一種復合微生物菌劑及其制備方法和應用
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種醋糟發(fā)酵的復合微生物菌劑，所述菌劑包含混合真菌；所述混合真菌由黃孢原毛平革菌、康氏木霉、黑曲霉和無花果曲霉混合組成。本發(fā)明還提供了上述菌劑的制備方法及其在醋槽發(fā)酵中的應用。降低醋糟中的粗纖維含量，增加醋糟中容易消化的還原糖含量，增加醋糟中水解酶的活性，提高醋糟的飼用價值。CGMCC No. 298020090327
【專利說明】
一種復合微生物菌劑及其制備方法和應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于有機廢棄物農(nóng)用資源化的微生物技術處理領域，涉及一種能促進醋糟 發(fā)酵的復合微生物菌劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 醋糟是以淀粉質(zhì)原料為主料固態(tài)發(fā)酵釀造食醋過程中產(chǎn)生的殘渣。我國食醋年產(chǎn) 量為200~250萬噸，且每年以7%的速度逐年增長。按照生產(chǎn)1噸標準固態(tài)發(fā)酵二級食醋產(chǎn) 生0.6~0.7噸醋糟計算，我國年產(chǎn)醋糟量為120~175萬噸。如此豐富且成本低廉的醋糟資 源目前尚未得到充分合理的利用，不僅造成資源浪費還導致環(huán)境污染。除少部分被周圍村 民直接用作飼料外，大部分被丟棄。而醋糟粗纖維含量高，適口性差，消化率低，直接飼喂 時，營養(yǎng)物質(zhì)利用率低，嚴重制約了醋糟作為飼料原料的大規(guī)模應用。
[0003] 近年來，由于微生物發(fā)酵操作簡單，成本低，經(jīng)濟環(huán)保，成為當前糟渣類資源增值 利用技術研究的熱點。利用真菌發(fā)酵，不僅可以降解醋糟中的纖維素成分，而且能增加水解 酶活性，可以顯著提高醋糟的營養(yǎng)價值和附加值。有學者對醋糟發(fā)酵工藝進行了探討研究， 但是效果并不理想，一是粗纖維含量下降幅度較低，下降幅度最高的僅為16.23%，其二是 工藝復雜，需要進行前處理，其三是發(fā)酵時間長。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 基于上述【背景技術】，本發(fā)明的目的在于降低醋糟中的粗纖維含量，增加醋糟中容 易消化的還原糖含量，增加醋糟中水解酶的活性，提高醋糟的飼用價值;并且建立成本低 廉，操作簡單，效果顯著，適合大規(guī)模應用于纖維素類廢棄物開發(fā)利用的混菌發(fā)酵工藝。
[0005] 本發(fā)明提供了 一種復合微生物菌劑，所述菌劑包含混合真菌；
[0006] 所述混合真菌由黃孢原毛平革菌(ACCC 30414)、康氏木霉(CGMCC 3.2878)、黑曲 霉(ACCC 30557)和無花果曲霉(NTG-23)組成;優(yōu)選地，以混合真菌中的真菌數(shù)量比例計所 述黃孢原毛平革菌:康氏木霉為:黑曲霉:無花果曲霉的比例為（1~4):(1~4):(1~4):(1 ~4);更優(yōu)選地，所述黃孢原毛平革菌、康氏木霉、黑曲霉和無花果曲霉以1:1:1:1的真菌 數(shù)量比例混合組成。
[0007] 本發(fā)明還提供了上述菌劑的制備方法，所述方法包括：
[0008] 1)將黃孢原毛平革菌、康氏木霉于28°C分別獨立地在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5~8天；
[0009] 同時，將黑曲霉和無花果曲霉于28°C分別獨立地在察氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)5~8天； [0010] 2)以無菌生理鹽水于無菌環(huán)境下分別將步驟1)中所述四種菌的孢子洗脫，得到分 別含有黃孢原毛平革菌孢子的溶液、含有康氏木霉孢子的溶液、含有黑曲霉孢子的溶液和 含有無花果曲霉孢子的溶液；
[0011] 3)將步驟2)得到的四種孢子溶液分別于室溫下以150rpm震蕩4小時；
[0012] 4)將步驟3)處理后的分別孢子溶液分別過濾，得到黃孢原毛平革菌孢子懸液、康 氏木霉孢子懸液、黑曲霉孢子懸液和無花果曲霉孢子懸液；
[0013] 5)將步驟4)得到的黃孢原毛平革菌孢子懸液、康氏木霉孢子懸液、黑曲霉孢子懸 液和無花果曲霉孢子懸液以相應的比例混合，即得菌劑；
[0014] 優(yōu)選地，所述步驟5)還包括將所述黃孢原毛平革菌孢子懸液、康氏木霉孢子懸液、 黑曲霉孢子懸液和無花果曲霉孢子懸液調(diào)整至以孢子/ml計的相同的濃度;更優(yōu)選地，所述 黃孢原毛平革菌孢子懸液、康氏木霉孢子懸液、黑曲霉孢子懸液和無花果曲霉孢子懸液以 體積比1:1:1:1混勾。
[0015] 在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，步驟4)中過濾是將孢子溶液通過8層紗布實現(xiàn) 的。
[0016] 在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，步驟5)中孢子懸液的濃度為1 X 106個孢子/ml。
[0017] 在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，步驟6)所述菌劑為干燥后密封的干粉菌劑;優(yōu) 選為通過真空冷凍干燥處理獲得。
[0018] 本發(fā)明進一步提供了一種醋糟發(fā)酵的方法，所述方法包括：
[0019] a)以g:ml計將比例為3:7的醋糟與礦物元素培養(yǎng)液混勻，得到醋糟固體培養(yǎng)基；
[0020] 其中，所述礦物元素培養(yǎng)液以去離子水為溶劑，含有Tween-80?2g/L、NaN〇3 2g/ L、KH2P〇4 1.5g/L、CaCl2 0.3g/L、MgS〇4*7H20 0.3g/L、FeS〇4*7H20 0.005g/L、MnS〇4*H20 0.0016g/L、ZnS〇4 · 7H20 0.0014g/L、CoCl2 · 6H20 0.0005g/L，并且所述礦物元素培養(yǎng)液通 過5M NaOH和1M HC1將pH值調(diào)整為6;
[0021] b)向步驟a)所述的醋糟固體培養(yǎng)基中加入相當于醋糟質(zhì)量的1%的尿素，混勻； [0022] C)向經(jīng)步驟b)處理的醋糟固體培養(yǎng)基中加入相當于醋槽質(zhì)量的0.03%的MnS〇4 · H20，混勻，進行滅菌處理并冷卻；
[0023] d)向經(jīng)步驟c)處理的醋糟固體培養(yǎng)基中加入所述的菌劑，以25°C發(fā)酵培養(yǎng)5天。
[0024]在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，步驟d)中，菌劑的加入量為第30g醋糟對應的加 入4X106個孢子的菌劑。
[0025]在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，當所述菌劑為干粉狀態(tài)時，以無菌生理鹽水復 溶制備孢子懸液;優(yōu)選地，孢子懸液的濃度為4 X 106個孢子/ml。
[0026] 更進一步地，本發(fā)明提供了通過上述方法得到的發(fā)酵產(chǎn)物，所述發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)真空 冷凍干燥處理，冷凍干燥處理的時間為48小時；優(yōu)選地，所述發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥后，粉碎 并密封裝袋。
[0027] 本發(fā)明還提供了上述發(fā)酵產(chǎn)物在制備飼料中的應用；優(yōu)選地，所述飼料選自家禽 飼料、家畜飼料、水產(chǎn)飼料。
[0028] 另一方面，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0029 ] 1、混菌組合:黃孢原毛平革菌、康氏木霉、黑曲霉和無花果曲霉NTG-23。
[0030] 2、發(fā)酵后的變化：
[0031] (1)還原糖含量提高。
[0032] (2)羧甲基纖維素酶活性提高。
[0033] (3)木聚糖酶活性提高。
[0034] (4)纖維素含量下降。
[0035] (5)半纖維素含量下降。
[0036] (6)木質(zhì)素含量下降。
[0037] (7)粗纖維含量下降。
[0038] 3、發(fā)酵周期短。
[0039] 4、發(fā)酵過程簡單，醋糟未經(jīng)前處理。
【具體實施方式】
[0040]下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明，應當理解，實施例僅用于進一步說明和闡釋 本發(fā)明，并非用于限制本發(fā)明。
[0041 ]除非特別指明，本發(fā)明所使用的試劑和材料均可通過商業(yè)途徑獲得。
[0042]除非特別指明，本發(fā)明所涉及的黃孢原毛平革菌、黑曲霉均可通過商業(yè)途徑獲得。 其中，黃孢原毛平革菌、黑曲霉可由位于北京市海淀區(qū)中關村南大街12號的中國農(nóng)業(yè)微生 物菌種保藏管理中心(ACCC)購得，黃孢原毛平革菌的保藏號為ACCC 30414,黑曲霉保藏號 為ACCC 30557;康氏木霉和無花果曲霉NTG-23由位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號的中 國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC)保藏，康氏木霉保藏號為CGMCC No . 3.2878,無花果曲霉NTG-23保藏號為CGMCC No . 2980(分類命名：無花果曲霉 Aspergillus ficuum，保藏日期：2009年03月27日。
[0043]實施例1培養(yǎng)基制備
[0044] PDA培養(yǎng)基配方(g/L):馬鈴薯浸粉3.0，葡萄糖20.0，瓊脂15.0，自然pH。
[0045] 察氏培養(yǎng)基配方（g/L):蔗糖30.0,瓊脂 12.0，NaN03 3.0，MgS〇4 · 7H20 0.5，KCL 0.5，F(xiàn)eS〇4.7H20 0·01，Κ2ΗΡ〇4 1.0,自然pH。
[0046] 按照配方配制，經(jīng)過煮沸，裝入干凈錐形瓶，封口膜封口，皮筋扎緊，121°C高壓滅 菌20min，結(jié)束后取出置于超凈工作臺（開紫外殺菌和通風），冷卻至40-60°C，倒入無菌的平 皿中（均勻，水平，無氣泡），冷卻凝結(jié)呈固態(tài)，備用。
[0047]實施例2菌株的培養(yǎng)
[0048] 將黃孢原毛平革菌(ACCC 30414)、康氏木霉(CGMCC 3.2878)在PDA培養(yǎng)基上活化 兩次，然后接到PDA平板培養(yǎng)基上28°C培養(yǎng)至產(chǎn)生大量孢子(一周左右）。
[0049] 將黑曲霉(ACCC 30557)、無花果曲霉(NTG-23)在察氏培養(yǎng)基上活化兩次，然后接 到察氏平板培養(yǎng)基上28°C培養(yǎng)至產(chǎn)生大量孢子(一周左右）。
[0050]實施例3制備孢子懸液
[0051] 1.用無菌生理鹽水(0.9%NaCl溶液)將四種菌的孢子從平板上洗脫下來，分別得 到各個菌的孢子液(操作過程為無菌操作）。
[0052] 2.將獲得的孢子液置于250mL錐形瓶(裝有玻璃珠）中，室溫下150rmp搖床震蕩4h， 打碎分散孢子。
[0053] 3.震蕩后的孢子液用8層紗布過濾(用到漏斗、玻璃棒），得到孢子懸液。
[0054] 4.采用血球計數(shù)板顯微鏡下觀察計數(shù)的方法，調(diào)整各種菌的孢子懸液至1 X 106個 孢子/mL，備用。
[0055]孢子懸液也可通過真空冷凍干燥技術處理為干燥的孢子粉菌劑，以便于保存或包 裝商用。
[0056]實施例4配制醋糟固體培養(yǎng)基
[0057] 礦物元素培養(yǎng)液配方：1L水溶液含有Tween-8D?2g，NaN〇3 2g，KH2P〇4 1.5g， CaCl2 0.3g，MgS〇4.7H20 0.3g，F(xiàn)eS〇4.7H20 0.005g，MnS〇4.H2〇 0.0016g，ZnS〇4.7H2〇 0.0014g,CoCl2· 6H2O 0.0005g；
[0058] 1.配制礦物元素培養(yǎng)液:按照上述配方配制礦物元素培養(yǎng)液，然后以5M NaOH和1M HC1調(diào)整其pH值為6。
[0059] 2.將30g醋糟置于500mL錐形瓶中，加入70mL上述礦物元素培養(yǎng)液調(diào)整固體發(fā)酵培 養(yǎng)基的初始水分含量使其達到70% ;
[0060] 3.向醋糟固體培養(yǎng)基中加入1%的尿素(尿素/醋糟）（即0.3g)，充分混勻；
[00611 4.向醋糟固體培養(yǎng)基中加入0.009g的MnS04 · H20(即相當于步驟2中醋糟的質(zhì)量的 0.03%)，充分混勻；
[0062] 5.放置高壓滅菌鍋中121°C滅菌20分鐘，取出放在超凈臺里冷卻。
[0063]實施例5醋糟發(fā)酵
[0064] 1.向?qū)嵤├?中的醋糟培養(yǎng)基中加入實施例3制備的四種菌的孢子懸液(濃度1 X 106個孢子/mL)各lmL，充分混勻。
[0065] 2.置于25 °C恒溫培養(yǎng)箱中通風保濕，培養(yǎng)5天。
[0066] 3.培養(yǎng)結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物置于真空冷凍干燥中，冷凍干燥48個小時，即得到干燥 的發(fā)酵產(chǎn)物。
[0067] 4.將樣品粉碎，裝袋保存得到成品。
[0068]步驟1中也可使用無菌去離子水將孢子粉菌劑復溶為孢子懸液，并使孢子懸液濃 度調(diào)整至1 X 106個孢子/mL。使用中每30g醋糟對應地加入每種菌的孢子懸液lml，或?qū)⑺姆N 菌等比例混合后的孢子懸液4ml，或者加入相應的孢子數(shù)的菌劑。
[0069]實施例6醋糟發(fā)酵
[0070] 1.向?qū)嵤├?中的醋糟培養(yǎng)基中加入實施例3制備的四種菌的孢子懸液(濃度IX 106個孢子/mL)，其中，取孢原毛平革菌0.4ml、黑曲霉lml、黃孢原毛平革菌lml、黑曲霉 1.6ml，充分混勻。
[0071 ] 2.置于25 °C恒溫培養(yǎng)箱中通風保濕，培養(yǎng)5天。
[0072] 3.培養(yǎng)結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物置于真空冷凍干燥中，冷凍干燥48個小時，即得到干燥 的發(fā)酵產(chǎn)物。
[0073] 4.將樣品粉碎，裝袋保存得到成品。
[0074]步驟1中也可使用無菌去離子水將孢子粉菌劑復溶為孢子懸液，并使孢子懸液濃 度調(diào)整至1 X 106個孢子/mL。使用中每30g醋糟對應地將四種菌以相應比例混合后的孢子懸 液4ml，或者加入相應的孢子數(shù)的菌劑。
[0075]實施例7醋糟發(fā)酵
[0076] 1.向?qū)嵤├?中的醋糟培養(yǎng)基中加入實施例3制備的四種菌的孢子懸液(濃度IX 106個孢子/mL)其中，取孢原毛平革菌lml、黑曲霉0.4ml、黃孢原毛平革菌1.6ml、黑曲霉 lml，充分混勻。
[0077] 2.置于25 °C恒溫培養(yǎng)箱中通風保濕，培養(yǎng)5天。
[0078] 3.培養(yǎng)結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物置于真空冷凍干燥中，冷凍干燥48個小時，即得到干燥 的發(fā)酵產(chǎn)物。
[0079] 4.將樣品粉碎，裝袋保存得到成品。
[0080]步驟1中也可使用無菌去離子水將孢子粉菌劑復溶為孢子懸液，并使孢子懸液濃 度調(diào)整至1 X 106個孢子/mL。使用中每30g醋糟對應地將四種菌以相應比例混合后的孢子懸 液4ml，或者加入相應的孢子數(shù)的菌劑。
[0081 ]實施例8醋糟發(fā)酵
[0082] 1.向?qū)嵤├?中的醋糟培養(yǎng)基中加入實施例3制備的四種菌的孢子懸液(濃度IX 106個孢子/mL)其中，取孢原毛平革菌lml、黑曲霉1.6ml、黃孢原毛平革菌0.4ml、黑曲霉 lml，充分混勻。
[0083] 2.置于25 °C恒溫培養(yǎng)箱中通風保濕，培養(yǎng)5天。
[0084] 3.培養(yǎng)結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物置于真空冷凍干燥中，冷凍干燥48個小時，即得到干 燥的發(fā)酵產(chǎn)物。
[0085] 4.將樣品粉碎，裝袋保存得到成品。
[0086]步驟1中也可使用無菌去離子水將孢子粉菌劑復溶為孢子懸液，并使孢子懸液濃 度調(diào)整至1 X 106個孢子/mL。使用中每30g醋糟對應地將四種菌以相應比例混合后的孢子懸 液4ml，或者加入相應的孢子數(shù)的菌劑。
[0087]實施例9醋糟發(fā)酵
[0088] 1.向?qū)嵤├?中的醋糟培養(yǎng)基中加入實施例3制備的四種菌的孢子懸液(濃度1 X 106個孢子/mL)其中，取孢原毛平革菌1.6ml、黑曲霉1.2ml、黃孢原毛平革菌0.8ml、黑曲霉 0.4ml，充分混勻。
[0089] 2.置于25 °C恒溫培養(yǎng)箱中通風保濕，培養(yǎng)5天。
[0090] 3.培養(yǎng)結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物置于真空冷凍干燥中，冷凍干燥48個小時，即得到干燥 的發(fā)酵產(chǎn)物。
[0091 ] 4.將樣品粉碎，裝袋保存得到成品。
[0092]步驟1中也可使用無菌去離子水將孢子粉菌劑復溶為孢子懸液，并使孢子懸液濃 度調(diào)整至1 X 106個孢子/mL。使用中每30g醋糟對應地將四種菌以相應比例混合后的孢子懸 液4ml，或者加入相應的孢子數(shù)的菌劑。
[0093]實施例10發(fā)酵產(chǎn)物檢測
[0094]( - )直接使用四種菌等比例混合后進行發(fā)酵得到的發(fā)酵產(chǎn)物(如表1所示）
[0095] 1 ·還原糖產(chǎn)量達到35 · 57mg/gds，比空白組高出108 · 01 %。
[0096] 2.木聚糖酶活性達到439.07U/gds，比單菌發(fā)酵的最高值高出432.08%。
[0097] 3.羧甲基纖維素酶活性達到8.15U/gds，比單菌發(fā)酵的最高值高出243.88%。
[0098] 4.纖維素含量降低了 17.11 %。
[0099] 5.半纖維素含量降低了 68.61 %。
[0100] 6.木質(zhì)素含量降低了 14.44%。
[0101 ]表1四種菌發(fā)酵醋糟前后成分比較表

[0104] (二)對發(fā)酵后的醋糟進行檢測
[0105] 檢測方法：
[0106] 1、還原糖含量測定
[0107] 采用DNS(Miller，1959)方法測定，以葡萄糖為標準物。
[0108] 2、羧甲基纖維素酶活性和木聚糖酶活性測定
[0109] 采用DNS法測定羧甲基纖維素酶活性(Feng，et al.2011);采用DNS法測定木聚糖 酶活性（Latif，et al.2006)。
[0110] 3、纖維素、半纖維素和木質(zhì)素含量測定
[0111] 使用濾袋(ΑΝΚ0Μ)測定發(fā)酵產(chǎn)物中中性洗滌纖維(NDF)、酸性洗滌纖維(ADF)、酸性 洗滌木質(zhì)素(ADL)和灰分含量。纖維素、半纖維素和木質(zhì)素含量由計算得出，即纖維素= ADF - ADL;半纖維素= NDF - ADF;木質(zhì)素= ADL- 灰分（El-Zoghbi 1994;Van Soest，et al,1991)〇
[0112] 4、粗纖維含量測定
[0113] 采用國家標準《飼料中粗纖維的含量測定-過濾法》(GB/T 6434-2006)測定。
[0114] (三)檢測結(jié)果：
[0115] 實施例5發(fā)酵后的醋糟的檢測結(jié)果(詳見表2)如下：
[0116] 1.還原糖含量提高170.00%。
[0117] 2.羧甲基纖維素酶活性提高418.99%。
[0118] 3.木聚糖酶活性提高507.45 %。
[0119] 4.纖維素含量下降19.43%。
[0120] 5.半纖維素含量下降68.97 %。
[0121] 6.木質(zhì)素含量下降19.64%。
[0122] 7.粗纖維含量下降29.02%。
[0123] 表2醋糟混菌發(fā)酵條件優(yōu)化前后成分比較表
[0125] 采用實施例6~9的菌劑進行發(fā)酵，也獲得了與實施例10相當?shù)男Чl(fā)酵后，還原 糖含量、羧甲基纖維素酶活性、木聚糖酶活性均顯著提高，同時，醋糟中纖維素含量、半纖維 素含量下降、木質(zhì)素含量下降以及粗纖維含量均下降。
[0126] 盡管本發(fā)明已進行了一定程度的描述，明顯地，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的 條件下，可進行各個條件的適當變化?？梢岳斫?，本發(fā)明不限于所述實施方案，而歸于權利 要求的范圍，其包括所述每個因素的等同替換。
【主權項】
1. 一種醋糟發(fā)酵的復合微生物菌劑，其特征在于，所述菌劑包含混合真菌； 所述混合真菌由黃抱原毛平革菌（ACCC 30414)、康氏木霉（CGMCC 3.2878)、黑曲霉 (ACCC 30557)和無花果曲霉(NTG-23)組成;優(yōu)選地，W混合真菌中的真菌數(shù)量比例計所述 黃抱原毛平革菌:康氏木霉為：黑曲霉:無花果曲霉的比例為（1~4):(1~4):(1~4):(1~ 4);更優(yōu)選地，所述黃抱原毛平革菌、康氏木霉、黑曲霉和無花果曲霉:1:1:1的真菌數(shù)量 比例混合組成。2. 如權利要求1所述的菌劑的制備方法，其特征在于，所述方法包括： 1) 將黃抱原毛平革菌、康氏木霉于28°C分別獨立地在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5~8天； 同時，將黑曲霉和無花果曲霉于28°C分別獨立地在察氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)5~8天； 2. W無菌生理鹽水于無菌環(huán)境下分別將步驟1)中所述四種菌的抱子洗脫，得到分別含 有黃抱原毛平革菌抱子的溶液、含有康氏木霉抱子的溶液、含有黑曲霉抱子的溶液和含有 無花果曲霉抱子的溶液； 3) 將步驟2)得到的四種抱子溶液分別于室溫下W15化pm震蕩4小時； 4) 將步驟3)處理后的抱子溶液分別過濾，得到黃抱原毛平革菌抱子懸液、康氏木霉抱 子懸液、黑曲霉抱子懸液和無花果曲霉抱子懸液； 5) 將步驟4)得到的黃抱原毛平革菌抱子懸液、康氏木霉抱子懸液、黑曲霉抱子懸液和 無花果曲霉抱子懸液W相應的比例混合，即得菌劑； 優(yōu)選地，所述步驟5)還包括將所述黃抱原毛平革菌抱子懸液、康氏木霉抱子懸液、黑曲 霉抱子懸液和無花果曲霉抱子懸液調(diào)整至W抱子/ml計的相同的濃度;更優(yōu)選地，所述黃抱 原毛平革菌抱子懸液、康氏木霉抱子懸液、黑曲霉抱子懸液和無花果曲霉抱子懸液W體積 ttl :1:1:1混勻。3. 如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟4)中過濾是將抱子溶液通過8層紗布實 現(xiàn)的。4. 如權利要求2或3所述的方法，其特征在于，步驟5)中抱子懸液的濃度為1 X 106個抱 子/ml。5. 如權利要求2~4中任一項所述的方法，其特征在于，步驟5)所述菌劑為干燥后密封 的干粉菌劑;優(yōu)選為通過真空冷凍干燥處理獲得。6. -種醋糟發(fā)酵的方法，其特征在于，所述方法包括： a) Wg:ml計將比例為3:7的醋糟與礦物元素培養(yǎng)液混勻，得到醋糟固體培養(yǎng)基； 其中，所述礦物元素培養(yǎng)液W去離子水為溶劑，含有Tvveen-80'?2g/L、NaM)3 2g/L、 Κ此P〇4 1.5g/L、CaCl2 0.3g/L、MgS〇4.7H20 0.3g/L、FeS〇4.7H20 0.005g/L、MnS〇4·此Ο 0.0016g/L、ZnS〇4 · 7出Ο 0.0014g/L、CoCl2 · 6出Ο 0.0005g/L，并且所述礦物元素培養(yǎng)液通 過5M NaOH和1M肥1將抑值調(diào)整的為6; b) 向步驟a)所述的醋糟固體培養(yǎng)基中加入相當于醋糟質(zhì)量的1%的尿素，混勻； C)向經(jīng)步驟b)處理的醋糟固體培養(yǎng)基中加入相當于醋槽質(zhì)量的0.03%的MnS〇4 ·此0， 混勻，進行滅菌處理并冷卻； d)向經(jīng)步驟C)處理的醋糟固體培養(yǎng)基中加入如權利要求1所述的菌劑，W25°C發(fā)酵培 養(yǎng)5天。7. 如權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟d)中，菌劑的加入量為第30g醋糟對應的 加入4X ΙΟ6個抱子的菌劑。8. 如權利要求6或7所述的方法，其特征在于，當所述菌劑為干粉狀態(tài)時，W無菌生理鹽 水復溶制備抱子懸液;優(yōu)選地，抱子懸液的濃度為4 X 106個抱子/ml。9. 一種根據(jù)權利要求6~8中任一項所述的方法得到的發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，所述發(fā) 酵產(chǎn)物經(jīng)真空冷凍干燥處理，冷凍干燥處理的時間為48小時;優(yōu)選地，所述發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)冷凍 干燥后，粉碎并密封裝袋。10. 如權利要求9所述的發(fā)酵產(chǎn)物在制備飼料中的應用；優(yōu)選地，所述飼料選自家禽飼 料、家畜飼料、水產(chǎn)飼料。
【文檔編號】C12R1/645GK105969669SQ201610265908
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年4月26日
【發(fā)明人】董曉芳, 佟建明, 崔耀明
【申請人】中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所