燥是基于這樣一基本原理水的飽和蒸氣壓與溫度緊密相關(guān)，在真空狀態(tài)下，水的沸點降低，即在真空下操作也就是在低溫下操作，可避免在高溫下營養(yǎng)成分如維生素等的破壞，同時提高了干燥速度。真空干燥在食品、制藥、化工等行業(yè)有廣泛的應(yīng)用，中國也開發(fā)和引進了各種真空干燥設(shè)備，其結(jié)構(gòu)形式多種多樣。常用的形式主要有箱式真空干燥器、雙錐式真空干燥器、帶式真空干燥器等。這些傳統(tǒng)的真空干燥裝置主要采用熱風(fēng)，蒸汽或電等加熱，利用熱傳導(dǎo)、對流或輻射原理將熱量從外部傳到物料內(nèi)部。真空干燥具有干燥溫度低，干燥室內(nèi)相對缺氧，可避免脂肪氧化，色素褐變等一系列優(yōu)點，適合于熱敏感性食品物料的干燥，此外設(shè)備成本、干燥費用也相對較低。
(2)噴霧干燥是流化技術(shù)用于液態(tài)物料干燥的一種方法。因是瞬間干燥，特別適用于熱敏性物料，故所得產(chǎn)品質(zhì)量好，保持原來的色香味，且易溶解。利用噴霧干燥來制備微囊的研究正在進行，它是將心料混懸在衣料的溶液中，經(jīng)離心噴霧器將其噴入熱氣流中，所得的產(chǎn)品是衣料包心料而成的微囊，這種微囊粉末可采用于直接壓片，也可制備膠囊劑、糖漿劑或混懸劑。
(3)冷凍干燥是將干燥液體物料冷凍成固體，在低溫減壓條件下利用冰的升華性能，使物料低溫脫水而達(dá)到干燥的一種方法。由于物料在高度真空及低溫條件下干燥，故對某些極不耐熱物品的干燥很適合。王大林報道了一種噴霧通氣凍干新技術(shù)，是利用冷的空氣或氮氣作為介質(zhì)，迅速流經(jīng)凍結(jié)物使水升華，噴霧凍干制得的產(chǎn)品微粒小、干燥快、時間短、均勻、流動性好，并具良好的速溶性。近年來，對膏狀物料和粘稠物料干燥的研究取得了較大進展，流態(tài)化技術(shù)、噴射技術(shù)、惰性載體技術(shù)，則是在此研究基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。旋轉(zhuǎn)閃蒸干燥機、熱噴射氣流干燥機、惰性載體干燥機均適合熱敏性物料和膏狀物料的干燥。這些新的研究成果用于中藥制劑生產(chǎn)，將大大改善中藥加工的技術(shù)水平，提高生產(chǎn)效率。
(4)遠(yuǎn)紅外加熱干燥法是一項新的干燥技術(shù)，其干燥原理是將電能轉(zhuǎn)變?yōu)檫h(yuǎn)紅外輻射，從而被藥材的分子吸收，產(chǎn)生共振，引起分子和原子的振動和轉(zhuǎn)動，導(dǎo)致物體變熱，經(jīng)過熱擴散、蒸發(fā)和化學(xué)變化，最終達(dá)到干燥的目的。遠(yuǎn)紅外干燥可節(jié)省電能20％～50％，效果較好。
(5)微波干燥法是一項20世紀(jì)60年代迅速發(fā)展起來的新技術(shù)，微波干燥實際上是通過感應(yīng)加熱和介質(zhì)加熱，使被干燥物中的水分和脂肪不同程度地吸收微波能量，并把它轉(zhuǎn)變?yōu)闊崃繌亩_(dá)到干燥的目的。微波干燥可殺滅微生物和霉菌，并具有消毒作用。目前中國生產(chǎn)的微波加熱成套設(shè)備有915mhz和2450mhz兩個頻率。
4、超臨界CO2萃取方法(1)有關(guān)動、植物脂肪油成分的提取方法有水煮法、水媒分離法、分子蒸餾和減壓蒸餾法、金屬加合法、萃取結(jié)晶法、分盤冷凍壓榨法和有機溶劑法等。
采用水煮加熱法，因加熱時間長、溫度高，易使對熱不穩(wěn)定的揮發(fā)成分發(fā)生變化，如一些不飽和脂肪酸的氧化。水媒分離法，此分離法的明顯優(yōu)點是消除了有機溶劑法造成的高費用和公害，但是這種技術(shù)的缺點是得到的飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸的純度或級別不如有機溶劑分離法高。分子蒸餾和減壓蒸餾法為減少熱變性，需用尿素加合物等方法來除去大部分飽和脂肪酸，在得到的產(chǎn)品中必須將其除去；雖然可得到較純的脂肪酸，但需幾步才能達(dá)到目標(biāo)，較費時、費力，增加了生產(chǎn)成本。金屬加合法分離需要較低的低溫處理，最后還要設(shè)法去除金屬離子，清除不盡還會造成金屬離子污染。萃取結(jié)晶法得到脂肪酸純度較高，在較低的溫度下進行，能防止脂肪酸的氧化，但時間較長，不太適用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。分盤冷凍壓榨法缺點是，安放盤架和液壓機的冷凍室需要數(shù)千平方米的面積和龐大的冷卻系統(tǒng)，大的設(shè)施需要多人操作，勞動強度高，分離速度緩慢，效率低，不能連續(xù)操作。有機溶劑法是采用石油醚或乙醚有機溶劑在水浴上加熱情況下，進行回流循環(huán)提?。挥捎谒捎玫挠袡C溶劑如石油醚或乙醚等均為一種低沸點物質(zhì)，易燃易爆，同時，有機溶劑的使用一方面會污染環(huán)境，另一方面有機溶劑有可能在提取物中有殘留，會影響提取物在醫(yī)藥上的進一步應(yīng)用。
(2)有關(guān)動、植物脂肪油成分的超臨界CO2萃取方法一種流體當(dāng)處在其臨界溫度和壓力狀態(tài)時，被稱為超臨界流體。由于超臨界流體的密度接近于液體，具有與液體溶劑相當(dāng)?shù)妮腿∧芰ΑＳ志哂信c氣體相當(dāng)?shù)牡驼扯?，擴散能力比液體要大100倍，因而具有較高的傳質(zhì)性。采用超臨界萃取的時候，利用超臨界流體的這些性質(zhì)，使之與待分離的物質(zhì)相接觸穿透基體，從中萃取出目標(biāo)物質(zhì)。然后利用降壓和/或升溫的辦法降低其密度，從而降低溶質(zhì)在其中的溶解度，使被萃取物與溶劑分離。因為不同的物質(zhì)在相同的萃取條件下溶解度是不同的，因而有可能借助這種差異將它們進一步分開。超臨界流體萃取常常選用CO2等臨界溫度低且化學(xué)惰性的物質(zhì)為萃取劑，它特別適用于熱敏物質(zhì)和易氧化物質(zhì)的分離，因此非常適用于對于動物油脂的提取分離。因此，本發(fā)明采取該方法，能夠制備高純度的被提取物的脂肪油。
超臨界CO2萃取方法是這樣提取的把干燥的被提取物的粗粉放在超臨界萃取設(shè)備中用CO2進行萃取，減壓后即得被提取物的脂肪油，室溫條件下呈淺黃色透明油狀；提取的被提取物的脂肪油中總脂肪酸的純度在40以上，優(yōu)于其他提取方法；總脂肪酸一般包括油酸、亞油酸、棕櫚酸以及余量的其他組分等。
超臨界CO2萃取被提取物的脂肪油的方法包括如下步驟(1)將干燥的被提取物粉碎至10～30目后，置于超臨界萃取釜中，連續(xù)地通入超臨界狀態(tài)下的CO2進行萃取，優(yōu)選的條件一般是CO2流量10～55kg/h·kg原料、壓力5～50Mpa、溫度15～75℃、時間0.5～6h；進一步優(yōu)選的條件一般是CO2流量45kg/h·kg原料、壓力35Mpa、溫度50℃、時間1h；(2)將萃取了被提取物的脂肪油的CO2減壓至1～12MPa，即可獲得在室溫條件下被提取物的脂肪油，被提取物的脂肪油中總脂肪酸的純度在40％以上，萃取物的理化性狀和脂肪酸純度都優(yōu)于其他提取方法。
萃取條件的選擇是通過以下辦法實現(xiàn)的首先選定四因素、三水平，根據(jù)正交設(shè)計方法，按L9(34)交設(shè)計表安排實驗(正交實驗設(shè)計安排參考郭祖超主編的《醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué)》，人民軍醫(yī)出版社，1999年第一版)。從正交實驗結(jié)果，分析得到萃取工藝條件。
對超臨界CO2萃取的被提取物的脂肪油進行脂肪酸甲酯化后，進行氣相色譜—質(zhì)譜分析。
超臨界CO2萃取被提取物的脂肪油的制備方法不使用有機溶劑等物質(zhì)，不會污染環(huán)境，也不存在有害溶劑殘留等問題，而且操作簡便、萃取時間短、產(chǎn)品純度高，使用的CO2廉價而且可重復(fù)循環(huán)使用，工業(yè)生產(chǎn)成本低廉。
(三)結(jié)腸癌的研究進展大腸癌包括直腸癌和結(jié)腸癌，是常見惡性腫瘤之一，以40～50歲的壯年人發(fā)病率最高。西歐及北美發(fā)達(dá)國家是發(fā)病率最高的國家，發(fā)病率高達(dá)35/10萬～50/10萬，其發(fā)病率及病死率在惡性腫瘤中居第2位；在東方，大腸癌也不少見，我國的有關(guān)資料顯示，大腸癌發(fā)病率占全部惡性腫瘤的第4～6位，每年大約有14萬人新患大腸癌，占全部癌癥患者的6.8％；大腸癌死亡率為3.54/10萬，占癌癥死亡率的5.29％，居第6位。華東地區(qū)是大腸癌的高發(fā)區(qū)，其中上海又是發(fā)病率和死亡率最高的城市。1979年時上海市大腸癌粗發(fā)病率19.6/10萬，為第四位常見癌癥(順序為胃癌、肺癌、肝癌、大腸癌)；1989年起粗發(fā)病率已升至28.2/10萬以上，僅次于肺癌、胃癌，而成為第三位常見癌癥；1997年上海大腸癌的發(fā)病率男性高達(dá)37.2/10萬，女性也達(dá)到了35.5/10萬。令人不安的是，各國的統(tǒng)計資料均顯示大腸癌尤其是其中的結(jié)腸癌發(fā)病率有增高的趨勢，近年來在青年人中發(fā)生率也明顯升高，約有5％患者的年齡在30歲以下。所以大腸癌尤其是結(jié)腸癌是值得大家特別重視的一個疾病。結(jié)腸癌的治療主要是手術(shù)切除和化學(xué)治療?；熕幬锇ǚ蜞奏?、絲裂霉素、亞硝脲類等，具有較大的毒副作用，給患者帶來肉體與精神上的痛苦，因此尋找更加安全有效、毒副作用小的防治結(jié)腸癌藥物具有極其重要的意義。
經(jīng)文獻檢索等，到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)有糙葉敗醬苷元提取物具有防治結(jié)腸癌作用方面的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題是公開了一種防治結(jié)腸癌的產(chǎn)品即中藥糙葉敗醬的苷元提取物尤其是藥物，該產(chǎn)品以糙葉敗醬中所含有的總環(huán)烯醚萜苷元為有效成分，并公開該產(chǎn)品的制備方法和用途，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。
本發(fā)明的目的之一在于提供一種可以防治結(jié)腸癌的產(chǎn)品即糙葉敗醬苷元提取物，其中的有效成分是糙葉敗醬中的總環(huán)烯醚萜苷元，最優(yōu)選藥物及藥物組合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供用于防治結(jié)腸癌的該產(chǎn)品的制備方法，特別是糙葉敗醬苷元提取物的制備方法。
本發(fā)明進一步提供以所述糙葉敗醬苷元提取物為活性成分，用于防治結(jié)腸癌的制劑和相應(yīng)的劑型。
也就是說，本發(fā)明意在明確一種防治結(jié)腸癌的藥物及其制備方法，即中藥糙葉敗醬的活性部位和活性成分及其制備方法；進而將糙葉敗醬的苷元提取物用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品，以糙葉敗醬中所含有的總環(huán)烯醚萜苷元為有效成分制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品尤其是藥物及其藥物組合物，該有效成分對結(jié)腸癌的防治有良好療效。換句話說，本發(fā)明涉及中藥糙葉敗醬苷元提取物及其制備方法，以及該苷元提取物及其組合物如藥物組合物等在制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。
所述的抗結(jié)腸癌產(chǎn)品是指用于診斷、檢測、預(yù)防、治療或研究結(jié)腸癌及相關(guān)病癥的產(chǎn)品；其中，所述的抗結(jié)腸癌產(chǎn)品是包括醫(yī)藥、食品或飲料領(lǐng)域產(chǎn)品中的一種或多種，優(yōu)選藥物、試劑、食品、保健食品、添加劑或飲料中的一種或多種，進一步優(yōu)選抗結(jié)腸癌藥物、抗結(jié)腸癌試劑、抗結(jié)腸癌食品或抗結(jié)腸癌飲料等中的一種或多種，最優(yōu)選抗結(jié)腸癌藥物。
(一)技術(shù)構(gòu)思自主開發(fā)創(chuàng)新藥物是中國目前的一項緊迫任務(wù)。中國中醫(yī)藥學(xué)具有悠久的歷史，用中草藥預(yù)防和治療疾病方面也積累了豐富的經(jīng)驗，因此從中藥中尋找有效的活性成分是一條有效的途徑，也是中國創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢之所在。
發(fā)明人檢索了《新編國家中成藥》、《臨床常用方劑手冊》、《中國常用中成藥大全》等書籍，推測在糙葉敗醬中極有可能存在抗結(jié)腸癌活性的物質(zhì)或物質(zhì)群。但是，由于對其化學(xué)成分研究不深入，藥理篩選不足，導(dǎo)致活性部位和活性成分不明確以及沒有可行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，限制了糙葉敗醬的進一步開發(fā)和利用。
因此，本發(fā)明通過對單味糙葉敗醬藥材(根和全草)的苷元提取物進行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，并篩選和證明該苷元提取物的活性和用途。
經(jīng)過化學(xué)成分研究，證明糙葉敗醬活性部位中的主要成分為總環(huán)烯醚萜苷元。而根據(jù)文獻檢索，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)總環(huán)烯醚萜苷元大多具有多種顯著的藥理活性，從而推測糙葉敗醬治療結(jié)腸癌的臨床藥效，應(yīng)主要是通過活性部位糙葉敗醬苷元提取物的藥效來發(fā)揮的，研究結(jié)果也證明和證實了糙葉敗醬苷元提取物具有更顯著的藥理活性，實驗證實糙葉敗醬苷元提取物比總環(huán)烯醚萜苷元中的單體效果更佳。
(二)糙葉敗醬苷元提取物1、糙葉敗醬苷元提取物的組成發(fā)明人通過對糙葉敗醬藥材(根和全草)進行系統(tǒng)的化學(xué)成分分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定等實驗研究，發(fā)現(xiàn)糙葉敗醬中主要含有大量的揮發(fā)油、總環(huán)烯醚萜苷元等多種化合物。
本發(fā)明所述的糙葉敗醬苷元提取物是指由糙葉敗醬(Patrinia scabra Bunge.)或同屬植物的根或全草中提取分離出的包含多種環(huán)烯醚萜的混合物，該混合物含有8種環(huán)烯醚萜苷元成分(PS-I、G7-C、G7-E、G7-Z、BJ3401、G9-A、G9-C和G9-D)中的一種或多種。
該混合物還具有如下特征該混合物與Godin試劑(1％香草醛的乙醇溶液和3％高氯酸水溶液)反應(yīng)，于281nm處比色，測定吸收度。該吸收度按單體BJ3401與Godin試劑反應(yīng)于281nm處比色的標(biāo)準(zhǔn)曲線折算，折算出的單體BJ3401含量，應(yīng)該占該混合物總量的40％以上。
也就是說，糙葉敗醬苷元提取物中的成分主要包括總環(huán)烯醚萜苷元，還包括其他成分。
其中，總環(huán)烯醚萜苷元在該苷元提取物中的含量范圍是40％～99.5％(W/W，即重量百分比)，優(yōu)選40％～90％，進一步優(yōu)選50％～60％；其他成分在該苷元提取物中的含量范圍是0.5％以下，其他成分是包括鞣質(zhì)、單糖或多糖、呫噸酮類(xanthones)或類胡蘿卜素等中的一種或多種。
現(xiàn)有的研究表明，其他成分對藥效或藥物的使用等方面至少沒有負(fù)面的影響，而且分離這些成分成本較高，因此目前沒有進一步純化的必要。
2、糙葉敗醬苷元提取物中的總環(huán)烯醚萜苷元各單體的化學(xué)結(jié)構(gòu) PS-I結(jié)構(gòu)式PS-I中文名稱9α-1，7-二氫-1-β-O-(3-甲基-丁酰)-4-[(3-甲基-丁酰)-O-]甲基-6-酮-8-羥基-8-α-羥甲基-環(huán)戊二烯并[c]吡喃PS-I英文名稱(9α-1，7-dihydro-1-β-O-(3-methylbutanoyl)-4-[(3-methylbutanoyl)-O-]methyl-6-one-8-α-hydroxymethyl-8-β-hydroxycyclopenta[c]pyron)
當(dāng)R＝H，為1R，3R及1S，3S的外消旋體時，表示G9-C；當(dāng)R＝H，為1R，3S及1S，3R的外消旋體時，表示G9-A；當(dāng)R＝COCH2CH(CH3)2，為1R，3S及1S，3R的外消旋體時，表示G7-Z。
G7-E的結(jié)構(gòu)式 G9-D的結(jié)構(gòu)式 BJ3401的結(jié)構(gòu)式G7-C的結(jié)構(gòu)式3、糙葉敗醬苷元提取物的活性在篩選具有抗結(jié)腸癌作用的天然活性成分過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)中藥糙葉敗醬(Patriniascabra Bunge.)根或全草的甲醇浸膏具有抗結(jié)腸癌作用，通過對其進行以活性為指導(dǎo)的分離，發(fā)現(xiàn)甲醇浸膏的氯仿萃取部分活性最強，繼續(xù)分離發(fā)現(xiàn)，氯仿萃取部分經(jīng)硅膠柱層析，乙酸乙酯洗脫部分為活性部位。該活性部位再反復(fù)通過硅膠柱色譜、HPLC、SephdexLH-20色譜分離純化，發(fā)現(xiàn)主要成分為多種環(huán)烯醚萜苷元，一共分離出8種環(huán)烯醚萜苷元成分(PS-I、G7-C、G7-E、G7-Z、BJ3401、G9-A、G9-C和G9-D)，其中PS-I、G7-C、G7-E、G7-Z、G9-A、G9-C為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)的新化合物。
本發(fā)明所述的糙葉敗醬苷元提取物對小鼠結(jié)腸癌(C26)移植性腫瘤表現(xiàn)出良好的抑制作用，其高劑量組(800mg/kg)口服抑瘤率達(dá)40％以上，具體見實施例。
PS-I和BJ3401是從糙葉敗醬苷元提取物分離出的單體，通過體外實驗證明其具有抗結(jié)腸癌活性，但二者活性均低于糙葉敗醬苷元提取物，具體見實施例，說明糙葉敗醬苷元提取物是由多種成分綜合發(fā)揮抗結(jié)腸癌作用的，除PS-I和BJ3401外其它環(huán)烯醚萜成分也具有活性。
(三)糙葉敗醬苷元提取物的制備方法本發(fā)明所說的糙葉敗醬苷元提取物的制備方法包括如下步驟(1)提取取糙葉敗醬原料若干，提取，得提取液，即糙葉敗醬苷元提取物；(2)分離純化將提取液分離純化，即得糙葉敗醬苷元提取物。
所述的糙葉敗醬原料包括糙葉敗醬(Patrinia scabra Bunge.)或同屬植物的根或根莖。
所述的提取方法包括溶劑提取法等本領(lǐng)域公知的所有可以使用的方法。
(四)糙葉敗醬苷元提取物的用途1、概述本發(fā)明的進一步目的是提供糙葉敗醬苷元提取物的在制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品中的新用途，產(chǎn)品是包括藥物、試劑、食品或飲料等中的一種或多種，優(yōu)選藥物。
已完成的急性毒性實驗證明，小鼠灌胃給藥對糙葉敗醬苷元提取物的最大耐受量超過2.0g/kg，相當(dāng)于臨床推薦用藥劑量的440倍，表明該有效部位安全可靠。
上述實驗結(jié)果顯示本發(fā)明所指的糙葉敗醬苷元提取物有較好療效，為該中藥提取物臨床用于治療結(jié)腸癌及其相關(guān)病癥提供了更多的藥理學(xué)依據(jù)。該糙葉敗醬苷元提取物及其組合物是一種安全的治療結(jié)腸癌及其相關(guān)病癥的藥物，其原料的根、根莖、全草、全草的地上部分或者其他部位等，或其原料的組合物，也可以直接或間接用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品。
2、糙葉敗醬苷元提取物及其組合物的使用方法與要求本發(fā)明所述的糙葉敗醬苷元提取物可以單獨或與其它活性組分聯(lián)合使用，包括用于制備用于診斷、檢測、預(yù)防、保護、治療或研究相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑、食品或飲料等，尤其是藥物。
在具體使用方面，本發(fā)明所述的糙葉敗醬苷元提取物能夠單獨使用，還能夠與其他許多化學(xué)物質(zhì)一起使用。無論這些化學(xué)物質(zhì)是否具有生物活性或具有治療疾病的功能，包括輔助功能如協(xié)同放大作用、拮抗或緩解糙葉敗醬苷元提取物的副作用等，這些化學(xué)物質(zhì)是包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物或人類用藥等中的一種或多種；優(yōu)選包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體或者食品等中的一種或多種；進一步優(yōu)選醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。
本文使用的“醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體”包括任何和所有的生理適用的溶劑、分散介質(zhì)、胞衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑或吸收延遲劑等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體的例子包括一種或多種的水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其組合物中的一種或多種。在許多情況下，在該組合物中最好包括等滲劑，例如，糖、諸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇或氯化鈉等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體還可以包含少量的輔助物質(zhì)，例如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖液等中的一種或多種，它們增強了該糙葉敗醬苷元提取物的有效期或效力。
從具體的分類上看，所說的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體是指醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括賦形劑，如淀粉或水等中的一種或多種；潤滑劑，如甘油或硬脂酸鎂等中的一種或多種；崩解劑，如微晶纖維素、瓊脂、碳酸鈣或碳酸氫鈉等；填充劑，如淀粉或乳糖等中的一種或多種；粘接劑，如預(yù)膠化淀粉、糊精、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等中的一種或多種；滲透壓調(diào)節(jié)劑，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一種或多種；稀釋劑，如水等；吸收促進劑，如季銨化合物等；表面活性劑，如十六烷醇等；吸附載體，如高嶺土或皂粘土等中的一種或多種；潤滑劑，如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂或聚乙二醇等中的一種或多種；另外，還可以在組合物中加入其它輔劑，如香味劑或甜味劑等中的一種或多種。
例如，將活性組分糙葉敗醬苷元提取物溶解、混懸或乳化于適宜的水性溶劑中(例如，蒸餾水、生理鹽水或格林溶液等中的一種或多種)或油性溶劑中(例如，植物油例如橄欖油、芝麻油、棉籽油、玉米油或丙二醇等中的一種或多種)中，即可制得注射制劑，其中溶劑中可含有分散劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚乙二醇、苯甲醇、氯代丁醇或苯酚等中的一種或多種)、滲透壓調(diào)節(jié)劑(例如，氯化鈉、甘油、D9-甘露糖、D-山梨醇或葡萄糖等中的一種或多種)。在這種情況下，如有必要，可加入添加劑，例如增溶劑(例如，水楊酸鈉或醋酸鈉等中的一種或多種)、穩(wěn)定劑(例如，人血清白蛋白等)、止痛劑(例如，苯甲醇等)等。
本發(fā)明所述及的糙葉敗醬苷元提取物還可以以組合物的形式聯(lián)合使用，特別是與用其它化學(xué)物質(zhì)如藥物對動物尤其是哺乳動物包括人或其他動物進行治療所用的組合物或者是類似的組合物。所述哺乳動物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、豬、馬、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、獼猴或恒河猴等中的一種或多種。例如，可以將本發(fā)明糙葉敗醬苷元提取物加入適于給與受治療者的藥用組合物中。通常，該藥用組合物包含本發(fā)明糙葉敗醬苷元提取物和藥學(xué)上可接受的載體。
糙葉敗醬苷元提取物的組合物特別是藥物組合物可以有各種形式，包括例如液體、半固體和固體等劑量形式中的一種或多種；其中所說的藥物組合物包括治療有效量的糙葉敗醬苷元提取物為活性成分，以及一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。
糙葉敗醬苷元提取物的藥物組合物可以采用本領(lǐng)域公知的常規(guī)生產(chǎn)方法制成各種劑型，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。所述的劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等中的一種或多種，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種)、粘膜透析等中的一種或多種給藥途徑進行以及結(jié)腸癌及相關(guān)病癥的診斷、檢測、治療或科學(xué)研究。
藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.5％～99％的活性成分糙葉敗醬苷元提取物，進一步優(yōu)選含有重量比為1％～95％的活性成分糙葉敗醬苷元提取物，最優(yōu)選含有重量比為5％～90％的活性成分糙葉敗醬苷元提取物。
糙葉敗醬苷元提取物的藥物組合物一般必須無菌且在生產(chǎn)儲存條件下穩(wěn)定?？梢詫⒃摻M合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂質(zhì)體或其它適合于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。通過將所需量的該糙葉敗醬苷元提取物與所需上述成分的一種或組合一起加入適當(dāng)?shù)娜軇┲胁⒔又M行除菌過濾制備無菌注射液。一般而言，通過將該糙葉敗醬苷元提取物加入含有基本分散介質(zhì)和所需的上述其它成分的無菌溶媒中制備分散液。在用于制備無菌注射液的無菌粉劑的情況下，推薦的制備方法是真空干燥和冷凍干燥劑。例如，通過諸如卵磷脂的包衣、在分散液的情況下通過保持所需顆粒大小和通過使用表面活性劑，可以保持溶液的適當(dāng)流動性。通過在該組合物中包括延遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鹽或明膠)可以達(dá)到注射組合物的延長吸收。
用于患者時，本發(fā)明所述的糙葉敗醬苷元提取物劑量為1mg～500mg/kg·天(d)，該劑量或用量通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定，優(yōu)選5mg～40mg/kg·d。
本發(fā)明糙葉敗醬苷元提取物及其藥用組合物可以包括“治療有效量”或“預(yù)防有效量”的本發(fā)明糙葉敗醬苷元提取物?！爸委熡行Я俊笔侵冈诒匾膭┝亢蜁r間下有效達(dá)到所需治療效果的量。糙葉敗醬苷元提取物的治療有效量可以根據(jù)諸如個體的病況、年齡、性別和體重以及該糙葉敗醬苷元提取物在該個體引起所需反應(yīng)的能力等因素而變化。治療有效量亦指該糙葉敗醬苷元提取物的有益治療效果超過其任何毒性或有害效果的量?！邦A(yù)防有效量”是指在必要劑量和時間下有效達(dá)到所需預(yù)防效果的量。因為預(yù)防劑量用于患病前或疾病早期的受治療者，預(yù)防有效量通常小于治療有效量。本發(fā)明糙葉敗醬苷元提取物的治療或預(yù)防有效量的典型的非限制性范圍是5mg～40mg/kg，更優(yōu)選為5mg～20mg/kg。應(yīng)注意，劑量值將根據(jù)欲減輕的疾病類型和嚴(yán)重性變化，也就是說用于患者時，本發(fā)明所述的糙葉敗醬苷元提取物的劑量或用量，通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。另外，應(yīng)理解，對于任何特定受治療者，應(yīng)隨著時間根據(jù)個體需要和給與或監(jiān)督給與所述組合物的人的專業(yè)判斷調(diào)整特定劑量制度，并且本文設(shè)定的劑量范圍僅為例證性的，并不會限制要求保護的組合物的范圍或?qū)嵺`。
也就是說，需要根據(jù)治療的對象、給藥途徑、所治療疾病和狀況等，變化本發(fā)明糙葉敗醬苷元提取物的每次和/或每日的劑量或用量。例如，經(jīng)靜脈給予哺乳動物，尤其是成年人(如體重60kg)，所述糙葉敗醬苷元提取物的單劑量約為50mg～200mg，優(yōu)選約100mg，優(yōu)選每日給藥1～3次?？梢哉{(diào)整劑量單位，以提拱最佳所需反應(yīng)(例如治療或預(yù)防應(yīng)答)。例如，可以單次大劑量給藥，可以在一段時間內(nèi)給予幾個均分量或根據(jù)治療情況的迫切性按比例降低或增加劑量。配制易于給藥和劑量統(tǒng)一的劑量單位形式的非腸道組合物尤其有利。本文使用的劑量單位形式，指適于欲治療的哺乳動物受治療者的單元劑量的物理分離單位；每個單位含有預(yù)定量的計算用于與所需藥用載體一同產(chǎn)生所需治療效果的活性物糙葉敗醬苷元提取物。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格，由以下確定并直接取決于以下(a)該糙葉敗醬苷元提取物的獨特特征和欲達(dá)到的特定治療或預(yù)防效果，和(b)在混合這種用于治療個體敏感性糙葉敗醬苷元提取物的技術(shù)中的內(nèi)在限制。
3、糙葉敗醬苷元提取物及其組合物的藥物劑型和給藥途徑本發(fā)明所述的糙葉敗醬苷元提取物及其組合物制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品，其中按照飲料、食品技術(shù)領(lǐng)域的要求制備的產(chǎn)品能夠診斷、檢測、預(yù)防、保護、治療或研究結(jié)腸癌及其相關(guān)病癥；按照醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域的要求制備的產(chǎn)品能夠用于患者的治療或保健，既能夠單獨直接用于制備治療或保健的藥物，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進行混合或組合，直接或間接用于制備治療或保健的藥物。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。
在本發(fā)明中，所需物料包括本發(fā)明的原料、上述配套使用的化學(xué)物質(zhì)等，均應(yīng)根據(jù)實際情況和需要，采用食品級或藥用級的物料。
本發(fā)明所述的糙葉敗醬苷元提取物及其組合物，可以用本領(lǐng)域已知的各種方法給藥，盡管在許多治療用途中推薦的給藥途徑/給藥方式是噴霧劑或口服給藥。但是，技術(shù)人員會理解給藥途徑/給藥方式隨所需的結(jié)果而變化。在某些具體實施中，該活性化合物可以與保護該化合物免于快速釋放的載體一同制備例如空釋制劑，包括移植物傳遞系統(tǒng)、透皮貼傳遞系統(tǒng)或微囊傳遞系統(tǒng)等中的一種或多種。此外，還可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羥基乙酸、膠原蛋白、聚正酯或聚乳酸等中的一種或多種。制備這種制劑的許多方法均已申請專利或一般為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知(參見例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson編輯，Marcel Dekker，Inc.，紐約，1978)。
本發(fā)明所述的糙葉敗醬苷元提取物及其組合物，通常通過口服、鼻吸入、直腸或腸胃外給藥等中的一種或多種方式，施用于需要這種治療的患者。
也就是說，糙葉敗醬苷元提取物制備的藥物及其藥物組合物可以采用本領(lǐng)域公知的方法制成各種劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、注射劑等，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射、皮下注射等)、粘膜透析等給藥途徑進行結(jié)腸癌的防治。
用于口服時，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑或膠囊等中的一種或多種。在實施時，本發(fā)明糙葉敗醬苷元提取物可以與例如惰性稀釋劑或可同化的食用載體一同口服。該糙葉敗醬苷元提取物(和共它成分，如果需要)亦可以包于硬或軟殼明膠膠囊、壓制成片劑或直接加入受治療者的膳食中。關(guān)于口服治療給藥，可以將所述糙葉敗醬苷元提取物與賦形劑一起加入并以可食片劑、頰含片劑、酊劑、膠囊、懸液、糖漿或糯米紙囊劑等等中的一種或多種形式使用。
為了以非腸道給藥之外給予本發(fā)明糙葉敗醬苷元提取物，可能需要用防止其失活的材料對該糙葉敗醬苷元提取物包衣或與該糙葉敗醬苷元提取物一同給予。亦可以將補充的活性化合物加入該組合物中。在具體實施時，將本發(fā)明糙葉敗醬苷元提取物與一種或多種可以用于治療疾病的其它治療藥物共配制和/或共給予。這種聯(lián)合使用，可以優(yōu)越地利用較低劑量的該給予的治療藥物，因此避免可能的毒性或與各種單一療法相關(guān)的并發(fā)癥。
制成液體制劑如水劑、油懸浮劑或其它液體制劑中的一種或多種，如糖漿或酏劑等中的一種或多種；用于腸胃外給藥時，可將其制成注射用的溶液劑、水劑或油性懸浮劑等中的一種或多種。
以上所述的使用形式中，優(yōu)選的形式是片劑、包衣片劑、膠囊劑、顆粒劑、栓劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等中的一種或多種，進一步優(yōu)選膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑或注射劑等中的一種或多種，特別優(yōu)選混懸劑、乳劑、溶液劑或注射劑等中的一種或多種。
此外，糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料在某些情況下也能夠單獨直接用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進行混合或組合，以組合物的形式直接或間接用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。
例如，糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的粉末用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品特別是藥物的各種劑型，或者是糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的粉末與有關(guān)的輔料用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品尤其是藥物的各種劑型，或者是糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的粉末與有關(guān)的制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品如藥物一起用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品如藥物的各種劑型，或者是糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的粉末與有關(guān)的輔助藥物一起用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品如藥物的各種劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑或混懸劑等中的一種或多種，優(yōu)選膠囊劑。
所述的方法之一是將糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的粉末灌裝為膠囊劑，方法之二是將糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的粉末與有關(guān)的制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品如藥物一起灌裝為膠囊劑，方法之三是將糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的粉末與有關(guān)的輔助藥物一起灌裝為膠囊劑；方法之四是將糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的粉末與有關(guān)的輔料一起按常規(guī)方法直接壓為片劑或顆粒劑，方法之五是將糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的粉末、有關(guān)的制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品如藥物一起與有關(guān)的輔料按常規(guī)方法直接壓為片劑或顆粒劑，方法之六是將糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的粉末、有關(guān)的輔助藥物一起與有關(guān)的輔料按常規(guī)方法直接壓為片劑或顆粒劑等。
除上述的六種基本方法外，還能夠選擇糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的其他形式或?qū)Σ谌~敗醬苷元提取物所使用的藥材原料進行本領(lǐng)域公知的方法處理后，制備各種劑型的含有糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的產(chǎn)品如藥物。但是，需要注意的是，在上述直接使用糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的時候，應(yīng)先根據(jù)所使用的糙葉敗醬苷元提取物的劑量要求，換算得到所需要使用的糙葉敗醬苷元提取物所使用的藥材原料的用量。
綜上所述，本發(fā)明糙葉敗醬苷元提取物及其組合物可用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品，優(yōu)選藥物和食品，進一步優(yōu)選藥物。
(五)技術(shù)特長本發(fā)明有針對性地研究糙葉敗醬苷元提取物，拓展了新的醫(yī)藥用途，也為預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究結(jié)腸癌提供了一種新的藥物來源。該原料安全低毒，藥理作用較強，其原料來源廣泛、價廉，制備工藝簡單、得率高，可用于制備預(yù)防、診斷、檢測、保護、治療和研究結(jié)腸癌的產(chǎn)品，易于推廣應(yīng)用。
也就是說，本發(fā)明的研究結(jié)果可被進一步深入開發(fā)為具有臨床應(yīng)用前景的防治結(jié)腸癌的產(chǎn)品尤其是新藥。該產(chǎn)品具有療效確切、有效劑量低、無毒副作用的優(yōu)點，與中國國內(nèi)、國際上的同類產(chǎn)品相比具有顯著的優(yōu)勢。結(jié)腸癌為臨床常見病、多發(fā)病，隨著全球環(huán)境的日益惡化，預(yù)計結(jié)腸癌等疾病的發(fā)病率將不斷攀升。因此，本發(fā)明還可為后續(xù)的新藥研究打下良好的基礎(chǔ)，并進一步產(chǎn)生較大的經(jīng)濟效益和社會效益。
經(jīng)過長期的藥理學(xué)試驗，糙葉敗醬苷元提取物具有治療結(jié)腸癌及其相關(guān)病癥的活性，直接使用糙葉敗醬苷元提取物，無須經(jīng)過胃腸道細(xì)菌的代謝，使作用更直接，避免個體之間的胃腸道菌群活性有差異造成代謝產(chǎn)物的差異而產(chǎn)生藥效上的差異，從而克服了中藥給藥劑量難以控制的問題，并提高了生物利用度。
實驗證明，本發(fā)明所述及的糙葉敗醬苷元提取物以及組合物特別是藥物組合物是一種安全、高效、穩(wěn)定、價廉的防治結(jié)腸癌的藥物。其制備成本低廉，活性成分明確；活性高，糙葉敗醬苷元提取物口服抑瘤率大于40％；毒性較低，糙葉敗醬苷元提取物的最大耐受量＞2g/kg。
直接使用糙葉敗醬苷元提取物，藥物的生物利用度高，可以準(zhǔn)確控制用藥劑量。糙葉敗醬苷元提取物性質(zhì)穩(wěn)定，治療結(jié)腸癌及其相關(guān)病癥的效果明顯，使用糙葉敗醬苷元提取物制備的制劑質(zhì)量穩(wěn)定，故其更適于治療結(jié)腸癌及其相關(guān)病癥藥物的工業(yè)化生產(chǎn)。
總之，本發(fā)明積極適應(yīng)了現(xiàn)代醫(yī)療、食品、飲料和科研領(lǐng)域的工作需要和人性化服務(wù)的需要，是用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品的安全原料，可直接或間接以及診斷、檢測、預(yù)防、保護、治療或研究結(jié)腸癌及其相關(guān)病癥。


圖1表示對照品的紫外吸收圖譜橫坐標(biāo)表示波長(Wavelength)；單位納米(nm)；縱坐標(biāo)表示吸收度(Abs)；Samplle Namebzp-2Collection Time2005-6-20 16:10:57Peak TablePeak Style PeaksPeak Threshold 0.0100Range 500.00nm to 200.00nmWavelength(nm) Abs281.00 0.8176209.00 0.4317中文翻譯如下樣本名稱bzp-2收集時間2005-6-20 16:10:57峰表峰形式 峰峰閾值 0.0100范圍 500.00納米到200納米波長(納米)吸收度281.000.8176209.000.4317圖2表示糙葉敗醬藥材苷元的紫外吸收圖譜橫坐標(biāo)表示波長(Wavelength)；單位納米(nm)；縱坐標(biāo)表示吸收度(Abs)；Sample Namesample2Collection Time 2005-6-20 16:36:49Peak TablePeak Style PeaksPeak Threshold 0.0100Range500.00nm to 200.00nmWavelength(nm)Abs282.001.2420208.002.7341
中文翻譯如下樣本名稱樣本2收集時間 2005-6-20 16:36:49峰表峰形式 峰峰閾值 0.0100范圍 500.00納米到200納米波長(納米)吸收度282.001.2420208.002.73具體實施方式
本發(fā)明研究了糙葉敗醬苷元提取物的用途，提供了一種能夠用于制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品如藥物等或者是抗結(jié)腸癌產(chǎn)品特別是藥物的原料，便于醫(yī)療行業(yè)和相關(guān)行業(yè)如食品、飲料等領(lǐng)域的安全使用，包括疾病的診斷、檢測、治療或科學(xué)研究等。
下面詳細(xì)闡述制備糙葉敗醬苷元提取物的具體操作方法。
(1)提取取干燥的糙葉敗醬原料若干，粉碎，加入提取溶劑混和、提取(用低元醇或低元醇水溶液滲漉或回流提取)，優(yōu)選甲醇、乙醇、95～70％乙醇溶液，將提取液過濾、濃縮，即得糙葉敗醬藥材苷元提取液。
(2)分離純化將糙葉敗醬苷元提取液經(jīng)分離純化步驟，得到糙葉敗醬苷元提取物。
這里所說的提取、分離純化方法包括溶劑提取法、溶劑萃取法、柱層析法等本領(lǐng)域公知的提取、分離純化方法。
例如，將糙葉敗醬苷元提取液加水混懸，用石油醚或己烷萃取，得到石油醚或己烷層和水層。水層用乙醚或氯仿或乙酸乙酯萃取，減壓回收乙醚或氯仿或乙酸乙酯，得到浸膏，浸膏用硅膠拌樣，蒸干，裝硅膠柱，依次用石油醚，乙酸乙酯依次洗脫，乙酸乙酯洗脫部位蒸干得到糙葉敗醬苷元提取物，具體見實施例。
具體來說在步驟(1)中①在所采用的溶劑提取法中，提取溶劑是包括水、醇類或其他有機溶劑等中的一種或多種，所述的醇類提取溶劑包括甲醇、乙醇、乙醇水溶液、丙醇或丁醇等中的一種或多種，所述的其他有機溶劑包括乙酸乙酯、丙酮等，優(yōu)選水、甲醇、乙醇、乙醇水溶液、丙醇、丁醇、乙酸乙酯、丙酮等有機溶劑或其混合溶劑中的一種或多種，進一步優(yōu)選包括乙醇或乙醇水溶液等中的一種，特別優(yōu)選60％～90％乙醇水溶液。
②所采用的溶劑提取法中，提取方法優(yōu)選超聲提取法、滲漉提取法或加熱回流提取法等中的一種或多種，進一步優(yōu)選加熱回流提取法；提取次數(shù)可以為一次或多次。
在步驟(2)中所采用的分離純化方法優(yōu)選溶劑萃取法，即將糙葉敗醬藥材苷元提取物用水分散，用石油醚脫脂后，再采用適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑萃取以除去脂溶性成分，得到萃取殘留物；或直接用適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑進行萃取以除去脂溶性成分，得到萃取殘留物；所述的適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑可以選用氯仿、二氯甲烷、乙醚或乙酸乙酯等中的一種或多種進行萃取；萃取次數(shù)可以為一次或多次。分取有機溶劑層，減壓濃縮至干，即得糙葉敗醬苷元提取物。此時，糙葉敗醬苷元提取物的得率為1％～10％，即糙葉敗醬苷元提取物占糙葉敗醬藥材總重量的1％～10％。
總而言之，在糙葉敗醬苷元提取物的制備方法中，是以糙葉敗醬新鮮藥材或市售藥材為原料為主；原料粉碎后，順次采用溶劑提取法、溶劑萃取法或大孔吸附樹脂法等中的一種或多種，即得糙葉敗醬苷元提取物的粗品；如果結(jié)合減壓濃縮干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等常用干燥方法中的一種或多種，則可制備得到糙葉敗醬苷元提取物粗品的浸膏或干燥物。
如果進一步采用柱層析法等分離純化方法，則能夠得到糙葉敗醬苷元提取物；此時，得到的總環(huán)烯醚萜苷元占糙葉敗醬苷元提取物的含量在40％～60％(W/W)。
如果需要該提取物的干浸膏或粉末的話，可以進一步進行干燥(3)干燥干燥如噴霧干燥或減壓干燥，得到提取物的干浸膏或粉末，即為本發(fā)明的該提取物的干浸膏或粉末。
在步驟(3)中步驟2得到的該提取物進行干燥處理，得到干燥形式的提取物，所用的干燥方法包括真空干燥、噴霧干燥和冷凍干燥等。
下面以幾個典型的劑型為例，詳細(xì)闡述糙葉敗醬苷元提取物各種劑型的具體制備方法。
本發(fā)明制備粉針劑一般采用常規(guī)的冷凍干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取糙葉敗醬苷元提取物，加入賦形劑，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，灌裝，半軋塞，冷凍干燥，壓塞軋蓋即可。所用的賦形劑選自甘露醇、水解明膠、葡萄糖、乳糖或右旋糖苷等中的一種或幾種。每瓶含糙葉敗醬苷元提取物10～100mg。
本發(fā)明制備粉針劑也可采用噴霧干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取糙葉敗醬苷元提取物，加或不加賦形劑(賦形劑同上)，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，噴霧干燥，無菌分裝，壓塞軋蓋即可。每瓶含糙葉敗醬苷元提取物10～100mg。
本發(fā)明制備小針劑時，以注射用水作為溶媒配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯或二甲基乙酰胺等中的一種或幾種。每支含糙葉敗醬苷元提取物10～100mg。
本發(fā)明制備葡萄糖輸液或氯化鈉輸液，以注射用水作為溶媒，加入適量葡萄糖或氯化鈉配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯或二甲基乙酰胺等中的一種或幾種。每瓶含糙葉敗醬苷元提取物10～100mg。
本發(fā)明制備片劑、膠囊、顆粒劑、口服液等口服制劑，輔料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸鹽等，按常規(guī)技術(shù)制備。
在本發(fā)明中，以上所述的具體實施方式
和以下所述的實例均是為了更好地闡述本發(fā)明，并不是用來限制發(fā)明的范圍。
下面通過實施例對本發(fā)明作詳細(xì)描述。
實施例1、糙葉敗醬苷元提取物的制備方法(一)糙葉敗醬苷元提取物的制備干燥的糙葉敗醬根莖50公斤，粉碎后，用甲醇潤濕后，裝入滲漉桶中，用甲醇滲漉。50℃減壓濃縮，加入50℃左右的熱水，混懸。用石油醚(60～90)萃取。得到石油醚層和水層。石油醚層濃縮后得到石油醚部分浸膏。取200ml水層依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別減壓回收，得到乙酸乙酯部分和正丁醇部分。
取乙酸乙酯浸膏250g，用氯仿-甲醇10∶1溶解，硅膠(100-200目)500g拌樣，60℃蒸干。裝硅膠柱，裝柱用硅膠為2000g。依次用石油醚，乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇4∶1依次洗脫，每種極性的溶劑用量均為20L。石油醚洗脫得到1.6g，乙酸乙酯洗脫得到97.4g，乙酸乙酯-甲醇4∶1洗脫得到53.8g.。薄層檢測，苷元存在于乙酸乙酯洗脫部位。
(二)糙葉敗醬苷元提取物的含量測定紫外分光光度法測定糙葉敗醬苷元提取物的含量。
(1)儀器與試劑Varian Cary 100紫外分光光度儀；水為蒸餾水，其余為分析純。天平十萬分之一。
(2)對照品苷元BJ3401。
(3)對照品溶液的制備精密秤取對照品5.14mg，于25ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度。取5ml至50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。
(4)樣品溶液的制備精密秤取糙葉敗醬苷元提取物10.83mg，于25ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度。取5ml至50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。
(5)吸收波長考察測定對照品溶液于200nm～500nm范圍內(nèi)紫外吸收曲線，在281nm波長處有最大吸收峰，因此采用281nm檢測。結(jié)果見圖1。
(6)三批樣品的含量測定 取本品三批各8mg，精密稱定，用甲醇定容于25ml容量瓶，準(zhǔn)確移取5ml至50ml容量瓶，用甲醇定容至刻度。取對照品5mg同法配制。分別測定紫外吸收，外標(biāo)法計算含量。結(jié)果見下表1。
表1、三批原料糙葉敗醬苷元提取物含量測定

實施例2、糙葉敗醬苷元提取物及單體(PS-I、BJ3401)對小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株C26的影響1材料和方法1.1藥物糙葉敗醬苷元提取物參照實施例1提取，PS-I、BJ3401為其中含有的單體，通過HPLC從糙葉敗醬苷元提取物中分離制備。
1.2瘤株小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株C26由上海市醫(yī)工院提供1.3試劑及儀器MTT(購于Sigma公司)；DMEM、胰蛋白酶、小牛血清(購于GIBCO公司)。Multiskan MK3型酶標(biāo)儀(Labsystems Dragon公司)表2、糙葉敗醬中環(huán)烯醚萜苷元(PS-I、BJ3401)對小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株C26的生長影響(x±S，n＝3)

與對照組比*p＜0.05，**p＜0.01
1.4MTT法測細(xì)胞增殖抑制率分別收集對數(shù)生長期的小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株C26(2×104/ml)，種入96孔培養(yǎng)板，每孔100μl，分別按設(shè)計加入藥液，陰性對照用相應(yīng)培養(yǎng)液代之，置5％CO2、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。處理后的細(xì)胞，移去DMEM培養(yǎng)基，D-Hank′s液洗2次，每孔加入100μlDMEM培養(yǎng)基和10μlMTT(5mg/ml)，37℃孵育4h。棄去液體，每孔加入100μlDMSO，放置數(shù)分鐘，使MTT結(jié)晶溶解，在酶標(biāo)儀上540nm處測吸收值。
1.5統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)用±S表示，顯著性差異采用student’s-t檢驗評價。
2結(jié)果PS-I、BJ3401小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株C26的生長均有抑制作用，且具有一定的濃度依賴關(guān)系。濃度為10-5mg/ml時，對C26的抑制率分別為60.44％和53.34％。結(jié)果見表2。
實施例3、糙葉敗醬苷元提取物小鼠結(jié)腸癌(C26)移植性腫瘤的影響1材料和方法1.1實驗動物小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株C26由上海市醫(yī)工院提供；BABL/C+ICR＝F1小鼠，19～22克，購自由上海斯萊克實驗動物有限公司提供，許可證號SCXK(滬)2003-0003。
1.2試劑及儀器環(huán)磷酰胺(規(guī)格200mg/瓶，批號050206，上海華聯(lián)制藥有限公司)；天平(JA2003A，上海精天電子儀器有限公司)1.3小鼠結(jié)腸癌(C26)移植性腫瘤模型建立及藥物作用選生長旺盛之小鼠結(jié)腸癌(C26)瘤源，以勻漿法(1∶8)制備成細(xì)胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種0.2ml。同時每天灌胃糙葉敗醬苷元提取物(200mg/kg、800mg/kg)，陽性對照藥腹腔注射環(huán)磷酰胺(25mg/kg)，每天1次。接種后10天處死動物，解剖，取皮下小鼠腫瘤，稱瘤重。
1.4統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)用±S表示，顯著性差異采用student’s-t檢驗評價。
表3、對移植小鼠結(jié)腸癌(C26)荷瘤小鼠腫瘤重量的影響(x±S，n＝10)

與生理鹽水組比較，**P＜0.012結(jié)果生理鹽水組移植小鼠結(jié)腸癌(C26)荷瘤腫瘤重量可達(dá)1.555±0.258g，糙葉敗醬中環(huán)烯醚萜苷元可顯著減小移植小鼠結(jié)腸癌(C26)荷瘤小鼠腫瘤，非常顯著減輕腫瘤重量(P＜0.01)，低、高劑量組(200mg/kg、800mg/kg)抑制率分別為27.4％和41.4％，表明糙葉敗醬中環(huán)烯醚萜苷元對移植小鼠結(jié)腸癌(C26)荷瘤小鼠腫瘤有抑制作用。結(jié)果見表3。
結(jié)論經(jīng)體外和體內(nèi)試驗表明糙葉敗醬中環(huán)烯醚萜苷元具有抗結(jié)腸癌作用。
實施例4、糙葉敗醬苷元提取物片劑的制備處方糙葉敗醬苷元提取物 500g淀粉30g乳糖40g羧甲基淀粉鈉5g淀粉漿(7％) 適量硬脂酸鎂1％(1.45g)制成1000片工藝取處方量糙葉敗醬苷元提取物，粉碎過100目篩，再將處方量的淀粉、乳糖粉碎過100目篩，混勻。將預(yù)知子總皂苷加入混勻的淀粉和乳糖中，混勻。加入適量50％乙醇拌勻，經(jīng)16目鐵篩絲網(wǎng)制粒，60℃以下干燥，整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，分析含量后壓片?？芍瞥?000片每片含500mg糙葉敗醬苷元提取物的片劑。
實施例5、糙葉敗醬苷元提取物膠囊劑的制備處方糙葉敗醬苷元提取物 500g淀粉 140g微粉硅膠 10g制成1000粒工藝取處方量糙葉敗醬苷元提取物，粉碎過100目篩，加入處方量的淀粉、微粉硅膠中，混勻，直接裝入膠囊，可制成1000粒每粒含500mg糙葉敗醬苷元提取物的膠囊劑。
實施例6、糙葉敗醬苷元提取物注射劑的制備處方糙葉敗醬苷元提取物 50g乙醇(95％) 4000g
丙二醇(C.P.) 1000g注射用水 加至10000ml制成1000支工藝取20℃乙醇(95％)5000g，加入活性炭5g攪拌，經(jīng)砂芯組減壓過濾，備用。取處方量糙葉敗醬苷元提取物加入上述乙醇4000g中，加熱至約50℃，充分?jǐn)嚢?，使之溶解澄明，然后加入處方量丙二醇，再加入新鮮注射用水使全量成10000ml，充分?jǐn)嚢?，混勻，加入活性?g，經(jīng)砂芯組減壓過濾澄明，合并前后濾液，再以專用砂芯精濾澄明。檢查含量及澄明度合格后灌封，100℃流通蒸氣滅菌30min，即得每只10ml含糙葉敗醬苷元提取物50mg的注射劑。
權(quán)利要求
1.糙葉敗醬苷元提取物，其特征在于，該苷元提取物包括總環(huán)烯醚萜苷元以及其他成分，其中總環(huán)烯醚萜苷元的含量為40％～99.5％(重量百分比，下同)，其他成分的含量是0.5％以下；在該總環(huán)烯醚萜苷元中，是包括PS-I、G7-C、G7-E、G7-Z、BJ3401、G9-A、G9-C或G9-D中的一種或多種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糙葉敗醬苷元提取物，其特征在于，所述的該苷元提取物的總環(huán)烯醚萜苷元的含量為50％～60％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糙葉敗醬苷元提取物，其特征在于，所述的其他成分是包括鞣質(zhì)、單糖或多糖、呫噸酮類或類胡蘿卜素等中的一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項所述的糙葉敗醬苷元提取物的制備方法，其特征在于，該方法包括如下步驟(1)提取取糙葉敗醬原料若干，提取，得提取液，即糙葉敗醬苷元提取物；(2)分離純化將提取液分離純化，即得糙葉敗醬苷元提取物；所述的糙葉敗醬原料包括糙葉敗醬(Patrinia scabra Bunge.)或同屬植物的根或根莖；所述的提取方法包括溶劑提取法等本領(lǐng)域公知的所有可以使用的方法；這里所說的提取、分離純化方法是包括本領(lǐng)域公知的溶劑提取法、溶劑萃取法或柱層析法中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的糙葉敗醬苷元提取物的制備方法，其特征在于，所述的提取方法中，如果需要該提取物的干浸膏或粉末的話，可以進一步進行干燥。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的糙葉敗醬苷元提取物的制備方法，其特征在于，所述的提取方法是包括溶劑提取法在內(nèi)的本領(lǐng)域公知的所有可以使用的方法。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的糙葉敗醬苷元提取物的制備方法，其特征在于，所述的提取方法是溶劑提取法。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的糙葉敗醬苷元提取物的制備方法，其特征在于，所述的溶劑提取法是包括常用的熱回流提取、連續(xù)逆流提取、超聲提取法、浸漬提取法、滲漉提取法、煎煮提取法或連續(xù)回流提取法中的一種或多種；提取次數(shù)是一次或多次。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的糙葉敗醬苷元提取物的制備方法，其特征在于，所述的溶劑提取法是包括超聲提取法、滲漉提取法、連續(xù)逆流提取或加熱回流提取法中的一種；提取次數(shù)是多次。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的糙葉敗醬苷元提取物的制備方法，其特征在于，所述的溶劑提取法是加熱回流提取法；提取次數(shù)是多次。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的糙葉敗醬苷元提取物的制備方法，其特征在于，所述的加熱回流提取法所使用的提取溶劑是包括常見的水試劑、親水性的有機溶劑或親脂性的有機溶劑三類提取溶劑中的一種或多種。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的糙葉敗醬苷元提取物的制備方法，其特征在于，所述的水試劑是包括水、酸水或堿水中的一種；所述的親水性的有機溶劑是包括乙醇、乙醇水溶液或甲醇中的一種或多種；所述的親脂性的有機溶劑是包括石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷中的一種或多種。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糙葉敗醬苷元提取物在制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糙葉敗醬苷元提取物的組合物在制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的糙葉敗醬苷元提取物的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗結(jié)腸癌產(chǎn)品是包括醫(yī)藥、食品或飲料領(lǐng)域產(chǎn)品中的一種或多種。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的糙葉敗醬苷元提取物的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗結(jié)腸癌產(chǎn)品是包括藥物、試劑、食品、保健食品、添加劑或飲料中的一種或多種。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的糙葉敗醬苷元提取物的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗結(jié)腸癌產(chǎn)品是抗結(jié)腸癌藥物、抗結(jié)腸癌試劑、抗結(jié)腸癌食品或抗結(jié)腸癌飲料中的一種或多種。
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糙葉敗醬苷元提取物的原料在制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糙葉敗醬苷元提取物的原料的組合物在制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的糙葉敗醬苷元提取物的原料在制備抗結(jié)腸癌產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，所述的糙葉敗醬苷元提取物的原料是包括根、根莖、全草、全草的地上部分或者其他部位中的一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療結(jié)腸癌的藥物及其制備方法，即從中藥糙葉敗醬中提取分離得到的糙葉敗醬苷元提取物及其制備方法，該藥物中的有效成分是來自于中藥糙葉敗醬的總環(huán)烯醚萜苷元，其含量＞40％。本發(fā)明還提供了該藥物的制劑和劑型及糙葉敗醬的總環(huán)烯醚萜苷元的制備方法。經(jīng)藥理學(xué)試驗證明本發(fā)明所涉及的糙葉敗醬總環(huán)烯醚萜苷元制成的藥物使用安全，有抑制移植小鼠結(jié)腸癌(C26)荷瘤小鼠腫瘤的重量的作用，是一種具有良好開發(fā)前景的治療結(jié)腸癌的藥物，應(yīng)用糙葉敗醬苷元提取物可制成片劑、膠囊、滴丸、顆粒劑或口服液。
文檔編號A61P35/00GK101057876SQ20071003898
公開日2007年10月24日 申請日期2007年4月3日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月3日
發(fā)明者李鐵軍, 顧正兵, 邱彥, 毛俊琴, 陳強, 芮耀誠 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)