專利名稱：利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，特別是利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法。
背景技術(shù)：
:不對(duì)稱生物催化由于其經(jīng)濟(jì)效益高，同時(shí)由于酶的專一特性，使得這種方法具有高的立體選擇性、化學(xué)及光學(xué)專一性的優(yōu)點(diǎn)，因此已經(jīng)成為工業(yè)上合成化學(xué)品、醫(yī)藥及農(nóng)藥中間體的重要方法。其中，制備手性氨基酸的方法中，主要是基于通過(guò)液相層析拆分外消旋混合物，通過(guò)化學(xué)拆分的方法進(jìn)行拆分。
各種拆分方法都存在難于進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)、成本相對(duì)較高且收率較低的缺點(diǎn)，理論收率值可達(dá)到50%，實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中收率僅為10%-20%，因此，應(yīng)用該類方法的生產(chǎn)成本非常昂貴。有時(shí)化學(xué)拆分法還使用價(jià)格昂貴的手性拆分劑，大大地增加了生產(chǎn)成本；另外所采用的化學(xué)試劑操作較為復(fù)雜，且后處理不利用環(huán)境保護(hù)。

發(fā)明內(nèi)容:本發(fā)明的目的在于提供一種利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，通過(guò)利用氨基轉(zhuǎn)移酶或其全細(xì)胞進(jìn)行不對(duì)稱生物催化，提供一種制備高光學(xué)純度的手性氨基酸的方法，選用已經(jīng)在市場(chǎng)上商業(yè)化的原料酮酸或其可溶性酮酸鹽類化合物為初始
原料，酮酸結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，其特征在于具體步驟如下: (1)投料:向反應(yīng)釜中加入主原料酮酸或其可溶性銅酸鹽類化合物，其中酮酸結(jié)構(gòu)式為
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(I)中主原料酮酸或其可溶性酮酸鹽類化合物與磷酸鹽緩沖液的用量比為lg/30 80mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(2)中主原料酮酸或其可溶性酮酸鹽類化合物與氨基供體的摩爾比為1:1 8eq。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(3)中主原料酮酸或其可溶性酮酸鹽類化合物與輔酶磷酸吡哆醛的摩爾比為1:0.01 0.08 ;主原料酮酸或其可溶性酮酸鹽類化合物與氨基轉(zhuǎn)移酶主酶的用量比為lg/0.05 0.5g。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(4)中反應(yīng)溫度為25 35°C，攪拌速度為180rpm 220rpm，反應(yīng)時(shí)間為32 72h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(5)中酮酸或其可溶性酮酸鹽類化合物與離子交換樹(shù)脂的用量比為6 13:1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(I)中酮酸或其可溶性酮酸鹽類化合物與磷酸鹽緩沖液的用量比為lg/40 60mL ;所述步驟(2)中酮酸或其可溶性酮酸鹽類化合物與氨基供體的摩爾比為1:1 5eq ；所述步驟(3)中酮酸或其可溶性酮酸鹽類化合物與輔酶磷酸吡哆醛的摩爾比為1:0.01 0.05 ;酮酸或其可溶性酮酸鹽類化合物與氨基轉(zhuǎn)移酶酶主酶的用量比為lg/0.05 0.3g ;所述步驟(4)中反應(yīng)溫度為27 33°C，攪拌速度為190rpm 210rpm，反應(yīng)時(shí)間為32 50h ;所述步驟(5)中酮酸或其可溶性酮酸鹽類化合物與離子交換樹(shù)脂的用量比為8 12:1o
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，其特征 在于所述步驟(I)中酮酸
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(2)中L-氨基酸為L(zhǎng)-谷氨酸、L-天冬氨酸、L-賴氨酸或L-高苯丙氨酸；D，L-氨基酸為D，L-谷氨酸、D, L-天冬氨酸、D, L-賴氨酸或D，L-高苯丙氨酸。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，其特征在于所述步驟(5)中酸為濃鹽酸或磷酸；可形成可溶性鹽的無(wú)機(jī)堿為4mol/L NaOH或KOH溶液。
全文摘要
一種利用氨基轉(zhuǎn)移酶合成手性環(huán)狀烷基氨基酸的方法，選用已經(jīng)在市場(chǎng)上商業(yè)化的原料酮酸或其相應(yīng)的可溶性酮酸鹽類化合物為初始原料，將初始原料溶解于磷酸鹽緩沖液；然后加入氨基供體；將磷酸吡哆醛(PLP)和氨基轉(zhuǎn)移酶主酶加入到含氨基供體及主原料酮酸或其相應(yīng)的可溶性酮酸鹽類化合物的體系中，恒溫條件下反應(yīng)，得到較高ee值的產(chǎn)品n=1,2,3,4,5，或n=0,1。該方法工藝條件穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)單，收率高，成本低，且利于環(huán)境保護(hù)，適用于規(guī)模化生產(chǎn)，為制備手性氨基酸化合物提供了一種新的思路和方法。
文檔編號(hào)C12P13/04GK103194501SQ20131010583
公開(kāi)日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2013年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月29日
發(fā)明者洪浩, 鄭長(zhǎng)勝, 高峰, 李雁飛, 呂麗慧, 呂彤, 李艷君 申請(qǐng)人:凱萊英醫(yī)藥集團(tuán)(天津)股份有限公司, 凱萊英生命科學(xué)技術(shù)(天津)有限公司, 天津凱萊英制藥有限公司, 凱萊英醫(yī)藥化學(xué)(阜新)技術(shù)有限公司, 吉林凱萊英醫(yī)藥化學(xué)有限公司