專利名稱：一類羅丹明熒光染料，其制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー類熒光探針化合物及其制備方法和用途，該化合物適用于精細(xì)化工領(lǐng)域中pH的檢測(cè)。
背景技術(shù)：
溶酶體是細(xì)胞內(nèi)的ー種非常重要的亞細(xì)胞器，其內(nèi)包含能夠分解廢棄材料和細(xì)胞碎片的酸性水解酶，他們能夠消化過量的或磨損的細(xì)胞器、食物粒子，并且能夠吞沒病毒或細(xì)菌，因此溶酶體被喻為細(xì)胞的胃部。細(xì)胞內(nèi)的pH是ー個(gè)非常重要的生理參數(shù)。細(xì)胞內(nèi)質(zhì)子的濃度并不是均一分布的，如細(xì)胞質(zhì)的PH大約在7. 2左右，線粒體則更偏堿性ー些，而溶酶體的pH為4. 5-5. 5。溶 酶體內(nèi)的酸度與細(xì)胞的很多生物功能密切相關(guān)，如水解酶的最佳活性，細(xì)胞自噬，細(xì)胞凋亡等。因此，檢測(cè)溶酶體內(nèi)的PH具有重要意義。熒光探針具有非侵入性、易操作、能夠?qū)崿F(xiàn)可視化檢測(cè)等特點(diǎn)，受到普遍的重視。目前許多溶酶體的定位染料都包含一條弱堿性鏈，可以使探針向酸性的溶酶體細(xì)胞器聚集。弱堿性的定位基團(tuán)通常包含N，N-甲基或嗎啉，而含氮的官能團(tuán)往往容易對(duì)熒光團(tuán)產(chǎn)生光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移(PET)作用，使突光團(tuán)的突光淬滅或降低，如Invitrogen公司設(shè)計(jì)的LysoSensor系列探針(LysoSensor Yellow/Blue DND-160除外)在中性或喊性條件下熒光信號(hào)微弱，而在PH較小的溶酶體環(huán)境中，PET作用被抑制，熒光增強(qiáng)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)溶酶體內(nèi)PH的檢測(cè)。但是此類探針的缺點(diǎn)是背景熒光較強(qiáng)，導(dǎo)致非特異性定位。除此之夕卜，含氮定位基團(tuán)的PET作用也限制了探針在溶酶體中對(duì)于其他被檢測(cè)物的測(cè)定，如H2O2(Dayoung Song, Jung Mi Lim, Somin Cho, Su-Jin ParK, Jaeheung Cno, Dongmin Kang, SueGoo Rhee, Youngmin You, and Wonwoo Nam, Chem. Commun. , 2012, 48, 5449-5451 ) 因此開發(fā)ー種不依賴于含氮的溶酶體定位基團(tuán)具有重要意義。羅丹明類熒光染料具有優(yōu)異的光化學(xué)物理性質(zhì)，例如高的摩爾小光系數(shù)、良好的光穩(wěn)定性、高的熒光量子產(chǎn)率等優(yōu)點(diǎn)。其特有的螺環(huán)“開-關(guān)”結(jié)構(gòu)，對(duì)質(zhì)子敏感，可用于對(duì)PH的檢測(cè)，而且可以解決通常pH探針背景熒光較高的弊端。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類帶有新型溶酶體定位基團(tuán)的pH探針的合成及應(yīng)用。本發(fā)明首先公開ー類羅丹明熒光染料，具有如下結(jié)構(gòu)通式I :.盤
權(quán)利要求
1.一類羅丹明熒光染料，具有如下結(jié)構(gòu)通式I:
2.權(quán)利要求I所述的羅丹明熒光染料，其特征在于所述的Rltl為H或2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基。
3.權(quán)利要求2所述的熒光染料，其特征在于所述的Rltl是2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基。
4.權(quán)利要求f3中任一權(quán)利要求所述的羅丹明熒光染料，其特征在于所述的Rp R2, R3和R4各自獨(dú)立地選自氫或乙基；R5、R6和R7各自獨(dú)立地選自氫或甲基。
5.權(quán)利要求4所述的羅丹明熒光染料，其特征在于所述的RpR2, R3和R4均為乙基。
6.權(quán)利要求5所述的羅丹明熒光染料，其特征在于所述的R5、R6和R7均為H。
7.權(quán)利要求I所述的羅丹明熒光染料的制備方法，是首先使用式II的化合物與通式為ClCOCH2R11的酰氯反應(yīng)，然后以四氫呋喃為反應(yīng)溶劑、在堿存在條件下與通式為HO-R12的醇按照摩爾比1:1飛反應(yīng)所得；
8.權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于所述的堿是氫化納。
9.權(quán)利要求I所述的羅丹明熒光染料在溶酶體熒光特異性標(biāo)記中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求I所述的羅丹明熒光染料在監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用。
全文摘要
一類羅丹明熒光染料，其制備方法及應(yīng)用。所述的羅丹明熒光染料具有如下結(jié)構(gòu)通式I。本發(fā)明所述的羅丹明類熒光染料具有優(yōu)異的光化學(xué)物理性質(zhì)，高的摩爾小光系數(shù)、良好的光穩(wěn)定性、高的熒光量子產(chǎn)率等優(yōu)點(diǎn)。其特有的螺環(huán)“開-關(guān)”結(jié)構(gòu)，對(duì)質(zhì)子敏感，可用于對(duì)pH的檢測(cè)，而且可以解決通常pH探針背景熒光較高的弊端?？捎糜谌苊阁w熒光特異性標(biāo)記及監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)G01N1/30GK102796395SQ20121029451
公開日2012年11月28日 申請(qǐng)日期2012年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月17日
發(fā)明者樊江莉, 朱浩, 彭孝軍, 徐群利 申請(qǐng)人:大連理工大學(xué)