檢測dock8蛋白的試劑盒及非診斷目的檢測dock8蛋白的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及蛋白檢測領(lǐng)域，特別涉及檢測DOCK8蛋白的試劑盒及非診斷目的檢測DOCK8蛋白的方法。該試劑盒包括DOCK8抗體、熒光素標(biāo)記的第二抗體、同型對照抗體。本發(fā)明提供的試劑盒可準(zhǔn)確檢測DOCK8蛋白；本發(fā)明提供的檢測DOCK8蛋白的方法可靠，操作簡單，重復(fù)性好，耗時(shí)短，整個(gè)檢測過程只需5小時(shí)。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及蛋白檢測領(lǐng)域，特別涉及檢測D0CK8蛋白的試劑盒及非診斷目的檢測 D0CK8蛋白的方法。 檢測D0CK8蛋白的試劑盒及非診斷目的檢測D0CK8蛋白的 方法

【背景技術(shù)】
[0002] 高IgE綜合征（HIES ;或Job's綜合征）是一類以反復(fù)的皮膚和肺部感染、濕疹、 血清IgE水平顯著升高和嗜酸性粒細(xì)胞增多為特征的原發(fā)性聯(lián)合免疫缺陷病。根據(jù)遺傳 方式的不同，HIES分為兩類，包括常染色體顯性遺傳 HIES(AD-HIES)和常染色體隱性遺傳 HIES (AR-HIES)。
[0003] AD-HIES患者的臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，但其臨床表現(xiàn)均有以下4個(gè)共性：①出生時(shí)或 生后不久即開始出現(xiàn)頑固性濕疹樣皮炎；②血清IgE水平顯著增高；③外周血嗜酸性粒細(xì) 胞增高；④反復(fù)發(fā)作的皮膚或肺膿腫。HIES的感染主要在皮膚和肺，皮膚膿腫因無通常所 見的紅、腫、痛，因而又稱之為"冷膿腫"，主要致病菌為金黃色葡萄球菌，也可為肺炎球菌、 流感嗜血桿菌及假單胞菌等。反復(fù)肺部感染可導(dǎo)致肺組織破壞而形成肺膨出、肺囊腫和支 氣管擴(kuò)張等病癥。肺實(shí)質(zhì)的損害導(dǎo)致患者易患慢性和機(jī)會性感染，包括曲霉菌屬、綠膿桿 菌、卡氏肺囊蟲以及非典型分枝桿菌感染等。曲霉菌屬與綠膿桿菌反復(fù)感染是HIES患者死 亡的主要病因，故應(yīng)引起足夠重視?；純阂话銦o其他過敏表現(xiàn)，如過敏性鼻炎、蕁麻疹、哮 喘。AD-HIES患者還可有免疫系統(tǒng)外的表現(xiàn)：特殊面容（前額突出、寬鼻梁、面部不對稱、眼 窩深陷及雙側(cè)外眥眼距增寬）、易骨折（微小創(chuàng)傷即可引起）、脊柱側(cè)彎、關(guān)節(jié)過伸、乳牙脫 落延遲及血小板增高等。目前研究認(rèn)為，AD-HIES多為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3 (signal transducers and activators of transcription, STAT3)基因突變所致。STAT3 是一種轉(zhuǎn) 錄因子，可被多種細(xì)胞因子和生長因子激活，包括IL-6、IL-10、IL-22、IL-23及巨噬細(xì)胞集 落刺激因子。AD-HIES中STAT3突變干擾以上細(xì)胞因子激活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而導(dǎo)致免疫 反應(yīng)的改變。
[0004] AR-HIES患者可與AD-HIES患者有相似的表現(xiàn)，如嚴(yán)重的特應(yīng)性皮炎樣皮疹，特 應(yīng)性皮炎樣皮疹通常為首發(fā)表現(xiàn)，幾乎所有HIES患者在嬰幼兒時(shí)期均可發(fā)生；反復(fù)細(xì)菌感 染，如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等；血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清IgE增高?；颊咄ǔ０橛?嚴(yán)重的過敏性疾病，如哮喘以及對食物和環(huán)境過敏原過敏等。由于AR-HIES可合并聯(lián)合免 疫缺陷，因此患者可反復(fù)發(fā)生頑固的病毒感染，并可能早期并發(fā)惡性腫瘤。嚴(yán)重慢性皮膚病 毒感染是AR-HIES的顯著特征，累及約90% AR-HIES患者。較常見的病毒為單純皰疹病毒 (herpes simplex virus，HSV)、人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV)、巨細(xì)胞病 毒（molluscum contagiosum virus,MCV)及水痘帶狀皰疫病毒（varicella-zostervirus, VZV)。此外，約半數(shù)的患者發(fā)生皮膚黏膜念珠菌感染；少數(shù)患者因感染或血管病變發(fā)生嚴(yán) 重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變，如偏癱、缺血性梗死等。此型HIES僅累及免疫系統(tǒng)，而不出現(xiàn)骨 骼、牙齒及結(jié)締組織病變。多數(shù)AR-HIES患者為胞質(zhì)分裂專一物8蛋白（dedicator of cytokinesis8protein，DOCKS)基因突變，AR-HIES患者中DOCKS缺失可引起T淋巴細(xì)胞和 Β淋巴細(xì)胞聯(lián)合免疫缺陷，從而導(dǎo)致患者對病毒感染的抵抗力大大減弱。
[0005] D0CK8(Dedicator of cytokinesis8)基因定位于 9ρ24· 3,信使 RNA(mRNA)有 3 種 異構(gòu)體，包括46-48個(gè)外顯子，超過250kb的基因序列，編碼1999-2099個(gè)氨基酸約239kDa 的D0CK8蛋白。D0CK8蛋白表達(dá)譜廣泛，主要表達(dá)在胎盤、腎、肺和胰腺，在免疫系統(tǒng)尤其是 淋巴細(xì)胞中高度表達(dá)。D0CK8屬于D0CK180家族成員，包括兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，DHR1和DHR2 (D0CK8 同源域1和2)。000(180家族由11個(gè)非典型鳥噪呤交換因子（guanine exchange factors， GEF)組成，它們可激活Rho-GTP酶包括RAC1、RAC2和CDC42。GTP酶調(diào)節(jié)很多細(xì)胞功能包括 肌動蛋白細(xì)胞骨架調(diào)控、細(xì)胞周期連續(xù)和基因表達(dá)。而D0CK8屬于D0CK180家族的D0CK-C 亞家族成員，可激活RAC和⑶C42,對細(xì)胞骨架構(gòu)成等功能至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn)，D0CK8蛋 白微量表達(dá)或不表達(dá)可導(dǎo)致高IgE綜合征，因此，對于D0CK8蛋白的檢測具有重要的臨床意 義。目前對于D0CK8基因的表達(dá)主要采用Western blotting、Northern blotting和免疫 組化等方法進(jìn)行鑒定。
[0006] 其中，Western blotting法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，經(jīng)過PAGE (聚丙烯酰 胺凝膠電泳）分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，與對應(yīng)的抗 體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢 測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該方法操作步驟繁復(fù)，導(dǎo)致誤差的因素較 多，耗時(shí)較長，重復(fù)性較差，且所用的很多實(shí)驗(yàn)用品對人體都有一定的傷害。
[0007] Northern blotting是從組織或細(xì)胞中提取總RNA，再經(jīng)過寡聚（dT)純化柱進(jìn)行 分離純化得到mRNA。然后RNA樣本經(jīng)過電泳依據(jù)分子量的大小對被分離，隨后凝膠上的RNA 分子被轉(zhuǎn)移到膜上。被標(biāo)記的探針與RNA探針雜交，經(jīng)過信號顯示后表明需檢測的基因的 表達(dá)。該方法所需樣本為RNA, RNA容易降解，所以northern blotting中所有的實(shí)驗(yàn)用品 都需要經(jīng)過除去RNA酶的過程，如高溫烘烤、DEPC處理等。同時(shí)，northern blotting中很 多實(shí)驗(yàn)用品如甲醛、EB、DEPC、紫外燈等對人體都有一定的傷害。
[0008] 免疫組化是組織或細(xì)胞標(biāo)本制備切片后利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過 化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗 原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及半定量的研究。該方法所需樣本為組織或細(xì)胞 標(biāo)本，取材困難，操作步驟繁復(fù)，導(dǎo)致誤差的因素較多，耗時(shí)較長，且重復(fù)性較差。
[0009] 由于Western blotting、Northern blotting和免疫組化等方法均存在一定的缺 陷，因此提供一種重復(fù)性好、樣品采集簡單、操作簡單、耗時(shí)短的D0CK8蛋白的檢測方法，具 有重要的現(xiàn)實(shí)意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 有鑒于此，本發(fā)明提供了檢測D0CK8蛋白的試劑盒及非診斷目的檢測D0CK8蛋白 的方法。該試劑盒可準(zhǔn)確檢測D0CK8蛋白；該檢測方法準(zhǔn)確可靠，操作簡單，重復(fù)性好，耗時(shí) 短，整個(gè)檢測過程只需5小時(shí)。
[0011] 為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
[0012] 本發(fā)明提供了一種檢測D0CK8蛋白的試劑盒，包括D0CK8抗體、熒光素標(biāo)記的第二 抗體、同型對照抗體。
[0013] 第一抗體就是能和非抗體性抗原（特異性抗原）特異性結(jié)合的蛋白。在本發(fā)明提 供的一些實(shí)施例中，第一抗體是D0CK8抗體。
[0014] 第二抗體是第一抗體的抗體，第二抗體能與第一抗體結(jié)合，第二抗體的主要作用 是檢測抗體的存在，放大一抗的信號。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，第二抗體為羊抗兔 IgG抗體。
[0015] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，羊抗兔IgG抗體為多克隆抗體。
[0016] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，同型對照抗體為兔源IgG單抗。同型對照抗體是 指使用與實(shí)驗(yàn)抗體（一抗）相同種屬來源、相同劑量及同種免疫球蛋白的相同亞型的抗體 作為對照。設(shè)置同型對照抗體的主要目的是確定一抗的結(jié)合是特異性的，而不是非特異性 的Fc受體或與其他蛋白的相互作用。其中，抗體非特異性結(jié)合主要包括：（1)抗體的Fc段 可以與細(xì)胞表面的Fc受體非特異性結(jié)合；（2)抗體進(jìn)入胞內(nèi)，不容易洗脫，造成非特異性染 色。
[0017] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，熒光素為藻紅蛋白。
[0018] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的試劑盒還包括抗凝劑。
[0019] 作為優(yōu)選，抗凝劑為肝素鋰。
[0020] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，試劑盒還包括含D0CK8蛋白的血液。
[0021] 本發(fā)明還提供了一種非診斷目的檢測D0CK8蛋白的方法，包括如下步驟：
[0022] 取待測血液樣本，經(jīng)預(yù)處理，與D0CK8抗體孵育，再與熒光素標(biāo)記的第二抗體孵 育，獲得待測血液樣本復(fù)合物；
[0023] 取待測血液樣本，經(jīng)預(yù)處理，與同型對照抗體孵育，再與熒光素標(biāo)記的第二抗體孵 育，獲得待測血液樣本的同型對照復(fù)合物；
[0024] 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測待測血液樣本復(fù)合物和待測血液樣本的同型對照復(fù)合物的 熒光強(qiáng)度，根據(jù)待測血液樣本復(fù)合物和待測血液樣本的同型對照復(fù)合物的熒光強(qiáng)度一致 性，判斷待測血液樣本中是否含有D0CK8蛋白；
[0025] 待測血液樣本復(fù)合物的熒光強(qiáng)度與待測血液樣本的同型對照復(fù)合物的熒光強(qiáng)度 一致，則待測血液樣本不含D0CK8蛋白；
[0026] 待測血液樣本復(fù)合物的熒光強(qiáng)度高于待測血液樣本的同型對照復(fù)合物的熒光強(qiáng) 度，則待測血液樣本含D0CK8蛋白。
[0027] 在本發(fā)明中，檢測D0CK8蛋白的原理為：
[0028] 待測血液樣本含有D0CK8蛋白時(shí)，先與D0CK8抗體（第一抗體）結(jié)合，再與熒光素 標(biāo)記的第二抗體結(jié)合，形成D0CK8蛋白-第一抗體-熒光素標(biāo)記第二抗體復(fù)合物；
[0029] 同時(shí)設(shè)置同型對照抗體消除非特異性結(jié)合背景。同型對照抗體是指使用與實(shí)驗(yàn)抗 體（一抗）相同種屬來源、相同劑量及同種免疫球蛋白的相同亞型的抗體作為對照。設(shè)置 同型對照抗體的主要目的是確定一抗的結(jié)合是特異性的，而不是非特異性的Fc受體或與 其他蛋白的相互作用。其中，抗體非特異性結(jié)合主要包括：（1)抗體的Fc段可以與細(xì)胞表 面的Fc受體非特異性結(jié)合；（2)抗體進(jìn)入胞內(nèi)，不容易洗脫，造成非特異性染色；
[0030] 采用流式細(xì)胞術(shù)對D0CK8蛋白-第一抗體-熒光素標(biāo)記第二抗體復(fù)合物進(jìn)行檢測 時(shí)，相對于同型對照復(fù)合物會產(chǎn)生熒光強(qiáng)度的增加，在流式細(xì)胞檢測圖中表現(xiàn)為D0CK8蛋 白-第一抗體-熒光素標(biāo)記第二抗體復(fù)合物的檢測峰與同型對照復(fù)合物的檢測峰不重疊， 即D0CK8蛋白-第一抗體-熒光素標(biāo)記第二抗體復(fù)合物的熒光強(qiáng)度會高于同型對照復(fù)合物 的熒光強(qiáng)度；
[0031] 待測血液樣本不含有D0CK8蛋白時(shí)，無法形成D0CK8蛋白的抗原抗體復(fù)合物，采用 流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測時(shí)，其熒光強(qiáng)度不增加，即不含D0CK8的血液樣本的熒光強(qiáng)度與同型 對照復(fù)合物的熒光強(qiáng)度一致。
[0032] 判斷待測血液樣本中是否含有D0CK8蛋白的原理如下：
[0033] 待測血液樣本與一抗特異性結(jié)合的淋巴細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度和待測血液樣本 的與同型對照抗體非特異性結(jié)合的淋巴細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度一致，則待測血液樣本不含 D0CK8蛋白；
[0034] 待測血液樣本與一抗特異性結(jié)合的淋巴細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度高于待測血液樣本 與同型對照抗體非特異性結(jié)合的淋巴細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度，則待測血液樣本含D0CK8蛋 白。
[0035] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，檢測D0CK8蛋白的方法還包括：取含D0CK8蛋白的 血液作為陽性對照，按照上述方法檢測熒光強(qiáng)度。
[0036] 取含D0CK8蛋白的血液作為陽性對照，按照上述方法進(jìn)行檢測具體為：
[0037] 取含D0CK8蛋白的血液，經(jīng)預(yù)處理，與D0CK8抗體孵育，再與熒光素標(biāo)記的第二抗 體孵育，獲得陽性對照復(fù)合物；
[0038] 取含D0CK8蛋白的血液，經(jīng)預(yù)處理，與同型對照抗體孵育，再與熒光素標(biāo)記的第二 抗體孵育，獲得含D0CK8蛋白的血液的同型對照復(fù)合物；
[0039] 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測陽性對照復(fù)合物和含D0CK8蛋白的血液的同型對照復(fù)合物 的熒光強(qiáng)度。
[0040] 設(shè)置含D0CK8蛋白的血液作為陽性對照的目的是對整個(gè)檢測過程進(jìn)行質(zhì)控。
[0041] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，預(yù)處理具體為：加入抗凝劑，分離外周血單個(gè)核細(xì) 胞，固定，打孔。
[0042] 作為優(yōu)選，孵育的時(shí)間為20?30min。
[0043] 作為優(yōu)選，孵育的溫度為15?30°C。
[0044] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，固定的時(shí)間為30?50min。
[0045] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，打孔的時(shí)間為15?20min。
[0046] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，第二抗體為羊抗兔IgG抗體。
[0047] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，同型對照抗體為兔源IgG單抗。
[0048] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，熒光素為藻紅蛋白（PE)。
[0049] 作為優(yōu)選，抗凝劑為肝素鋰。
[0050] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，試劑盒還包括含D0CK8蛋白的血液。
[0051] 本發(fā)明提供了檢測D0CK8蛋白的試劑盒及非診斷目的檢測D0CK8蛋白的方法。該 試劑盒包括D0CK8抗體、熒光素標(biāo)記的第二抗體、同型對照抗體。本發(fā)明提供的試劑盒可準(zhǔn) 確檢測D0CK8蛋白；本發(fā)明提供的檢測D0CK8蛋白的方法準(zhǔn)確可靠，操作簡單，重復(fù)性好，耗 時(shí)短，整個(gè)檢測過程只需5小時(shí)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0052] 圖1示實(shí)施例1中缺失D0CK8蛋白的血液樣本的細(xì)胞流式檢測結(jié)果；其中，線1示 同型對照的檢測峰，線2示缺失D0CK8蛋白的血液樣本的檢測峰；
[0053] 圖2示實(shí)施例2中表達(dá)D0CK8蛋白的血液樣本的細(xì)胞流式檢測結(jié)果；其中，線1示 同型對照的檢測峰，線2示表達(dá)D0CK8蛋白的血液樣本的檢測峰。

【具體實(shí)施方式】
[0054] 本發(fā)明公開了檢測D0CK8蛋白的試劑盒及非診斷目的檢測D0CK8蛋白的方法，本 領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似 的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明 的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精 神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技 術(shù)。
[0055] 本發(fā)明提供的檢測D0CK8蛋白的試劑盒及非診斷目的檢測D0CK8蛋白的方法中所 用抗體、試劑等均可由市場購得。固定劑和打孔劑均購自BD公司；anti-human D0CK8抗體 購自 abeam，貨號abl75208 ;同型對照抗體rabbit IgG isotype購自 abeam，貨號abl72730 ; PE標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗購自abeam,貨號ab97070。
[0056] 下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：
[0057] 實(shí)施例1 D0CK8蛋白的檢測
[0058] 采用Western Blot法篩選獲得缺失D0CK8蛋白的血液樣本。Western Blot法的 具體操作為：
[0059](一）蛋白樣品制備
[0060] 采集血液樣本，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，倒掉培養(yǎng)液，用預(yù)冷的PBS洗1?2次， 去盡殘液（冰上操作）。按lmL裂解液加10 μ L0. 1M PMSF、3 μ L Aprotining(抑肽酶）和 5 μ L0. 1M Na3V04，（正釩酸鈉）備用（PMSF要搖勻至無結(jié)晶時(shí)才可加入裂解液）。按照100 - 200 μ L裂解液/50cm2的比例加入培養(yǎng)瓶，于冰上裂解30min，為使細(xì)胞充分裂解培養(yǎng)瓶要 經(jīng)常來回?fù)u動或吹打。裂解完后，用移液器輕輕吹打洗滌，然后用槍將細(xì)胞碎片和裂解液移 至1. 5mL離心管中（整個(gè)操作盡量在冰上進(jìn)行）。于4°C下12000rpm離心15min(提前開 離心機(jī)預(yù)冷）。離心完后，取上清裝入新的EP管中，取一部分測濃度，-80°C保存。適量分 裝。獲得細(xì)胞總蛋白。
[0061] (二）蛋白含量的測定
[0062] 1、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0063] 從_20°C取出lmg/mL BSA，室溫融化后，備用。按以下濃度稀釋BSA(mg/mL):
[0064]

【權(quán)利要求】
1. 一種檢測D0CK8蛋白的試劑盒，其特征在于，包括D0CK8抗體、熒光素標(biāo)記的第二抗 體、同型對照抗體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述第二抗體為羊抗兔IgG抗體。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述同型對照抗體為兔源IgG單抗。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光素為藻紅蛋白。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括抗凝劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述抗凝劑為肝素鋰。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括含DOCKS蛋白的血 液。
8. -種非診斷目的檢測DOCKS蛋白的方法，其特征在于，包括如下步驟： 取待測血液樣本，經(jīng)預(yù)處理，與DOCKS抗體孵育，再與熒光素標(biāo)記的第二抗體孵育，獲 得待測血液樣本復(fù)合物； 取待測血液樣本，經(jīng)預(yù)處理，與同型對照抗體孵育，再與熒光素標(biāo)記的第二抗體孵育， 獲得待測血液樣本的同型對照復(fù)合物； 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測所述待測血液樣本復(fù)合物和所述待測血液樣本的同型對照復(fù)合 物的熒光強(qiáng)度，根據(jù)所述待測血液樣本復(fù)合物和所述待測血液樣本的同型對照復(fù)合物的熒 光強(qiáng)度一致性，判斷所述待測血液樣本中是否含有DOCKS蛋白； 所述待測血液樣本復(fù)合物的熒光強(qiáng)度與所述待測血液樣本的同型對照復(fù)合物的熒光 強(qiáng)度一致，則待測血液樣本不含DOCKS蛋白； 所述待測血液樣本復(fù)合物的熒光強(qiáng)度高于所述待測血液樣本的同型對照復(fù)合物的熒 光強(qiáng)度，則待測血液樣本含D0CK8蛋白。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：取含DOCKS蛋白的血液 作為陽性對照，按照權(quán)利要求8所述的方法檢測熒光強(qiáng)度。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述預(yù)處理具體為：加入抗凝劑，分離外 周血單個(gè)核細(xì)胞，固定，打孔。
11. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述孵育的時(shí)間為20?30min。
12. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述孵育的溫度為15?30°C。
13. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述固定的時(shí)間為30?50min。
14. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述打孔的時(shí)間為15?20min。
【文檔編號】G01N33/68GK104101715SQ201410336559
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月15日
【發(fā)明者】趙曉東, 秦濤 申請人:重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院