一種鹿茸與秘魯參配伍規(guī)律的分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中醫(yī)用藥配伍規(guī)律方法領(lǐng)域，特別是涉及到一種分析鹿茸與秘魯參配 伍規(guī)律的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 炮制與配伍是我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)用藥的兩大特色，"炮制理論"和"配伍理論"則是中 醫(yī)藥理論的精華。炮制有"陰陽炮制"之說，以達(dá)"陽藥陽制，增陽助力"之功。藥對配伍有 "七情和合"之論，以顯"同類相須，協(xié)同增效"之效?，F(xiàn)代科學(xué)研宄表明藥材的炮制與配伍 會引起藥材所含化學(xué)成分的變化和藥理作用的改變，從而直接影響臨床療效。
[0003] 衰老是一個比較復(fù)雜的過程，現(xiàn)代中醫(yī)臨床研宄發(fā)現(xiàn)衰老證候主要表現(xiàn)為五臟衰 老的證候，如腰膝酸軟、頭暈?zāi)垦?、視物昏花、食欲減退、易感冒等，其中相關(guān)最為密切的為 肝和腎，其次是脾，其與腎虛具有相同的外在表現(xiàn)。與此同時，衰老會引起多種生理功能出 現(xiàn)異常，較為常見的有免疫功能下降、內(nèi)分泌功能紊亂、男性勃起功能障礙（陽萎）等。目 前，對于衰老的機(jī)制有多種學(xué)說，其中自由基學(xué)說是較為成熟的理論。正常情況下，自由基 的產(chǎn)生和消除處于相對平衡狀態(tài)，當(dāng)機(jī)體衰老時，清除自由基的能力下降，過剩的自由基 將引發(fā)一系列生物學(xué)毒性反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致組織器官的結(jié)構(gòu)和功能出現(xiàn)紊亂，整個機(jī)體呈現(xiàn) 出衰老特征。
[0004] "腎虛"證涉及面很廣，目前的研宄認(rèn)為"腎虛"證主要涉及到神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫， 其病理變化主要體現(xiàn)在下丘腦-垂體-靶腺軸（包括腎上腺、胸腺、性腺、甲狀腺）功能的 改變。當(dāng)下丘腦-垂體-性腺軸的功能異常時，會出現(xiàn)雄性動物血清睪丸酮（T)含量降低， 雙氫睪酮（DHT)含量下降，血清雌二醇（E2)含量升高，睪丸乳酸脫氫酶（LDH)和乳酸脫氫 酶-X(LDH-X)同功酶活性降低等現(xiàn)象。同時男性的睪丸、前列腺和精囊腺會出現(xiàn)組織學(xué)改 變。"腎陽虛"證患者機(jī)體內(nèi)B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的免疫活性及轉(zhuǎn)化率會出現(xiàn)下降現(xiàn)象， 細(xì)胞免疫功能低下且白介素-2和γ-干擾素的活性會明顯降低。尚有大量臨床資料表明 "腎陽虛"證與衰老有著密切聯(lián)系，腎虛可導(dǎo)致過氧化物歧化酶活性下降，導(dǎo)致機(jī)體清除自 由基的能力下降，進(jìn)而造成過氧化反應(yīng)，導(dǎo)致核酸鏈斷裂，蛋白質(zhì)過度降解，從而引起細(xì)胞、 組織、器官等的損傷。
[0005] 關(guān)于腎陽虛證與內(nèi)分泌功能關(guān)系的研宄始見于20世紀(jì)50年代。大量研宄結(jié)果 表明腎陽虛證患者通常存在著腎上腺功能紊亂、甲狀腺功能紊亂、性腺功能紊亂、垂體功能 紊亂等內(nèi)分泌失調(diào)現(xiàn)象，故而將腎陽虛證定位在下丘腦-垂體-靶腺軸（腎上腺、甲狀腺、 性腺）之上。其中能夠反映下丘腦-垂體-性腺軸的功能異常的主要指標(biāo)包括血清睪丸酮 (T)下降，雙氫睪酮（DHT)降低，血清雌二醇（E2)升高。同時，當(dāng)此性腺軸功能異常時，還會 伴隨著睪丸、前列腺、精囊腺等器官出現(xiàn)組織學(xué)改變。
[0006] 睪丸間質(zhì)（Leydig)細(xì)胞是一種存在于睪丸間質(zhì)內(nèi)部的內(nèi)分泌細(xì)胞，主要功能是 分泌睪酮，動物體內(nèi)約95 %的睪酮是由睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌的。其分泌活動主要由丘下腦、垂 體及自身調(diào)節(jié)作用控制。動物實驗研宄表明由于老年大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的睪酮合成酶系統(tǒng) 功能衰退，導(dǎo)致老年Wistar大鼠睪酮濃度明顯低于其青年大鼠，進(jìn)一步揭示了睪丸間質(zhì)細(xì) 胞的分泌功能衰退和數(shù)量減少是導(dǎo)致中老年男性雄激素部分缺乏的主要原因之一。
[0007] 由此本發(fā)明針對于"腎陽虛"證的病理變化，選擇經(jīng)典的體外活性實驗方法，以 自由基清除活性、脾細(xì)胞增殖活性和促進(jìn)睪酮分泌活性為指標(biāo)，采用均勻設(shè)計法分析鹿 茸-秘魯參的最佳活性配伍比例。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：提供一種鹿茸與秘魯參配伍規(guī)律的分析方法，針 對于"腎陽虛"證的病理變化，選擇經(jīng)典的體外活性實驗方法，以自由基清除活性、脾細(xì)胞增 殖活性和促進(jìn)睪酮分泌活性為指標(biāo)，采用均勻設(shè)計法分析鹿茸-秘魯參的最佳活性配伍比 例；
[0009] -種鹿茸與秘魯參配伍規(guī)律的分析方法，其特征是：包括以下步驟，
[0010] 步驟一、凍干的鹿茸和秘魯參的干品各取150g，分別粉碎，過40目篩；設(shè)定鹿茸劑 量范圍為Og~3g，秘魯參的劑量范圍為Og~15g ;在所述劑量范圍內(nèi)，各取6個劑量的鹿 茸和秘魯參，鹿茸的劑量分別為〇g、〇. 6g、l. 2g、l. 6g、2. 4g、3. 0g，秘魯參的劑量分別為0g、 3g、6g、9g、12g、15g ;
[0011] 其中：當(dāng)鹿茸取〇g的劑量與秘魯參取6g的劑量配比成鹿茸-秘魯參I ;
[0012] 當(dāng)鹿茸取0. 6g的劑量與秘魯參取15g的劑量配比成鹿茸-秘魯參II ;
[0013] 當(dāng)鹿茸取I. 2g的劑量與秘魯參取3g的劑量配比成鹿茸-秘魯參III ;
[0014] 當(dāng)鹿茸取I. 6g的劑量與秘魯參取12g的劑量配比成鹿茸-秘魯參IV ;
[0015] 當(dāng)鹿茸取2. 4g的劑量與秘魯參取Og的劑量配比成鹿茸-秘魯參V ;
[0016] 當(dāng)鹿茸取3. Og的劑量與秘魯參取9g的劑量配比成鹿茸-秘魯參VI ;
[0017] 步驟二、取按步驟一配制的6組鹿茸-秘魯參組方，分別加6~20倍體積的體積 分?jǐn)?shù)為60 %~80 %的乙醇，超聲提取2次，每次1小時，濾過，合并兩次的濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀于60°C回收溶劑，得到的6組提取物分別在65°C水浴鍋上蒸干，得到6組干膏組方，分別 為鹿茸-秘魯參I干膏、鹿茸-秘魯參II干膏、鹿茸-秘魯參III干膏、鹿茸-秘魯參IV干膏、 鹿茸-秘魯參V干膏、鹿茸-秘魯參VI干膏，備用；
[0018] 步驟三、采用體外清除二苯代苦味肼基自由基法，對步驟二得到的6組干膏組方 進(jìn)行二苯代苦味肼基自由基清除能力的分析；
[0019] 步驟四、用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)DPS7. 05,對步驟三得到的二苯代苦味肼基自由基實驗數(shù) 據(jù)進(jìn)行處理，得到抗氧化活性與鹿茸-秘魯參配伍之間的關(guān)系，鹿茸-秘魯參配伍的最佳重 量配伍比例為1:1 ;
[0020] 步驟五、對步驟二中得到的6組干膏組方進(jìn)行脾淋巴細(xì)胞增殖作用的分析；
[0021] 步驟六、用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)DPS7. 05,對步驟五得到的脾淋巴細(xì)胞增殖實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行 處理；得到脾淋巴細(xì)胞增殖活性與鹿茸-秘魯參配伍之間的關(guān)系，鹿茸-秘魯參最佳重量比 例為1:1 ;
[0022] 步驟七、對步驟二得到的6組干膏組方進(jìn)行睪丸間質(zhì)細(xì)胞增殖和促進(jìn)睪丸間質(zhì)細(xì) 胞分泌睪酮作用的分析；
[0023] 步驟八、用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)DPS7. 05,對步驟七得到的睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮分泌量的實 驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理；鹿茸-秘魯參最佳重量比例為I. 02:1。
[0024] 所述步驟三中鹿茸-秘魯參I干膏在濃度為250 μ g/mL~1500 μ g/mL范圍內(nèi)， 抗氧化劑的質(zhì)量濃度X與二苯代苦味肼基自由基的清除率y之間呈線性關(guān)系；鹿茸-秘 魯參II干膏在濃度為50 μ g/mL~1000 μ g/mL范圍內(nèi)，抗氧化劑的質(zhì)量濃度X與二苯代苦 味肼基自由基的清除率y之間呈線性關(guān)系；鹿茸-秘魯參III干膏在濃度為250 μ g/mL~ 1000 μ g/mL范圍內(nèi)，抗氧化劑的質(zhì)量濃度X與二苯代苦味肼基自由基的清除率y之間呈線 性關(guān)系；鹿茸-秘魯參IV干膏在濃度為50 μ g/mL~1000 μ g/mL范圍內(nèi)，抗氧化劑的質(zhì)量濃 度X與二苯代苦味肼基自由基的清除率y之間呈線性關(guān)系；鹿茸-秘魯參V干膏在濃度為 50 μ g/mL~1500 μ g/mL范圍內(nèi)，抗氧化劑的質(zhì)量濃度X與二苯代苦味肼基自由基的清除 率y之間呈線性關(guān)系；鹿茸-秘魯參VI干膏在濃度為40 μ g/mL~400 μ g/mL范圍內(nèi)，抗氧 化劑的濃度X與二苯代苦味肼基自由基的清除率y之間呈線性關(guān)系；6組干膏組方具有供 氫能力。
[0025] 通過上述設(shè)計方案，本發(fā)明可以帶來如下有益效果：本發(fā)明針對于"腎陽虛"證 的病理變化，選擇經(jīng)典的體外活性實驗方法，以二苯代苦味肼基自由基清除活性、脾細(xì)胞增 殖活性和促進(jìn)睪酮分泌活性為指標(biāo)，采用均勻設(shè)計法分析鹿茸-秘魯參的最佳活性配伍比 例；鹿茸-秘魯參配伍對二苯代苦味肼基自由基清除活性具有較好的供氫能力；鹿茸-秘 魯參配伍對于脾細(xì)胞的增殖有隨著濃度增大，增殖作用增強的趨勢；鹿茸與秘魯參配伍對 脾淋巴細(xì)胞的增殖作用存在交互作用，兩藥合用較二者單用作用增強，具有協(xié)同作用；鹿茸 與秘魯參配伍所產(chǎn)生的交互作用對睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌睪酮的影響是極顯著的，兩藥合用 較鹿茸或者秘魯參單用作用增強，具很好的有協(xié)同作用。
【附圖說明】
[0026] 以下結(jié)合附圖和【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明：
[0027] 圖1為本發(fā)明的總體工藝流程示意圖。
[0028] 圖2為二苯代苦味肼基自由基DPPH標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0029] 圖3為維生素 E的二苯代苦味肼基自由基DPPH清除率曲線。
[0030] 圖4為鹿茸-秘魯參6個比例的二苯代苦味肼基自由基DPPH清除率曲線
[0031] 圖5為ELISA法側(cè)睪酮⑴標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0032] 圖中：1_鹿茸-秘魯參I干膏、2-鹿茸-秘魯參II干膏、3-鹿茸-秘魯參III干膏、 4-鹿茸-秘魯參IV干膏、5-鹿茸-秘魯參V干膏、6-鹿茸-秘魯參VI干膏。
【具體實施方式】
[0033] 如圖1所示，一種分析鹿茸與秘魯參配伍規(guī)律的方法，其特征是：包括以下步驟，
[0034] 一種鹿茸與秘魯參配伍規(guī)律的分析方法，其特征是：包括以下步驟，
[0035] 步驟一、凍干的鹿茸和秘魯參的干品各取150g，分別粉碎，過40目篩；設(shè)定鹿茸劑 量范圍為Og~3g，秘魯參的劑量范圍為Og~15g ;在所述劑量范圍內(nèi)，各取6個劑量的鹿 茸和秘魯參，鹿茸的劑量分別為〇g、〇. 6g、l. 2g、l. 6g、2. 4g、3. 0g，秘魯參的劑量分別為0g、 3g、6g、9g、12g、15g ;
[0036] 其中：當(dāng)鹿茸取Og的劑量與秘魯參取6g的劑量配比成鹿茸-秘魯參I ;
[0037] 當(dāng)鹿茸取0. 6g的劑量與秘魯參取15g