一種藥物組合物的檢測(cè)及質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種藥物組合物的檢測(cè)及質(zhì)量控制方法，所述的藥物組合物為含有貫葉金絲桃的組合物，利用液相色譜法對(duì)金絲桃苷、蘆丁、紫丁香苷的含量檢測(cè)，所用液相色譜測(cè)定條件為：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為NaH2PO4緩沖液，流動(dòng)相B為乙腈與甲醇的混合溶液，采用梯度洗脫。該方法具有快速、高效、穩(wěn)定、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，能夠快速、有效的對(duì)藥物其組合物進(jìn)行質(zhì)量控制。
【專利說(shuō)明】一種藥物組合物的檢測(cè)及質(zhì)量控制方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物的質(zhì)量控制，具體涉及一種藥物組合物的檢測(cè)及質(zhì)量控制方法。

【背景技術(shù)】
[0002]抑郁癥已迅速成為全球疾病中給人類造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān)的第二位重要疾病，對(duì)患者及其家屬造成的痛苦和對(duì)社會(huì)造成的損失是其他疾病所無(wú)法比擬的。因此，社會(huì)對(duì)抑郁癥治療的藥物需求是巨大的。相對(duì)于西醫(yī)使用特定作用靶點(diǎn)藥物治療來(lái)講，中醫(yī)使用活性物質(zhì)群，能夠作用于多靶點(diǎn)，呈現(xiàn)多效性，而調(diào)整是其主要作用機(jī)制，顯示出傳統(tǒng)醫(yī)藥的獨(dú)特性。舒肝解郁膠囊是國(guó)內(nèi)首個(gè)SFDA批準(zhǔn)的用于治療抑郁的中成藥，由貫葉金絲桃、刺五加兩味中藥組成。主要的功效為健脾安神，適用于輕、中度單相抑郁癥屬肝郁脾虛證者，癥見(jiàn)情緒低落、興趣下降、遲滯、入睡困難、早醒、多夢(mèng)、緊張不安、急躁易怒、食少納呆、胸悶、疲乏無(wú)力、多汗、疼痛、舌苔白或膩，脈弦或細(xì)。
[0003]舒肝解郁膠囊由貫葉金絲桃、刺五加兩味中藥組成。其中貫葉金絲桃已經(jīng)有2400年的使用歷史，近年來(lái)對(duì)貫葉金絲桃的研究熱點(diǎn)放在抗抑郁功效方面。貫葉金絲桃經(jīng)醇提取后獲得的主要成分為6類:萘并二蒽酮類(naphtho1-anthrones)、間苯三酌.類(phloroglucinols)、黃麗類(flavonoids)、雙黃麗類(biflavones)、苯丙烯酸類(phenylpropanes)、原花青素(proanthocyanidins)。另外，還有少量的單寧酸、氧雜蒽酮、揮發(fā)油和氨基酸等。其中黃酮類成分在貫葉金絲桃中含量高達(dá)
9.25%，有研究報(bào)道稱其為有效的抗抑郁成分，已經(jīng)被確認(rèn)的黃酮苷類主要包括山柰酌'(kaempferol)、木犀草素(luteolin)、楊梅素(myricetin)、槲皮素(quercetin)、金絲桃苷(hyperoside, hyperin)、蘆丁(rutin)、槲皮苷(quercitrin)、異槲皮苷(isoquercitrin)、miquelianin (quercetin-3-0-glucuronide,懈皮素-3-0-葡萄糖醒酸苷)、astilbin (taxifolin-3-O-rhamnopyranoside,紫杉葉素-3-0-鼠李糖苷)[A review of the antibacterial activity of Hypericum perforatumL, Journal ofEthnopharmacology, ZebSaddiqe, 2010, 131:511 - 521]。刺五加始見(jiàn)于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其性溫，味辛、苦，歸肝、腎經(jīng)，具有祛風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、通淤血、利水腫、鎮(zhèn)痛解熱等功效。文獻(xiàn)報(bào)道其主要的包含刺五加皂苷、黃酮類、多糖類、三萜皂苷類、木脂素和咖啡酰奎寧酸類等多種化學(xué)成分，其中紫丁香苷是其的主要活性成分，具有抗疲勞、免疫調(diào)節(jié)等多種生理作用。金絲桃苷和蘆丁作為貫葉金絲桃中較為重要的兩種黃酮類化合物，常被用于做為該藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)。例如，《中國(guó)藥典》2010年版中以金絲桃苷和蘆丁為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用薄層色譜法對(duì)貫葉金絲桃進(jìn)行質(zhì)量鑒別，《歐洲藥典》7.0版和《英國(guó)藥典》2009版中，均選取蘆丁、金絲桃苷和金絲桃素作為質(zhì)量控制的指標(biāo)，對(duì)貫葉金絲桃進(jìn)行薄層色譜鑒別?！吨袊?guó)藥典》2010版中以紫丁香苷含量測(cè)定，對(duì)刺五加藥材及其浸膏進(jìn)行質(zhì)量控制。
[0004]在中藥質(zhì)量控制方法中，色譜法是在中藥材提取物的研究中應(yīng)用時(shí)間最長(zhǎng)，范圍最廣，應(yīng)用技術(shù)最有成就的一種技術(shù)，它可以很好地反映化學(xué)組成及含量情況，主要包括高效液相色譜(HPLC)法、薄層色譜(TLC)法、薄層掃描技術(shù)和氣相色譜(GC)法等，已成為中藥質(zhì)量控制的最主要方法，HPLC的分離效能高、檢測(cè)手段多、分析速度快等特點(diǎn)，使其越來(lái)越多地應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制當(dāng)中。
[0005]然而，由于貫葉金絲桃和刺五加二種中藥材的提取物中均含有大量的藥物活性物質(zhì)，其中貫葉金絲桃的主要活性物質(zhì)金絲桃苷、蘆丁、異槲皮苷母核結(jié)構(gòu)相同、性質(zhì)相似，要利用HPLC方法準(zhǔn)確將目標(biāo)物質(zhì)同其他雜質(zhì)有效分離并且定量分析存在較大難度，因此，建立一種簡(jiǎn)單、有效、靈敏度高的高效液相色譜檢測(cè)方法，對(duì)于舒肝解郁膠囊的質(zhì)量控制來(lái)說(shuō)具有十分重要的意義。
[0006]目前，利用高效液相色譜法對(duì)含有貫葉金絲桃和刺五加的藥物組合物(如舒肝解郁膠囊)的藥品質(zhì)量控制方法未見(jiàn)報(bào)道，雖然對(duì)于高效液相色譜法單獨(dú)定量檢測(cè)貫葉金絲桃中的金絲桃苷和/或蘆丁或紫丁香苷有一定的報(bào)道，例如范之楓等報(bào)道了用高效液相色譜方法檢測(cè)新疆貫葉金絲桃不同部位中金絲桃苷、蘆丁的含量[范之楓，新疆貫葉金絲桃不同部位中金絲桃苷、蘆丁和金絲桃素的含量及提取工藝對(duì)它們的影響，新疆中醫(yī)藥，2005，23，4:4-6]，然而 申請(qǐng)人:通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該方法用于舒肝解郁膠囊的檢測(cè)時(shí)雖然分離時(shí)間較短，但其出峰時(shí)間過(guò)早，分離度差，主要物質(zhì)峰中包含大量雜質(zhì)，同樣難以舒肝解郁膠囊中對(duì)金絲桃苷和蘆丁進(jìn)行有效定量。
[0007]此外， 申請(qǐng)人:通過(guò)對(duì)其余中藥材(非貫葉金絲桃)中金絲桃苷和蘆丁含量的高效液相色譜方法[1_17]，進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)其方法僅在檢測(cè)一種藥材提取物中金絲桃苷和蘆丁含量時(shí)就存在如下問(wèn)題:
[0008]I)方法的分析時(shí)間長(zhǎng)，一般在40min?60min,參見(jiàn)文獻(xiàn)[4,7-9]；
[0009]2)分離度達(dá)不到要求(分離度一般要求1.5以上)，目標(biāo)峰中可見(jiàn)雜峰存在，參見(jiàn)文獻(xiàn)[1-2，4-6，8-10，13，15-17]；
[0010]3)基線波動(dòng)大，波長(zhǎng)選擇不合理，背景干擾嚴(yán)重，參見(jiàn)文獻(xiàn)[2，4，6，8-9，13-17]；
[0011]4)各種分析方法的耐用性都沒(méi)有進(jìn)行初步的考察，參見(jiàn)文獻(xiàn)[1-17]。
[0012]參考文獻(xiàn):
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0031]為了更好控制藥物組合物質(zhì)量，提供一種快速、準(zhǔn)確的藥物質(zhì)量控制方法，本發(fā)明提供了如下方法。
[0032]本發(fā)明提供一種藥物組合物的檢測(cè)方法,采用液相色譜法對(duì)藥物組合物中的金絲桃苷和蘆丁進(jìn)行含量測(cè)定，其中所述液相色譜測(cè)定條件為:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為NaH2PO4緩沖液，流動(dòng)相B為乙腈與甲醇的混合溶液，采用梯度洗脫；其中所述藥物組合物為含有貫葉金絲桃的藥物組合物。
[0033]本發(fā)明提供的藥物組合物的檢測(cè)方法，其所述的梯度洗脫條件為:
[0034]

【權(quán)利要求】
1.一種藥物組合物的檢測(cè)方法，其特征在于采用液相色譜法對(duì)藥物組合物中的金絲桃苷和蘆丁進(jìn)行含量測(cè)定，其中所述液相色譜測(cè)定條件為:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為NaH2PO4緩沖液，流動(dòng)相B為乙腈與甲醇的混合溶液，采用梯度洗脫；其中所述藥物組合物為含有貫葉金絲桃的藥物組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述梯度洗脫條件為:
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述流動(dòng)相A的pH值為2.0-6.0,優(yōu)選為3.0 ;流動(dòng)相B中乙腈與甲醇的比例為9:1 ;供試品溶液的制備方法為取適量供試品，用乙醇/水混合溶液溶解，超聲提取，過(guò)濾后即得；優(yōu)選為取適量供試品，用25-75%乙醇/水混合溶液溶解，超聲提取10-90min，過(guò)濾后即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述液相色譜條件中，柱溫為15-40°C，優(yōu)選為 35°C ;流速為 0.5-1.5ml/min，優(yōu)選為 0.8ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)為 254_360nm，優(yōu)選為360nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)方法，其特征在于包含以下步驟: 1)對(duì)照品溶液的制備 取蘆丁對(duì)照品、金絲桃苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含蘆丁 0.07mg、金絲桃苷.0.03mg的溶液； 2)供試品溶液的制備 取藥物組合物適量，用50%乙醇/水混合溶液溶解，超聲，過(guò)濾，取濾液，即得，其中所述藥物組合物為舒肝解郁膠囊內(nèi)容物； 3)含量檢測(cè) 對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μ I注入液相色譜柱,進(jìn)行含量測(cè)定； 其中色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為NaH2PO4緩沖液，pH值為3.0,流動(dòng)相B為乙腈:甲醇為9:1的混合溶液；柱溫:35°C，流速:0.8ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，所述梯度洗脫條件為:

6.一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于包含權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的藥物組合物中金絲桃苷和蘆丁的含量檢測(cè)方法，所述藥物組合物為含有貫葉金絲桃的藥物組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物中金絲桃苷的含量不低于5mg/g,蘆丁的含量不低于8mg/g,所述藥物組合物為舒肝解郁膠囊內(nèi)容物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物中紫丁香苷的含量不低于1.25mg/g。
9.根據(jù)權(quán)利要求8中所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述紫丁香苷的檢測(cè)的液相色譜條件為:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，采用梯度洗脫，所述梯度洗脫條件優(yōu)選為:
柱溫優(yōu)選為20-40°C，更優(yōu)選為35°C ;流速優(yōu)選為0.5-1.5ml/min，更優(yōu)選為1.0ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)214-338nm,優(yōu)選為265nm,所述供試品溶液的制備方法為取舒肝解郁膠囊內(nèi)容物適量，使用甲醇溶液溶解，超聲提取，過(guò)濾即得。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述紫丁香苷的含量檢測(cè)方法包含以下步驟: 1)對(duì)照品溶液的制備 取紫丁香苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液； 2)供試品溶液的制備 取舒肝解郁膠囊內(nèi)容物適量，加甲醇溶解，超聲、過(guò)濾，取濾液即得； 3)含量檢測(cè) 取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 μ 1，注入液相色譜儀測(cè)定，其中液相檢測(cè)條件:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，采用梯度洗脫，柱溫3(TC，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為265mn，梯度洗脫條件為:
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104076099SQ201310108369
【公開(kāi)日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2013年3月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月29日
【發(fā)明者】柯瀟, 鄔智剛, 喬懷耀 申請(qǐng)人:成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司