一種結(jié)核桿菌最低抑菌濃度檢測試劑盒及制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及快速準(zhǔn)確檢測結(jié)核桿菌藥敏的液體培養(yǎng)基及制備方法及最低抑菌濃度檢測方法，第一方面是提供一種結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度(MIC)快速檢測試劑盒；第二方面是提供一種制備結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度(MIC)快速檢測試劑盒方法；第三個方面是提供一種結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度檢測方法；本發(fā)明改進(jìn)優(yōu)化了培養(yǎng)基的配方組分，能更有效的促進(jìn)結(jié)核分枝桿菌的快速生產(chǎn)；該培養(yǎng)基制作簡單，使用新型的水溶性四唑鹽變色劑更簡化了實驗步驟，培養(yǎng)基四大組分均為獨立分裝的液體試劑，增強了溶液組分抗雜菌污染能力，保證穩(wěn)定性和靈敏性；本發(fā)明使得該技術(shù)操作簡便、迅速，結(jié)核分枝桿菌生長更良好，縮短檢測結(jié)果所用時間，可達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種結(jié)核桿菌最低抑菌濃度檢測試劑盒及制備方法及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及結(jié)核分枝桿菌快速檢測試劑盒及試劑盒的制備方法及結(jié)核分枝桿菌檢測方法，特別是一種結(jié)核桿菌最低抑菌濃度檢測試劑盒及制備方法及應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]結(jié)核病是嚴(yán)重危害群眾健康的呼吸道傳染病，被列為我國重大傳染病之一；我國結(jié)核病人數(shù)居世界第二位，十年來沒有改變；據(jù)全國統(tǒng)計結(jié)果顯示全國約有450萬結(jié)核病患者，而結(jié)核病發(fā)病率年下降率僅為1% ;近年來世界各地結(jié)核分枝桿菌的多耐菌株逐漸增多，甚至引起暴發(fā)流行；據(jù)耐藥基線調(diào)查，全國耐藥率為8.32%，廣泛耐藥率為0.68 % ;我國結(jié)核病耐多藥病人占全球約49萬人的1/3-1/4 ;耐多藥分枝桿菌(MDR-TB)對一線抗結(jié)核藥物和二線抗結(jié)核藥物不敏感，耐多藥結(jié)核病的出現(xiàn)大大降低了現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)治療策略的療效，亟需準(zhǔn)確精細(xì)的藥敏數(shù)據(jù)來支持臨床實施個體化治療；如何選擇合適的藥物治療MDR-TB病人，臨床上已是一個難題，因此結(jié)核桿菌最低抑菌濃度快速檢測在臨床上就有很大的價值，為疾病的前期診斷，治療方案的制定具有指導(dǎo)意義；但是結(jié)核桿菌生長緩慢，無運動能力，性情懶惰，其最快分裂增殖速度為18小時一代，而大多數(shù)細(xì)菌都是幾分鐘或幾十分鐘便繁殖一代，這就為結(jié)核桿菌的快速鑒別帶來了難度。
[0003]目前市面上出售的結(jié)核分枝桿菌藥敏培養(yǎng)基主要是羅氏藥敏培養(yǎng)基、基于Midddlebrook培養(yǎng)基系統(tǒng)的系列藥敏培養(yǎng)基等，羅氏藥敏培養(yǎng)基為傳統(tǒng)培養(yǎng)基，現(xiàn)在臨床普遍使用，但培養(yǎng)周期較長，其他產(chǎn)品存在培養(yǎng)基中污染率高，檢測不準(zhǔn)確，操作不方便，難以全面推廣應(yīng)用等問題；市場上一些基于耐藥基因的快速檢測技術(shù)雖然極大提高了耐藥結(jié)核分枝桿菌的檢測速度，但這些耐藥基因與結(jié)核分枝桿菌的MIC值無明晰的對照關(guān)系，并且大多數(shù)的MIC檢測方法藥敏臨界值的設(shè)置忽略結(jié)核分枝桿菌菌群差異對臨界值的影響，也缺乏足夠的樣本量與傳統(tǒng)檢測方法相對比繪制特征曲線，得到一個與傳統(tǒng)方法符合率最聞的臨界值。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有結(jié)核桿菌最低抑菌濃度(MIC)快速檢測試劑盒及制備方法及最低抑菌濃度檢測方法存在的問題，本發(fā)明的目的就是提供一種快速，準(zhǔn)確檢測結(jié)核桿菌藥敏的液體培養(yǎng)基，及制備方法及最低抑菌濃度檢測方法。
[0005]本發(fā)明第一方面是提供一種結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度(MIC)快速檢測試劑盒，包括:
[0006]A、基礎(chǔ)培養(yǎng)基:磷酸氫二鈉2_3g、磷酸二氫鉀0.5-1.5g、硫酸鎂0.03-0.07g、L_谷氨酸鈉0.3-0.7g、檸檬酸三鈉2H200.01-0.08g、葡萄糖15_25g、兩性霉素B5_15ug/ml、羧芐青霉素45-50ug/ml、多粘菌素B150_250ug/ml、乳酸增效磺胺15_25ug/ml、蛋白胨45_55g、吐溫 800.3-0.7ml ；
[0007] B、培養(yǎng)基添加劑:亞油酸0.3-0.7g、葉酸0.003-0.007g、1.5ml甘油；
[0008]C、變色劑:噻唑藍(lán)溶液100ml ；
[0009]D、藥物儲存液:64 μ g/ml異煙肼儲存液、320 μ g/ml利福平儲存液、640 μ g/ml乙胺丁醇儲存液、640 μ g/ml鏈霉素儲存液等四個藥物溶液，以上四組分獨立分裝，用時按比例混合即可。
[0010]與其他同類上市的藥敏培養(yǎng)基產(chǎn)品比較，培養(yǎng)基改進(jìn)，優(yōu)化了配方組分，能更有效的促進(jìn)結(jié)核分枝桿菌的快速生產(chǎn)，培養(yǎng)基四大組分均為獨立分裝的液體試劑，使用時按一定的比例混合即可，增強了溶液組分抗雜菌污染能力，保證穩(wěn)定性和靈敏性。
[0011]本發(fā)明第二方面是提供一種制備結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度(MIC)快速檢測試劑盒方法，包括以下步驟:
[0012]基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備:
[0013]在10萬級潔凈度生產(chǎn)環(huán)境下，先將鹽類成分:磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、L-谷氨酸鈉、檸檬酸三鈉2H20、葡萄糖加入到500ml滅菌蒸餾水中，充分?jǐn)嚢枞芙夂螅a充滅菌蒸餾水至800ml繼續(xù)混合均勻，用121°C蒸汽滅菌，密閉待用；再將兩性霉素B、羧芐青霉素、多粘菌素B、乳酸增效磺胺加入到50ml滅菌蒸餾水中混合攪拌至無色后，與蛋白胨、吐溫80、150ml滅菌蒸餾水一起添加到上面混合好的待用溶液中，攪拌均勻，分裝后用85°C滅菌I小時即可；
[0014]培養(yǎng)基添加劑的制備:
[0015]在10萬級潔凈度生產(chǎn)環(huán)境下，將亞油酸、葉酸加入到800ml滅菌蒸餾水中，用INHCL調(diào)節(jié)ph值6.6-6.7 ，添加1.5ml甘油，補充滅菌蒸餾水至1000ml，攪拌均勻后用0.22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，分裝后用85°C滅菌I小時即可；
[0016]變色劑制備:
[0017]在10萬級潔凈度生產(chǎn)環(huán)境下，將水溶性四唑鹽溶解于PBS (PH7.2)配置成5mg/ml的噻唑藍(lán)溶液1000ml，用0.22um微孔濾膜濾過，分裝后用85°C滅菌I小時，4°C避光保存；
[0018]藥物儲存液的制備:
[0019]在10萬級潔凈度局部萬級的生產(chǎn)環(huán)境下，將量取好的異煙肼添加到滅菌蒸餾水中配制成64μg/ml，攪拌均勻分裝用85°C滅菌I小時分裝即可；將量取好的利福平添加到滅菌蒸餾水中配制成320 μ g/ml，攪拌均勻分裝用85 °C滅菌I小時分裝即可；將量取好的乙胺丁醇添加到滅菌蒸餾水中配制成640 μ g/ml，攪拌均勻用85°C滅菌I小時分裝分裝即可；將量取好的鏈霉素添加到滅菌蒸餾水中配制成640 μ g/ml，攪拌均勻后用85°C滅菌I小時分裝即可。
[0020]該藥敏培養(yǎng)基制備方法簡單，便于操作，便于大規(guī)模生產(chǎn)。
[0021]本發(fā)明的第三個方面是提供一種結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度檢測方法，包括以下步驟:
[0022]步驟1:將基礎(chǔ)培養(yǎng)基、培養(yǎng)基添加劑、變色劑按照(8.5-9.5): (0.9-1): (0.04-0.06)的質(zhì)量份數(shù)比，優(yōu)選 9: 0.95: 0.05 質(zhì)量份數(shù)比配制，按每孔10ul加入96孔無菌微孔板，同時設(shè)置各濃度梯度藥物，藥物濃度梯度優(yōu)選
0.0625ug/ml、0.125ug/ml、0.25ug/ml、0.5ug/ml、lug/ml、2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml、16ug/ml、32ug/ml、64ug/ml、128ug/ml ；
[0023]步驟2:將試驗菌株于羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)兩周后,用液體培養(yǎng)基重懸,加入玻璃珠在漩渦震蕩器上磨菌5~lOmin，取上層均勻的懸濁液用液體培養(yǎng)基比濁至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)濁度待用；選取試驗菌株對異煙肼、利福平、乙胺丁醇和鏈霉素用傳統(tǒng)法檢測藥敏藥敏背景清晰；
[0024]步驟3:在含藥96孔板中，每孔加入5 μ I含有菌液的液體培養(yǎng)基，藥物對照孔不加菌懸液，貼上封板膜，37°C培養(yǎng)，10~14d觀察并記錄結(jié)果；
[0025]與對照孔相比，待測培養(yǎng)孔顏色無明顯變化的定為MIC值，MIC值>臨界值，判斷為耐藥;MIC值〈臨界值，判斷為敏感，(MIC臨界值為:異煙肼0.2 μ g/ml，利福平0.1yg/ml,乙胺丁醇2 μ g/ml,鏈霉素4 μ g/ml);采用上述同樣試驗方法,本產(chǎn)品對二線藥物氧氟沙星、左氧氟沙星、卷曲霉素、阿米卡星、吡嗪酰胺、環(huán)丙沙星、紫霉素等進(jìn)行耐藥敏最低抑菌濃度(MIC)快速檢測，結(jié)果總符合率為94.7% -100%，效果甚佳，并設(shè)置二線藥物臨界濃度:氧氟沙星1.0 μ g/ml、左氧氟沙星0.5 μ g/ml、卷曲霉素4.0 μ g/ml、阿米卡星1.0 μ g/ml、批嗪酰胺50.0 μ g/ml、環(huán)丙沙星1.0 μ g/ml、紫霉素2.0 μ g/ml。
[0026]MIC藥敏臨界值的測定方法
[0027]使用研發(fā)的微量顯色法與傳統(tǒng)的瓊脂比例稀釋法進(jìn)行對比，ROC曲線分析，以確定臨界濃度。
[0028]本試驗采用變色培養(yǎng)基微量稀釋法的原理是基于比色法的基礎(chǔ)上，將最初單濃度的藥敏檢測發(fā)展為96微孔板孔多藥敏濃度的MIC值快速分子檢測技術(shù)，可以用分光光度計測定(波長為590nm)或者肉眼判讀，運用更科學(xué)的藥物代謝動力學(xué)和藥效學(xué)模型原理設(shè)置臨界值。
[0029]試驗方法:以60株已知藥敏結(jié)果的保存菌株作為實驗菌株，根據(jù)已知藥敏結(jié)果確定變色培養(yǎng)基微量稀釋法MIC藥敏判斷界值，最后用80株連續(xù)時間段內(nèi)收集的結(jié)核分枝桿菌臨床分離株對變色培養(yǎng)基微量稀釋法MIC藥敏判斷臨界值進(jìn)行驗證和修正。
[0030]1.材料:
[0031]1.1菌株:60株已知藥敏試驗結(jié)果的結(jié)核分枝桿菌臨床分離菌株，其中36株為四種藥物全部敏感，6株為全部耐藥,18株為不同耐藥類型；80株未知藥敏結(jié)果的結(jié)核分枝桿菌臨床分離菌株。
[0032]1.2主要試劑與儀器:異煙肼、利福平、乙胺丁醇、鏈霉素購自美國sigma公司；7H9培養(yǎng)液；7H10培養(yǎng)基；比濁儀；培養(yǎng)箱；96孔板。
[0033]1.3藥液配制:異煙肼、乙胺丁醇、鏈霉素均用去離子水溶解制成10mg/ml，利福平用二甲基甲酰胺溶解制成10mg/ml ;另用相應(yīng)的溶劑配制異煙肼20g/ml溶液，利福平4000g/ml,乙胺丁醇200g/ml,鏈霉素400g/ml,所有備用藥液均用0.22um無菌濾器過濾除菌，分裝保存于4°C。
[0034]1.4MIC檢測藥物濃度設(shè)置:每種藥物的終濃度分別為:異煙肼0.06~32g/ml，利福平 0.06 ~128g/ml,乙胺丁醇 0.25 ~32g/ml，鏈霉素 0.25 ~128g/ml。
[0035]1.5含藥培養(yǎng)基的制備:L-J培養(yǎng)基按規(guī)程制備，在培養(yǎng)基凝固之前，每10ml加入Iml藥物儲備液，85~90°C血清凝固器中間歇滅菌2次，含藥培養(yǎng)基于4°C冰箱中保存。
[0036]2.方法:
[0037]2.1MIC檢測:試驗前將10ul含藥變色培養(yǎng)基加入96孔板中待用。將待測菌株于羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)兩周后，用液體培養(yǎng)基重懸，加入玻璃珠在漩渦震蕩器上磨菌5~lOmin，取上層均勻的懸濁液用液體培養(yǎng)基比濁至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)濁度待用。在含藥96孔板中，每孔加入5ul含有菌液的液體培養(yǎng)基，同時設(shè)生長對照和陰性對照，貼上封板膜，37°C培養(yǎng)，10~14d觀察結(jié)果。
[0038]2.2間接比例法:于羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)兩周后，用接種環(huán)刮取生長旺盛的菌落置于加有少許PBS緩沖液的磨菌管底部，磨菌，配成lmg/ml菌液，再將其進(jìn)行1000倍稀釋制備成10_3mg/ml菌液。以同樣的方法再稀釋100倍，得到10_5mg/ml菌液，2個濃度的菌液各取
0.01ml接種于對照培養(yǎng)基和含藥培養(yǎng)基上。
[0039]2.3質(zhì)量控制:每次實驗均以卡介菌、恥垢桿菌為質(zhì)控，0.1ml接種在生長對照孔。
[0040]3.結(jié)果讀取:
[0041]3.1MIC結(jié)果讀取:與陽性對照、陰性對照孔比較,觀察顏色變化。
[0042]3.2間接比例法結(jié)果讀取:
[0043]表1比例法菌落生長判讀表
[0044]

【權(quán)利要求】
1.一種結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度快速檢測試劑盒，其特征在于包括: A、基礎(chǔ)培養(yǎng)基:磷酸氫二鈉2-3g、磷酸二氫鉀0.5-1.5g、硫酸鎂0.03-0.07g、L_谷氨酸鈉0.3-0.7g、檸檬酸三鈉2H200.01-0.08g、葡萄糖15_25g、兩性霉素B5_15ug/ml、羧芐青霉素45-50ug/ml、多粘菌素B150_250ug/ml、乳酸增效磺胺15_25ug/ml、蛋白胨45_55g、吐溫800.3-0.7ml ； B、培養(yǎng)基添加劑:亞油酸0.3-0.7g、葉酸0.003-0.007g、1.5ml甘油； C、變色劑:噻唑藍(lán)溶液100ml； D、藥物儲存液:64μg/ml異煙肼儲存液、320μ g/ml利福平儲存液、640 μ g/ml乙胺丁醇儲存液、640μ g/ml鏈霉素儲存液四個藥物溶液，所述組分為獨立分裝，用時按一定的比例混合即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度快速檢測試劑盒，其特征在于包括: A、基礎(chǔ)培養(yǎng)基:磷酸氫二鈉2g、磷酸二氫鉀0.5g、硫酸鎂0.03g、L-谷氨酸鈉0.3g、檸檬酸三鈉2H200.01g、葡萄糖15g、兩性霉素B5ug/ml、羧節(jié)青霉素45ug/ml、多粘菌素B150ug/ml、乳酸增效磺胺15ug/ml、蛋白胨45g、吐溫800.3ml ；
B、培養(yǎng)基添加劑:亞油酸0.3g、葉酸0.003g、1.5ml甘油； C、變色劑:噻唑藍(lán)溶液100ml； D、藥物儲存液:64μg/ml異煙肼儲存液、320μ g/ml利福平儲存液、640 μ g/ml乙胺丁醇儲存液、640μ g/ml鏈霉素儲存液等四個藥物溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度快速檢測試劑盒，其特征在于包括: A、基礎(chǔ)培養(yǎng)基:磷酸氫二鈉3g、磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.07g、L-谷氨酸鈉0.7g、檸檬酸三鈉2H200.08g、葡萄糖25g、兩性霉素B15ug/ml、羧芐青霉素50ug/ml、多粘菌素B250ug/ml、乳酸增效磺胺25ug/ml、蛋白胨55g、吐溫800.7ml ； B、培養(yǎng)基添加劑:亞油酸0.7g、葉酸0.007g、1.5ml甘油； C、變色劑:噻唑藍(lán)溶液100ml； D、藥物儲存液:64μg/ml異煙肼儲存液、320μ g/ml利福平儲存液、640 μ g/ml乙胺丁醇儲存液、640 μ g/ml鏈霉素儲存液等四個藥物溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度快速檢測試劑盒，其特征在于包括: A、基礎(chǔ)培養(yǎng)基:磷酸氫二鈉2.5g、磷酸二氫鉀lg、硫酸鎂0.05g、L-谷氨酸鈉0.5g、檸檬酸三鈉2H200.04g、葡萄糖20g、兩性霉素B10ug/ml、羧芐青霉素47ug/ml、多粘菌素B200ug/ml、乳酸增效磺胺20ug/ml、蛋白胨50g、吐溫800.5ml ； B、培養(yǎng)基添加劑:亞油酸0.5g、葉酸0.005g、1.5ml甘油； C、變色劑:噻唑藍(lán)溶液100ml； D、藥物儲存液:64μ g/ml異煙肼儲存液、320 μ g/ml利福平儲存液、640 μ g/ml乙胺丁醇儲存液、640 μ g/ml鏈霉素儲存液等四個藥物溶液。
5.一種制備權(quán)利要求1、2、3或4所述的結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度快速檢測試劑盒的方法包括以下步驟:基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備: 在10萬級潔凈度生產(chǎn)環(huán)境下，先將鹽類成分:磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、L-谷氨酸鈉、檸檬酸三鈉2H20、葡萄糖加入到500ml滅菌蒸餾水中，充分?jǐn)嚢枞芙夂?，補充滅菌蒸餾水至800ml繼續(xù)混合均勻后，用121°C蒸汽滅菌，密閉待用；再將兩性霉素B、羧芐青霉素、多粘菌素B、乳酸增效磺胺加入到50ml滅菌蒸餾水中混合攪拌至無色后，與蛋白胨、吐溫80、150ml滅菌蒸餾水一起添加到上面混合好的待用溶液中，攪拌均勻，分裝后用85°C滅菌I小時即可； 培養(yǎng)基添加劑的制備: 在10萬級潔凈度生產(chǎn)環(huán)境下，將亞油酸、葉酸加入到800ml滅菌蒸餾水中，用IN HCL調(diào)節(jié)ph值6.6-6.7,添加甘油，補充滅菌蒸懼水至1000ml,攪拌均勻后用0.22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，分裝后用85°C滅菌I小時即可； 變色劑制備: 在10萬級潔凈度生產(chǎn)環(huán)境下，將噻唑藍(lán)溶液100ml直接分裝后用85°C滅菌I小時即可； 藥物儲存液的制備: 在10萬級潔凈度局部萬級的生產(chǎn)環(huán)境下，將量取好的異煙肼添加到滅菌蒸餾水中配制成64 μ g/ml，攪拌均勻分裝后用85°C滅菌I小時即可；將量取好的利福平添加到滅菌蒸餾水中配制成320 μ g/ml，攪拌均勻分裝后用85°C滅菌I小時即可；將量取好的乙胺丁醇添加到滅菌蒸餾水中配制成640 μ g/ml，攪拌均勻分裝后用85°C滅菌I小時即可；將量取好的鏈霉素添加到滅菌蒸懼水中配制成640 μ g/ml,攪拌均勻分裝后用85°C滅菌I小時即可。
6.一種以1、2、3或4所述的結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度快速檢測試劑盒為基礎(chǔ)的結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度的檢測方法，包括以下步驟: 步驟1:將基礎(chǔ)培養(yǎng)基、培養(yǎng)基添加劑、變色劑按照(8.5-9.5): (0.9-1): (0.04-0.06)的質(zhì)量份數(shù)比配制，按每孔10ul加入96孔無菌微孔板，同時設(shè)置各濃度梯度藥物平行對照孔； 步驟2:選取對異煙肼、利福平、乙胺丁醇和鏈霉素的藥敏背景清晰的試驗菌株于羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)兩周后，用液體培養(yǎng)基重懸，加入玻璃珠在漩渦震蕩器上磨菌5~lOmin，取上層均勻的懸濁液用液體培養(yǎng)基比濁至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)濁度待用； 步驟3:在含藥96孔板中，每孔加入5 μ I含有菌液的液體培養(yǎng)基，藥物對照孔不加菌懸液，貼上封板膜，37°C培養(yǎng)，10~14d觀察并記錄結(jié)果，與對照孔相比，待測培養(yǎng)孔顏色無明顯變化的定為MIC值，MIC值> 臨界值，判斷為耐藥;MIC值〈臨界值，判斷為敏感，MIC臨界值為:異煙肼0.2 μ g/ml，利福平0.1 μ g/ml,乙胺丁醇2 μ g/ml,鏈霉素4 μ g/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度的檢測方法，其特征在于:將基礎(chǔ)培養(yǎng)基、培養(yǎng)基添加劑、變色劑按照9: 0.95: 0.05的質(zhì)量份數(shù)比配置。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的結(jié)核分枝桿菌最低抑菌濃度的檢測方法，其特征在于:平行對照孔濃度梯度設(shè)為 0.0625ug/ml、0.125ug/ml、0.25ug/ml、0.5ug/ml、lug/ml、2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml、16ug/ml、32ug/ml、64ug/ml、128ug/ml0
【文檔編號】C12Q1/20GK104073546SQ201410226302
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年5月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月27日
【發(fā)明者】齊偉 申請人:河南賽諾特生物技術(shù)有限公司