一種動物源性食品中胺苯吡唑酮?dú)埩舻目焖贉y定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種動物源性食品中胺苯化挫酬殘留的快速測定方法，更具體地說是 采用氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源-質(zhì)譜(GC-NCI-MS)定性定量測定豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動 物肌肉及制品等脂肪含量高的動物源性食品中殘留的胺苯化挫酬含量的方法，屬于農(nóng)藥殘 留量的測定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 胺苯化挫酬(Fe噸yrazamine)是日本住友化學(xué)株式會社研究開發(fā)的基于化晚的雜 環(huán)類殺真菌劑，通過抑制麥角醬醇生物合成途徑的作用機(jī)制的病原體，顯示出對菌絲生長 和抱子萌發(fā)和花粉管生長的抑制作用。CAS號為:473798-59-3，分子式為Ci7也1化化S，分子量 為331.43,胺苯化挫酬的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0003] 胺苯化菌酬是住友化學(xué)獨(dú)立開發(fā)的新殺菌劑，具有新穎化學(xué)結(jié)構(gòu)，能迅速滲入作 物體內(nèi)，對感染的真菌能快速發(fā)揮藥效，主要用于控制葡萄、石果、蔬菜作物中的灰霉病、菌 核病和鏈核盤菌。另外，胺苯化菌酬對哺乳類動物高度安全，在環(huán)境中能迅速降解，可在多 種作物采收前應(yīng)用。胺苯化菌酬最初在韓國推出，在胺苯化菌酬原藥獲得第一個(gè)全球登記 后，住友化學(xué)又在韓國推出其含胺苯化菌酬原藥的殺菌劑新品，并WBotrycide商標(biāo)名進(jìn)行 銷售，該產(chǎn)品為30%的懸浮劑型，用于水果和蔬菜作物。2009年，住友化學(xué)于申請歐盟登記 用于溫室栽培的西紅柿、茄子、辣椒和葫蘆等蔬菜作物，還有葡萄的田間應(yīng)用，但當(dāng)時(shí)僅在 波蘭獲得為期S年的臨時(shí)登記，商品名為Prolec化。2012年6月，歐盟食品與動物健康常務(wù) 委員會已投票通過了其登記申請，胺苯化菌酬已經(jīng)獲得歐盟批準(zhǔn)登記，將于2013年1月舊 起正式列入歐盟農(nóng)藥1107/2009法規(guī)下的已登記有效成分名單，有效期為十年。胺苯化菌酬 在歐盟取得登記后，將用于葡萄和一些溫室作物，如番茄、茄子、辣椒和葫蘆等。胺苯化菌酬 對葡萄抱菌具有優(yōu)異防控能力，住友化學(xué)將進(jìn)一步于2012/13年度向意大利和智利市場推 廣該產(chǎn)品，其全球商品名為Prolectus?，F(xiàn)已在美國和很多亞洲國家進(jìn)行了登記，具有很廣 闊的應(yīng)用前景。
[0004] 隨著胺苯化挫酬的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的歐盟、美國、加拿 大等國家制定了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(M化）， 歐盟制定殺菌劑胺苯化菌酬在多種作物上的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)已于2012年5月7日 生效。胺苯化菌酬在馬鈴馨、辣椒、茄子中的最大殘留限量為3mg/kg;在葫蘆、黃瓜、小黃瓜、 綠皮南瓜中的最大殘留限量為〇.7mg/kg;在相橘、葡萄抽、巧樣等水果及各種干果中的殘留 限量最為嚴(yán)格，為O.Olmg/kg。美國規(guī)定胺苯化挫酬在杏仁中的最大殘留限量為0.02mg/kg; 在杏仁外殼中的最大殘留限量為1.5mg/kg;在開屯、果中的最大殘留限量為0.02mg/kg;在窩 宦頭中的最大殘留限量為1.5mg/kg;在窩宦葉中的最大殘留限量為2mg/kg;在曼越替亞組 13-07A中的最大殘留限量為5mg/kg;在灌木漿果類亞組13-07B中的最大殘留限量為5mg/ kg;在小型蔓生水果13-07F亞組中（除雜猴桃外）的最大殘留限量為3mg/kg;在葡萄汁中的 最大殘留限量為4mg/kg;在矮生漿果類亞組13-07G中的最大殘留限量為3mg/kg;在人參中 的最大殘留限量為〇.7mg/kg。加拿大規(guī)定胺苯化挫酬在葡萄汁、生菜、窩宦、人參根、杏仁堅(jiān) 果、開屯、果中的M 化分別為4. Omg/kg、2. Omg/kg、1.5mg/kg、0.7mg/kg和0.02mg/kg;歐盟、日 本等國家規(guī)定沒有制定相應(yīng)農(nóng)藥的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽 肉等動物源性食品中殘留限量均實(shí)行O.Olmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005]現(xiàn)階段，對胺苯化挫酬殘留量測定方法的研究較少，報(bào)道的檢測方法主要為蔬菜 和水果中胺苯化挫酬殘留檢測方法，運(yùn)些檢測方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測 定蔬菜和水果中胺苯化挫酬殘留量的檢測方法，使用LC-MS/MS巧憶食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時(shí)，需使用不同的流動 相或色譜柱，運(yùn)樣需要不斷更換色譜柱、流動相并耗費(fèi)比較長的時(shí)間對系統(tǒng)進(jìn)行平衡，運(yùn)一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。配備負(fù)化學(xué)電離源的氣相色譜質(zhì)譜(GC-NCI-MS)分析食 品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有很大優(yōu)勢，負(fù)化學(xué)離子源(NCI源)被稱為質(zhì)譜"軟電離源"，對含電 負(fù)性集團(tuán)的分析物具有高選擇性和高靈敏度，由于其特征性強(qiáng)，利用其進(jìn)行殘留分析時(shí)，基 質(zhì)干擾很少，可很準(zhǔn)確地對目標(biāo)物進(jìn)行定性和定量分析?，F(xiàn)各種檢測機(jī)構(gòu)和企業(yè)均購置了 氣相色譜-質(zhì)譜儀(GC-MS)，一般也都配備了負(fù)化學(xué)離子源(NCI)，現(xiàn)很多類農(nóng)藥均含有電負(fù) 性基團(tuán)，有機(jī)氯和擬除蟲菊醋類農(nóng)藥分子大都含有一F、一C1、一化或一COO-等強(qiáng)電負(fù)性基 團(tuán)；有機(jī)憐農(nóng)藥分子大都含有=S、一OR、一P、一0-、一Cl、或一P = O等電負(fù)性基團(tuán)；而近年 來開發(fā)的新型農(nóng)藥中大多含有一F基團(tuán)，因此，使用GC-NCI-MS可方便實(shí)現(xiàn)多種農(nóng)藥的多殘 留分析，與GC-EI-MS相比，能獲得更好的抗干擾能力、更低的靈敏度和更好的選擇性，但迄 今為止未見食品農(nóng)產(chǎn)品中胺苯化挫酬殘留量的GC-NCI-MS檢測方法的報(bào)道。另外，眾所周 知，Q址化ERS前處理技術(shù)已成為農(nóng)藥殘留分析中應(yīng)用最廣的樣品前處理方法，但Q址化邸S 方法主要適用于低脂肪含量的高含水基質(zhì)，如大部分的水果蔬菜，在面對高脂肪含量基質(zhì) 時(shí)能力有限，一般需要增加正己燒除脂、冷凍樣品提取液去脂等步驟，但效果有限。近年來 有些公司推出了增強(qiáng)型脂質(zhì)去除專利產(chǎn)品-Enhanced Matrix Removal ,EMR-lipid，主要用 于去除具有直鏈控類結(jié)構(gòu)的脂類干擾物，包括游離脂肪酸、膽固醇、甘油=醋、憐脂等。該產(chǎn) 品已被制成基質(zhì)固相分散萃取劑，經(jīng)水活化后可直接通過分散固相萃取流程對提取液中的 脂類雜質(zhì)進(jìn)行去除，本發(fā)明應(yīng)用該前處理方法凈化動物源性食品時(shí)發(fā)現(xiàn)，該方法簡單高效、 對脂類物質(zhì)去除效果好，建立EMR基質(zhì)分散凈化、氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源-質(zhì)譜(GC-NCI-MS)定性和定量分析動物源性食品中胺苯化挫酬殘留量的檢測方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種動物源性食品中胺苯化挫酬殘留的快速測定方法，主要 用于測定動物源性食品等脂肪含量高的食品農(nóng)產(chǎn)品中胺苯化挫酬殘留量。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種動物源性食品中胺苯化挫酬 殘留的快速測定方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取 稱取混勻樣品于具塞離屯、管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙臘溶液均質(zhì)提取，然后 加入氯化鋼和無水硫酸儀，劇烈滿旋Imin后離屯、。
[0009] 凈化 將增強(qiáng)型脂質(zhì)去除產(chǎn)品EMR用水活化，移取樣品提取液于活化好的EMR凈化管中，滿旋 Imin后，700化/min離屯、5min，轉(zhuǎn)移全部上清液至裝有無水硫酸儀和氯化鋼的離屯、管中進(jìn)行 鹽析，滿旋離屯、后，移取一定體積的上清液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混 合溶劑溶解定容，過膜后，待氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源-質(zhì)譜(GC-NCI-MS)檢測。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含胺苯化挫酬的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 殘?jiān)?，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，滿旋混勻，配制成至少3個(gè)濃度的胺苯化挫酬系列標(biāo)準(zhǔn)工 作液。
[0011] (4)測定和結(jié)果計(jì)算 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-NCI-MS測定，W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化 后的樣品液注入GC-NCI-MS進(jìn)行測定，測得樣品液中胺苯化挫酬的色譜峰面積，代入基質(zhì)標(biāo) 準(zhǔn)工作曲線，得到樣品液中胺苯化挫酬含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到 樣品中胺苯化挫酬殘留量;若上機(jī)溶液中胺苯化挫酬殘留量超過線性范圍上限，需用定容 溶劑將上機(jī)溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤。
[0013] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持IOmin;傳輸線溫度:280°C。
[0014] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為:離子源溫度150°C;四極桿溫度150°C;電離模式:負(fù)化學(xué)電 離，即NCI模式，能量70eV;掃描方式：選擇離子監(jiān)測（SIM)模式，監(jiān)測的離子為：230.1、 231.U229.lo
[0015] 步驟(4)中測定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運(yùn)種農(nóng)藥;若 上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0016] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0017] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-NCI-MS應(yīng)用于糧谷、動物源性食品中胺苯化挫 酬定性確證和定量檢測，平均回收率為90.4%~93.6%，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為5.8% ~6.8%，檢出限低于3.90yg/kg，具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。 能滿足美國、歐盟、日本等國家對相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全 及對