一種治療風(fēng)熱感冒中藥的hplc特征圖譜的構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療風(fēng)熱感冒制劑的質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥特征圖譜能全面、綜合的反映所含成分的相對(duì)關(guān)系，較好的體現(xiàn)中藥成分的 復(fù)雜性和相關(guān)性，具有特征明顯、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，隨著中醫(yī)中藥的推廣應(yīng)用，特 征圖譜作為中草藥及其提取物質(zhì)量控制方法，目前已成為被國內(nèi)外廣泛接受的一種對(duì)中藥 質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)的技術(shù)。
[0003] 此前，一種治療風(fēng)熱感冒制劑（專利號(hào)CN 104623082 A)沒有明確的檢測(cè)方法，而 對(duì)其中的藥味(金銀花、連翹、錦燈籠、紫箕貫眾、黃芩、甘草），多采用中國藥典中給出的方 法，即單獨(dú)的對(duì)其中各味藥的成分進(jìn)行含量測(cè)定(金銀花-綠原酸、連翹-連翹苷、黃芩-黃芩 苷、甘草-甘草苷）。前述檢測(cè)方法存在的不足之處有：
[0004] 1、在藥典規(guī)定的方法中沒有對(duì)其中多味藥材的多個(gè)主要化學(xué)成分進(jìn)行全面、系統(tǒng) 的檢測(cè)。
[0005] 2、現(xiàn)行無質(zhì)量檢測(cè)方法不能監(jiān)控原料藥材、中間體、成品的質(zhì)量。
[0006] 綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)一種治療風(fēng)熱感冒制劑(專利號(hào)CN 104623082 A)方法存 在方法繁瑣、不能快速、全面的對(duì)一種治療風(fēng)熱感冒制劑進(jìn)行檢測(cè)和鑒定等缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種治療風(fēng)熱感冒中藥的HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，克服現(xiàn) 有的檢測(cè)方法存在的前述不足。
[0008] 本發(fā)明的HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法包括：
[0009] 1、供試品溶液的制備：
[0010] 取本品2g-5g，精密稱定，精密加取30 % -100 %甲醇25-30ml，稱定重量，用超聲處 理30-60分鐘取出，待溶液冷卻至室溫，用30 %-100%甲醇補(bǔ)重，搖勻，用0.45μπι微孔濾膜濾 過，取續(xù)濾液，即得。
[0011] 2、參照物溶液的制備:分別精密稱取綠原酸、連翹酯苷Α、甘草苷、木犀草苷、連翹 苷、黃芩苷、甘草酸銨7個(gè)參照物適量，加50 %甲醇制成每lmL分別含綠原酸35.50yg、連翹酯 苷B50.10yg、甘草苷42.50yg、木犀草苷39.45yg、連翹苷31.80yg、甘草酸42.65yg、黃芩苷 40.0 Oyg的混合參照物貯備溶液。使用時(shí)精密量取2. OOmL，置25mL量瓶中，用30%-100%甲 醇稀釋至刻度，作為參照物溶液。
[0012] 3、色譜條件:采用Z0RBAXSB-C18色譜柱（4 · 6mm X 250mm，5μπι)，流動(dòng)相乙腈-水（乙 腈9 %-55 % )梯度洗脫;體積流量0.8mL/min; DAD檢測(cè)器，波長為253nm;柱溫35 °C ;進(jìn)樣量10 yL。理論板數(shù)均不低于10000。
[0013] 4、測(cè)定:分別精密吸取供試品溶液和參照物溶液各10μ1注入液相色譜儀，照高效 液相色譜法測(cè)定，得到一種治療風(fēng)熱感冒中藥的HPLC特征圖譜。
[0014] 本發(fā)明的HPLC特征圖譜的最佳構(gòu)建方法如下：（以下技術(shù)方案中所記載的各物質(zhì) 的用量或用量范圍，旨在表明各物質(zhì)間的用量比例關(guān)系，并不限定在記載的具體數(shù)量上。）
[0015] 供試品溶液的制備:取本品2g，精密稱定，精密加取50 %甲醇25ml，稱定重量，用超 聲處理30分鐘取出，待溶液冷卻至室溫，用50 %甲醇補(bǔ)重，搖勻，用0.45μπι微孔濾膜濾過，取 續(xù)濾液，即得。
[0016] 參照物溶液的制備：分別精密稱取綠原酸、連翹酯苷Α、甘草苷、木犀草苷、連翹 苷、黃芩苷、甘草酸銨7個(gè)參照物適量，加50 %甲醇制成每lmL分別含綠原酸35.50yg、連翹酯 苷B50.10yg、甘草苷42.50yg、木犀草苷39.45yg、連翹苷31.80yg、甘草酸42.65yg、黃芩苷 40.0 Oyg、的混合參照物貯備溶液及單獨(dú)參照物。使用時(shí)精密量取2. OOmL，置25mL量瓶中，用 50%甲醇稀釋至刻度，作為參照物溶液。
[0017] 3、色譜條件:采用Z0RBAXSB-C18色譜柱(4.6mmX250mm，5ym)，流動(dòng)相梯度洗脫程 序見表1;體積流量〇.8mL/min;DAD檢測(cè)器，波長為253nm;柱溫35°C;進(jìn)樣量10yL。理論板數(shù) 均不低于10000。
[0018]表1流動(dòng)相梯度洗脫條件
[0019]
[0020] 4、測(cè)定:分別精密吸取供試品溶液和參照物溶液各10μ1注入液相色譜儀，照高效 液相色譜法測(cè)定，得到一種治療風(fēng)熱感冒中藥的HPLC特征圖譜。
[0021] 其中所述一種治療風(fēng)熱感冒制劑的HPLC特征圖譜中共有7個(gè)特征共有峰，其中歸 屬于金銀花的特征圖譜具有2個(gè)特征共有峰：1號(hào)峰、2號(hào)峰;歸屬于連翹的特征圖譜具有2個(gè) 特征共有峰:3號(hào)峰、4號(hào)峰;歸屬于甘草的特征圖譜具有2個(gè)特征共有峰:5號(hào)峰、6號(hào)峰;歸屬 于黃芩的特征圖譜具有1個(gè)特征共有峰:7號(hào)峰；
[0022]其中所述的一種治療風(fēng)熱感冒制劑的HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，在25 3nm波長檢 測(cè)下利用各標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)主要峰進(jìn)行比較確定；1-7號(hào)分別為綠原酸、木犀草苷、連翹酯苷A、連 翹苷、甘草苷、黃芩苷。
[0023]其中所述一種治療風(fēng)熱感冒制劑的HPLC特征圖譜，以甘草苷為參照峰S，計(jì)算各特 征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述相對(duì)保留時(shí)間在第一規(guī)定值的±5%之內(nèi)，所述第一規(guī)定 值為:16.18-峰 1、8·3-峰2、17.8-峰3、7·86-峰4、21· 12-峰5、1.00-峰S、11.83-峰7 [0024]其中所述一種治療風(fēng)熱感冒制劑的HPLC特征圖譜，采用《中藥色譜指紋圖譜相似 度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版》進(jìn)行評(píng)價(jià)，供試品批與批間的相似度均大于0.90。
【附圖說明】
[0025] 圖1是一種治療風(fēng)熱感冒制劑的HPLC特征圖譜
[0026] 圖2是一種治療風(fēng)熱感冒制劑的HPLC對(duì)照品參照物圖譜 [0027]圖3是一種治療風(fēng)熱感冒制劑的HPLC連翹苷對(duì)照品 [0028]圖4是一種治療風(fēng)熱感冒制劑的HPLC甘草苷對(duì)照品 [0029]圖5是一種治療風(fēng)熱感冒制劑的HPLC木犀草苷對(duì)照品
[0030] 圖6是一種治療風(fēng)熱感冒制劑的HPLC連翹酯苷A與黃芩苷對(duì)照品
[0031] 圖7是一種治療風(fēng)熱感冒制劑11批次樣品疊加圖
【具體實(shí)施方式】
[0032] 實(shí)施例1: 一種治療風(fēng)熱感冒制劑特征圖譜方法的建立。
[0033] 1儀器:UltiMate 3000DGLC高效液相色譜儀，紫外DAD檢測(cè)器;Mettler AE240十萬 分之一分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司）;AB204-E電子天平(上海梅特勒-托利 多儀器有限公司）等。
[0034] 2試劑與試藥
[0035] 2.1試劑：甲醇等為分析純，磷酸、乙腈為色譜純，水為超純水。
[0036] 2.2試藥:綠原酸、連翹酯苷A、甘草苷、木犀草苷、連翹苷、黃芩苷、甘草酸銨(均來 自中國食品藥品鑒定研究院），一種治療風(fēng)熱感冒制劑批號(hào)：120601、120602、120603、 130501、130502、130503、130504、130505、141201、141202、141203(來自吉林修正藥業(yè)新藥 開發(fā)有限公司）。
[0037] 3方法與結(jié)果
[0038] 3.1色譜條件:采用201^4乂38-(：18色譜柱(4.6臟\250臟，5以111)，流動(dòng)相梯度洗脫程 序見表;體積流量〇. 8mL/min; DAD檢測(cè)器，波長為253nm;柱溫35 °C ;進(jìn)樣量10yL。理論板數(shù)均 不低于10000。
[0039]流動(dòng)相梯度洗脫條件
[0040]
[0042] 3.2供試品溶液的制備：取本品2g，精密稱定，精密加取50%甲醇25ml，稱定重量， 用超聲處理30分鐘取出，待溶液冷卻至室溫，用50%甲醇補(bǔ)重，搖勻，用0.45μπι微孔濾膜濾 過，取續(xù)濾液，即得。
[0043] 3.3參照物溶液的制備:分別精密稱取綠原酸、連翹酯苷Α、甘草苷、木犀草苷、連翹 苷、黃芩苷、甘草酸銨7個(gè)參照物適量，加50 %甲醇制成每lmL分別含綠原酸35.50yg、連翹酯 苷B50.10yg、甘草苷42.50yg、木犀草苷39.