本發(fā)明屬于具生物學(xué)功能的有機(jī)碳量子點(diǎn)合成技術(shù)領(lǐng)域，涉及微波可控輔熱促進(jìn)巰基乙胺調(diào)諧檸檬酸與聚乙烯亞胺合成熒光聚合物或碳點(diǎn)的制備方法，具體涉及一種碳量子點(diǎn)納米材料及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

隨著基因組高通量測序技術(shù)的迅速發(fā)展，研究人員積累了許多物種的基因組序列，這些物種的研究也隨之進(jìn)入了功能基因組時代。其中，生物信息學(xué)預(yù)測出的許多基因需要進(jìn)行功能鑒定及功能互作的研究，因此，多種新穎的，精準(zhǔn)的基因功能研究技術(shù)不斷涌現(xiàn)，如基因編輯技術(shù)，RNA干擾，基因定點(diǎn)突變，基因定點(diǎn)插入。這些技術(shù)都需要將構(gòu)建的外源核酸分子遞送進(jìn)相應(yīng)細(xì)胞內(nèi)才能發(fā)揮作用，而且更重要的是能獲得轉(zhuǎn)基因植株。目前，植物轉(zhuǎn)基因受體系統(tǒng)中，體細(xì)胞胚胎再生體系可以實(shí)現(xiàn)再生植株的目標(biāo)，而且已在多種植物中成功構(gòu)建，一些已經(jīng)進(jìn)行工廠化生產(chǎn)，并且獲得的轉(zhuǎn)基因植株的表型也能通過植物表型組學(xué)高通量性狀分型及表型-基因組數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)分析技術(shù)進(jìn)行有效的收集分析。因此，高載荷量，穩(wěn)定，高效甚至多種大片段核酸共轉(zhuǎn)染的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)成為各個植物物種基因工程迫切需求的關(guān)鍵技術(shù)。但是傳統(tǒng)的病毒，農(nóng)桿菌介導(dǎo)的將外源遺傳物質(zhì)引入植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的技術(shù)，具有受體材料易污染，轉(zhuǎn)染物種范圍窄，轉(zhuǎn)染質(zhì)粒長短有限等局限性，而基因槍，顯微注射，電擊法，等常規(guī)物理方法存在轉(zhuǎn)化成本高，效率低，難以轉(zhuǎn)化具有細(xì)胞壁的植物細(xì)胞，細(xì)胞易損傷等問題，難以滿足日趨迫切的植物完整細(xì)胞高效轉(zhuǎn)基因的需求。表面能夠修飾功能基團(tuán)，具有多功能的納米材料作為核酸運(yùn)載工具在動物中已廣泛開展研究，所研究出的材料具有吸附、壓縮DNA，保護(hù)DNA不被酶切降解，轉(zhuǎn)基因效率高等優(yōu)點(diǎn)；而且納米材料以其較小的粒徑、表面活性，能夠被植物細(xì)胞吸收至胞質(zhì)內(nèi)，由其結(jié)構(gòu)與表面電荷的不同，能夠特異性定位到不同的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中，甚至通過植株內(nèi)運(yùn)輸系統(tǒng)，特異性地在分生組織中富集。一些納米材料能夠具有發(fā)射波長范圍窄，熒光發(fā)射強(qiáng)度高等優(yōu)異的熒光性能。因此，以納米材料開發(fā)應(yīng)用于植物的高載荷，高效率納米基因遞送載體勢在必行。

聚乙烯亞胺(PEI)，是一種含有豐富氮原子的聚陽離子高分子聚合物，其具有1KDa到1000KDa的寬分子量范圍，它分為線狀和分枝狀兩種分子結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)骨架(-CHI-CHZ-NH-)中每3個原子就存在一個氨基，其可以在生理?xiàng)l件下發(fā)生質(zhì)子化，使得PEI具有較高的正電荷密度，通過靜電吸附作用和帶負(fù)電荷磷酸基團(tuán)的核酸發(fā)生電性中和，能夠有效地吸附，壓縮帶負(fù)電荷的核酸分子，形成穩(wěn)定的納米-核酸復(fù)合物，表面電荷呈中性或弱陽性，與表面帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜相互作用而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，而且能夠保護(hù)核酸分子免受細(xì)胞溶酶體中降解酶的降解，在酸性內(nèi)涵體中發(fā)生質(zhì)子化，吸附內(nèi)涵體中離子，改變內(nèi)外水勢，導(dǎo)致外部離子內(nèi)流，使內(nèi)涵體膨脹破裂，即產(chǎn)生“質(zhì)子海綿效應(yīng)”，從而釋放出從PEI游離出來的核酸分子或PEI與核酸分子的復(fù)合物，促進(jìn)核酸轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核，實(shí)現(xiàn)基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。經(jīng)過進(jìn)一步與其他功能性分子修飾，能夠獲得較高的靶向性和轉(zhuǎn)染效率。所以聚乙烯亞胺是應(yīng)用于動物細(xì)胞的一種具有較高轉(zhuǎn)染效率的體外轉(zhuǎn)染陽離子聚合物，被廣泛用作核酸類基因藥物的陽離子聚合物載體系統(tǒng)。但是PEI潛在的細(xì)胞毒性會隨著分子量的增加，而明顯增大，尤其是平均分子量為25000的PEI。其次PEI表面過多的具正電荷的基團(tuán)以及分散的結(jié)構(gòu)，在應(yīng)用于外層具有細(xì)胞壁的植物完整細(xì)胞的核酸遞送時，常常僅吸附在細(xì)胞壁表面。由于這些缺點(diǎn)的存在，限制了PEI的應(yīng)用。但據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，使用檸檬酸與低分子量的PEI水熱反應(yīng)合成高/超分子聚合物，在單個分子上富集PEI的帶正電的基團(tuán)，提高質(zhì)粒吸附量，提高了轉(zhuǎn)染效率；將親水性的多聚物如PEG修飾在PEI上，降低了表面正電荷，同時也降低了毒性。目前，已有研究表明，利用分子量（MW）為25,000的PEI作為高效原生質(zhì)體瞬時表達(dá)質(zhì)粒遞送載體，在pH為7.0的條件下50μL溶液中結(jié)合質(zhì)粒DNA，TEM負(fù)染色檢測其形成了100-200nm的納米尺寸的復(fù)合物，在N/P比為5時轉(zhuǎn)染擬南芥原生質(zhì)體平均效率達(dá)到65%。而高正電荷基團(tuán)的聚酰胺-胺型樹枝狀高分子（PAMAM）能夠遞送質(zhì)粒進(jìn)入具有細(xì)胞壁的植物細(xì)胞中，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因。

碳量子點(diǎn)（C-dots）作為具有獨(dú)特物理化學(xué)性質(zhì)，特別其具有良好的生物相容性的第四主族為原料合成的納米材料，目前已被廣泛應(yīng)用到生物傳感、藥物載體和熒光成像等不同生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。相對于其他納米材料而言，C-dots作為一種新型的具有熒光性質(zhì)的零維碳納米材料，具有以下優(yōu)勢：①C-dots的相對分子質(zhì)量和粒徑都小，直徑一般在1~10 nm；碳是自然界分布最普遍的元素之一，也是構(gòu)成地球上一切生命體最重要的元素。例如，生命體的基本結(jié)構(gòu)單元氨基酸、蛋白質(zhì)、核苷酸等的骨架都是由碳元素組成的，因此，C-dots通常對生命體是無毒的或低毒性的，具有良好的生物相容性和環(huán)境友好性；③具有一元激發(fā)多元發(fā)射的熒光性質(zhì)，同時還具有優(yōu)異的寬吸收窄發(fā)射特性。在C-dots具有生物學(xué)和材料學(xué)多個優(yōu)點(diǎn)的基礎(chǔ)上，以細(xì)胞自身存在的有機(jī)物結(jié)合已有的功能性大分子，或直接以特殊細(xì)胞內(nèi)含物如硅藻等合成小粒徑的碳量子點(diǎn)等納米材料已有研究報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的第一個目的是提供一種碳量子點(diǎn)納米材料，具有轉(zhuǎn)基因效率高，可降解，毒性低等特點(diǎn)。本發(fā)明的第二個目的是提供一種上述碳量子點(diǎn)納米材料的制備方法。本發(fā)明第三個目的是提供上述碳量子點(diǎn)納米材料的應(yīng)用。

技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種碳量子點(diǎn)納米材料的制備方法：取檸檬酸、巰基乙胺、聚乙烯亞胺，溶于超純水中，攪拌混勻，超聲處理，在120 – 170 ℃，微波加熱處理，將反應(yīng)合成完的混合物經(jīng)透析袋在超純水中透析，完成后真空旋轉(zhuǎn)干燥儀干燥，收集材料即可。

所述的碳量子點(diǎn)納米材料的制備方法，檸檬酸與巰基乙胺質(zhì)量比不小于1，聚乙烯亞胺與巰基乙胺的質(zhì)量比為1-5。

所述的碳量子點(diǎn)納米材料的制備方法，超聲功率為200 W、頻率為28 KHz，超聲3 min。

所述的碳量子點(diǎn)納米材料的制備方法，其特征在于：微波功率是500 W，加熱10 min。

所述的碳量子點(diǎn)納米材料的制備方法，在45 ℃的超純水中透析36 h，10 h換一次超純水。

所述的碳量子點(diǎn)納米材料的制備方法所獲得的碳量子點(diǎn)納米材料。帶正電荷，粒徑小，具有高亮度熒光的碳量子點(diǎn)，其能吸附帶負(fù)電荷的物質(zhì)，如核酸分子，以適合的配比結(jié)合形成的復(fù)合物能夠親和細(xì)胞壁，并且與細(xì)胞膜互作，激活細(xì)胞內(nèi)吞作用，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，實(shí)現(xiàn)外源物質(zhì)的遞送。

所述的碳量子點(diǎn)納米材料作為細(xì)胞壁熒光標(biāo)記物的應(yīng)用。

所述的碳量子點(diǎn)納米材料作為促進(jìn)動植物細(xì)胞內(nèi)吞及高效吸收外界溶液的材料的應(yīng)用。

所述的碳量子點(diǎn)納米材料作為實(shí)現(xiàn)遞送核酸轉(zhuǎn)染具細(xì)胞壁的植物完整細(xì)胞的材料的應(yīng)用。

有益效果：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明其有以下優(yōu)勢：

一、合成方法簡單高效：本發(fā)明所使用的反應(yīng)底物都能夠在水中溶解，因此采用水分散體系，溶解無苛刻條件，使用微波合成儀，可方便的調(diào)節(jié)參數(shù)實(shí)現(xiàn)巰基乙胺的調(diào)諧合成功能。

二、產(chǎn)物性能可調(diào)諧：本發(fā)明合成的聚合物或碳量子點(diǎn)有在紫外光照下可以發(fā)出高亮度的藍(lán)白色熒光，也有不具熒光的材料，但其在其他方面如正電性等性能會相對更加優(yōu)異。具有高亮度熒光的材料可應(yīng)用于熒光可視化分析，而高正電性的材料可以作為吸附載體，吸附裝載核酸，藥物或營養(yǎng)物等貨物。

三、屏蔽表面活性基團(tuán)，利于細(xì)胞壁擴(kuò)散，激活細(xì)胞內(nèi)吞：與僅使用檸檬酸和巰基乙胺合成的高分子聚合物相比，本發(fā)明獲得的材料具高亮度的熒光發(fā)光，粒徑小而均勻，水相分散度很高，不形成團(tuán)聚物。而且不粘附在細(xì)胞壁外表面，能夠進(jìn)入細(xì)胞壁中彌散，可應(yīng)用為細(xì)胞壁活性熒光染料。碳量子點(diǎn)在超純水中保存兩年后，熒光特性不發(fā)生改變。

四、實(shí)現(xiàn)生物學(xué)功能多：本發(fā)明合成的材料基于帶有高正電荷的陽離子聚合物，以及具有潛在生物活性的巰基乙胺，以及生物糖代謝中間產(chǎn)物檸檬酸，經(jīng)微波可控輔熱合成的復(fù)合物的毒性可調(diào)整的非常低，而且能夠?qū)⒎磻?yīng)底物的各自的功能進(jìn)行整合，如PEI吸附質(zhì)粒等帶負(fù)電的物質(zhì)等，并且獲得更多性能如高亮度的熒光發(fā)光。所以本發(fā)明所訴的調(diào)諧合成方法可優(yōu)化合成適合多個應(yīng)用場景的材料，如適用于細(xì)胞壁生物成像的高亮度碳量子點(diǎn)；以正電荷基團(tuán)吸附并遞送質(zhì)粒的核酸遞送載體，刺激細(xì)胞內(nèi)吞的材料等。

附圖說明

圖1是實(shí)施例1在白光、紫外光照射下的合成材料圖；

圖2是實(shí)施例1合成材料的DLS粒徑圖；

圖3是實(shí)施例1合成材料的Zeta電位圖；

圖4是實(shí)施例1合成材料的紫外吸收光譜圖；

圖5是實(shí)施例1合成材料的熒光光譜圖；

圖6是實(shí)施例1合成材料在蔡司顯微鏡不同熒光通道下的熒光發(fā)光圖；

圖7是實(shí)施例1合成材料與鵝掌楸懸浮系細(xì)胞共孵育24h后低倍鏡下（100×）檢測細(xì)胞中熒光分布圖；

圖8是實(shí)施例1合成材料在超純水中處理鵝掌楸懸浮系單細(xì)胞后的細(xì)胞熒光分布圖；

圖9是實(shí)施例1合成材料在PBS中處理鵝掌楸懸浮系單細(xì)胞后的細(xì)胞熒光分布圖；

圖10是實(shí)施例1合成材料與鵝掌楸懸浮系細(xì)胞共孵育48h后的細(xì)胞紫外吸收與熒光光譜圖；a，紫外吸收光譜；b，超純水空白對照組熒光光譜；c，PBS與合成材料處理組熒光光譜；d，超純水與合成材料處理組熒光光譜；

圖11是實(shí)施例1合成材料與鵝掌楸細(xì)胞吸附36h后細(xì)胞的流式熒光檢測圖譜圖；a為經(jīng)合成材料處理的細(xì)胞圖譜，b為未處理的細(xì)胞圖譜；a-1，b-1：λ_ex = 355 nm， λ_em = 410 – 510 nm通道檢測熒光強(qiáng)度與細(xì)胞粒度（SSC）的細(xì)胞分布圖譜；a-2，b-2： λ_ex = 355 nm、λ_em = 410 - 510和λ_ex = 488 nm、λ_em = 490 - 570 nm通道檢測熒光強(qiáng)度的細(xì)胞分布圖譜；

圖12是實(shí)施例2使用實(shí)施例一合成材料吸附質(zhì)粒后的與鵝掌楸懸浮細(xì)胞共孵育24h后介導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)染圖；實(shí)現(xiàn)瞬時表達(dá)；

圖13是實(shí)施例3優(yōu)選反應(yīng)物配比與反應(yīng)條件合成的熒光碳點(diǎn)在超純水中激活細(xì)胞內(nèi)吞作用圖；紅色箭頭所示結(jié)構(gòu)為內(nèi)吞泡膜，綠色箭頭所示結(jié)構(gòu)為內(nèi)吞泡內(nèi)部。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的具體范圍。

實(shí)施例1

將0.15 g 檸檬酸，0.13 g 巰基乙胺，0.1 g 聚乙烯亞胺（Mw = 800），溶于3 mL 超純水，攪拌混勻，超聲（功率200 W，頻率28 KHz）3 min，170 ℃，單模微波合成儀（功率500 W）加熱10 min，將反應(yīng)合成完的混合物經(jīng)透析袋（Mwco: 1000）在45 ℃的超純水中透析36 h，10 h換一次超純水，真空旋轉(zhuǎn)干燥儀干燥后收集材料，用紫外燈（305 nm，365 nm）檢測熒光發(fā)光，如圖1所示，合成材料在白光下呈透明的棕黃色，在紫外燈（305 nm，365 nm）下具有高亮度的熒光發(fā)光。馬爾文粒徑儀檢測合成材料的DLS粒徑和Zeta電位值，其粒徑約0.7 nm，相對較?。凰鶐檎姾?，約+8.18 mV，因此其能夠吸附帶負(fù)電的質(zhì)粒，以及親和吸附帶負(fù)電荷的細(xì)胞壁，見圖2和圖3。如圖4所示使用紫外/可見分光光度計(jì)紫外吸收光譜可發(fā)現(xiàn)其紫外吸收波長范圍為300 - 400 nm，最大紫外吸收峰在350 nm左右。熒光分光光度計(jì)檢測其熒光光譜。發(fā)現(xiàn)其熒光發(fā)射波長范圍在400-525 nm之間，最大熒光發(fā)射波長在450 nm左右，見圖5。將材料用1 μL的移液槍，滴加在載玻片上，在60 ℃烘箱中烘干，于蔡司熒光顯微鏡熒光檢測通道下檢測熒光發(fā)光。其能在多個熒光檢測通道如FITC（λex = 455-495 nm，λem = 505-555 nm），CFP（λex = 426-446 nm，λem = 460-500 nm）中被檢測到，見圖6。將制備的材料與懸浮系單細(xì)胞共孵育，在蔡司熒光顯微鏡中，使用低倍物鏡，其視野里的所有細(xì)胞的細(xì)胞壁都具有合成材料特異性熒光，表明其熒光強(qiáng)度高，如圖7所示。

用300目細(xì)胞篩取懸浮培養(yǎng)的鵝掌楸單細(xì)胞，平分后3000 rpm離心8 min，吸去上清，分別加入細(xì)胞培養(yǎng)PBS（pH = 7.4）溶液和超純水，吹打懸浮細(xì)胞后，取兩種細(xì)胞懸浮液各2 mL，分別加入100 μL 合成材料，混勻，分別以未加納米材料的細(xì)胞懸浮液作對照組。23 ℃，暗培養(yǎng)，24h后取500 μL清洗兩次后蔡司熒光顯微鏡檢測合成材料吸附細(xì)胞結(jié)果；對比圖8與圖9發(fā)現(xiàn)使用透明的棕黃色合成材料處理用超純水或PBS懸浮的細(xì)胞，在共孵育中，溶液由透明的黃色，變的無色透明，細(xì)胞清洗后，超純水體系下結(jié)合合成材料的細(xì)胞呈棕黃色，而PBS體系下結(jié)合合成材料的細(xì)胞的棕黃色較淺，合成材料可能被細(xì)胞吸收降解。分析超純水對照及PBS環(huán)境下細(xì)胞的熒光分布，合成材料與鵝掌楸細(xì)胞共孵育24 h后，都能夠在整個細(xì)胞壁中分布，特別是未直接接觸溶液分裂后期細(xì)胞的細(xì)胞板中也檢測到熒光信號（圖9橙色箭頭所示），表明熒光碳點(diǎn)在細(xì)胞壁的分布不具有特異性，而且可能在細(xì)胞壁中能夠擴(kuò)散的。在48 h后使用紫外/可見分光光度計(jì)，熒光分光光度計(jì)測量清洗兩次后的細(xì)胞的紫外吸收光譜和熒光光譜。由圖10所示，經(jīng)過合成材料分別在超純水與PBS中共孵育處理的懸浮系單細(xì)胞的紫外吸收光譜與熒光光譜，在超純水中經(jīng)合成材料處理后的紫外吸收光譜與未處理的較為相似的圖譜，而細(xì)胞在PBS中經(jīng)合成材料處理后的紫外吸收光譜與前兩者明顯不同，隨檢測波長的增加吸收強(qiáng)度呈逐漸下降趨勢；比較這三個處理組的熒光光譜，可知，在PBS中經(jīng)合成材料處理的細(xì)胞具有的材料特異性熒光波峰與超純水中經(jīng)合成材料處理的細(xì)胞的材料特異性熒光發(fā)射波峰相比更為顯著；合成材料仍然需要外界溶液中特異性離子在共孵育48h后使細(xì)胞產(chǎn)生質(zhì)壁分離，并激活內(nèi)吞，在與壁分離的細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)形成圓形較明顯的具有合成材料特異性熒光的內(nèi)吞泡。

對每隔7天繼代2次懸浮培養(yǎng)的懸浮細(xì)胞在第三次培養(yǎng)的第三天進(jìn)行300目細(xì)胞篩多次過篩，獲得大小適合流式細(xì)胞儀檢測或篩選的細(xì)胞，與熒光碳點(diǎn)合成材料共孵育36 h后，用PBS清洗3次后，再次懸浮進(jìn)行流式細(xì)胞儀相應(yīng)熒光通道檢測。

在利用合成材料的熒光對與懸浮細(xì)胞相互作用的可視化研究基礎(chǔ)上，通過過篩獲得大小適合流式細(xì)胞儀檢測分選的懸浮系單細(xì)胞，將其在PBS中經(jīng)合成材料處理后，用流式細(xì)胞儀檢測，處理后細(xì)胞粒度（SSC）更加集中，比空白對照形成明顯的峰型，λex = 355 nm，λem = 410-510 nm的檢測通道適合檢測合成材料的熒光，共孵育后的細(xì)胞與對照相比，在此通道下檢測發(fā)現(xiàn)具有更高熒光強(qiáng)度的細(xì)胞個數(shù)相對增多，表明合成材料對細(xì)胞親和吸附的能力較好，有較多細(xì)胞具有合成材料的特異性高強(qiáng)度的熒光，見圖11。

實(shí)施例2

將20 μL實(shí)施例1合成的材料在水體系分散的，與10 μg質(zhì)粒加入超純水中，補(bǔ)足總量為50 μL，在超聲波清洗儀中冰浴超聲震蕩3min，置于暗處靜置結(jié)合30 min后，加入經(jīng)300目細(xì)胞篩過篩鵝掌楸懸浮系單細(xì)胞中，混勻，然后轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)板，添加1 mL超純水，24 h后觀察熒光碳點(diǎn)在鵝掌楸懸浮系細(xì)胞中的分布。由實(shí)施例1可知合成材料具有一定的正電荷基團(tuán)，能夠通過靜電作用吸附質(zhì)粒，與細(xì)胞共孵育能夠吸附細(xì)胞壁，如圖12所示，吸附GFP綠色熒光蛋白表達(dá)質(zhì)粒能夠遞送進(jìn)入細(xì)胞中表達(dá)，使整個細(xì)胞質(zhì)都存在高亮度的綠色熒光，這與單獨(dú)使用合成材料與細(xì)胞相互作用后熒光分布是明顯不同的，合成材料能夠遞送質(zhì)粒進(jìn)入具有細(xì)胞壁的完整植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。

實(shí)施例3

使用反應(yīng)底物的不同配比，在不同反應(yīng)溫度下經(jīng)微波合成儀10 min反應(yīng)合成材料，將0.15 g 檸檬酸，0.08 g 巰基乙胺，0.2 g 聚乙烯亞胺（Mw = 800），溶于3 mL 超純水，攪拌混勻，超聲3 min，150 ℃，微波合成儀加熱10 min，將反應(yīng)合成完的混合物經(jīng)透析袋（Mwco: 1000）在45 ℃的超純水中透析36 h，10 h換一次超純水，真空旋轉(zhuǎn)干燥儀干燥后收集材料，取200 μL與1 mL鵝掌楸懸浮系單細(xì)胞在3 mL超純水中進(jìn)行共孵育24 h，用熒光顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中材料特異性熒光發(fā)現(xiàn)，合成的樣品處理的細(xì)胞中出現(xiàn)了質(zhì)壁分離，而且在多個細(xì)胞出現(xiàn)了多個分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的具有特異性熒光的內(nèi)吞泡，可能在此條件下合成的樣品能夠激發(fā)細(xì)胞內(nèi)吞作用。如圖13所示。

本發(fā)明是使用巰基乙胺調(diào)諧聚乙烯亞胺與檸檬酸，由微波輔助可控水熱合成法制備出碳量子點(diǎn)，反應(yīng)底物中聚乙烯亞胺為分子量可變的陽離子聚合物，控制不同分子量的聚乙烯亞胺和巰基乙胺用量的質(zhì)量比范圍為1~5之間，控制反應(yīng)溫度（120 - 170℃）和反應(yīng)時長（6 - 10 min），有利于設(shè)置不同條件，輔助巰基乙胺調(diào)諧聚乙烯亞胺與檸檬酸的水熱合成產(chǎn)物的性能變化，可優(yōu)選出具有高水相分散性，低細(xì)胞毒性的植物活細(xì)胞的細(xì)胞壁熒光標(biāo)記物，或促進(jìn)動植物細(xì)胞內(nèi)吞及高效吸收外界溶液的材料，或?qū)崿F(xiàn)遞送核酸轉(zhuǎn)染具細(xì)胞壁的植物完整細(xì)胞的材料。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干改進(jìn)，這些改進(jìn)也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。