本發(fā)明屬于化學(xué)藥物分析檢測領(lǐng)域，涉及一種噁拉戈利鈉遺傳毒性雜質(zhì)的檢測方法，具體涉及一種噁拉戈利鈉遺傳毒性雜質(zhì)甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯的檢測方法。

背景技術(shù)：

1、噁拉戈利鈉(英文名稱：elagolix，商品名：orilissa)于2018年7月獲得美國食品和藥物管理局的批準，用于治療因子宮內(nèi)膜異位癥導(dǎo)致的疼痛。噁拉戈利鈉是一種口服促性腺激素釋放激素(gnrh)拮抗劑，通過與垂體腺中的gnrh受體競爭性結(jié)合來抑制內(nèi)源性gnrh信號傳導(dǎo)。

2、在制備噁拉戈利鈉過程中，需用到甲磺酸及甲磺酰氯，圖1為中間體以及降解產(chǎn)物流程圖。其中，雜質(zhì)甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯為磺酸酯化物，具有遺傳毒性警示結(jié)構(gòu)。

3、甲磺酸甲酯結(jié)構(gòu)式如下：

4、

5、甲磺酸乙酯結(jié)構(gòu)式如下：

6、

7、按icch?m7和中國藥典2020年版四部通則9101遺傳毒性雜質(zhì)控制指導(dǎo)原則，按ttc1.5μg/天計算，雜質(zhì)甲磺酸甲/乙酯限度為3.75ppm。需對噁拉戈利鈉中甲磺酸甲/乙酯進行檢測，以期達到標準要求。

8、遺傳毒性雜質(zhì)限度較低，大多使用lc-ms或gc-ms檢測遺傳毒性雜質(zhì)。由于lc-ms或gc-ms儀器較為昂貴，故開發(fā)常規(guī)氣相色譜方法檢測遺傳毒性雜質(zhì)更具有實用性。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種基于氣相色譜法高靈敏度檢測噁拉戈利鈉遺傳毒性雜質(zhì)的方法，并且該檢測方法經(jīng)驗證均符合標準。

2、甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯無法使用氣相色譜法(lc)直接檢測，需采用衍生化法，通過碘化鈉衍生為碘甲烷、碘乙烷進行檢測。

3、發(fā)明人配制供試品溶液和對照品溶液，對氣相色譜檢測條件進行了篩選。

4、供試品溶液：取噁拉戈利鈉樣品200mg，精密稱定，置于頂空瓶中，精密加入2ml?n,n-二甲基甲酰胺，再加入6g碘化鈉及3ml水，密封，振搖使溶解。

5、對照品溶液：取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯各適量，精密稱定，加n,n-二甲基甲酰胺稀釋制成每1ml約含甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯各0.375μg的溶液，量取2ml置于頂空瓶中，再加入6g碘化鈉及3ml水，密封，搖勻。

6、先篩選氣相色譜柱，使用hp-innowax毛細管色譜柱(內(nèi)徑0.53mm，長度30m，膜厚1.0μm)，起始柱溫為50℃，維持6分鐘，以每分鐘20℃的速率升溫至220℃，維持8分鐘；進樣口溫度為180℃；檢測器溫度為250℃；頂空瓶平衡溫度為80℃，平衡時間為30分鐘。

7、對照品溶液與供試品溶液的圖譜見圖2，可見供試品溶液中噁拉戈利鈉及其他雜質(zhì)干擾甲磺酸乙酯出峰。

8、調(diào)整前述氣相色譜檢測條件的起始柱溫為40℃，無法使其他雜質(zhì)峰與甲磺酸乙酯分離。

9、將hp-innowax毛細管色譜柱更換為db-624毛細管柱(長度60m，內(nèi)徑0.32mm，膜厚1.8μm)，起始柱溫為50℃，維持10分鐘，以每分鐘30℃的速率升至220℃，維持8分鐘；進樣口溫度為180℃；檢測器溫度為250℃；頂空瓶平衡溫度為80℃，平衡時間為30分鐘。對照品溶液與供試品溶液的圖譜見圖3，可見其他雜質(zhì)峰與甲磺酸乙酯分離度符合要求，不干擾甲磺酸甲酯/乙酯檢測。

10、因此，發(fā)明人選擇db-624氣相色譜柱，進一步篩選頂空平衡溫度。

11、頂空平衡溫度為80℃，平衡時間為30分鐘，起始柱溫為50℃，維持10分鐘，以每分鐘30℃的速率升至220℃，維持8分鐘；進樣口溫度為180℃；檢測器溫度為250℃；加標供試品溶液，甲磺酸甲酯回收率為59.8％，甲磺酸乙酯回收率為66.6％，甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的回收率均不在75％～120％范圍內(nèi)。

12、調(diào)整頂空平衡溫度為60℃，平衡時間為30分鐘，起始柱溫為50℃，維持10分鐘，以每分鐘30℃的速率升至220℃，維持8分鐘；進樣口溫度為180℃；檢測器溫度為250℃對照品溶液與加標供試品溶液圖譜見圖4，甲磺酸甲酯回收率為104.8％，甲磺酸乙酯回收率為96.8％，甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的回收率均在75％～120％范圍內(nèi)，符合要求。

13、最終篩選出的最優(yōu)氣相色譜檢測條件：氣相色譜條件：色譜柱：以6％氰丙基苯-94％二甲基硅氧烷為固定相的毛細管柱(db-624毛細管柱，長度60m，內(nèi)徑0.32mm，膜厚度1.8μm)；起始柱溫為50℃，維持10分鐘，以每分鐘30℃的速率升至220℃，維持8分鐘；進樣口溫度為180℃；檢測器溫度為250℃；頂空瓶平衡溫度為60℃，平衡時間為30分鐘。

14、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

15、一種噁拉戈利鈉遺傳毒性雜質(zhì)檢測方法，該方法為通過氣相色譜法檢測噁拉戈利鈉中遺傳毒性雜質(zhì)甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯的含量；包括：分別配制甲磺酸甲酯對照品溶液、甲磺酸乙酯對照品溶液、供試品溶液；分別精密量取供試品溶液和甲磺酸甲酯對照品溶液、甲磺酸乙酯對照品溶液，頂空進樣，記錄色譜圖，采用外標法，以峰面積計算供試品溶液中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯的含量。

16、所述的氣相色譜檢測條件：色譜柱：以6％氰丙基苯-94％二甲基硅氧烷為固定相的毛細管柱；起始柱溫為50℃，維持10分鐘，以每分鐘30℃的速率升至200～220℃，維持8分鐘；進樣口溫度為180～200℃；載氣：n2；檢測器溫度為250～280℃；頂空瓶平衡溫度為60℃，平衡時間為30分鐘。

17、優(yōu)選的，色譜柱為db-624毛細管柱(長度60m，內(nèi)徑0.32mm，膜厚度1.8μm)。

18、配制供試品溶液：取噁拉戈利鈉樣品0.2～0.3g，精密稱定，置于頂空瓶中，精密加入2ml?n,n-二甲基甲酰胺，再加入5～7g碘化鈉及2～3ml水，密封，振搖使溶解。

19、優(yōu)選的，配制供試品溶液：取噁拉戈利鈉樣品200mg，精密稱定，置于頂空瓶中，精密加入2ml?n,n-二甲基甲酰胺，再加入6g碘化鈉及3ml水，密封，振搖使溶解。

20、配制甲磺酸甲酯對照品溶液：取甲磺酸甲酯適量，精密稱定，加n,n-二甲基甲酰胺稀釋制成每1ml約含甲磺酸甲酯0.3～0.4μg的溶液，量取2ml置于頂空瓶中，再加入5～7g碘化鈉及2～3ml水，密封，搖勻。

21、優(yōu)選的，配制甲磺酸甲酯對照品溶液：取甲磺酸甲酯適量，精密稱定，加n,n-二甲基甲酰胺稀釋制成每1ml約含甲磺酸甲酯0.375μg的溶液，量取2ml置于頂空瓶中，再加入6g碘化鈉及3ml水，密封，搖勻。

22、配制甲磺酸乙酯對照品溶液：取甲磺酸乙酯適量，精密稱定，加n,n-二甲基甲酰胺稀釋制成每1ml約含甲磺酸乙酯0.3～0.4μg的溶液，量取2ml置于頂空瓶中，再加入5～7g碘化鈉及2～3ml水，密封，搖勻。

23、優(yōu)選的，配制甲磺酸乙酯對照品溶液：取甲磺酸乙酯適量，精密稱定，加n,n-二甲基甲酰胺稀釋制成每1ml約含甲磺酸乙酯0.375μg的溶液，量取2ml置于頂空瓶中，再加入6g碘化鈉及3ml水，密封，搖勻。

24、本發(fā)明檢測方法最低能定量檢測3.75ppm的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯。

25、本發(fā)明的有益效果：

26、(1)、本發(fā)明采用氣相色譜法檢測噁拉戈利鈉中的雜質(zhì)甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，能使甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和噁拉戈利鈉以及其他雜質(zhì)均有效分離，且峰型對稱性較好，利于雜質(zhì)甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯的檢出，具有較高的系統(tǒng)適用性。

27、(2)、本發(fā)明方法在檢測靈敏度上表現(xiàn)出巨大的優(yōu)勢，能夠檢測3.75ppm限度的遺傳毒性雜質(zhì)。

28、(3)、本發(fā)明方法在專屬性、定量限、檢測限、線性范圍以及重復(fù)性上表現(xiàn)出無可擬比的優(yōu)勢，具有較高的精密度。