一種輔助降血糖片深加工產(chǎn)品中4?羥基異亮氨酸含量的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種輔助降血糖片深加工產(chǎn)品中4?羥基異亮氨酸含量的檢測方法。該檢測方法包括：將待測樣品采用超聲技術(shù)溶解于有機(jī)酸溶液中，放冷至室溫，過濾，得到供試液；將4?羥基異亮氨酸對照品溶液和供試液分別采用高效液相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定4?羥基異亮氨酸，利用外標(biāo)法得到4?羥基異亮氨酸的含量。通過對本發(fā)明4?羥基異亮氨酸的含量測定方法進(jìn)行線性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、空白、檢出限、定量限、回收率試驗，均符合GB/T27404?2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范》的要求，證明含量測定方法科學(xué)有效，能對葫蘆巴提取物的4?羥基異亮氨酸含量起到質(zhì)量控制的目的。
【專利說明】
一種輔助降血糖片深加工產(chǎn)品中4-羥基異亮氨酸含量的檢測 方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種輔助降血糖片深加工產(chǎn)品中4-羥基 異亮氨酸含量的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病是一種以高血糖為主要特征的慢性代謝類疾病，分原發(fā)性和繼發(fā)性兩大 類。因為體內(nèi)胰島素分泌絕對不足和相對不足，引起糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝紊亂，主要是糖分 解代謝障礙，產(chǎn)生大量中間代謝產(chǎn)物，如酮體等，中間代謝產(chǎn)物引起許多嚴(yán)重的急性、慢性 合并癥，這些合并癥嚴(yán)重影響糖尿病患者的生命和健康，是造成糖尿病高病死率和高致殘 率的主要原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織有關(guān)資料表明，其對總體健康的危害程度，已居慢性非傳染 性疾病的第三位。作為一種多病因的綜合性疾病，糖尿病患者需要長期規(guī)范的治療，如果控 制不好，會引發(fā)多種類型并發(fā)癥，包括血管病變、神經(jīng)病變、腎功能衰竭、失明、截止等病變， 且無法治愈。
[0003] 胡蘆巴（Trigonella foenum-graecum L.)是豆科胡蘆巴屬的一種一年生草本植 物，廣泛分布于亞洲、歐洲和非洲。胡蘆巴種子是傳統(tǒng)的中藥材，主要的兩個藥理作用是抗 糖尿病和降膽固醇。4-羥基異亮氨酸是存在于胡蘆巴屬植物中的一種非蛋白氨基酸，這種 氨基酸主要存在于胡蘆巴種子中，約占該種子中游離氨基酸總含量的80%。近年來，文獻(xiàn)報 道由胡蘆巴種子中分離到的（2s，3R，4S)-4-羥基異亮氨酸能促進(jìn)胰島素分泌，而這種促進(jìn) 作用也解釋了胡蘆巴種子的抗糖尿病活性。
[0004] 目前，有報道采用高效液相色譜法測定4-羥基異亮氨酸的含量。色譜條件為：用十 八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈:無水醋酸鈉-四氫呋喃混合溶液（19:81)為流動相； 檢測波長為340nm;流速為0.6mL/min，柱溫:40°C。樣品處理方法為：⑴衍生化試劑:稱取鄰 苯二甲醛0.1 g，加入甲醇lmL，超聲溶解，再加入2-疏基乙醇0.2mL和硼酸-氫氧化鈉溶液(PH =9.5)4mL，搖勻，0.45_微孔濾膜過濾，即得。⑵準(zhǔn)確稱取樣品50mg(精確至0.000lg)，用 40 %乙醇溶解并定容至50mL，搖勻，經(jīng)0.45mi微孔濾膜過濾，即得試樣溶液。⑶空白溶液：用 40%乙醇經(jīng)0.45_微孔濾膜過濾，即得空白溶液。測定方法為:準(zhǔn)確吸取衍生化試劑10此， 再準(zhǔn)確吸取空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液各進(jìn)樣20此，在規(guī)定的色譜條件下，進(jìn)行色譜 分析，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。還有報道采用HPLC-ELSD測定萌蘆巴中4-羥基異亮氨酸的含量。但上述方法在檢測4-羥基異亮氨酸含量的準(zhǔn)確性方面均存在一定的 問題。因此，需要提供一種能夠準(zhǔn)確檢測4-羥基異亮氨酸含量的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明提供了一種輔助降血糖片深加工產(chǎn)品中4-羥基異亮氨酸含量的 檢測方法。該檢測方法可準(zhǔn)確檢測待測樣品中4-羥基異亮氨酸的含量。
[0006] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
[0007] 本發(fā)明提供了一種4-羥基異亮氨酸含量的檢測方法，包括：
[0008] 將待測樣品采用超聲技術(shù)溶解于有機(jī)酸溶液中，放冷至室溫，過濾，得到供試液；
[0009] 將4-羥基異亮氨酸對照品溶液和供試液分別采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測 定4-羥基異亮氨酸，利用外標(biāo)法得到4-羥基異亮氨酸的含量；
[0010] 高效液相色譜的條件為:C18色譜柱;流動相由流動相A和流動相B組成，流動相A為 乙酸銨溶液，流動相B為乙腈或甲醇;梯度洗脫；
[0011] 質(zhì)譜的條件為:電噴霧正離子源，掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測模式。
[0012] 作為優(yōu)選，有機(jī)酸為甲酸或乙酸。
[0013] 在本發(fā)明提供的實施例中，有機(jī)酸為甲酸。
[0014] 作為優(yōu)選，溶解的時間為5~20min。
[0015]在本發(fā)明提供的實施例中，溶解的時間為lOmin。
[0016] 作為優(yōu)選，乙酸銨的濃度為5~20臟〇1/1411值為3.5。
[0017]在本發(fā)明提供的實施例中，乙酸銨的濃度為1 Omm〇 1 /L，pH值為3.5。
[0018]作為優(yōu)選，梯度洗脫的程序為：
[0021] 作為優(yōu)選，流動相的流速為0.3~0.5mL/min。
[0022]在本發(fā)明提供的實施例中，流動相的流速為0.4mL/min。
[0023]作為優(yōu)選，C18色譜柱為Agilent EC-C18色譜柱、Phenomenex Kinetex XB-C18色 譜柱、Phenomenex Luna C18色譜柱或者其它相同性能的色譜柱。
[0024] 在本發(fā)明提供的實施例中，Agilent EC-C18色譜柱的規(guī)格為：150X4? 6mm，2? 7mi; Phenomenex Kinetex XB-C18色譜柱的規(guī)格為：100 X4.6mm，2.6iim;Phenomenex Luna C18 (2)色譜柱的規(guī)格為:100X4.6mm，3wii。
[0025] 作為優(yōu)選，色譜柱的柱溫為30~40°C。
[0026]在本發(fā)明提供的實施例中，色譜柱的柱溫為40°C。
[0027]作為優(yōu)選，質(zhì)譜的參數(shù)如下所示：
[0028] 定量離子對為148.2/74.2m/z，碰撞氣能量為17.3eV;
[0029] 定性離子對為148 ? 2/130 ? 2m/z，碰撞氣能量為13 ? OeV;
[0030] 定性離子對為148 ? 2/102 ? 2m/z，碰撞氣能量為14 ? OeV;
[0031] 氣簾氣為22. Opsi，碰撞氣壓為7. Opsi，電噴霧電壓為5500V，離子源溫度為600°C， 霧化氣為60.Opsi，輔助氣為20.0 psi，去簇電壓為15.4V，入口電壓為6.8V，碰撞池入口電壓 CEP為8.0V，碰撞室出口電壓為3.0V。
[0032] 氣簾氣為22.0psi，碰撞氣壓為7.0psi，電噴霧電壓為5500V，離子源溫度為600°C， 霧化氣為60.Opsi，輔助氣為20.0 psi，去簇電壓為15.4V，入口電壓為6.8V，碰撞池入口電壓 EP為8.0V。
[0033] 在本發(fā)明提供的實施例中，待測樣品為含有4-羥基異亮氨酸的輔助降血糖片。 [0034]本發(fā)明提供了一種輔助降血糖片深加工產(chǎn)品中4-羥基異亮氨酸含量的檢測方法。 該檢測方法包括:將待測樣品采用超聲技術(shù)溶解于有機(jī)酸溶液中，放冷至室溫，過濾，得到 供試液;將4-羥基異亮氨酸對照品溶液和供試液分別采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測 定4-羥基異亮氨酸，利用外標(biāo)法得到4-羥基異亮氨酸的含量;高效液相色譜的條件為:C18 色譜柱;流動相由流動相A和流動相B組成，流動相A為乙酸銨溶液，流動相B為乙腈或甲醇； 梯度洗脫;質(zhì)譜的條件為：電噴霧正離子源，掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測模式。本發(fā)明具有的有 益效果為：
[0035] 1、本發(fā)明檢測方法可準(zhǔn)確檢測待測樣品中4-羥基異亮氨酸的含量；
[0036] 2、通過對本發(fā)明4-羥基異亮氨酸的含量測定方法進(jìn)行線性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定 性、空白、檢出限、定量限、回收率試驗，均符合GB/T27404-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范》的要 求，證明含量測定方法科學(xué)有效，能對萌蘆巴提取物的4-羥基異亮氨酸含量起到質(zhì)量控制 的目的。
【附圖說明】
[0037]圖1~5分別為標(biāo)準(zhǔn)序號為STD1~STD5對照品的色譜圖，示本發(fā)明檢測方法的線性 關(guān)系；
[0038]圖6示根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)序號為STD1~STD5對照品中4-羥基異亮氨酸的濃度繪制的標(biāo)準(zhǔn)工 作曲線；
[0039] 圖7~12為對照品溶液重復(fù)測定6次得到的色譜圖，示本發(fā)明檢測方法的精密度；
[0040] 圖13~18為試樣重復(fù)測定6次得到的色譜圖，示本發(fā)明檢測方法的重復(fù)性；
[0041 ] 圖19~24為對照品溶液在室溫下放置Oh、lh、2h、4h、8h、12h后得到的色譜圖，示本 發(fā)明檢測方法的穩(wěn)定性；
[0042]圖25示空白溶液的色譜圖；
[0043]圖26示本發(fā)明檢測方法的檢出限；
[0044]圖27示本發(fā)明檢測方法的定量限；
[0045]圖28~36為序號為1~9樣品的色譜圖，示本發(fā)明檢測方法的回收率。
【具體實施方式】
[0046] 本發(fā)明公開了一種輔助降血糖片深加工產(chǎn)品中4-羥基異亮氨酸含量的檢測方法， 本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似 的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明 的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精 神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技 術(shù)。
[0047] 本發(fā)明提供的輔助降血糖片深加工產(chǎn)品中4-羥基異亮氨酸含量的檢測方法中所 用試劑或儀器均可由市場購得。
[0048]下面結(jié)合實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：
[0049]實施例1檢測方法及方法學(xué)驗證
[0050] 1原理:試樣中的4-羥基異亮氨酸經(jīng)過超聲提取至溶劑中，用高效液相色譜C18柱將 4_羥基異亮氨酸分離，經(jīng)質(zhì)譜檢測，并用外標(biāo)法定量測定。
[0051 ] 2儀器:安捷倫1260高效液相色譜儀-API3200質(zhì)譜儀(配ESI離子源）。
[0052] 3試劑試藥：甲酸(色譜純）；乙酸銨(色譜純）；乙酸(色譜純）；乙腈(色譜純）；一級 用水;4-羥基異亮氨酸（對照品來源：上海源葉生物科技有限公司，批號：P29F7F10167,純 度：98%)。
[0053] 4分析步驟：
[0054] 4.1儀器條件與參數(shù)：
[0055] 4.1.1高效液相色譜儀條件：
[0056] 流動相:A: 1 Ommo 1 /L的乙酸銨溶液，用乙酸調(diào)pH至3.5，B:乙腈，梯度洗脫(表1);
[0057]表1梯度洗脫程序
[0059] 流速:〇.4mL/min;
[0060] 柱溫：40。(：；
[0061 ]色譜柱：Agi lent，EC-C18，150 X 4 ? 6mm，2 ? 7wn〇 [0062] 4.1.2質(zhì)譜儀參數(shù)：
[0063]電噴霧正離子源(ESI+);掃描方式:多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM);質(zhì)譜參數(shù)見表2、3。 [0064]表2、3中英文為質(zhì)譜參數(shù)，都是特有固定值，電噴霧正離子源(ESI + )、電噴霧電壓 (31)、霧化氣(651)、輔助氣(652)、氣簾氣(〇]1〇、離子源溫度(1￡1〇、母離子(〇1)、定量定性 離子對(Q3)、去簇電壓(DP)、入口電壓(EP)、碰撞氣能量(CE)、碰撞氣壓(CAD)、碰撞室出口 電壓(CXP)。
[0069] 4.2對照儲備液的配制：
[0070] 精密稱取4-羥基異亮氨酸對照品16. llmg，置于50mL棕色容量瓶中，加入0.1%甲 酸溶液溶解并定容至刻度，搖勻，即得儲備液。儲備液放在4°C的冰箱中儲存?zhèn)溆谩?br>[0071] 4.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制：
[0072] 精密吸取4-羥基異亮氨酸儲備液l.OOmL，置于200mL棕色容量瓶中，加入0.1%甲 酸溶液定容至刻度，搖勻，即得工作溶液，分別精密吸取工作溶液1此、2yL、4yL、7yL、1 OyL， 在4.1條件下，進(jìn)行分析測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
[0073] 4.4試樣制備：
[0074] 精密稱取樣品約0.1 g，置于100mL容量瓶中，加0.1 %甲酸（甲酸可以用乙酸代替） 溶液超聲溶解，約l〇min，放冷至室溫，用加0.1 %甲酸溶液定容至刻度，搖勻，精密移取 1.OOmL樣品溶液至10mL容量瓶中，用加0.1 %甲酸溶液定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45_的水相 濾膜過濾，即得供試液。精密吸取供試液4yL，在4.1條件下，進(jìn)行分析測定。
[0075] 4.5結(jié)果計算：
[0076] X = CXV/MXK
[0077] 式中:X-樣品中4-羥基異亮氨酸的含量，％ ;
[0078] M-樣品的質(zhì)量，g;
[0079] K-單位轉(zhuǎn)換系數(shù)(K = 0.0001);
[0080] V-樣品的稀釋倍數(shù)，mL;
[0081 ] C-樣品溶液中4-羥基異亮氨酸的濃度，yg/mL。
[0082] 5方法學(xué)驗證：
[0083] 5.1線性范圍確認(rèn)：
[0084] 5? 1 ? 1試驗數(shù)據(jù)：（色譜圖見附圖1-5)
[0085]表4線性關(guān)系試驗檢測結(jié)果
[0087] 5.1.2標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖：
[0088] 以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如圖6所示。
[0089] 5.1.3線性試驗結(jié)論：
[0090] 線性評價：相關(guān)系數(shù)R為0.9999，所以用該方法測定4-羥基異亮氨酸在濃度為 0.39470yg/mL至3.9470yg/mL之間呈現(xiàn)良好的線性，，符合GB/T27404-2008《實驗室質(zhì)量控 制規(guī)范》的要求(GB/T27404-2008要求相關(guān)系數(shù)R>0.99)。
[0091] 5.2精密度試驗
[0092] 5.2.1試驗方法：
[0093]將4-羥基異亮氨酸的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按4.1條件重復(fù)測定6次，計算其峰面積RSD (%)〇
[0094] 5 ? 2 ? 2試驗數(shù)據(jù)：（色譜圖見附圖7-12)
[0095]表5精密度試驗檢測結(jié)果
[0096]
[0097] 5.2.3試驗結(jié)論：
[0098] 4-羥基異亮氨酸重復(fù)測定6次峰面積的RSD( % )為1.0%，表明該方法有較好的精 密度。
[0099] 5.3重復(fù)性試驗：
[0100] 5.3.1試驗方法：
[0101 ]稱取6份樣品，按4.4試樣制備方法處理樣品，檢測樣品含量，計算其RSD( % )。
[0102] 5.3.2試驗數(shù)據(jù)：（色譜圖見附圖13-18)
[0103] 表6重復(fù)性試驗檢測結(jié)果
[0104]
[0105] 5.3.3試驗結(jié)論：
[0106] 6份樣品4-羥基異亮氨酸含量的RSD為1.7%，表明該方法有較好的重復(fù)性，符合 GB/T27404-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范》的要求(GB/T27404-2008要求RSD( % )<2.7% )。 [0107] 5.4穩(wěn)定性試驗
[0108] 5.4.1試驗方法：
[0109] 將4-羥基異亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別在室溫下放置011、111、211、41 1、811、1211后，按 4.1條件測定峰面積，計算其RSD( % )。
[0110] 5.4.2試驗數(shù)據(jù)：（色譜圖見附圖19-24)
[0111] 表7穩(wěn)定性試驗檢測結(jié)果
[0112]
[0113] 5.4.3試驗結(jié)論：
[0114] 4-羥基異亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別在室溫下放置011、111、211、411、811、1211后，1^0 (%)為2.4%，表明4-羥基異亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在室溫下12小時內(nèi)的穩(wěn)定性良好。
[0115] 5.5空白試驗
[0116] 5.5.1試驗方法：
[0117] 不稱取樣品，按4.4試樣制備方法處理空白溶液，按4.1色譜條件測定空白溶液，與 4_羥基異亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的出峰時間對比。
[0118] 5.5.2試驗結(jié)果見圖25。
[0119] 5.5.3試驗結(jié)論：
[0120] 空白溶液在4-羥基異亮氨酸的出峰時間處均無吸收峰，表明空白對測定結(jié)果基本 無干擾。
[0121] 5.6檢出限與定量限試驗：
[0122] 分析方法的定量限和檢出限由信噪比（S/N)計算。檢出限圖譜見圖26,定量限圖譜 見圖27。當(dāng)信噪比（S/N)為3時，檢出限為0.01263yg/mL;得到方法的檢出限為126.3mg/kg。 當(dāng)信噪比（S/N)為10時，定量限為0.03158yg/mL;得到方法的定量限為315.8mg/kg。
[0123] 5.7回收率試驗：
[0124] 5.7.1試驗方法：
[0125] 加標(biāo):精密稱取約O.lg樣品9份(已知樣品的4-羥基異亮氨酸含量:1.526%)，分成 3組，每組3份，各組分別精密加入4-羥基異亮氨酸的儲備液2.00mL、4.00mL、6. OOmL。按4.4 試樣制備方法處理樣品。
[0126] 5.7.2試驗數(shù)據(jù)如下：（色譜圖見附圖28-36)
[0127] 表8回收率試驗檢測結(jié)果
[0129 ] 測得加入量=加標(biāo)樣品測得量-樣品測得量；
[0130] 回收率（％ )=測得加入量/理論加入量。
[0131] 5.7.3試驗結(jié)論：
[0132] 平均回收率為：98.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.0%，符合GB/T27404-2008《實驗 室質(zhì)量控制規(guī)范》的要求(GB/T27404-2008要求回收率為95-105% )。
[0133] 6 結(jié)論：
[0134] 通過對4-羥基異亮氨酸的含量測定方法進(jìn)行線性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、空白、 檢出限、定量限、回收率試驗，均符合GB/T27404-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范》的要求，證明 含量測定方法科學(xué)有效，能對萌蘆巴提取物的4-羥基異亮氨酸含量起到質(zhì)量控制的目的。
[0135] 實施例2檢測實例
[0136] 對已知含量的4-羥基異亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)品采用實施例1方法和現(xiàn)有的檢測方法分別進(jìn) 行測定?，F(xiàn)有檢測方法參照《馮歡李新霞馮葳等.柱前衍生化HPLC測定不同產(chǎn)地萌蘆巴中4-羥基異亮氨酸的含量.西北藥學(xué)雜志.2016,31:136-138》。結(jié)果如下：
[0137] 表9 4-羥基異亮氨酸含量檢測結(jié)果
[0139]由試驗結(jié)果可知，采用本申請檢測方法檢測4-羥基異亮氨酸含量，結(jié)果更為準(zhǔn)確。 [0140]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng) 視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種4-羥基異亮氨酸含量的檢測方法，其特征在于，包括： 將待測樣品采用超聲技術(shù)溶解于有機(jī)酸溶液中，放冷至室溫，過濾，得到供試液； 將4-羥基異亮氨酸對照品溶液和所述供試液分別采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測 定4-羥基異亮氨酸，利用外標(biāo)法得到4-羥基異亮氨酸的含量； 所述高效液相色譜的條件為:C18色譜柱;流動相由流動相A和流動相B組成，所述流動 相A為乙酸銨溶液，所述流動相B為乙腈或甲醇;梯度洗脫； 所述質(zhì)譜的條件為：電噴霧正離子源，掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測模式。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述有機(jī)酸為甲酸或乙酸。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于，所述溶解的時間為5~20min。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述乙酸銨的濃度為5~ 20mmol/L，pH{IS3.5。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述梯度洗脫的程序為：6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述流動相的流速為0.3 ~0?5mL/min〇7. 根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述C18色譜柱為 Agilent EC-C18色譜柱、Phenomenex Kinetex XB-C18色譜柱、Phenomenex Luna C18色譜 柱或者其它相同性能的色譜柱。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述Agilent EC-C18色譜柱的規(guī)格 為：150 X 4? 6mm，2 ? 7_;所述Phenomenex Kinetex XB-C18色譜柱的規(guī)格為：100 X 4? 6mm， 2所述Phenomenex Luna Cl8色譜柱的規(guī)格為：100X4.6mm，3ym。9. 根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述色譜柱的柱溫為30 ~4(TC〇10. 根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述質(zhì)譜的參數(shù)如下所 示： 定量離子對為148.2/74.2m/z，碰撞氣能量為17.3eV; 定性離子對為148.2/130.2m/z，碰撞氣能量為13. OeV; 定性離子對為148.2/102.2m/z，碰撞氣能量為14. OeV; 氣簾氣為22.0psi，碰撞氣壓為7.0psi，電噴霧電壓為5500V，離子源溫度為600°C，霧化 氣為60 ? Opsi，輔助氣為20 ? Opsi，去簇電壓為15 ? 4V，入口電壓為6 ? 8V，碰撞池入口電壓CEP 為8.0V，碰撞室出口電壓為3.0V。
【文檔編號】G01N30/02GK106053678SQ201610675896
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年8月16日
【發(fā)明人】蘇昭侖, 葉少文, 游景水, 李珍
【申請人】湯臣倍健股份有限公司