專利名稱：分子沉積法多層固定化酶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于固定化酶及制備方法。
固定化酶是60年代酶學(xué)領(lǐng)域掘起的技術(shù)，對酶技術(shù)應(yīng)用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)和酶傳感器的開發(fā)起到了關(guān)鍵作用。目前已開發(fā)了許多固定化酶方法，包括包埋法、交聯(lián)法和載體結(jié)合法等。其中載體結(jié)合法是將酶分子通過共價偶聯(lián)或吸附使其與非水溶性載體結(jié)合，從而形成固定化酶。該方法由于酶分子只在載體表面(包括多孔載體內(nèi)表面)單層結(jié)合，因此單位重量載體的酶活力受到限制。
本發(fā)明的目的是增加單位重量載體的固定化酶活力。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的(1).把酶分子通過共價偶聯(lián)或吸附使其與非水溶性載體結(jié)合形成單層固定化酶。
(2).把(1)中形成的單層固定化酶置于一有機電解質(zhì)溶液中，放置0.5小時后使有機電解質(zhì)分子沉積在酶分子表面，洗凈抽干后，再置入酶溶液中放置6小時，使酶分子沉積在有機電解質(zhì)表面，得雙層固定化酶。
(3).重復(fù)(2)中步驟得多層固定化酶。
本發(fā)明提高了單位重量固定化酶的總活力，固定化方法簡單，載體可再生，該固定化酶應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)可縮短反應(yīng)周期，減少能量消耗，降低成本。
實施例用大孔強堿性聚苯乙烯球系季胺基陰離子交換樹脂直接吸附葡萄糖異構(gòu)酶，形成單層固定化酶，該固定化葡萄糖異構(gòu)酶活力達11000-12000工業(yè)單位/克干載體。
把上述形成的單層固定化葡萄糖異構(gòu)酶置入季胺基線性聚苯乙烯溶液中，放置0.5小時后洗凈、抽干，再放入葡萄糖異構(gòu)酶溶液中放置6小時，得雙層固定化酶，該固定化雙層葡萄糖異構(gòu)酶活力達21000-22000工業(yè)單位/克干載體。
用此固定化雙層葡萄糖異構(gòu)酶裝入指定管內(nèi)形成固定床反應(yīng)器，以pH值為8.0-8.5、濃度為40-42%的葡萄糖溶液為底物，在溫度為60℃-62℃的條件下使底物通過反應(yīng)器，則有42%的葡萄糖轉(zhuǎn)化為果糖，該固定化雙層葡萄糖異構(gòu)酶在上述固定床反應(yīng)器條件下半壽期為45天，生產(chǎn)能力為1公斤固定化葡萄糖異構(gòu)酶可轉(zhuǎn)化9500公斤葡萄糖(絕干物質(zhì))產(chǎn)生含42%果糖的果葡糖漿。
權(quán)利要求
1.一種分子沉積多層固定化酶的方法，它是把酶分子通過共價偶聯(lián)或吸附使其與非水溶性載體結(jié)合，其特征在于a.把形成的單層固定化酶置于一有機電解質(zhì)溶液中，放置一定時間后使有機電解質(zhì)分子沉積在酶分子表面，洗凈抽干后，再置入酶溶液中放置一定時間，使酶分子沉積在有機電解質(zhì)表面，得雙層固定化酶。b.重復(fù)a中步驟得多層固定化酶。
2.一種分子沉積多層固定化酶，其特征是在非水溶性載體上通過有機電解質(zhì)分子和酶分子交替沉積而形成的多層固定化酶。
全文摘要
一種分子沉積法多層固定化酶及其方法。它是通過把用載體結(jié)合法形成的單層固定化酶，反復(fù)置入有機電解質(zhì)溶液中和酶溶液中，使有機電解質(zhì)分子和酶分子交替沉積，從而形成多層固定化酶。該固定化酶增加了單位重量固定化酶的總活力，方法簡單，載體可再生。該固定化酶應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)可縮短反應(yīng)周期、減少能量消耗和降低成本。
文檔編號C12N11/08GK1087120SQ93116268
公開日1994年5月25日 申請日期1993年8月9日 優(yōu)先權(quán)日1993年8月9日
發(fā)明者孔維, 王立平, 周慧, 李惟, 沈家驄 申請人:吉林大學(xué)