專(zhuān)利名稱(chēng)：六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液及其制備方法和應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于中藥成分分析領(lǐng)域，具體地涉及一種針對(duì)商品化的六味地黃丸質(zhì)量的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
眾所周知，在中成藥檢驗(yàn)中經(jīng)常需要使用大量對(duì)照品，對(duì)照品價(jià)格高，數(shù)量有限， 已經(jīng)成為制約對(duì)照品檢驗(yàn)方法廣泛應(yīng)用的重要因素，同時(shí)也是企業(yè)生產(chǎn)、檢驗(yàn)成本提高，導(dǎo)致商品藥價(jià)過(guò)高的因素之一。
另外，藥典中對(duì)于中藥成分含量的測(cè)定項(xiàng)規(guī)定同時(shí)測(cè)定2個(gè)或多個(gè)組分含量的中成藥，在實(shí)驗(yàn)操作上需要分別配制相應(yīng)的2個(gè)或多個(gè)對(duì)照品溶液，然后分別進(jìn)行檢測(cè)，因此，操作復(fù)雜，不僅試驗(yàn)用對(duì)照品用量大，而且實(shí)驗(yàn)后剩余的對(duì)照品溶液棄用，都造成巨大的浪費(fèi)。
以經(jīng)典藥物六味地黃丸為例，六味地黃丸的主要成分為5-羥甲基糠醛、莫諾苷、 馬錢(qián)苷、芍藥苷和丹皮酚，按照傳統(tǒng)的藥品檢測(cè)方法，需要分別配置5種成分的對(duì)照品溶液，然后分別制備供試品溶液，再按不同的檢測(cè)條件進(jìn)行檢測(cè)，操作步驟繁瑣，檢驗(yàn)周期長(zhǎng)， 不利于快速高效地進(jìn)行檢驗(yàn)，同時(shí)5-羥甲基糠醛、莫諾苷、馬錢(qián)苷、芍藥苷和丹皮酚的對(duì)照品價(jià)格高，尤其是莫諾苷對(duì)照品供應(yīng)量極其有限，每20mg莫諾苷價(jià)格在2000元以上，造成檢驗(yàn)成本過(guò)高，目前中藥檢驗(yàn)領(lǐng)域的技術(shù)發(fā)展趨勢(shì)是快速、高效，多組分含量同時(shí)測(cè)定。所以急需探索一種使用成本低的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并且對(duì)中成藥中多個(gè)組分的含量同時(shí)進(jìn)行測(cè)定的簡(jiǎn)便方法。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)目前檢驗(yàn)技術(shù)中存在的不足，提供新的中成藥檢驗(yàn)對(duì)照物——六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液，應(yīng)用按本發(fā)明中方法制備的六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液，測(cè)定商品六味地黃丸中的5-羥甲基糠醛、莫諾苷、馬錢(qián)苷、芍藥苷和丹皮酚含量。 本發(fā)明不僅操作簡(jiǎn)便，檢驗(yàn)速度塊，而且降低了檢測(cè)成本，準(zhǔn)確度高。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案是六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液，其組成為每毫升提取液中含有16. 71 66. 82ug 5-羥甲基糠醛、30. 56 122. 22ug莫諾苷、19. 52 78. 06ug馬錢(qián)苷、12. 71 50. 84 Ug芍藥苷和40. 27 161. 06 Ug丹皮酚。
上述的六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液的制備方法如下1)六味地黃丸對(duì)照中成藥的制備取熟地黃160份、酒萸肉80份、牡丹皮60份、山藥 80份、茯苓60份和澤瀉60份，粉碎成細(xì)粉，混勻；每IOOg粉末加煉蜜35 50g與適量的水，制得六味地黃丸對(duì)照中成藥；或每IOOg粉末加煉蜜80 IlOg制成六味地黃丸對(duì)照中成藥；2)六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液的制備取六味地黃丸對(duì)照中成藥15 30g，置具塞錐形瓶中，加甲醇200 400mL，超聲提取25 40分鐘，濾過(guò)，濾液加在中性氧化鋁柱上，用100 200mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸至50 90mL，轉(zhuǎn)移至100 200mL量瓶中，加甲醇至刻度，用微孔濾膜過(guò)濾至安瓶中，充氮?dú)猓鄯狻?br> 一種商品六味地黃丸中成分的定量檢測(cè)方法，步驟如下1)采用高效液相色譜法，利用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品5-羥甲基糠醛、莫諾苷、馬錢(qián)苷、芍藥苷和丹皮酚標(biāo)定上述的六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液中的5-羥甲基糠醛、莫諾苷、馬錢(qián)苷、芍藥苷和丹皮酚的含量，以此作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；2)商品六味地黃丸樣品的處理取商品六味地黃丸1 2.5g，置具塞錐形瓶中，加甲醇 30 40mL，超聲提取25 40分鐘，濾過(guò)，濾液蒸至5 9mL，轉(zhuǎn)移至10 25mL量瓶中，加甲醇至刻度，制得供試液；3)檢測(cè)采用高效液相色譜儀；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)條件如下 色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0. 05%磷酸水； 梯度洗脫0-30 min，流動(dòng)相B的配比由95%至80% ； 30-80 min，流動(dòng)相B的配比由80%至30% ； 80-85 min，流動(dòng)相B的配比由30%至95% ；柱溫:35°C ； 流速1 mL/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng):237 nm ； 進(jìn)樣量10 20μ ο
本發(fā)明的原理是本發(fā)明首先采用對(duì)照品標(biāo)定六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液中的 5-羥甲基糠醛、莫諾苷、馬錢(qián)苷、芍藥苷和丹皮酚的含量，并注明批號(hào)和5個(gè)成分的含量，以此為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，采用高效液相色譜法，對(duì)商品六味地黃丸中的5-羥甲基糠醛、莫諾苷、馬錢(qián)苷、芍藥苷和丹皮酚5個(gè)成分同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定。
本發(fā)明的有益效果是①本發(fā)明和現(xiàn)有的質(zhì)量控制方法相比，能同時(shí)對(duì)多成分含量進(jìn)行測(cè)定，簡(jiǎn)化檢驗(yàn)過(guò)程，大大地降低檢驗(yàn)成本，由目前每批次上千元的檢驗(yàn)成本降低為幾十元，只需用較少的對(duì)照品就可以標(biāo)定出一大批對(duì)照中成藥提取液。同時(shí)對(duì)照提取液的制備方法簡(jiǎn)便，利于推廣應(yīng)用。②采用本發(fā)明的方法，樣品中5個(gè)成分的分離度和穩(wěn)定性高，以此方法對(duì)全國(guó)各地收集的六味地黃丸沈批次樣品，進(jìn)行了含量測(cè)定，并與直接應(yīng)用對(duì)照品進(jìn)行含量測(cè)定的方法進(jìn)行比較，RSD值均符合要求。③針對(duì)目前藥品市場(chǎng)存在的假藥問(wèn)題，經(jīng)常有知情人舉報(bào)是假藥，而按現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)卻符合規(guī)定的情況發(fā)生，這是由于不法企業(yè)不按制備工藝生產(chǎn)，僅添加檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中要求的一個(gè)或兩個(gè)對(duì)照品或藥材提取物，這一問(wèn)題已經(jīng)是目前中成藥質(zhì)量監(jiān)管中的突出問(wèn)題。但是采用本發(fā)明的以六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)對(duì)5個(gè)成分的含量進(jìn)行測(cè)定，可以在技術(shù)上制約企業(yè)的造假行為，對(duì)于節(jié)約檢驗(yàn)成本，提升中藥的質(zhì)量控制水平具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。


圖1是實(shí)施例1中對(duì)照品5-羥甲基糠醛的HPLC圖。
圖2是實(shí)施例1中對(duì)照品莫諾苷的HPLC圖。
圖3是實(shí)施例1中對(duì)照品馬錢(qián)苷的HPLC圖。
圖4是實(shí)施例1中對(duì)照品芍藥苷的HPLC圖。
圖5是實(shí)施例1中對(duì)照品丹皮酚的HPLC圖。
圖6是實(shí)施例1中六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液的HPLC圖。
圖7是實(shí)施例2中第1批次的商品六味地黃丸的HPLC圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液 (一)六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液的制備1)六味地黃丸對(duì)照中成藥的制備取熟地黃160g、酒萸肉80g、牡丹皮60 g、山藥80 g、茯苓60 g和澤瀉60 g，粉碎成細(xì)粉，過(guò)40目篩，混勻；每IOOg粉末加煉蜜IOOg制成六味地黃丸對(duì)照中成藥；2)六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液的制備取六味地黃丸對(duì)照中成藥15g，置具塞錐形瓶中，加甲醇200mL，超聲提取25分鐘，濾過(guò)，濾液加在中性氧化鋁柱(100 200目，IOg,內(nèi)徑Icm)上，用IOOmL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸至50mL，轉(zhuǎn)移至IOOmL量瓶中，加甲醇至刻度，用微孔濾膜過(guò)濾至安瓶中，充氮?dú)?，熔封?)標(biāo)定采用高效液相色譜儀；檢測(cè)條件如下色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4. 6 mmX250 mm, 5 μ m)； 流動(dòng)相乙腈(流動(dòng)相A) - 0. 05%磷酸水(流動(dòng)相B)； 梯度洗脫0-30 min，流動(dòng)相B的配比由95%至80% ； 30-80 min，流動(dòng)相B的配比由80%至30% ； 80-85 min，流動(dòng)相B的配比由30%至95% ；柱溫:35°C ； 流速1 mL/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng):237 nm ； 進(jìn)樣量10 UL0
對(duì)照品溶液的制備取5-羥甲基糠醛、莫諾苷、馬錢(qián)苷、芍藥苷、丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇使溶解，分別制成90 yg/ml,90 μ g/mL、50 μ g/mL、40 μ g/mL、40 μ g/mL的對(duì)照品溶液；理論板數(shù)分別按5-羥甲基糠醛、莫諾苷、馬錢(qián)苷、芍藥苷和丹皮酚計(jì)算均不低于3000。
方法學(xué)研究線(xiàn)性關(guān)系考察精密吸取5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液2、5、10、15、20 μ L進(jìn)樣，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得回歸方程Y = 967. 15Χ+2. 02 (r =0.9999),結(jié)果表明，5-羥甲基糠醛進(jìn)樣量在0.184 1.84 Pg與峰面積的線(xiàn)性關(guān)系良好。精密吸取莫諾苷對(duì)照品溶液1、2、5、8、10 μ L進(jìn)樣，回歸方程Y = 143. 78Χ+10. 72(r = 0.9997)，結(jié)果表明，莫諾苷進(jìn)樣量在0.09(Γ0. 90 μ g與峰面積的線(xiàn)性關(guān)系良好。精密吸取馬錢(qián)苷對(duì)照品溶液2、5、8、10、15 μ L進(jìn)樣，回歸方程Y = 1552. 78Χ+23. 29 (r = 0.9995)， 結(jié)果表明，馬錢(qián)苷進(jìn)樣量在0.0989、. 7416 μ g與峰面積的線(xiàn)性關(guān)系良好。精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液2、4、6、8、10 μ L進(jìn)樣，回歸方程Y = 1154. 52Χ-3. 42(r = 0.9995)，結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0.076、. 379 μ g與峰面積的線(xiàn)性關(guān)系良好。精密吸取丹皮酚對(duì)照品溶液2、5、10、15、20 口1^進(jìn)樣，回歸方程￥=90. 183X+25. 265(r =0. 9995)，結(jié)果表明，丹皮酚進(jìn)樣量在0. 0793、. 793 μ g與峰面積的線(xiàn)性關(guān)系良好。
精密度試驗(yàn)精密吸取5-羥甲基糠醛、莫諾苷、馬錢(qián)苷、芍藥苷和丹皮酚對(duì)照品溶液各10 μ L，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得5-羥甲基糠醛的RSD為1. ，莫諾苷的RSD為1. 1%，馬錢(qián)苷的RSD為1. 2%，芍藥苷RSD為1. 0%，丹皮酚的RSD為1. 0%。
穩(wěn)定性試驗(yàn)取制備的六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液，進(jìn)行M個(gè)月的常溫穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果見(jiàn)表1。
權(quán)利要求
1.六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液，其特征在于組成為每毫升提取液中含有16.71 66. 82ug 5-羥甲基糠酸、30. 56 122. 22ug莫諾苷、19. 52 78. 06ug馬錢(qián)苷、12. 71 50. 84 ug芍藥苷和40. 27 161. 06 Ug丹皮酚。
2.權(quán)利要求1所述的六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液的制備方法，其特征在于步驟如下1)六味地黃丸對(duì)照中成藥的制備取熟地黃160份、酒萸肉80份、牡丹皮60份、山藥 80份、茯苓60份和澤瀉60份，粉碎成細(xì)粉，混勻；每IOOg粉末加煉蜜35 50g與適量的水，制得六味地黃丸對(duì)照中成藥；或每IOOg粉末加煉蜜80 IlOg制成六味地黃丸對(duì)照中成藥；2)六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液的制備取六味地黃丸對(duì)照中成藥15 30g，置具塞錐形瓶中，加甲醇200 400mL，超聲提取25 40分鐘，濾過(guò)，濾液加在中性氧化鋁柱上，用 100 200mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸至50 90mL，轉(zhuǎn)移至100 200mL量瓶中，加甲醇至刻度，用微孔濾膜過(guò)濾至安瓶中，充氮?dú)猓鄯狻?br> 3.商品六味地黃丸中成分的定量檢測(cè)方法，其特征在于步驟如下1)采用高效液相色譜法，利用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品5-羥甲基糠醛、莫諾苷、馬錢(qián)苷、芍藥苷和丹皮酚標(biāo)定權(quán)利要求1所述的六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液中的5-羥甲基糠醛、莫諾苷、馬錢(qián)苷、芍藥苷和丹皮酚的含量，以此作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；2)商品六味地黃丸樣品的處理取商品六味地黃丸1 2.5g，置具塞錐形瓶中，加甲醇 30 40mL，超聲提取25 40分鐘，濾過(guò)，濾液蒸至5 9mL，轉(zhuǎn)移至10 25mL量瓶中，加甲醇至刻度，制得供試液；3)檢測(cè)采用高效液相色譜儀；色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0. 05%磷酸水；梯度洗脫0-30 min，流動(dòng)相B的配比由95%至80% ；30-80 min，流動(dòng)相B的配比由80%至30% ； 80-85 min，流動(dòng)相B的配比由30%至95% ；柱溫:35°C ；流速 1 mL/min ；檢測(cè)波長(zhǎng):237 nm ；進(jìn)樣量10 20μ ο
全文摘要
本發(fā)明涉及一種六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液及其制備方法和應(yīng)用。采用的技術(shù)方案是六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液的組成為每毫升提取液中含有16.71～66.82μg5-羥甲基糠醛、30.56～122.22μg莫諾苷、19.52～78.06μg馬錢(qián)苷、12.71～50.84μg芍藥苷和40.27～161.06μg丹皮酚。以本發(fā)明提供的六味地黃丸對(duì)照中成藥提取液為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，采用高效液相色譜法，對(duì)商品六味地黃丸進(jìn)行含量測(cè)定，能同時(shí)對(duì)多成分進(jìn)行控制，簡(jiǎn)化檢驗(yàn)過(guò)程，大大地降低檢驗(yàn)成本，符合中藥檢驗(yàn)領(lǐng)域技術(shù)發(fā)展趨勢(shì)。而且對(duì)照提取液的制備方法簡(jiǎn)便，利于推廣應(yīng)用，實(shí)用性強(qiáng)。
文檔編號(hào)G01N30/06GK102520103SQ201110426259
公開(kāi)日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月19日
發(fā)明者孫苓苓, 徐秋陽(yáng), 李虹, 桑育黎, 王維寧, 趙曉笠, 郝延軍, 陳婧 申請(qǐng)人:遼寧省食品藥品檢驗(yàn)所