一種疏枝刺柳珊瑚激光拉曼光譜的建立方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種疏枝刺柳珊瑚激光拉曼光譜的建立方法。一種疏枝刺柳珊瑚激光拉曼光譜的建立方法，包括如下步驟：(a)試樣的制備：取疏枝刺柳珊瑚樣品切成條塊狀顆粒后，裝入樣品瓶進(jìn)行速凍。已速凍樣品經(jīng)過(guò)真空冷凍干燥機(jī)后，再碾磨成粉末，然后用篩網(wǎng)過(guò)濾，得到粉末狀疏枝刺柳珊瑚樣品；(b)采用聚焦的激光束將含有微粒狀疏枝刺柳珊瑚的緩沖液囚禁在焦點(diǎn)，同時(shí)用來(lái)激發(fā)被囚禁疏枝刺柳珊瑚的拉曼散射，獲得測(cè)試樣品的拉曼光譜圖；本發(fā)明與現(xiàn)有的疏枝刺柳珊瑚分析鑒定技術(shù)相比，該鑒定方法屬純粹的光學(xué)方法，需要樣品量少，測(cè)試時(shí)間短，測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確，測(cè)試過(guò)程對(duì)樣品無(wú)損，不產(chǎn)生化學(xué)污染物，所建立的激光拉曼圖譜能快速有效地鑒定疏枝刺柳珊瑚樣品，為其深入研究提供有效的定性鑒定標(biāo)準(zhǔn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種疏枝刺柳珊瑚激光拉曼光譜的建立方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于柳珊瑚鑒定領(lǐng)域，具體地說(shuō)設(shè)計(jì)到一種利用激光拉曼光譜對(duì)疏枝刺柳珊瑚進(jìn)行定性鑒別的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]拉曼光譜法是通過(guò)用激發(fā)光照射目標(biāo)物，收集其內(nèi)部分子對(duì)激發(fā)光的散射光譜進(jìn)行分析，可以獲得分子振動(dòng)、轉(zhuǎn)動(dòng)方面信息，并應(yīng)用于判斷目標(biāo)物內(nèi)分子結(jié)構(gòu)及含量的一種方法。光鑷是利用高匯聚的激光束囚禁目標(biāo)物，以達(dá)到在溶液中將其固定的效果。結(jié)合光鑷技術(shù)的激光鑷子拉曼光譜稱(chēng)為激光鑷子拉曼光譜(LTRS)，其使目標(biāo)物更接近其自然生理狀況，降低了目標(biāo)物運(yùn)動(dòng)時(shí)產(chǎn)生的不確定性，減少了雜光的干擾，提高了信噪比。近年來(lái)，拉曼光譜技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于生物領(lǐng)域，如疾病判斷，微生物鑒定，細(xì)胞成像等多個(gè)方面。
[0003]柳珊瑚(Gorgonian)屬于腔腸動(dòng)物門(mén)珊瑚蟲(chóng)綱八放珊瑚亞綱軟珊瑚目，是硬軸珊瑚、全軸珊瑚和鈣軸珊瑚等三種亞目的統(tǒng)稱(chēng)。柳珊瑚個(gè)體由中軸支撐，外形多以扇形、分枝形、鞭形等為主，全世界約有1200種。柳珊瑚的研究涉及到分類(lèi)學(xué)、化學(xué)、生態(tài)學(xué)等多個(gè)方面。然而，柳珊瑚的拉曼 光譜特征一直未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本發(fā)明采用激光拉曼光譜方法對(duì)疏枝刺柳珊瑚進(jìn)行定性檢測(cè)，方法簡(jiǎn)便，分析速度快。目前，尚未發(fā)現(xiàn)柳珊瑚相關(guān)的激光拉曼研究報(bào)導(dǎo)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的在于提供一種操作簡(jiǎn)便，可迅速定性鑒定疏枝刺柳珊瑚的激光拉曼檢測(cè)方法。本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0005](I)試樣制備:疏枝刺柳珊瑚樣品切成條塊狀顆粒后，裝入樣品瓶進(jìn)行速凍，終點(diǎn)溫度約-10-100 °c。轉(zhuǎn)移已速凍樣品到真空冷凍干燥機(jī)的干燥室中，真空度為
0.01-0.1MPa，干燥時(shí)間為12-48h。干燥好的疏枝刺柳珊瑚樣品用瑪瑙研缽碾磨成粉末后，再用100-400目濾網(wǎng)過(guò)濾，得到粉末狀疏枝刺柳珊瑚樣品。
[0006](2)光譜條件:儀器激光功率lO-lOOmW，掃描時(shí)間5_20s。將一束波長(zhǎng)為500-1500nm激光經(jīng)過(guò)濾波后導(dǎo)入一臺(tái)倒置生物顯微鏡。激光束經(jīng)油浸物鏡(孔徑為
1.00-3.00，放大倍數(shù)為50-300倍)聚焦后在焦點(diǎn)附近形成了一個(gè)單光束光勢(shì)阱。樣品池由下底密封了 20-200 μ m的石英蓋玻片和上邊密封了蓋玻片的玻璃板構(gòu)成，玻璃板中心有一個(gè)直徑為1-1Omm的孔。
[0007](3)光譜測(cè)定:含有疏枝刺柳珊瑚樣品微粒的緩沖液里放置在玻璃板中心孔中，被聚焦的激光束產(chǎn)生的輻射壓力囚禁在焦點(diǎn)附近，同時(shí)這束激光也用來(lái)激發(fā)被囚禁疏枝刺柳珊瑚樣品的拉曼散射。在測(cè)定疏枝刺柳珊瑚樣品前用懸浮在水中的直徑約1-10 μ m的聚苯乙烯球狀顆粒進(jìn)行校正。
[0008](4)特征光譜:將實(shí)際掃描結(jié)果與理論計(jì)算結(jié)果對(duì)比，校對(duì)，指認(rèn)激光拉曼圖譜中各個(gè)光譜峰的振動(dòng)原理，確定疏枝刺柳珊瑚的主要特征峰范圍為1000-1050cm-1、1100-1200cm_\l450-1550cm_1o
[0009]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):采用本發(fā)明激光拉曼光譜對(duì)疏枝刺柳珊瑚進(jìn)行定性檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便，可快速準(zhǔn)確定性分析，可用于大規(guī)模樣品的快速檢測(cè)。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1疏枝刺柳珊瑚的激光拉曼光譜。
【具體實(shí)施方式】
[0011]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明并不僅僅局限于下述實(shí)施。
[0012]疏枝刺柳珊瑚樣品0.1Og切成條塊狀顆粒后，裝入樣品瓶進(jìn)行速凍，終點(diǎn)溫度約-80°c。轉(zhuǎn)移已速凍樣品到真空冷凍干燥機(jī)的干燥室中，真空度為0.08MPa，干燥時(shí)間為36h。干燥好的柳珊瑚樣品用瑪瑙研缽碾磨成粉末后，再用100目濾網(wǎng)過(guò)濾，得到疏枝刺柳珊瑚粉末狀樣品。 [0013]將一束波長(zhǎng)為780nm激光經(jīng)過(guò)濾波后導(dǎo)入一臺(tái)尼康倒置生物顯微鏡(TE2000U，Nikon)。激光束經(jīng)油浸物鏡(孔徑為1.30，放大倍數(shù)為100倍)聚焦后在焦點(diǎn)附近形成了一個(gè)單光束光勢(shì)講。樣品池由下底密封了 100 μ m的石英蓋玻片和上邊密封了 I號(hào)蓋玻片的玻璃板構(gòu)成，玻璃板中心有一個(gè)直徑為6mm的孔。含有疏枝刺柳珊瑚樣品微粒的緩沖液里放置在玻璃板中心孔中，被聚焦的激光束產(chǎn)生的輻射壓力囚禁在焦點(diǎn)附近，同時(shí)這束激光也用來(lái)激發(fā)被囚禁疏枝刺柳珊瑚樣品的拉曼散射。在測(cè)定疏枝刺柳珊瑚樣品前用懸浮在水中的直徑約2 μ m的聚苯乙烯球狀顆粒進(jìn)行校正。
[0014]疏枝刺柳珊瑚樣品的激光拉曼光譜在1006、llll、1501cm-l譜帶峰突出。其中，1006cm^峰代表-CH3水平搖擺振動(dòng)模式，llllcnT1峰代表C-C伸縮振動(dòng)模式，150Icm^1峰代表C = C伸縮振動(dòng)模式。
[0015]以上較佳實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容，除此之外，本發(fā)明還有其他實(shí)施方式，但凡本領(lǐng)域技術(shù)人員因本發(fā)明所涉及之技術(shù)啟示，而采用等同替換或等效變形方式形成的技術(shù)方案均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種疏枝刺柳珊瑚激光拉曼圖譜的建立方法，其特征在于采用激光拉曼光譜法，具體包括如下步驟: (a)試樣制備:疏枝刺柳珊瑚樣品切成條塊狀顆粒后，裝入樣品瓶進(jìn)行速凍，終點(diǎn)溫度約-10-100°C。轉(zhuǎn)移已速凍樣品到真空冷凍干燥機(jī)的干燥室中，真空度為0.01-0.1MPa，干燥時(shí)間為12-48h。干燥好的疏枝刺柳珊瑚樣品用瑪瑙研缽碾磨成粉末后，再用100-400目濾網(wǎng)過(guò)濾，得到粉末狀疏枝刺柳珊瑚樣品。 (b)光譜條件:將一束波長(zhǎng)為500-1500nm激光經(jīng)過(guò)濾波后導(dǎo)入一臺(tái)倒置生物顯微鏡。激光束經(jīng)油浸物鏡(孔徑為1.00-3.00，放大倍數(shù)為50-300倍)聚焦后在焦點(diǎn)附近形成了一個(gè)單光束光勢(shì)阱。樣品池由下底密封了 20-200 μ m的石英蓋玻片和上邊密封了蓋玻片的玻璃板構(gòu)成，玻璃板中心有一個(gè)直徑為1-1Omm的孔。 (c)光譜測(cè)定:含有疏枝刺柳珊瑚樣品微粒的緩沖液里放置在玻璃板中心孔中，被聚焦的激光束產(chǎn)生的輻射壓力囚禁在焦點(diǎn)附近，同時(shí)這束激光也用來(lái)激發(fā)被囚禁疏枝刺柳珊瑚樣品的拉曼散射。在測(cè)定疏枝刺柳珊瑚樣品前用懸浮在水中的直徑約1-10 μ m的聚苯乙烯球狀顆粒進(jìn)行校正。 (d)特征光譜:將實(shí)際掃描結(jié)果與理論計(jì)算結(jié)果對(duì)比，校對(duì)，指認(rèn)激光拉曼圖譜中各個(gè)光譜峰的振動(dòng)原理，確定疏枝刺柳珊瑚的主要特征峰范圍為1000-1050οCM-1、1100-1200cm_\l450-1550cm_1o
【文檔編號(hào)】G01N1/42GK104020149SQ201310224796
【公開(kāi)日】2014年9月3日 申請(qǐng)日期:2013年6月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月7日
【發(fā)明者】高程海, 何碧娟, 陳波, 張榮燦, 柯珂, 雷富, 王一兵 申請(qǐng)人:廣西科學(xué)院