多種腫瘤標(biāo)志物快速定量聯(lián)合檢測(cè)裝置制造方法
【專利摘要】一種檢測(cè)多種腫瘤標(biāo)志物快速定量聯(lián)合檢測(cè)裝置，其特征在于裝置由3-8種相互獨(dú)立的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試紙如AFP、CEA、PSA、CA125、CA153、CA199、CA242、NSE，3-8聯(lián)專用卡殼和內(nèi)置了相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線和判定方法的免疫層結(jié)果析判讀記錄儀組成。這些試紙可以根據(jù)特定的需要組合成3聯(lián)、4聯(lián)或至8聯(lián)的檢測(cè)裝置。免疫層析結(jié)果判讀記錄儀內(nèi)置了對(duì)8種試紙的標(biāo)準(zhǔn)曲線和判定方法，用于對(duì)檢測(cè)結(jié)果的定量判定，并且對(duì)判定方法能對(duì)不同的檢測(cè)結(jié)果的組合進(jìn)行各種腫瘤發(fā)生情況的預(yù)測(cè)。檢測(cè)時(shí)在15-20分鐘內(nèi)完成。具有聯(lián)合檢測(cè)、操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、結(jié)果準(zhǔn)確、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，適合臨床對(duì)更為準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便檢測(cè)的需要。
【專利說明】多種腫瘤標(biāo)志物快速定量聯(lián)合檢測(cè)裝置
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明專利是涉及醫(yī)學(xué)臨床診斷【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種以免疫膠體金快速檢測(cè)方法制備的多種腫瘤標(biāo)志物快速定量聯(lián)合檢測(cè)裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生和釋放的某種物質(zhì)，常以抗原、酶、激素等代謝產(chǎn)物的形式存在于腫瘤細(xì)胞內(nèi)或宿主體液中，根據(jù)其生化或免疫特性可以識(shí)別或診斷腫瘤。腫瘤標(biāo)記物在臨床上主要用于對(duì)原發(fā)腫瘤的發(fā)現(xiàn)、腫瘤高危人群的篩選、良性和惡性腫瘤的鑒別診斷、腫瘤發(fā)展程度的判斷腫瘤治療效果的觀察和評(píng)價(jià)以及腫瘤復(fù)發(fā)和預(yù)后的預(yù)測(cè)等。
[0003]目前常見的腫瘤標(biāo)志物有:
[0004]1、甲胎蛋白
[0005]I)原發(fā)肝癌。AFP可早于影像學(xué)6-12月出現(xiàn)異常，為肝癌的早期診斷提供重要依據(jù)，建議肝硬化患者定期復(fù)查AFP。
[0006]2)病毒性肝炎、肝硬化絕大部分AFP〈400ng / ml。
[0007]3)內(nèi)胚層癌、畸胎瘤、睪丸癌、卵巢癌、胃癌等伴肝轉(zhuǎn)移者AFP可升高。
[0008]4)婦女妊娠3個(gè)月后，AFP開始升高，7-8個(gè)月時(shí)達(dá)高峰，一般在400ng / ml以下，分娩后3周恢復(fù)正常。妊娠期AFP異常升高，要排除胎兒神經(jīng)管缺損、畸形可能。
[0009]2、癌胚抗原
[0010]DCEA升高主要見于結(jié)/直腸癌、胃癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宮及子宮頸癌、泌尿系腫瘤等，其他惡性腫瘤也有不同程度的陽性率。
[0011]2)肝硬化、肝炎、肺氣腫、腸道憩室、直腸息肉、結(jié)腸炎等良性病CEA可升高。
[0012]3)癌癥越晚期，CEA越高，陽性率越高；腺癌敏感，其次是鱗癌和低分化癌，分化程度越高陽性率越高。
[0013]4)正常人吸煙者CEA升高。
[0014]5)癌癥病人的胸、腹水、消化液、分泌物中的CEA常升高。
[0015]3、前列腺特異抗原
[0016]PSA是目前廣泛應(yīng)用于前列腺癌的腫瘤標(biāo)志物。
[0017]I)前列腺癌血清PSA升高，陽性率在50% -80%。
[0018]2)前列腺增生、前列腺炎、腎臟和泌尿生殖系統(tǒng)的疾病也可見血清PSA升高；良性前列腺增生血清中游離PSA的比例是顯著增高的。
[0019]3) PSA水平隨年齡的增加而增加，一般以每年0.04ug/L的速度遞增。
[0020]4)PSA水平與前列腺的體積有關(guān)，但兩者并不具有相關(guān)性。
[0021]5)有關(guān)前列腺損傷的各種檢查均可引起PSA的明顯升高。
[0022]4、糖類抗原125
[0023]I)卵巢癌血清CA125升高，陽性率61.4%;治療有效04125下降；復(fù)發(fā)0八125升高先于癥狀；CA125是判斷療效和復(fù)發(fā)的良好指標(biāo)。[0024]2)其他非卵巢惡性腫瘤也有一定的陽性率:如宮頸癌、宮體癌、子宮內(nèi)膜癌43%，胰腺癌50%，肺癌41%，胃癌47%，結(jié)/直腸癌34%，乳腺癌40%。
[0025]3)其他非惡性腫瘤，也有不同程度的升高，但陽性率較低:如子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔炎、卵巢囊腫、胰腺炎、肝炎、肝硬化等。
[0026]4)在許多良性和惡性胸、腹水中發(fā)現(xiàn)CA125升高。
[0027]5)早期妊娠，也有CA125升高。
[0028]5、糖類抗原153
[0029]I)乳腺癌患者CA153升高，乳腺癌初期的敏感性60%，乳腺癌晚期的敏感性80%。
[0030]2)其他惡性腫瘤也有一定的陽性率:如:肺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、原發(fā)性肝癌等。
[0031]3)肝臟、胃腸道、肺、乳腺、卵巢等非惡性腫瘤性疾病，陽性率一般〈10%。
[0032]6、糖類抗原199
[0033]I)胰腺癌、膽囊癌、膽管壺腹癌，CA199明顯升高，尤其胰腺癌晚期的陽性率可達(dá)75%，是重要的輔助診斷指標(biāo)，但早期診斷價(jià)值不大。
[0034]2)胃癌的陽性率50 %，結(jié)/直腸癌的陽性率60 %，肝癌的陽性率65 %。
[0035]3)其他惡性腫瘤也有一定的陽性率:如:乳腺癌、卵巢癌、肺癌等。
[0036]4)某些消化道炎癥CA19-9也有不同程度的升高，如:急性胰腺炎、膽囊炎、膽汁淤積性膽管炎、肝炎、肝硬化等。
[0037]7、糖類抗原 CA242
[0038]CA242是一種唾液酸化的鞘糖脂類抗原，幾乎總是和CA50 —起表達(dá)，但兩者受不同的單克隆抗體識(shí)別。在臨床上均被用于消化道惡性腫瘤尤其是胰腺癌、結(jié)直腸癌的診斷，與CA19-9、CA50相比，新一代的CA242在胰腺癌、膽囊癌和消化道癌中的靈敏度、特異性更高(CA50、CA19-9易受肝功能以及膽汁郁積的影響，在良性阻塞性黃疸以及肝實(shí)質(zhì)性損害記疾病時(shí)常出現(xiàn)假陽性)。[3]主要相關(guān)腫瘤:胰腺癌、胃、結(jié)腸癌。
[0039]其它相關(guān)腫瘤:肝癌、食管癌、肺癌。
[0040]其他影響因素:良性胃腸疾病如胰腺癌、肝炎、肝硬化患者會(huì)有所升高。
[0041]8、神經(jīng)元特異性烯醇化酶NSE
[0042]主要相關(guān)腫瘤:小細(xì)胞肺癌。
[0043]其它相關(guān)腫瘤:肺腺癌、大細(xì)胞肺癌、神經(jīng)系統(tǒng)癌。
[0044]腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)目前已普遍應(yīng)用于臨床。然而由于單個(gè)腫瘤標(biāo)志物的靈敏度和特異性都不是太高，所以需要聯(lián)合檢測(cè)或結(jié)合臨床其它指標(biāo)進(jìn)行判定，才能具有更為明確的意義。對(duì)于檢測(cè)一些組織器官的腫瘤，臨床上一般推薦以下的聯(lián)合檢測(cè)方法:
[0045]肝:AFP+CEA
[0046]結(jié)、直腸、膽道:CEA+CA199
[0047]胰:CEA+CA199+CA242
[0048]胃:CEA+CA199+CA724
[0049]食道:CEA+SCC
[0050]肺:NSE+CYFRA21-1+CEA+CA125
[0051]乳腺:CA153+CEA+CA125[0052]卵巢:CA125+P -HCG+CEA
[0053]宮頸:CEA+CA724+SCC+
[0054]子宮:CEA+P -HCG+SCC
[0055]腎:CEA+P2-MG
[0056]前列腺:FPSA+TPSA+PAP
[0057]目前臨床上在進(jìn)行腫瘤檢測(cè)時(shí)往往檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)。這些指標(biāo)常用ELISA、化學(xué)發(fā)光、熒光等方法進(jìn)行單獨(dú)檢測(cè)，再綜合判定。目前還沒有運(yùn)用膠體金方法聯(lián)合定量檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)的試劑出現(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0058]本發(fā)明目的是提供一種多種腫瘤標(biāo)志物快速定量聯(lián)合檢測(cè)裝置，用來檢測(cè)血清、血漿和全血樣本中的3-8種常見腫瘤標(biāo)志物。具有操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、結(jié)果準(zhǔn)確、可信、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。
【發(fā)明內(nèi)容】
如下:
[0059]一種多種腫瘤標(biāo)志物快速定量聯(lián)合檢測(cè)裝置，其特征在于裝置由3-8種相互獨(dú)立的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試紙如AFP、CEA、PSA、CA125、CA153、CA199、CA242、NSE, 3-8聯(lián)專用卡殼和內(nèi)置了相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線和判定方法的免疫層析結(jié)果判讀記錄儀組成。這些試紙可以根據(jù)特定的需要組合成3聯(lián)、4聯(lián)或至8聯(lián)的檢測(cè)裝置。
[0060]所述的檢測(cè)裝置，其特征在于每種腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試劑試紙由含有膠體金標(biāo)記抗體的膠體金墊、包被有配對(duì)抗體(T線)和抗鼠IgG(C線)的NC膜、樣品墊、吸樣墊和塑料底板組成。每個(gè)試紙的寬度為3-5mm，長度為7-8cm。樣品墊、膠體金墊、NC膜和吸樣墊從塑料底板一端依次排列至另一端。
[0061]所述的檢測(cè)裝置，其特征在于專用卡殼包含上蓋和下蓋兩個(gè)部分，內(nèi)部可平行放置3-8條檢測(cè)試紙，卡殼可根據(jù)需要設(shè)計(jì)成3聯(lián)、4聯(lián)或至8聯(lián)?？ど仙w的下部對(duì)應(yīng)樣品墊部分設(shè)置了樣品孔和稀釋液孔，用于加入樣本和稀釋液，卡殼上蓋的中間部分應(yīng)對(duì)試紙NC膜中部設(shè)置了視窗口，用于觀察NC膜上的C、T線，判定結(jié)果。
[0062]所述的檢測(cè)裝置，其特征在于所述NC膜是一種由硝酸纖維素構(gòu)成的多孔結(jié)構(gòu)的膜，孔徑為8-12um。稀釋液墊為玻璃纖維膜或無紡布，吸樣墊為吸水濾紙。
[0063]所述的檢測(cè)裝置，其特征在于每種腫瘤標(biāo)志物試紙單獨(dú)制備，包被有配對(duì)抗體的NC膜制備過程為:以合適鹽緩沖液將單個(gè)的腫瘤標(biāo)志物抗體配制成合適的濃度，在噴膜儀在NC膜上以1.0-1.5ul / cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時(shí)在NC膜上部包被2mg / ml的抗鼠IgG作為C線，干燥備用。膠體金墊的制備過程為:取IOOml膠體金液放在燒杯內(nèi)，用0.2M K2C03調(diào)至合適的pH值，再加入適量的配對(duì)標(biāo)記用單個(gè)腫瘤標(biāo)志物抗體，室溫?cái)嚢?0min,封閉，12000rpm離心30分鐘,棄上清,用工作液復(fù)溶至40ml,然后用噴金機(jī)分別均勻地噴涂在膠體金墊上，干燥備用。
[0064]所述的檢測(cè)裝置，其特征在檢測(cè)卡裝配方法為:在相對(duì)濕度小于40%的條件下，取塑料底板，將已包被NC膜粘貼在底板的中部，在NC膜T線一側(cè)粘貼膠體金墊，在膠體金墊另一側(cè)粘貼樣品墊；在NC膜C線一側(cè)粘貼吸樣墊；各粘貼組分接口相互疊壓l_2mm，粘貼好的大板切成3-5_寬的試紙條。然后將3-8種試紙條按特定的順序分別放置于卡殼下蓋的槽中，然后蓋上上蓋，壓緊，完成裝配。[0065]所述的檢測(cè)裝置，其特征在于免疫層析結(jié)果判讀記錄儀是一種光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)，內(nèi)置了對(duì)8種試紙的標(biāo)準(zhǔn)曲線和判定方法，用于對(duì)檢測(cè)結(jié)果的定量判定，并且對(duì)判定方法能對(duì)不同的檢測(cè)結(jié)果的組合進(jìn)行各種腫瘤發(fā)生情況的預(yù)測(cè)。
[0066]所述的檢測(cè)裝置，其特征在于檢測(cè)方法為各個(gè)單個(gè)試紙的檢測(cè)方法相同:檢測(cè)時(shí)將10-20ul的被檢樣本如血清、血漿、全血加入到樣本孔中，然后在稀釋液孔中加入IOOul樣品稀釋液，在15-20分鐘內(nèi)，用免疫層析結(jié)果判讀記錄儀對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判定。
[0067]本發(fā)明的有益效果是:提供一種多種腫瘤標(biāo)志物快速定量聯(lián)合檢測(cè)裝置，用來檢測(cè)血清、血漿和全血樣本中的3-8種常見腫瘤標(biāo)志物，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合判定。具有操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、結(jié)果準(zhǔn)確、可信、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。
【專利附圖】

【附圖說明】:
[0068]圖1是檢測(cè)試紙結(jié)構(gòu)圖
[0069]圖2是3聯(lián)專用卡殼結(jié)構(gòu)圖
【具體實(shí)施方式】
[0070]實(shí)施例:AFP / CEA / PSA三種腫瘤標(biāo)志物快速定量聯(lián)合檢測(cè)裝置制備
[0071]I主要材料
[0072]1.1生物原料AFP、CEA和PSA配對(duì)抗體，從相關(guān)公司購買；鼠抗人IgG抗體，羊抗鼠IgG:自制；氯金酸:Sigma公司產(chǎn)品；NC膜:美國Millipore公司產(chǎn)品；水解酪蛋白，聚乙二醇PEG20000 =Sigma產(chǎn)品。其它常用試劑均為分析純?cè)噭?br> [0073]1.2臨床樣本由公司在相關(guān)醫(yī)院獲得，共120份，其中確診為各類腫瘤的病人血清樣本60份，AFP檢測(cè)值從200-1000ng / mL, CEA檢測(cè)值從20_200ng / mL。PSA檢測(cè)值從10-60ng / mL，正常人血清樣本60份，檢測(cè)值均低于相應(yīng)的參考值。
[0074]1.3三聯(lián)卡殼:由本公司設(shè)計(jì)，相關(guān)公司按要求生產(chǎn)、提供。
[0075]1.4免疫層析結(jié)果結(jié)判讀記錄儀:型號(hào):NS3001，天津中新科炬生物制藥有限公司
女口
廣叩o
[0076]2 方法
[0077]2.1抗體膠體金標(biāo)記采用氯金酸-檸檬酸三鈉法制備直徑為40±5nm的膠體金溶液，取膠體金溶液，分別用0.2M K2CO3將溶液調(diào)到pH7.5，然后將膠體金緩慢攪拌，按每ml溶液加入5ug將AFP標(biāo)記抗體加入到溶液中，繼續(xù)攪拌30分鐘，再加入到終濃度為0.5%的PEG2000和0.5%的水解酪蛋白進(jìn)行封閉，標(biāo)記結(jié)束后以12000g離心，棄上清，沉淀按60%原體積復(fù)溶至不同配比的膠體金工作液中(PH8.0，含水解酪蛋白，羊血清，蔗糖和表面活性劑)。然后將標(biāo)記膠體金溶液用噴膜機(jī)噴在膠體金墊上，在溫度20-25 °C，相對(duì)濕度在〈30 %的干燥間干燥3-4小時(shí)，制成膠體金墊。CEA和PSA抗體標(biāo)記方法和AFP —致，只是加入的抗體為分別為CEA和PSA抗體。
[0078]2.2NC膜包被用0.0lM pH7.4PBS將配對(duì)的FABP抗體配制成1.0mg / mL,羊抗鼠IgG分別稀釋成2mg / ml，然后用噴膜儀在NC膜上按1.2ul / cm進(jìn)行分別劃線包被，包被完成后將NC膜在在溫度20-25°C，相對(duì)濕度在〈30%的干燥間干燥3_5小時(shí)。CEA和PSA抗體包被方法和AFP —致，只是配制的為CEA和PSA抗體。[0079]2.3在相對(duì)濕度小于40%的條件下，取塑料底板，將已包被NC膜粘貼在底板的中部，在NC膜T線一側(cè)粘貼膠體金墊，在膠體金墊另一側(cè)粘貼樣品墊；在NC膜C線一側(cè)粘貼吸樣墊；各粘貼組分接口相互疊壓l_2mm，粘貼好的大板切成3-5mm寬的試紙條。然后將三種試紙條分別放置于卡殼下蓋的槽中，然后蓋上上蓋，壓緊，完成裝配。
[0080]2.4內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線曲線和參數(shù)設(shè)置確定好試紙工藝參數(shù)后，分別用0，20，50、100、250，500ng / mL的AFP標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)試劑進(jìn)行測(cè)定，不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品顯示出不同強(qiáng)度色帶，用免疫層析判讀記錄儀將相應(yīng)強(qiáng)度的色帶數(shù)字化后，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線，并輸入免疫層析結(jié)果判讀記錄儀中，完成AFP標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)設(shè)置；分別用0,5,10,20、50、100、200ng / mL的CEA標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)試劑進(jìn)行測(cè)定，用免疫層析判讀記錄儀將相應(yīng)強(qiáng)度的色帶數(shù)字化后，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線，并輸入免疫層析結(jié)果判讀記錄儀中，完成CEA標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)設(shè)置；類似的方法完成PSA標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)設(shè)置。將AFP的Cutoff值設(shè)為20ng / mL，CEA的Cutoff值設(shè)為5ng /mL，PSA的Cutoff值設(shè)為4ng / mL。對(duì)于同一樣本，弱3項(xiàng)檢測(cè)均為陰性，對(duì)腫瘤的判定結(jié)果為陰性，I項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)為陽性，對(duì)腫瘤的判定結(jié)果為可疑，若2及以上項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)為陽性，對(duì)腫瘤的判定結(jié)果為陽性，完成結(jié)果判定參數(shù)設(shè)置，并輸入免疫層析結(jié)果判讀記錄儀中。
[0081]2.5檢測(cè)方法I)將檢測(cè)試劑及樣本平衡至室溫，取出試紙卡，平放；2)分別精確吸取10 u I血清、血漿或20ul全血樣本，加入到3個(gè)樣本孔中，立即分別在下部的稀釋液孔中加入100 u L樣本稀釋液(0.0lM PBS)，15-20分鐘內(nèi)用免疫層析結(jié)果判讀記錄定量判定結(jié)果；3)設(shè)置好儀器相關(guān)參數(shù)后將試紙卡放入倉內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，儀器將顯示分別出AFP、CEA、PSA樣品濃度的定量測(cè)定結(jié)果；以及對(duì)腫瘤的綜合測(cè)試結(jié)果。
[0082]2.7臨床樣本檢測(cè)試劑制備完成后，按檢測(cè)方法對(duì)所有臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)，并分析檢測(cè)結(jié)果。
[0083]3 結(jié)果
[0084]臨床樣本檢測(cè)對(duì)120份臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)，兩種檢測(cè)均為陽性的為30例，均為陰性的為57例，和臨床相比，陽性、陰性預(yù)期值均為100%。另外33例為可疑結(jié)果。綜合結(jié)果的一致率為72.5%。，和單個(gè)陽性檢測(cè)相比，綜合判定的結(jié)果準(zhǔn)確性更高。和定值的量進(jìn)行定量分析，相關(guān)系數(shù)r均大于0.95，不一致的檢測(cè)離群值〈3%，t檢驗(yàn)P>0.05,定量檢測(cè)效果較好。通過以上結(jié)果可以判定檢測(cè)裝置的性能良好，具有操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、結(jié)果準(zhǔn)確、可信、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，特別其良好的綜合陽性、陰性預(yù)期值適合臨床對(duì)更為準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便檢測(cè)的需要。
【權(quán)利要求】
1.一種多種腫瘤標(biāo)志物快速定量聯(lián)合檢測(cè)裝置，其特征在于裝置由3-8種相互獨(dú)立的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試紙如AFP、CEA、PSA、CA125、CA153、CA199、CA242、NSE, 3-8聯(lián)專用卡殼和內(nèi)置了相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線和判定方法的免疫層析結(jié)果判讀記錄儀組成。這些試紙可以根據(jù)特定的需要組合成3聯(lián)、4聯(lián)或至8聯(lián)的檢測(cè)裝置。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)裝置，其特征在于每種腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試劑試紙由含有膠體金標(biāo)記抗體的膠體金墊、包被有配對(duì)抗體(T線)和抗鼠IgG(C線)的NC膜、樣品墊、吸樣墊和塑料底板組成。每個(gè)試紙的寬度為3-5_，長度為7-8cm。樣品墊、膠體金墊、NC膜和吸樣墊從塑料底板一端依次排列至另一端。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)裝置，其特征在于專用卡殼包含上蓋和下蓋兩個(gè)部分，內(nèi)部可平行放置3-8條檢測(cè)試紙，卡殼可根據(jù)需要設(shè)計(jì)成3聯(lián)、4聯(lián)或至8聯(lián)?？ど仙w的下部對(duì)應(yīng)樣品墊部分設(shè)置了樣品孔和稀釋液孔，用于加入樣本和稀釋液，卡殼上蓋的中間部分應(yīng)對(duì)試紙NC膜中部設(shè)置了視窗口，用于觀察NC膜上的C、T線，判定結(jié)果。
4.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的檢測(cè)裝置，其特征在于所述NC膜是一種由硝酸纖維素構(gòu)成的多孔結(jié)構(gòu)的膜，孔徑為8-12um。稀釋液墊為玻璃纖維膜或無紡布，吸樣墊為吸水濾紙。
5.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的檢測(cè)裝置，其特征在于每種腫瘤標(biāo)志物試紙單獨(dú)制備，包被有配對(duì)抗體的NC膜制備過程為:以合適鹽緩沖液將單個(gè)的腫瘤標(biāo)志物抗體配制成合適的濃度，在噴膜儀在NC膜上以1.0-1.5ul / cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時(shí)在NC膜上部包被2mg / ml的抗鼠IgG作為C線，干燥備用。膠體金墊的制備過程為:取IOOml膠體金液放在燒杯內(nèi)，用0.2M K2C03調(diào)至合適的pH值，再加入適量的配對(duì)標(biāo)記用單個(gè)腫瘤標(biāo)志物抗體，室溫?cái)嚢?0min，封閉，12000rpm離心30分鐘，棄上清，用工作液復(fù)溶至40ml，然后用噴金機(jī)分別均勻地噴涂在膠體金墊上，干燥備用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)裝置，其特征在檢測(cè)卡裝配方法為:在相對(duì)濕度小于40%的條件下，取塑料底板，將已包被NC膜粘貼在底板的中部，在NC膜T線一側(cè)粘貼膠體金墊，在膠體金墊另一側(cè)粘貼樣品墊；在NC膜C線一側(cè)粘貼吸樣墊；各粘貼組分接口相互疊壓1-2_，粘貼好的大板切成3-5_寬的試紙條。然后將3-8種試紙條按特定的順序分別放置于卡殼下蓋的槽中，然后蓋上上蓋，壓緊，完成裝配。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)裝置，其特征在于免疫層析結(jié)果判讀記錄儀是一種光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)，內(nèi)置了對(duì)8種試紙的標(biāo)準(zhǔn)曲線和判定方法，用于對(duì)檢測(cè)結(jié)果的定量判定，并且對(duì)判定方法能對(duì)不同的檢測(cè)結(jié)果的組合進(jìn)行各種腫瘤發(fā)生情況的預(yù)測(cè)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)裝置，其特征在于檢測(cè)方法為各個(gè)單個(gè)試紙的檢測(cè)方法相同:檢測(cè)時(shí)將10-20ul的被檢樣本如血清、血漿、全血加入到樣本孔中，然后在稀釋液孔中加入IOOul樣品稀釋液，在15-20分鐘內(nèi)，用免疫層析結(jié)果判讀記錄儀對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判定。
【文檔編號(hào)】G01N33/574GK103529207SQ201310524463
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月17日
【發(fā)明者】李洲, 楊發(fā)青, 許俊艷 申請(qǐng)人:天津中新科炬生物制藥有限公司