專利名稱：一一對照式玻片檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測方法技術(shù)領(lǐng)域，具體為一一對照式玻片檢測方法。
背景技術(shù)：
在科研或臨床應(yīng)用上，組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)、組織細(xì)胞水平、蛋白質(zhì)水平、RNA水平、DNA水平、免疫組化、各種原位雜交或原位PCR，只要是原位方法的檢測，按質(zhì)量要求均需要設(shè)立陽性對照及空白對照。目前，除少數(shù)試劑可于片中尋找自身對照外，通常是一組檢測片只能通過切片方法設(shè)立一張陽性對照片作為對照，但是無論是機(jī)器操作還是手工操作均不能保證每張玻片的檢測條件一致，如每一步驟的時間、試劑的用量、效價程度或其它人為因素等均存在差異，都會造成部分結(jié)果的準(zhǔn)確性很難判斷，故其標(biāo)準(zhǔn)化問題日益受到大家的重視。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，設(shè)計(jì)提供一種一一對照式玻片檢測方法的技術(shù)方案，能有效提高判斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于包括以下步驟1)選擇與檢測對象相應(yīng)的對照物質(zhì)，進(jìn)行細(xì)胞提取處理；2)制備細(xì)胞對照保存體對照物質(zhì)進(jìn)行細(xì)胞提取處理后，于保存介質(zhì)中制成細(xì)胞對照保存體，細(xì)胞提取物與保存介質(zhì)的比例為1∶1-5；所述的保存介質(zhì)為液體石蠟或固體石蠟，也可以是自制的保存液，保存液的制備取0.05-0.1mol/L、PH為7.4的三羥甲基氨基甲烷100ml，加溫到60-70℃，加入優(yōu)質(zhì)明膠50-100mg，攪拌溶解后，冷卻至室溫，加入0.1-0.8g牛血清白蛋白，加入NaN3200mg溶解后過濾制成；3)在進(jìn)行玻片檢測時，將上述細(xì)胞對照保存體少許點(diǎn)、涂或融化于相應(yīng)的每一張玻片上，與檢測對象一起進(jìn)行檢測、分析或判斷。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于所述的對照物質(zhì)為培養(yǎng)細(xì)胞、液體標(biāo)本或組織標(biāo)本。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞提取處理為直接用胰酶將細(xì)胞從培養(yǎng)瓶上消化下來。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于液體標(biāo)本的細(xì)胞提取處理為液體標(biāo)本加入抗凝劑進(jìn)行直接離心分離、洗滌獲取細(xì)胞，所述的洗滌液為0.01mol/L、PH為7.4的磷酸緩沖液或三羥甲基氨基甲烷緩沖液，抗凝劑為肝素或枸櫞酸。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于組織標(biāo)本的細(xì)胞提取處理為組織標(biāo)本洗去血跡、磨碎，100-400目篩網(wǎng)過濾，進(jìn)行細(xì)胞打孔處理、離心分離、洗滌。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于不新鮮組織標(biāo)本磨碎后進(jìn)行及時固定，固定液為10-20％中性福爾馬林或90-95％乙醇或冷丙酮。
所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于組織標(biāo)本磨碎后添加紅細(xì)胞裂解液處理，紅細(xì)胞裂解液的配制稱取3-4g氯化銨、1-2g三羥甲基氨基甲烷，加水溶解并稀釋至500ml，0.22μm濾膜過濾除菌，4-6℃保存。
上述一一對照式玻片檢測方法，操作簡單、方便，將細(xì)胞對照保存體少許點(diǎn)、涂或融化于相應(yīng)的每一張玻片上，與檢測對象一起進(jìn)行檢測、分析或判斷，保證每張玻片的檢測條件一致，有效提高了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，為相關(guān)的研究工作提供了必要的數(shù)據(jù)，更為治療方案的選擇提供了更準(zhǔn)確的判斷依據(jù)，且還能通過對比觀察檢測出未知物質(zhì)的性質(zhì)。
具體實(shí)施例方式
一一對照式玻片檢測方法，其特征在于包括以下步驟1)選擇與檢測對象相應(yīng)的對照物質(zhì)，進(jìn)行細(xì)胞提取處理，所述的細(xì)胞包括動物細(xì)胞和微生物，所述的對照物質(zhì)可為培養(yǎng)細(xì)胞、液體標(biāo)本或組織標(biāo)本。培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞提取處理為直接用胰酶將細(xì)胞從培養(yǎng)瓶上消化下來。液體標(biāo)本的細(xì)胞提取處理為液體標(biāo)本加入抗凝劑進(jìn)行直接離心分離、洗滌獲取細(xì)胞，所述的洗滌液為0.01mol/L、PH為7.4的磷酸緩沖液或三羥甲基氨基甲烷緩沖液，抗凝劑為肝素或枸櫞酸。組織標(biāo)本的細(xì)胞提取處理為組織標(biāo)本洗去血跡、磨碎，300目篩網(wǎng)過濾，進(jìn)行細(xì)胞打孔處理、離心分離、洗滌。不新鮮組織標(biāo)本磨碎后進(jìn)行及時固定，固定液為15％中性福爾馬林或95％乙醇或冷丙酮。組織標(biāo)本含紅細(xì)胞較多的，磨碎后添加紅細(xì)胞裂解液處理，紅細(xì)胞裂解液的配制稱取3.735g氯化銨、1.3g三羥甲基氨基甲烷，加水溶解并稀釋至500ml，0.22μm濾膜過濾除菌，4℃保存。
2)制備細(xì)胞對照保存體對照物質(zhì)進(jìn)行細(xì)胞提取處理后，于保存介質(zhì)中制成細(xì)胞對照保存體，所述的細(xì)胞對照保存體為懸液，也可以是固體，所述的保存介質(zhì)為醫(yī)用的液體石蠟或固體石蠟，也可以是自制的保存液。保存液的制備取0.06mol/L、PH為7.4的三羥甲基氨基甲烷100ml，加溫到65℃，加入優(yōu)質(zhì)明膠90mg，攪拌溶解后，冷卻至室溫，加入0.7g牛血清白蛋白，加入NaN3200mg溶解后過濾制成。細(xì)胞提取物與保存液按1∶3的配比，制成細(xì)胞懸液；細(xì)胞提取物進(jìn)行脫水、透明處理后與液體石蠟、固體石蠟按配比進(jìn)行浸蠟處理，其比例分別為1∶3，1∶1，分別制成細(xì)胞懸液、細(xì)胞對照保存固體。
3)在進(jìn)行玻片檢測時，將上述細(xì)胞對照保存體少許點(diǎn)、涂于相應(yīng)的每一張玻片上，與檢測對象一起進(jìn)行檢測、分析或判斷。
本申請中所涉及的離心分離、洗滌處理，脫水、透明、浸蠟處理，及細(xì)胞懸液、細(xì)胞對照保存固體的配制均為一般公知技術(shù)，在此不再贅述。
根據(jù)該檢測方法，可開發(fā)出針對不同檢測目的、不同檢測對象的對照物質(zhì)，生產(chǎn)出可長時間保存的細(xì)胞對照保存體。在進(jìn)行玻片檢測時，將細(xì)胞對照保存體少許點(diǎn)、涂或融化于相應(yīng)的每一張玻片上，與檢測對象一起進(jìn)行檢測、分析或判斷，保證每張玻片的檢測條件一致，有效提高了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，為相關(guān)的研究工作提供了必要的數(shù)據(jù)，更為治療方案的選擇提供了更準(zhǔn)確的判斷依據(jù)，且還能通過對比觀察檢測出未知物質(zhì)的性質(zhì)。
權(quán)利要求
1.一一對照式玻片檢測方法，其特征在于包括以下步驟1)選擇與檢測對象相應(yīng)的對照物質(zhì)，進(jìn)行細(xì)胞提取處理；2)制備細(xì)胞對照保存體對照物質(zhì)進(jìn)行細(xì)胞提取處理后，于保存介質(zhì)中制成細(xì)胞對照保存體，細(xì)胞提取物與保存介質(zhì)的比例為1∶1-5；所述的保存介質(zhì)為液體石蠟或固體石蠟，也可以是自制的保存液，保存液的制備取0.05-0.1mol/L、PH為7.4的三羥甲基氨基甲烷100ml，加溫到60-70℃，加入優(yōu)質(zhì)明膠50-100mg，攪拌溶解后，冷卻至室溫，加入0.1-0.8g牛血清白蛋白，加入NaN3200mg溶解后過濾制成；3)在進(jìn)行玻片檢測時，將上述細(xì)胞對照保存體少許點(diǎn)、涂或融化于相應(yīng)的每一張玻片上，與檢測對象一起進(jìn)行檢測、分析或判斷。
2.如權(quán)利要求1所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于所述的對照物質(zhì)為培養(yǎng)細(xì)胞、液體標(biāo)本或組織標(biāo)本。
3.如權(quán)利要求2所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞提取處理為直接用胰酶將細(xì)胞從培養(yǎng)瓶上消化下來。
4.如權(quán)利要求2所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于液體標(biāo)本的細(xì)胞提取處理為液體標(biāo)本加入抗凝劑進(jìn)行直接離心分離、洗滌獲取細(xì)胞，所述的洗滌液為0.01mol/L、PH為7.4的磷酸緩沖液或三羥甲基氨基甲烷緩沖液，抗凝劑為肝素或枸櫞酸。
5.如權(quán)利要求2所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于組織標(biāo)本的細(xì)胞提取處理為組織標(biāo)本洗去血跡、磨碎，100-400目篩網(wǎng)過濾，進(jìn)行細(xì)胞打孔處理、離心分離、洗滌。
6.如權(quán)利要求5所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于不新鮮組織標(biāo)本磨碎后進(jìn)行及時固定，固定液為10-20％中性福爾馬林或90-95％乙醇或冷丙酮。
7.如權(quán)利要求5所述的一一對照式玻片檢測方法，其特征在于組織標(biāo)本磨碎后添加紅細(xì)胞裂解液處理，紅細(xì)胞裂解液的配制稱取3-4g氯化銨、1-2g三羥甲基氨基甲烷，加水溶解并稀釋至500ml，0.22μm濾膜過濾除菌，4-6℃保存。
全文摘要
一一對照式玻片檢測方法，屬于醫(yī)學(xué)檢測方法技術(shù)領(lǐng)域。其特征在于包括以下步驟選擇與檢測對象相應(yīng)的對照物質(zhì)，進(jìn)行細(xì)胞提取處理；制備細(xì)胞對照保存體對照物質(zhì)進(jìn)行細(xì)胞提取處理后，于保存介質(zhì)中制成細(xì)胞對照保存體，細(xì)胞提取物與保存介質(zhì)的比例為1∶1－5；在進(jìn)行玻片檢測時，將上述細(xì)胞對照保存體少許點(diǎn)、涂或融化于相應(yīng)的每一張玻片上，與檢測對象一起進(jìn)行檢測、分析或判斷。上述一一對照式玻片檢測方法，操作簡單、方便，能保證每張玻片的檢測條件一致，有效提高了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，為相關(guān)的研究工作提供了必要的數(shù)據(jù)，更為治療方案的選擇提供了更準(zhǔn)確的判斷依據(jù)，且還能通過對比觀察檢測出未知物質(zhì)的性質(zhì)。
文檔編號G01N1/28GK1699953SQ20051005030
公開日2005年11月23日 申請日期2005年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月12日
發(fā)明者任興昌 申請人:杭州市中醫(yī)院