3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸衍生物及其應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新的化合物，具有以下結構通式：其中，R選自：H、直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈的C1-C4羥烷基、直鏈或支鏈的C1-C4巰基烷基、直鏈或支鏈的C1-C4烷基羧基、以及C1-C4烷基酰胺基。本發(fā)明的化合物對于氨肽酶N具有較好的抑制活性，可用于制備氨肽酶N抑制劑。
【專利說明】
3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨釀-異亮氨酸衍生物及其 應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于化學合成技術領域，具體涉及3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異 亮氨酸衍生物及其應用。
【背景技術】
[0002] 上海來益生物藥物研究開發(fā)中心有限責任公司的ZL 201110076554. 6號中國發(fā) 明專利公開了從CGMCC No. 4027的代謝產(chǎn)物中分離得到了以下結構式（1)的化合物，命名 為：3_ 氨基-2-羥基-4-苯基-繳氨酰-異亮氨酸（3-amin〇-2-hydroxy-4_phenylbutano yl-valyl-isoleucine)：
[0003]
[0004] ZL 201110076555. 0號中國發(fā)明專利中，進一步公開了該化合物具有氨肽酶N抑 制活性，可用于制備氨肽酶N抑制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本申請的發(fā)明人在進一步的研發(fā)中，在3-氨基-2-羥基-4-苯基-結|氨酰-異亮 氨酸，即結構式（1)的母體化合物，的基礎上，合成了一系列衍生化合物，經(jīng)過對這些衍生 物的氨肽酶N抑制活性進行研究后發(fā)現(xiàn)，這些衍生物的氨肽酶N抑制活性相比結構式（1) 的母體化合物均有了實質(zhì)性的提高。
[0006] 因此，本發(fā)明的第一個目的，在于提供一種結構式（1)的化合物的衍生物，所述衍 生物具有以下結構通式：
[0007]
[0008] 其中，R選自：H、直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈的C1-C4羥烷基、直鏈或支鏈 的C1-C4巰基烷基、直鏈或支鏈的C1-C4烷基羧基、以及C1-C4烷基酰胺基。
[0009] 本發(fā)明的另一個目的，在于提供上述通式化合物的應用，用于制備氨肽酶N抑制 劑。
[0010] 本發(fā)明的上述結構式（1)的衍生物，對于氨肽酶N的抑制活性相比結構式（1)的 化合物均有顯著的提升，IC 5。普遍提高了一個數(shù)量級以上，對于開發(fā)氨肽酶N抑制劑具有非 常重要的意義。
【具體實施方式】
[0011] 以下結合具體實施例，對本發(fā)明的3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸 衍生物的合成以及氨肽酶N抑制活性作進一步詳細說明。應理解，以下實施例僅用于說明 本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0012] 一、合成實施例
[0013] 以結構式⑴為母體化合物，合成一系列的衍生物，具體如下：
[0014] 實施例1
[0015] 反應式如下：
[0017] 合成步驟如下：
[0018] l、100ml三口燒瓶中，投入4.07g(0.01mol)化合物（l)，22ml四氫呋喃，冰水浴下 滴加22ml的氫氧化鈉溶液（lmol/1)，攪拌20min，滴加0.0 llmol芐氧羰基氯，自然升溫反 應，TLC跟蹤，反應完畢后，倒入冰水中，乙酸乙酯提取，有機層用飽和鹽水洗滌，干燥，抽濾， 濾液濃縮，得到化合物（2) 4g，摩爾收率為73. 9%。
[0019] 2、100ml三口燒瓶中，N2置換保護下，投入化合物（2) 4g和2. 9g L-異亮氨酸芐酯 對甲苯磺酸鹽，2. 4gTBTU，60ml二氯甲烷，冰水浴下降溫至0°C，緩緩滴入3. 4ml二異丙基乙 胺，滴加完畢后自然升溫反應，TLC跟蹤，反應完畢后倒入冰水中，分層，有機層用飽和鹽水 洗滌，干燥，抽濾，濾液濃縮得到化合物（3) 4. 8g，摩爾收率為87 %。
[0020] 3、100ml單口燒瓶中，投入4. 8g化合物（3)，50ml甲醇，0.24g鈀碳，氫氣球置換三 次，在氫氣保護條件下常溫攪拌反應，TLC跟蹤，反應完畢后，抽濾濾掉鈀碳，甲醇洗滌兩次， 濾液濃縮，二氯甲烷打漿得到2. 6g化合物（4)，摩爾收率為77. 5%。4 NMR(500MHz，DMS0) δ :〇· 8 (m，18H)，1. 4 (m，2H)，1. 7 (m，2H)，2. 0 (m，2H)，2. 5 (m，3H)，2. 8 (m，1H)，3. 2 (m，1H)， 3. 8 (s，1H)，4. 0 (m，1H)，4. 3 (m，2H)，7. 3 (m，5H)，7. 8 (s，2H)，8. 0 (m，1H) ;ESI-MS m/z : 521[M+H+] 〇
[0021] 實施例2
[0022] 反應式如下：
[0024] 合成步驟如下：
[0025] l、100ml三口燒瓶中，投入4. 07g(0.0 lmol)化合物（l)，22ml四氫呋喃，冰水浴下 滴加22ml的氫氧化鈉溶液（lmol/1)，攪拌20min，滴加0.0 llmol芐氧羰基氯，自然升溫反 應，TLC跟蹤，反應完畢后，倒入冰水中，乙酸乙酯提取，有機層用飽和鹽水洗滌，干燥，抽濾， 濾液濃縮，得到化合物（2) 4g，摩爾收率為73. 9%。
[0026] 2、100ml三口燒瓶中，N2置換保護下，投入化合物（2) 4g和2. 9g L-亮氨酸芐酯對 甲苯磺酸鹽，2. 4gTBTU，60ml二氯甲烷，冰水浴下降溫至0°C，緩緩滴入3. 4ml二異丙基乙 胺，滴加完畢后自然升溫反應，TLC跟蹤，反應完畢后倒入冰水中，分層，有機層用飽和鹽水 洗滌，干燥，抽濾，濾液濃縮得到化合物（5) 5g，摩爾收率為90 %。
[0027] 3、100ml單口燒瓶中，投入5g化合物（5)，50ml甲醇，0.25g鈀碳，氫氣球置換三 次，在氫氣保護條件下常溫攪拌反應，TLC跟蹤，反應完畢后，抽濾濾掉鈀碳，甲醇洗滌兩次， 濾液濃縮，二氯甲烷打漿得到2. 7g化合物（6)，摩爾收率為77 %。4 NMR (500MHz，DMS0) δ :〇· 8 (m，18H)，1. 5 (m，2H)，1. 7 (m，2H)，2. 0 (m，2H)，2. 5 (m，3H)，2. 8 (m，1H)，3. 2 (m，1H)， 4. 0 (m，1H)，4. 1 (m，1H)，4. 2 (m，2H)，7. 3 (m，5H)，7. 8 (s，2H)，8. 0 (m，1H) ;ESI-MS m/z : 521[M+H+] 〇
[0028] 實施例3
[0029] 反應式如下：
[0031] 合成步驟如下：
[0032] l、100ml三口燒瓶中，投入4. 07g(0.0 lmol)化合物（l)，22ml四氫呋喃，冰水浴下 滴加22ml的氫氧化鈉溶液（lmol/1)，攪拌20min，滴加0.0 llmol芐氧羰基氯，自然升溫反 應，TLC跟蹤，反應完畢后，倒入冰水中，乙酸乙酯提取，有機層用飽和鹽水洗滌，干燥，抽濾， 濾液濃縮，得到化合物（2) 4g，摩爾收率為73. 9%。
[0033] 2、100ml三口燒瓶中，N2置換保護下，投入化合物（2)4g和2. 8g L-纈氨酸芐酯對 甲苯磺酸鹽，2. 4gTBTU，60ml二氯甲烷，冰水浴下降溫至0°C，緩緩滴入3. 4ml二異丙基乙 胺，滴加完畢后自然升溫反應，TLC跟蹤，反應完畢后倒入冰水中，分層，有機層用飽和鹽水 洗滌，干燥，抽濾，濾液濃縮得到化合物（7) 4. 8g，摩爾收率為89 %。
[0034] 3、100ml單口燒瓶中，投入4. 8g化合物（7)，50ml甲醇，0.25g鈀碳，氫氣球置換三 次，在氫氣保護條件下常溫攪拌反應，TLC跟蹤，反應完畢后，抽濾濾掉鈀碳，甲醇洗滌兩次， 濾液濃縮，二氯甲烷打漿得到2. 6g化合物（8)，摩爾收率為78 %。4 NMR (500MHz，DMS0) δ :〇· 8 (m，18H)，1. 4 (m，1H)，1. 7 (m，1H)，2. 0 (m，2H)，2. 5 (m，3H)，2. 8 (m，1H)，3. 2 (m，1H)， 3. 9 (s，1H)，4. 0 (m，1H)，4. 3 (m，2H)，7. 3 (m，5H)，7. 8 (s，2H)，8. 1 (m，1H) ;ESI-MS m/z : 507. 3 [M+H+] 〇
[0035] 參照以上方法合成了一系列衍生物，具體如表1所示。
[0036] 對于本領域的技術人員來說，參照以上實施例1-3的方法很容易獲得表1中所列 結構式（9)~（24)的化合物，因此這里不再逐一描述。另外，雖然以上實施例在第二步反 應中均使用了 L-型氨基酸基團，但D-型氨基酸基團同樣適用，這對于本領域的技術人員來 說是顯而易見的，因此同樣屬于本發(fā)明涵蓋的范圍。
[0037] 二、氨肽酶N抑制活性實施例
[0038] 實施例4
[0039] 本實施例以上述合成的結構式（4)、（6)、（8)~（24)的化合物（表1所列）為例， 驗證這些化合物對氨肽酶N的抑制活性，同時以母體化合物（結構式（1)的化合物）為對 照，具體如下：
[0040] 測定方法（參照ZL201110076555. 0號中國發(fā)明專利）
[0041] 在96孔板中加入底物（L-亮氨酰對硝基苯胺）100 μ 1 (lmg/ml，溶于0. 1M 1^8-!1(：1，？!17.0)，不同濃度梯度的待測化合物2(^1(0.邡1^8-!1(：1，？!17.0)，37°(：， 3min 反應，再加入氨肽酶 N(L5006-25UN，Sigma)溶液 20yl(2mU，0· 1M Tris-HCl，pH 7.0)， 37°C，反應30min，后于405nm波長處測定吸收值。
[0042] 按照如下公式計算抑制率：
[0043] 抑制率=(A_B)/A*100%
[0044] 其中A為不含抑制劑的反應體系測得的吸收度，B為含有不同濃度待測化合物的 反應體系測得的吸收度，用0. 1M Tris-HCl，pH 7.0的緩沖液調(diào)零。在所得數(shù)據(jù)系列中找出 抑制率在50%左右所對應的各化合物濃度，即為其半數(shù)抑制濃度IC5。。
[0045] 按上述方法試驗獲得的一系列衍生物的氨肽酶N抑制活性結果如表2所示：
[0046] 表2、氨肽酶N抑制活性
[0047]
[0049] *平均值，取自3組重復實驗結果
[0050] 由以上表1的結果可見，本發(fā)明合成的結構式（1)的一系列衍生物，其氨肽酶N抑 制活性相比母體化合物（結構式（1))都有了顯著的提升，IC 5。普遍提高了一個數(shù)量級以上， 對于開發(fā)新的氨肽酶N抑制劑具有非常重要的意義。
[0051]




【主權項】
1. 一種新化合物，其特征在于，所述化合物具有W下結構通式：其中，R選自：H、直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈的Cl-C4^烷基、直鏈或支鏈的 C1-C4琉基烷基、直鏈或支鏈的C1-C4烷基簇基、W及C1-C4烷基酷胺基。2. 如權利要求1所述的化合物的應用，其特征在于，用于制備氨膚酶N抑制劑。
【文檔編號】C12N9/48GK105985405SQ201510076300
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月13日
【發(fā)明人】戈梅, 王濤, 鐃敏, 羅敏玉, 夏興
【申請人】上海來益生物藥物研究開發(fā)中心有限責任公司