專利名稱：一種測定痕量曲普瑞林的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種采用液相色譜與質譜聯(lián)用技術測定痕量曲普瑞林的方法。
背景技術：
曲普瑞林是人工合成的十肽，為促性腺激素釋放激素(GnRH)的類似物。其結構的改良是將天然分子結構中的第六個左旋氨基酸(甘氨酸)，以右旋色氨酸取代。曲普瑞林作用與GnRH相同，但其血漿半衰期延長且對GnRH受體的親和力更強，因此曲普瑞林成為GnRH受體的強力激動劑。曲普瑞林注射后，最初會刺激垂體分泌促性腺激素(Gn)，即黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)。當垂體經(jīng)過長期的刺激后會進入不應期，促性腺激素的釋放會減少，因而使性類固醇(睪丸酮或雌激素)降低至去勢水平。上述作用是可逆轉的。臨床上曲普瑞林被用于治療各種激素依賴性疾病如前列腺癌、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤和性早熟。曲普瑞林已上市的產(chǎn)品主要有注射劑和長效緩釋微球制劑，曲普瑞林臨床常用劑量:每天一次皮下注射0.5毫克，連續(xù)七天，然后每天一次皮下注射0.1毫克，作為維持劑量；體外授精術(IVF)每天一次皮下注射0.5毫克，七至十天，然后每天一次皮下注射0.1毫克。曲普瑞林臨床應用的不良反應是由于激素的產(chǎn)生被抑制而可能引起的藥理副作用，因此臨床治療時應密切監(jiān)測性類固醇血漿水平。曲普瑞林臨床極低的用量，就可能引起極強的臨床不良反應，這些情況都迫切需要建立一種操作簡單，特異性好及高靈敏的痕量曲普瑞林檢測技術，目前血漿及排泄物等生物樣品中痕量曲普瑞林的檢測是利用放射免疫法進行測定，由于它測定的是蛋白多肽的特異性片段，樣品中其他有抗原決定簇的代謝片段或者曲普瑞林的自身降解產(chǎn)物也能和免疫試劑反應，增加結果誤差，并且其具有放射性，對檢測人員有潛在的傷害可能；且其試劑盒非常昂貴，必須配備高級儀器設備，不適合臨床及科研使用。
發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術存在的上述缺陷，本發(fā)明人進行深入研究，提供一種操作簡單、結果準確、特異性好、靈敏度高的痕量曲普瑞林的測定方法。所述方法采用液相色譜與質譜聯(lián)用技術，其高效液相的流動相采用含酸的水溶液-甲醇體系進行梯度洗脫，所述酸為乙酸或丙酸，優(yōu)選為乙酸；酸的體積百分濃度0.01-0.1%，優(yōu)選為0.01-0.05%，更優(yōu)選為0.02%。所述體積百分濃度為IOOml水中所含酸的體積(ml)數(shù)。在液質聯(lián)用方法中，液相色譜流動相的選擇具有非常重要的作用。本發(fā)明所述流動相的有機相選擇甲醇，相比乙腈等其他有機溶劑，甲醇在測定痕量曲普瑞林時有更高的響應值和較好的色譜行為；流動相的水相中添加酸可明顯提高方法的靈敏度，其中添加乙酸或丙酸比甲酸等其他酸，可以顯著提高檢測限近十倍。所述檢測限是指在樣品中能檢出的被測組分的最低濃度(量)，即產(chǎn)生信號(峰高)為基線噪音標準差k倍時的樣品濃度，一般將檢測限定義為信噪比(S/N) 3: I時的濃度。所述梯度洗脫含酸水溶液和甲醇的體積比具體如下表，其中第三時間段可省略，但優(yōu)選含有第三時間段，可減少連續(xù)進樣后柱壓升高和噪音。
權利要求
1.一種測定痕量曲普瑞林的方法，其特征在于采用液相色譜與質譜聯(lián)用技術，高效液相的流動相采用含酸的水溶液-甲醇體系進行梯度洗脫，所述酸為乙酸或丙酸。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于酸的體積百分濃度為0.01-0.1 %。
3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于酸的體積百分濃度為0.01% -0.05%。
4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于酸的體積百分濃度為0.02%。
5.根據(jù)權利要求1-4任一所述的方法，其特征在酸為乙酸。
6.根據(jù)權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于高效液相色譜梯度洗脫為，第一時間段含酸的水溶液A與甲醇B的體積比為75-95: 25-5;第二時間段A與B的體積比為30-50: 70-50 ;第三時間段A與B體積比為0_10: 100-90 ;第四時間段A與B的體積比為 75-95: 25-5。
7.根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于省略第三時間段。
8.根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于第一時間段A與B的體積比為90: 10;第二時間段A與B的體積比為40: 60;第三時間段A與B的體積比為2: 98;第四時間段A與B的體積比為90: 10。
9.根據(jù)權利要求1-4任一所述的方法，用于哺乳動物在使用曲普瑞林制劑后，檢測體內(nèi)曲普瑞林的含量變化及代謝研究的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種測定痕量曲普瑞林的方法，采用液相色譜與質譜聯(lián)用技術對樣品中痕量曲普瑞林進行測定，該方法操作簡單、結果準確、特異性好、靈敏度高。本發(fā)明還涉及所述測定方法用于定性或定量檢測生物樣品中的曲普瑞林的含量及其曲普瑞林制劑藥代動力學研究的用途。
文檔編號G01N30/06GK103163258SQ201110409108
公開日2013年6月19日 申請日期2011年12月9日 優(yōu)先權日2011年12月9日
發(fā)明者韓江彬, 沙春潔, 宋濤, 王濤, 孫考祥, 劉萬卉 申請人:山東綠葉制藥有限公司