本發(fā)明涉及包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合凝聚物、其制備方法以及包含其的組合物。此外，本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防代謝疾病和/或炎性疾病的包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物。此外，本發(fā)明涉及用于促進(jìn)骨發(fā)育、生長、強(qiáng)度和/或愈合或者預(yù)防和/或治療骨疾病的包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物。

背景技術(shù)：

1、乳鐵蛋白(lf)和骨橋蛋白(opn)已被確定具有有益的健康益處，因此已嘗試將這些蛋白質(zhì)用于營養(yǎng)產(chǎn)品或藥物產(chǎn)品中。

2、乳鐵蛋白(lf)是一種鐵結(jié)合糖蛋白，存在于大多數(shù)哺乳動物的乳汁中。這種蛋白質(zhì)通常在早期和成熟人乳中的濃度分別為約4.91g/l和2.10g/l，而在牛乳中的濃度則為約1/10。lf是具有相關(guān)生物功能的蛋白質(zhì)，包括抗微生物、抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。在嬰兒群體中的若干臨床研究已經(jīng)將lf與晚發(fā)型敗血癥和壞死性小腸結(jié)腸炎的發(fā)病率降低聯(lián)系起來。

3、已知lf與可溶復(fù)合物形式的陰離子蛋白質(zhì)結(jié)合。在嬰兒配方食品共混物的濕混合期間添加乳鐵蛋白時，蛋白質(zhì)在溫度和ph的影響下經(jīng)歷伸展變性和重折疊，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)不穩(wěn)定性和粘度增大。這種現(xiàn)象使得在諸如嬰兒配方食品的產(chǎn)品中以濕態(tài)(即，在干燥之前)添加乳鐵蛋白非常復(fù)雜。

4、因此，對于在制備好產(chǎn)品的基料粉末之后通過干混合以固體形式將乳鐵蛋白添加到諸如嬰兒配方食品的產(chǎn)品中已有描述。然而，此種方法具有挑戰(zhàn)性，因為以固體形式添加的乳鐵蛋白需要是無菌的。為了實現(xiàn)所需的無菌水平，乳鐵蛋白需要經(jīng)受滅菌技術(shù)。大多數(shù)滅菌技術(shù)涉及使用高熱，這可導(dǎo)致乳鐵蛋白的變性?？墒褂闷渌麥缇夹g(shù)，諸如膜過濾，但這些滅菌技術(shù)可能成本高昂并且需要特定設(shè)備。另外，在最終產(chǎn)品中添加無菌乳鐵蛋白需要特定且精確的無菌定量給料設(shè)備。

5、骨橋蛋白(opn)是次要的、酸性的、高度磷酸化的糖蛋白，在人乳中的濃度也高于牛乳。據(jù)報道，人乳、牛乳和嬰兒配方食品中的平均opn濃度分別為138mg/l、18mg/l和9mg/l。opn具有若干種生物功能，包括刺激免疫、大腦和腸道發(fā)育的能力。另據(jù)報道，在嬰兒配方食品中補(bǔ)充opn可降低發(fā)燒的發(fā)生率，同時改變血漿細(xì)胞因子模式，導(dǎo)致促炎性tnf-α水平降低和白細(xì)胞介素-2水平提高。

6、為了克服乳鐵蛋白滅菌的問題，非常希望開發(fā)乳鐵蛋白和骨橋蛋白的組合形式，從而允許將它們與嬰兒配方食品的其他成分一起添加到濕混合物中，并在嬰兒配方食品組合物中進(jìn)行無菌加工或噴霧干燥。

7、此外，非常希望增強(qiáng)乳鐵蛋白的生物活性和/或生物利用度，特別是與骨橋蛋白組合施用于受試者，特別是患有代謝疾病和/或炎性疾病的受試者。

8、具體地講，非常希望改善乳鐵蛋白的生物活性和/或生物利用度，特別是消化后在受試者體內(nèi)與骨橋蛋白組合，特別是用于治療和/或預(yù)防代謝疾病和/或炎性疾病。

9、另外，乳鐵蛋白還可以促進(jìn)骨生長。在生理濃度下，乳鐵蛋白有效地刺激原代成骨細(xì)胞的增殖和分化，并且還充當(dāng)存活因子，用于抑制由血清剝奪誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。乳鐵蛋白還影響破骨細(xì)胞形成，并能有效地抑制破骨細(xì)胞生成(naot,d.等人,2005.clinicalmedicine&research,3(2),第93-101頁)。

10、研究表明，骨橋蛋白還在骨代謝和穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮作用。骨橋蛋白是神經(jīng)元介導(dǎo)和內(nèi)分泌調(diào)節(jié)骨量的重要因子，并參與生物活動，諸如若干種骨相關(guān)細(xì)胞的增殖、遷移和粘附。已經(jīng)證明骨橋蛋白與許多骨相關(guān)疾病(包括骨質(zhì)疏松癥)的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)(si,j.等人,2020.medical?science?monitor:international?medical?journal?ofexperimental?and?clinical?research,26,第e919159-1頁)。

11、非常希望增強(qiáng)乳鐵蛋白和/或骨橋蛋白的生物活性和/或生物利用度，以促進(jìn)骨代謝和/或穩(wěn)態(tài)。

12、到目前為止，形成乳鐵蛋白和骨橋蛋白的凝聚物的嘗試顯示是不成功的。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明涉及包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合凝聚物。

2、本發(fā)明還涉及制備根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的復(fù)合凝聚物的方法，其中該方法包括以下步驟：

3、a.提供包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的單獨水性溶液，

4、b.在ph值為4至6、優(yōu)選ph值為4.5至5.5、更優(yōu)選ph值為4.8至5.2、甚至更優(yōu)選ph值為5的條件下混合所述包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的單獨水性溶液，并且其中調(diào)節(jié)所述包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的單獨水性溶液，使得乳鐵蛋白與骨橋蛋白的蛋白質(zhì)質(zhì)量比在2至8的范圍內(nèi)、優(yōu)選在3至6的范圍內(nèi)、更優(yōu)選在3.2至5.5的范圍內(nèi)、更優(yōu)選在3.5至5的范圍內(nèi)、甚至更優(yōu)選為3.8至4.2以及甚至更優(yōu)選為4。

5、本發(fā)明還涉及包含根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合凝聚物的組合物。

6、本發(fā)明還涉及包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物或者含有包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物的組合物，用于治療或預(yù)防代謝障礙、特別是超重、肥胖、糖尿病前期或糖尿病以及/或者炎性疾病、特別是敗血癥或壞死性小腸結(jié)腸炎。

7、本發(fā)明還涉及通過向受試者施用包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物或者含有包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物的組合物來治療或預(yù)防代謝障礙、特別是超重肥胖、糖尿病前期或糖尿病以及/或者炎性疾病、特別是敗血癥或壞死性小腸結(jié)腸炎的方法。

8、本發(fā)明還涉及包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合凝聚物，用于促進(jìn)骨發(fā)育、生長、強(qiáng)度和/或愈合或者預(yù)防和/或治療骨疾病。

9、本發(fā)明還涉及促進(jìn)骨發(fā)育、生長、強(qiáng)度和/或愈合或者預(yù)防和/或治療骨疾病的方法，該方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合凝聚物。

技術(shù)特征：

1.包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合凝聚物。

2.根據(jù)段落1所述的復(fù)合凝聚物，其中所述復(fù)合凝聚物包含5％w/w至50％w/w的量、優(yōu)選15％w/w至40％w/w的量以及更優(yōu)選25％w/w至35％w/w的量的蛋白質(zhì)。

3.根據(jù)段落1和2中任一項所述的復(fù)合凝聚物，其中所述復(fù)合凝聚物包含50％w/w至95％w/w的量、優(yōu)選60％w/w至85％w/w的量以及甚至更優(yōu)選65％w/w至75％w/w的量的水。

4.根據(jù)前述段落中任一項所述的復(fù)合凝聚物，其中所述復(fù)合凝聚物具有在最短維度上至少500nm、優(yōu)選在最短維度上至少600nm、更優(yōu)選在最短維度上至少700nm以及更優(yōu)選在最短維度上至少900nm的直徑。

5.根據(jù)前述段落中任一項所述的復(fù)合凝聚物，其中所述復(fù)合凝聚物具有-15mv至+15mv范圍內(nèi)、優(yōu)選-10mv至+10mv范圍內(nèi)以及更優(yōu)選-8mv至+5mv范圍內(nèi)的ζ電位。

6.制備根據(jù)前述段落中任一項所述的復(fù)合凝聚物的方法，其中所述方法包括以下步驟：

7.根據(jù)段落6所述的方法，其中在步驟b.中，所述混合水性溶液中的離子強(qiáng)度不高于30mm、優(yōu)選不高于20mm、更優(yōu)選不高于10mm、更優(yōu)選不高于5mm以及甚至更優(yōu)選不高于0.2mm的添加鹽、優(yōu)選添加的無機(jī)鹽、更優(yōu)選添加的nacl。

8.根據(jù)段落6和7中任一項所述的方法，其中在步驟b.中，調(diào)節(jié)所述包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的單獨水性溶液，使得總蛋白質(zhì)濃度在2％w/v至8％w/v的范圍內(nèi)、優(yōu)選在4％w/v至6％w/v的范圍內(nèi)。

9.組合物，所述組合物包含根據(jù)段落1至5中任一項所述的復(fù)合凝聚物。

10.根據(jù)段落9所述的組合物，其中所述組合物選自由以下組成的組：食品組合物、寵物食品組合物、飲料、營養(yǎng)配方產(chǎn)品或營養(yǎng)品。

11.根據(jù)段落9和10中任一項所述的組合物，其中所述組合物是嬰兒配方食品、一段嬰兒配方食品、較大嬰兒配方食品、嬰孩食品、嬰兒谷物組合物、成長乳、強(qiáng)化劑諸如人乳強(qiáng)化劑或補(bǔ)充劑。

12.包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物或者含有包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物的組合物，其用于治療或預(yù)防代謝障礙、特別是超重或者與醫(yī)學(xué)病癥、肥胖、糖尿病前期或糖尿病相關(guān)聯(lián)的超重以及/或者炎性疾病、特別是敗血癥或壞死性小腸結(jié)腸炎。

13.通過向受試者施用包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物或者含有包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物的組合物來治療或預(yù)防代謝障礙、特別是超重或者與醫(yī)學(xué)病癥、肥胖、糖尿病前期或糖尿病相關(guān)聯(lián)的超重以及/或者炎性疾病、特別是敗血癥或壞死性小腸結(jié)腸炎的方法。

14.包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物或者含有包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物的組合物，其用于促進(jìn)骨發(fā)育、生長、強(qiáng)度和/或愈合或者預(yù)防和/或治療骨疾病。

15.通過向受試者施用包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物或者含有包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物、優(yōu)選復(fù)合凝聚物的組合物來促進(jìn)骨發(fā)育、生長、強(qiáng)度和/或愈合或者預(yù)防和/或治療骨疾病的方法。

16.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合凝聚物，其用于促進(jìn)受試者的骨發(fā)育、生長、強(qiáng)度和/或愈合或者預(yù)防和/或治療受試者的骨疾病。

17.根據(jù)權(quán)利要求16用于所述用途的復(fù)合凝聚物，其中所述復(fù)合凝聚物以組合物的形式施用。

18.根據(jù)權(quán)利要求17用于所述用途的復(fù)合凝聚物，其中所述組合物選自由以下組成的組：食品組合物、寵物食品組合物、飲料、營養(yǎng)配方產(chǎn)品或營養(yǎng)品。

19.根據(jù)權(quán)利要求17或18用于所述用途的復(fù)合凝聚物，其中所述組合物是嬰兒配方食品、一段嬰兒配方食品、較大嬰兒配方食品、嬰孩食品、嬰兒谷物組合物、成長乳、強(qiáng)化劑或補(bǔ)充劑。

20.根據(jù)權(quán)利要求16至19中任一項用于所述用途的復(fù)合凝聚物，其中所述復(fù)合凝聚物口服施用。

21.根據(jù)權(quán)利要求16至20中任一項用于所述用途的復(fù)合凝聚物，其中所述復(fù)合凝聚物以100mg/kg/天至10000mg/kg/天的劑量、優(yōu)選以500mg/kg/天至5000mg/kg/天的劑量以及更優(yōu)選以1000mg/kg/天至2000mg/kg/天的劑量施用。

22.根據(jù)權(quán)利要求16至21中任一項用于所述用途的復(fù)合凝聚物，其中所述復(fù)合凝聚物增加骨生長和/或骨強(qiáng)度，優(yōu)選地其中所述復(fù)合凝聚物增加選自以下的一種或多種骨參數(shù)：小梁骨體積和組織體積分?jǐn)?shù)(bv/tv)、骨礦物質(zhì)密度(bmd)、骨礦物質(zhì)含量(bmc)、皮質(zhì)骨體積(ct.bv)、內(nèi)外直徑、前后直徑、骨屈服力和骨剛度。

23.根據(jù)任一前述權(quán)利要求用于所述用途的復(fù)合凝聚物，其中所述骨疾病是代謝骨障礙，優(yōu)選地其中所述骨疾病是低骨密度、骨質(zhì)減少、骨質(zhì)疏松、骨軟化或佝僂病。

24.根據(jù)權(quán)利要求16至23中任一項用于所述用途的復(fù)合凝聚物，其中所述受試者是少年、青少年、兒童或嬰兒，優(yōu)選地其中：

25.根據(jù)權(quán)利要求16至23中任一項用于所述用途的復(fù)合凝聚物，其中所述受試者是成人，優(yōu)選地其中所述受試者具有一處或多處骨折。

26.根據(jù)權(quán)利要求16至25中任一項用于所述用途的復(fù)合凝聚物，其中所述受試者是人類，或者其中所述受試者是動物，優(yōu)選地其中所述受試者是人類。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合凝聚物、其制備方法以及包含其的組合物。此外，本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防代謝疾病和/或炎性疾病的包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物。此外，本發(fā)明涉及用于促進(jìn)骨發(fā)育、生長、強(qiáng)度和/或愈合或者預(yù)防和/或治療骨疾病的包含乳鐵蛋白和骨橋蛋白的復(fù)合物。

技術(shù)研發(fā)人員：D·古爾丁,J·奧雷根,L·J·R·博韋托,K·維達(dá)爾,M·N·奧卡亞達(dá),N·博內(nèi)特,J·豪澤
受保護(hù)的技術(shù)使用者：雀巢產(chǎn)品有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21