專利名稱：一種邊分離-邊分析鑒別真?zhèn)误H皮阿膠的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及真?zhèn)误H皮阿膠的鑒別技術(shù)，具體地，本發(fā)明涉及一種通過(guò)比較阿膠中不同組分性質(zhì)的方法進(jìn)行真?zhèn)伟⒛z鑒別的技術(shù)。本發(fā)明還涉及分離阿膠中不同組分的方法，以及不同膠的組分性質(zhì)的比較方法。
背景技術(shù)：
阿膠為驢皮經(jīng)去毛后等預(yù)處理后再經(jīng)過(guò)煎煮濃縮熬制而成的固體膠。驢皮中含有糖胺聚糖，糖蛋白，網(wǎng)蛋白，角質(zhì)蛋白、膠原蛋白、脂肪及其它物質(zhì)，在原料前處理過(guò)程中，漂、泡、搓、洗等過(guò)程將角質(zhì)蛋白和脂肪等除去，制膠過(guò)程熬制溫度、時(shí)間、水分等因素作用，使驢皮中的大分子水解，膠原蛋白和其它蛋白，糖胺聚糖和蛋白聚糖水解等后，形成一系列降解產(chǎn)物，成分十分復(fù)雜，分子量分布范圍很大。
正品阿膠應(yīng)為驢皮阿膠，而其它動(dòng)物皮熬制的膠均為偽膠。偽膠功效與阿膠不同，甚至有嚴(yán)重的副作用，不但給市場(chǎng)帶來(lái)了混亂，而且危害消費(fèi)者的身心健康。由于其它各種雜皮膠的制備工藝及膠的外觀性狀與阿膠相似，又因其成分復(fù)雜，所以鑒別真?zhèn)螛O其困難。傳統(tǒng)的鑒別方法(如查看膠斷面色澤，手感，水試，膠懸浮液性狀等)多根據(jù)膠的理化性質(zhì)或表觀性狀進(jìn)行鑒別而且需要相當(dāng)?shù)慕?jīng)驗(yàn)，因此準(zhǔn)確性差；尤其是在膠的形態(tài)和色澤十分相似的情況下更難以根據(jù)膠的形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行真?zhèn)螀^(qū)分。雖然也有人利用紫外，紅外等方式進(jìn)行鑒別，但膠溶液含有不同種類物質(zhì)，這種方式分析的是阿膠中不同物質(zhì)的混合物，沒(méi)有針對(duì)性，而且準(zhǔn)確性也不高，重現(xiàn)性非常低。另外，對(duì)于熬膠過(guò)程中利用雜皮加入驢皮方式得到混皮膠，這種利用混合物直接光譜掃描鑒別阿膠真?zhèn)蔚姆绞綔?zhǔn)確性極差。
本發(fā)明的目的在于提供一種新的鑒別方法，這種方法能夠快速而準(zhǔn)確地鑒別阿膠地真?zhèn)危诣b別所需樣品量少，預(yù)處理簡(jiǎn)單，具有非常高的重復(fù)性。本發(fā)明涉及的真?zhèn)舞b別方法對(duì)于所有生物類的中藥中的含有蛋白或多糖的中藥均適用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的上述目的是通過(guò)將膠溶解后得到的溶液進(jìn)行預(yù)處理，以去除人為加入的冰糖等輔料以及膠中的不溶物，將得到的溶液借助各種分離方法(離子交換，凝膠過(guò)濾，吸附等層析-色譜方法)得到阿膠中不同種類的組分，同時(shí)結(jié)合其它分析方法比較各類組分的性質(zhì)，以邊分離邊分析的方式來(lái)實(shí)現(xiàn)的。阿膠溶解后含有不同種類的陰陽(yáng)離子，這些離子大小及電荷性質(zhì)不同。利用凝膠過(guò)濾層析根據(jù)膠溶液中分子的分子量的大小進(jìn)行分離，利用離子交換層析根據(jù)膠溶液中帶不同電荷及帶相同電荷的離子的電荷多少和強(qiáng)度進(jìn)行分離，根據(jù)膠溶液中糖種類的不同利用糖柱層析進(jìn)行分離，以及利用膠溶液中不同分子的其它性質(zhì)進(jìn)行分離。對(duì)于層析分離出的不同種類的組分利用紫外光譜，紅外光譜，質(zhì)譜或其它方式進(jìn)行分析。將不同分離方式得到的色譜峰的掃描圖譜與標(biāo)準(zhǔn)阿膠溶液同一色譜峰的圖譜進(jìn)行比較，或?qū)⒉煌V峰的質(zhì)譜分析結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)膠的同一峰的質(zhì)譜分析結(jié)果進(jìn)行比較。
本發(fā)明的具體方法如下一種鑒別真?zhèn)误H皮阿膠的方法，其步驟如下1 取一定量的膠加入一定量的蒸餾水，在室溫下振蕩6～10小時(shí)。
2 將1得到的阿膠溶液離心，去除上層白色物質(zhì)和下層沉淀物，留中間黃色透明溶液。
3 向2得到的透明溶液中加入一定濃度的沉淀劑，振蕩數(shù)分鐘后低溫保存2～4小時(shí)，離心收集沉淀，洗滌后離心，保留沉淀物。
4 將3得到的沉淀利用緩沖液重新溶解，待進(jìn)行分離-分析。
5 將4得到的溶液進(jìn)行色譜分離，采集各峰的紫外或紅外掃描圖譜。
6 將得到的各色譜峰掃描圖譜與真阿膠的各色譜峰的圖譜進(jìn)行比對(duì)，根據(jù)各個(gè)色譜峰的光譜掃描結(jié)果與真阿膠的各個(gè)色譜峰的光譜掃描結(jié)果的比較結(jié)果區(qū)分待鑒別膠的真?zhèn)巍?br> 7 對(duì)于各個(gè)峰的光譜掃描結(jié)果完全相同的樣品需要將各個(gè)峰進(jìn)行定量計(jì)算，以確定是純驢皮膠還是加入雜皮的混合膠。


圖1待鑒別膠的預(yù)處理過(guò)程示意2真阿膠及一種待測(cè)膠的離子交換圖譜曲線1真阿膠，曲線2待測(cè)膠圖3四種膠的圖2中第一個(gè)峰的紫外掃描圖譜T-真阿膠，A待測(cè)膠a，B待測(cè)膠b，C待測(cè)膠c圖4真阿膠及一種待測(cè)膠的陽(yáng)離子交換圖譜曲線1真阿膠，曲線2待測(cè)膠圖5四種膠的圖4中第一個(gè)峰的紫外掃描圖譜T-真阿膠，A待測(cè)膠I，B待測(cè)膠II，C待測(cè)膠III以下借助具體實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的方法實(shí)施例一 陰離子交換分離—分析區(qū)別阿膠的真?zhèn)? 待鑒別樣品 3種膠2 所需儀器(1)離心機(jī)(2)高效液相色譜儀(3)檢測(cè)器二極管陣列檢測(cè)器3 樣品處理(1)分別取真阿膠和3種待鑒別膠(膠a，膠b，膠c)各2克，分別加入20毫升蒸餾水，利用超聲振蕩4小時(shí)。
(2)將(1)得到的各溶液在10000r/m下離心5分鐘，分別取4種膠的中間清液10毫升。
(3)向(2)得到的4種溶液中加入15毫升沉淀劑，靜置2小時(shí)，在12000r/m下離心10分鐘。
(4)收集(3)得到的4種沉淀，加入15毫升0.05mol/ml磷酸緩沖液(pH＝7.0)。振蕩，直至沉淀全部溶解。
(5)利用陰離子交換色譜法分析4種樣品，色譜柱SynChropak AX300。
(6)比較待測(cè)樣品與真阿膠的各個(gè)色譜峰的紫外掃描圖譜。如圖2所示，曲線1為真阿膠的色譜圖，曲線2為其中一種待測(cè)膠的色譜圖。圖3為4種樣品的色譜圖中的第一個(gè)色譜峰的紫外掃描圖譜，因此，待測(cè)的三種膠均為假阿膠。
實(shí)施例二 陽(yáng)離子交換分離—分析區(qū)別阿膠的真?zhèn)? 待鑒別樣品 2種膠2 所需儀器(1)離心機(jī)(2)高效液相色譜儀(3)檢測(cè)器二極管陣列檢測(cè)器3 樣品處理(1)分別取真阿膠和3種待鑒別膠(膠I，膠II，膠III)各2克，分別加入20毫升蒸餾水，在室溫下利用搖床振蕩4小時(shí)。
(2)將(1)得到的各溶液在10000r/m下離心5分鐘，分別4種膠的中間清液10毫升。
(3)向(2)得到的3種溶液中加入15毫升沉淀劑，靜置2小時(shí)，在12000r/m下離心10分鐘。
(4)收集(3)得到的4種沉淀，加入15毫升0.05mol/ml磷酸緩沖液(pH＝7.0)。振蕩，直至沉淀全部溶解。
(5)利用陽(yáng)離子交換色譜法分析4種樣品，色譜柱SynChropak CM300。
(6)比較待測(cè)樣品與真阿膠的各個(gè)色譜峰的紫外掃描圖譜。如圖5所示，曲線1為真阿膠的色譜圖，曲線2為其中一種膠II的色譜圖。圖6為3種樣品的色譜圖中的第一個(gè)色譜峰的紫外掃描圖譜，因此，待測(cè)的兩種膠中膠I和膠III為假阿膠。膠II與真阿膠的圖譜相同，峰1的峰面積相等，且其它峰的紫外圖譜與真膠一致，因此，膠II為真阿膠。
權(quán)利要求
1.一種邊分離邊分析鑒別真?zhèn)误H皮阿膠的方法，其特征在于，該方法包括(1)取待測(cè)樣品，用適當(dāng)?shù)娜芤喝芙猓?2)將(1)得到的溶液經(jīng)離心后取中間的清液；(3)將(2)得到的清液中加入沉淀劑，離心后收集沉淀物；(4)利用適當(dāng)?shù)木彌_液將(3)得到的沉淀重新溶解；(5)將(4)得到的溶液進(jìn)行邊分離邊分析或直接進(jìn)行分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，膠溶液離心后收集的是中間的清液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的要求，向權(quán)利要求2的清液中加入的沉淀劑可以是三氯乙酸，丙酮，甲醇，硫酸銨等。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，沉淀重新溶解后，所得溶液的分離方法含離子交換色譜分離和凝膠過(guò)濾色譜分離等色譜分離技術(shù)和膜過(guò)濾(含超濾)等。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，權(quán)利要求4所說(shuō)的分離方法的檢測(cè)方式含光譜掃描和質(zhì)譜，包括紫外光譜掃描和紅外光譜掃描等。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，權(quán)利要求4分離的不同組分可以定量分析。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種真?zhèn)伟⒛z的鑒別方法，具體地，該方法將膠溶解后得到的溶液進(jìn)行預(yù)處理，以去除人為加入的輔料以及不溶物，借助各種分離方法得到阿膠中不同種類的組分，同時(shí)結(jié)合其它分析方法比較各類組分的性質(zhì)，以邊分離邊分析的方式得到各組分地分析結(jié)果，將該結(jié)果與真阿膠的分析結(jié)果相比以實(shí)現(xiàn)真?zhèn)伟⒛z的鑒別。該方法重復(fù)性好，準(zhǔn)確性高。
文檔編號(hào)G01N30/86GK1548954SQ0313083
公開(kāi)日2004年11月24日 申請(qǐng)日期2003年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月8日
發(fā)明者蘇志國(guó), 張貴鋒 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所