一種半定量微量尿白蛋白快速檢測裝置制造方法
【專利摘要】本實用新型專利公開了一種半定量微量尿白蛋白快速檢測裝置。其特征在于裝置由微量尿白蛋白(UmAlb)膠體金半定量檢測試紙筆(1)、配套比色卡(2)和采樣杯(3)構成。UmAlb膠體金半定量檢測試紙筆由外部的卡殼內部的試紙組成：試紙由含有膠體金標記人血清白蛋白抗體的膠體金墊、包被有人血清白蛋白和抗鼠IgG的NC膜、樣品墊、吸樣墊和塑料底板組成；卡殼內部裝載試紙，下部具有可以為細長型或一體型樣品窗口。采樣杯是可以接收尿液的塑料容器。配套比色卡是白色背景上印有4條不同深淺紅色線條的卡片，分別對應不同UmAlb濃度。檢測時用采樣杯采樣，結果和比色卡對比進行半定量判定。操作簡便、快速、經(jīng)濟實用，特別適合個人自測或臨床檢測。
【專利說明】一種半定量微量尿白蛋白快速檢測裝置
【技術領域】
[0001]本實用新型是涉及醫(yī)學臨床診斷【技術領域】，特別是涉及一種以免疫膠體金快速檢測技術制備的半定量微量尿白蛋白快速檢測裝置。
【背景技術】
[0002]微量尿白蛋白尿是指在尿中出現(xiàn)微量白蛋白。白蛋白是一種血液中的正常蛋白質，為含585個氨基酸殘基的單鏈多肽，分子量為66KD，在成人血清中的含量是40?55g /L，占總蛋白含量的一半左右。但在生理條件下尿液中僅出現(xiàn)極少量白蛋白。微量尿白蛋白是反映腎臟異常滲漏蛋白質。微量尿白蛋白的增高多見于糖尿病腎病、高血壓、妊娠子癇前期，是腎損傷的早期敏感指標。
[0003]當一名患者有高血壓或糖尿病或同時患有這兩種疾病(經(jīng)常同時發(fā)生)時，腎臟血管會發(fā)生病變，改變了腎臟濾過蛋白質(尤其是白蛋白)的功能，這使得蛋白質滲漏到尿中，為糖尿病腎病。微量白蛋白尿是糖尿病影響腎臟的早期征象。
[0004]2型糖尿病是一種常見病，近20年來發(fā)病率顯著升高，且發(fā)病年齡提前，目前全球20-79歲人群患病人數(shù)約1.5億，其中患病人數(shù)最多的前3位國家是:印度、中國、美國現(xiàn)有數(shù)據(jù)顯示2型糖尿病患者微量白蛋白尿的患病率30%-40%左右，為此，美國糖尿病學會推薦所有2型糖尿病患者在初診斷時及以后每年檢查微量白蛋白尿。
[0005]尿中白蛋白用來評估腎臟受損程度時，當發(fā)現(xiàn)尿白蛋白在20mg/L-200mg / L范圍內時，屬微量尿白蛋白，這個時候說明腎臟已經(jīng)損傷，如果患者能夠經(jīng)過規(guī)范的修復腎單位和逆轉纖維化治療，尚可徹底修復腎小球，消除蛋白尿。而當尿中微量白蛋白超過200mg /L時，尿常規(guī)測試尿蛋白陽性，此時證明機體已有大量白蛋白漏出，可能出現(xiàn)低蛋白血癥，腎病發(fā)展離不可逆期只有一步之遙，如果不及時進行醫(yī)治，就會進入尿毒癥期。
[0006]目前檢測尿微量白蛋白的方法主要生化法、免疫法。免疫法又包含免疫比濁法、ELISA法和膠體金法等。
[0007]免疫膠體金技術是一種新型的診斷技術，基本原理如下:利用膠體金標記一種抗原或抗體，在試劑的NC膜上包被相應的配對抗原或抗體，檢測時當樣品中含相應的特異性抗體或抗原時，膠體金標記顆粒和樣品中配體相結合形成復合物，然后在NC膜上層析，再被包被抗原或抗體捕獲，形成肉眼可見的檢測T線，在一定的條件下，T線的強弱和樣品中的濃度呈正相關或負相關，從而實現(xiàn)定量或半定量檢測。具有操作簡便、反應快速、敏感性高、特異性強、適合現(xiàn)場檢測和經(jīng)濟實用等優(yōu)點。
[0008]申請?zhí)朇N201210165074.1的專利公開了一種半定量檢測尿微量白蛋白的試紙條，該試紙是一種條型結構，采用了 3條T線的檢測方法；申請?zhí)朇N201210165074.1的專利公開了微量尿白蛋白膠體金定量檢測試劑盒，是一種卡型結構，但不包含比色卡和采樣杯，不能進行快速的半定量檢測，以上兩個專利和本申請專利的筆型結構并配套比色卡和采樣杯構成的檢測裝置明顯不同，另外本檢測提供了微量尿白蛋白檢測的全套裝置，不需要其它任何配件即能實現(xiàn)檢測，而以上兩個專利只提供了實現(xiàn)微量尿白蛋白檢測的部分部 件。

【發(fā)明內容】

[0009]本實用新型的目的是提供一種半定量微量尿白蛋白快速檢測裝置，具有半定量檢測能力，操作簡便、反應快速、敏感性高、特異性強、經(jīng)濟實用。檢測裝置不需要其它任何配件即能實現(xiàn)檢測，特別適合于個人的自測。具體內容如下:
[0010]一種半定量微量尿白蛋白快速檢測裝置，其特征在于裝置由微量尿白蛋白膠體金半定量檢測試紙筆(I)、配套比色卡(2)和采樣杯(3)構成；微量尿白蛋白膠體金半定量檢測試紙筆由外部的卡殼內部的試紙組成；采樣杯是可以裝載3-10ml尿液的塑料容器。配套比色卡是白色背景上印有系列不同深淺紅色線條的卡片，用于對檢測結果的對比判定，不同深淺的紅色線條共4條，分別對應0、20、50、200mg/L的微量尿白蛋白濃度。
[0011 ] 所述試紙由含有膠體金標記人血清白蛋白抗體的膠體金墊、包被有人血清白蛋白和抗鼠IgG的NC膜、樣品墊、吸樣墊和塑料底板組成；試紙的寬度為3-5_，總長度為6-9cm。樣品墊、膠體金墊、NC膜和吸樣墊從塑料底板的一端至另一端依次排列。樣品墊長度1.5-4.5cm ;膠體金墊長度為0.6-lcm ；NC膜長度1.8-2.5cm,吸樣墊長度為1.5-2.5cm。
[0012]所述卡殼是一種塑料注塑件，包含上蓋和下蓋兩個部分，卡殼內部可以裝載寬度為3_5mm,總長度為6_9cm的試紙；卡殼上蓋中間部分對應試紙NC膜設置了觀察視窗,用于觀察結果，卡殼下部應對試紙樣品墊設置了樣品窗口，用于加樣；樣品窗口外觀為細長型結構。
[0013]所述試紙的微量尿白蛋白抗體為鼠抗單克隆抗體，和人體其它正常蛋白沒有交叉反應。
[0014]所述試紙的NC膜抗體的包被過程為:以0.01MpH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)將人白蛋白(Alb)配制成l-3mg / ml的溶液,將抗鼠IgG配制成l_2mg / ml的溶液,用噴膜儀在NC膜上部和下部以1-1.5ul / cm的參數(shù)進行分別劃線，包被C、T線，劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30%，干燥3-5小時。
[0015]所述試紙的膠體金墊制備過程為:以氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為30-40nm的膠體金溶液，制備完成后取IOOml膠體金液放在燒杯內，用0.2M K2CO3調至PH8.0,按IOOml膠體金溶液加入0.5-lmg的Alb抗體，室溫攪拌2小時，加入終濃度為0.5%牛血清白蛋白，0.5%聚乙二醇20000封閉20min，12000r / m離心30分鐘，棄上清，用膠體金工作液復溶至75ml，按Iml溶液鋪20cm2的比例均勻地鋪在玻璃纖維膜或無紡布上，再置干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30%，干燥3-5小時，制成膠體金墊。
[0016]所述試紙卡的裝配過程為:在干燥室內，溫度20_25°C，濕度小于40%，取塑料底板，將已包被的NC膜放置在塑料底板的中部粘貼，將膠體金墊裁切成合適的寬度，在NC膜T線一側搭接膠體金墊，搭膠體金墊的l_2mm粘貼，在膠體金墊另一側搭接粘貼上樣墊，搭膠體金墊的2-3mm粘貼；在NC膜C線一側搭接吸樣墊，搭吸樣墊的l_2mm粘貼；最后用裁剪機將貼好的塑料板切成3-5_寬的試紙條，總長度為6-9cm。樣品墊、膠體金墊、NC膜和吸樣墊從左至右依次排列。樣品墊長度1.5-4.5cm ;膠體金墊長度為0.6-lcm ;吸樣墊長度為
1.5-2.5cm。將試紙再裝入細長型或一體型塑料卡殼內，形成試劑試紙筆。
[0017]將試紙筆、配套比色卡和采樣杯組合，加上外包裝，即形成微量尿白蛋白快速檢測>J-U ρ?α裝直。
[0018]所述檢測裝置，檢測方法為:1)將檢測試劑及樣本平衡至室溫，取出試紙筆2)
[0019]細長型的試紙筆，可在排尿時直接將尿淋在試紙筆的樣品窗口。也可以和一體型的試紙筆一樣，用采樣杯收集尿液，然后取100-150ul尿液加入紙筆的樣品窗口。3)將試紙筆平放，計時，5-10分鐘內用比色卡半定量判定結果:將試紙卡T線的顏色和比色卡上標準線的顏色深淺進行對比，半定量判定樣品的濃度區(qū)間。
[0020]本實用新型的有益效果是:提供一種利用免疫膠體金技術制備的UmAlb快速測裝置，特別適合個人自測或單人份檢測。具有操作簡便、反應快速、敏感性高、特異性強、適合現(xiàn)場檢測和經(jīng)濟實用等優(yōu)點。
【專利附圖】

【附圖說明】:
[0021 ] 圖1是半定量UmAlb快速檢測裝置結構圖
[0022]附圖符號說明:
[0023]1、試紙筆；2、比色卡；3、采樣杯
【具體實施方式】
[0024]實施例:半定量UmAlb快速檢測裝置制備及檢測
[0025]I主要材料
[0026]1.1Alb特異性抗體、Al`b抗原:從有資質的供應商處購買；鼠抗人IgG抗體:自制；氯金酸:Sigma公司產(chǎn)品；硝酸纖維素(NC)膜:Millipore公司產(chǎn)品；牛血清白蛋白(BSA),聚乙二醇PEG20000，水解酪蛋白=Sigma產(chǎn)品。其它常用試劑均為分析純試劑。
[0027]1.2臨床樣本由公司在相關醫(yī)院獲得，100份，UmAlb含量分布區(qū)間為0_500mg / L之間。
[0028]1.3卡殼、比色卡:由本公司設計，相關公司按要求生產(chǎn)、提供。
[0029]2 方法
[0030]2.1UmAlb抗體膠體金標記氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為30_40nm的膠體金溶液，制備完成后取三份膠體金，分別用0.2M K2CO3將溶液調到pH7.5、pH8.0和pH8.5。然后將溶液置于磁力攪拌器上緩慢攪拌，按每100ml溶液加入0.8mg、lmg、l.5mg將標記用UmAlb抗體緩慢滴加到膠體金溶液中，繼續(xù)攪拌2小時，再加入到終濃度為0.5%的PEG2000和0.5%的BSA進行封閉20min，標記結束后以12000r / m離心，棄上清，沉淀按50%原體積復溶至不同配比的膠體金工作液中(PH8.0，含BSA，羊血清，蔗糖和表面活性劑)。然后將標記膠體金溶液按Iml溶液鋪20cm2的比例加樣于無紡布上，在溫度20_25°C，相對濕度在〈30%的干燥間干燥3-5小時，制成膠體金墊。
[0031]2.2NC 膜包被用 0.01M pH7.4PBS 將 Alb 稀釋成 Img / ml、2mg / ml、3mg / ml，鼠抗人IgG分別稀釋成Img / ml、2mg / ml,然后用噴膜儀在NC膜上按1.2ul / cm進行分別劃線包被，包被完成后將NC膜在在溫度20-25 °C，相對濕度在〈30 %的干燥間干燥2_5小時。
[0032]2.3試紙卡組裝在干燥室內，溫度20_25°C，濕度小于40%，取塑料底板，將已包被的NC膜放置在塑料底板的中部粘貼，將膠體金墊裁切成合適的寬度，在NC膜T線一側搭接膠體金墊，搭膠體金墊的1_2_粘貼，在膠體金墊另一側搭接粘貼上樣墊，搭膠體金墊的2-3mm粘貼；在NC膜C線一側搭接吸樣墊，搭吸樣墊的l_2mm粘貼；最后用裁剪機將貼好的塑料板切成3-5_寬的試紙條，總長度為6-9cm。樣品墊、膠體金墊、NC膜和吸樣墊從左至右依次排列。樣品墊長度1.5-4.5cm ;膠體金墊長度為0.6-lcm ;吸樣墊長度為1.5-2.5cm。將試紙再裝入細長型或一體型塑料卡殼內，形成試劑試紙筆。
[0033]2.4將試紙筆、配套比色卡和采樣杯組合，加上外包裝，即形成微量尿白蛋白快速檢測裝置。
[0034]2.5試紙工藝參數(shù)調試將濃度不同標記、包被的試劑進行組合配對，制備小樣，利用UmAlb標準品對試劑進行測試，尋找最佳組合。
[0035]2.6檢測方法I)將檢測試劑及樣本平衡至室溫，取出試紙筆2)取100_150ul尿液加入紙筆的樣品窗口。3)將試紙筆平放，計時，5、10、15、20分鐘內用比色卡半定量判定結果:將試紙卡T線的顏色和比色卡上標準線的顏色深淺進行對比，半定量判定樣品的濃度區(qū)間。
[0036]2.7臨床樣本檢測試劑制備完成后，按檢測方法對所有臨床樣本進行檢測，并分析檢測結果。
[0037]3 結果
[0038]3.1試紙參數(shù)確定根據(jù)小樣的檢測結果，確定了試紙的最佳標記pH值為8.0 ；Alb抗體最佳標記量為Img / 100ml膠體金溶液；最佳的膠體金工作液為20mM硼酸鹽緩沖液，口!18.0，含0.5%854、10%羊血清，5%蔗糖，0.2%了￥661120;最佳包4113濃度為211^ / ml。檢測結果的最佳判定時間為5-10分鐘。但以上參數(shù)在制備不同批次產(chǎn)品時可能需要適當調整。
[0039]3.2臨床樣本檢測對100份臨床定值樣本檢測，區(qū)間判定結果和樣本值的符合率為95%，一致性系數(shù)KappaX).85。檢測結果表明制備的檢測裝置性能良好，適合用于個人自測或臨床檢測。
【權利要求】
1.一種半定量微量尿白蛋白快速檢測裝置，其特征在于裝置由微量尿白蛋白膠體金半定量檢測試紙筆(I)、配套比色卡(2)和采樣杯(3)構成，微量尿白蛋白膠體金半定量檢測試紙筆由外部的卡殼內部的試紙組成；采樣杯是可以裝載3-10ml尿液的塑料容器；配套比色卡是白色背景上印有系列不同深淺紅色線條的卡片，用于對檢測結果的對比判定，不同深淺的紅色線條共4條，分別對應O、20、50、200mg/L的微量尿白蛋白濃度。
2.根據(jù)權利要求1所述的檢測裝置，其特征在于試紙由含有膠體金標記人血清白蛋白抗體的膠體金墊、包被有人血清白蛋白和抗鼠IgG的NC膜、樣品墊、吸樣墊和塑料底板組成；試紙的寬度為3-5_，總長度為6-9cm ;樣品墊、膠體金墊、NC膜和吸樣墊從塑料底板的一端至另一端依次排列。樣品墊長度1.5-4.5cm ;膠體金墊長度為0.6-lcm ;NC膜長度1.8-2.5cm,吸樣塾長度為 1.5-2.5cm。
3.根據(jù)權利要求1所述的檢測裝置，其特征在于卡殼是一種塑料注塑件，包含上蓋和下蓋兩個部分，卡殼內部可以裝載寬度為3-5_，總長度為6-9cm的試紙；卡殼上蓋中間部分對應試紙NC膜設置了觀察視窗，用于觀察結果，卡殼下部應對試紙樣品墊設置了樣品窗口，用于加樣；樣品窗口外觀為細長型結構。
4.根據(jù)權利要求1和2所述的檢測裝置，其特征在于所述檢測裝置的微量尿白蛋白抗體為鼠抗單克隆抗體，和人體其它正常蛋白沒有交叉反應。
【文檔編號】G01N33/68GK203432976SQ201320487209
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年8月7日 優(yōu)先權日:2013年8月7日
【發(fā)明者】李洲, 楊發(fā)青, 周鴻銳 申請人:天津中新科炬生物制藥有限公司