含巖藻糖三糖硫酸酯及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明屬于化學(xué)合成的糖脂分子應(yīng)用于抗腫瘤生物活性的領(lǐng)域，具體涉及含巖藻糖三糖硫酸酯及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明以全三甲基硅烷基保護(hù)的巖藻糖基碘作為糖給體，以三乙胺作為反應(yīng)促進(jìn)劑，單羥基的三甲基硅烷基保護(hù)的二糖為糖受體，采用一鍋法合成了以單一的α?糖苷鍵結(jié)合的三糖，再經(jīng)過(guò)兩步，隨后對(duì)新合成的三糖用SO3·NEt3進(jìn)行硫酸酯化處理得到含巖藻糖三糖硫酸酯。本發(fā)明的含巖藻糖三糖硫酸酯的體外抗腫瘤活性，其在1.0 mg/mL時(shí)對(duì)人源腫瘤細(xì)胞體外增殖有明顯的抑制作用，比天然的褐藻搪膠的抑制效果好。
【專利說(shuō)明】
含巖藻糖H糖硫酸醋及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于化學(xué)合成的糖脂分子應(yīng)用于抗腫瘤生物活性的領(lǐng)域，具體設(shè)及到人工 設(shè)計(jì)并合成的含巖藻糖的=糖硫酸醋在體外表現(xiàn)出強(qiáng)于天然褐藻搪膠的抗腫瘤活性。
【背景技術(shù)】
[0002] 巖藻聚糖硫酸醋作為海帶等褐藻所固有的細(xì)胞間多糖，存在于褐藻細(xì)胞壁基質(zhì) 中，是褐藻所特有的生物活性物質(zhì)。因其天然含有硫酸根，從而具有陰離子高分子化合物的 特性。研究表明，巖藻聚糖硫酸醋具有改善胃腸道、降血脂、降血糖、預(yù)防肥胖、抗腫瘤、抗病 毒、增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能、輔助改善記憶等多種生理活性。至于巖藻聚糖硫酸醋的抗腫瘤作用 機(jī)理，現(xiàn)主要包括W下：一）多數(shù)細(xì)胞具有生命周期，到達(dá)一定時(shí)間即會(huì)因自然調(diào)亡作用而 自然死亡，但癌細(xì)胞本身缺乏自然調(diào)亡能力，因此會(huì)不斷增生或轉(zhuǎn)移。巖藻聚糖硫酸醋具有 啟動(dòng)癌細(xì)胞"自殺信號(hào)"的開(kāi)關(guān)，促使癌細(xì)胞分裂最后走向調(diào)亡。二）當(dāng)癌細(xì)胞發(fā)展到一定大 小后，若要繼續(xù)分裂增殖就不能沒(méi)有營(yíng)養(yǎng)和氧氣的供給，因此癌細(xì)胞會(huì)發(fā)出信號(hào)，促使周圍 微血管的增生W取得養(yǎng)分。巖藻聚糖硫酸醋在實(shí)驗(yàn)中可明顯抑制血管新生，阻斷癌細(xì)胞取 得營(yíng)養(yǎng)及氧氣的機(jī)會(huì)，進(jìn)而達(dá)到抑制癌細(xì)胞增生與擴(kuò)散的作用。=)在免疫反應(yīng)中，自然殺 手細(xì)胞可識(shí)別體內(nèi)腫瘤細(xì)胞及受病毒感染細(xì)胞并加 W毒殺，是重要的初期免疫防御機(jī)制之 一。當(dāng)自然殺手細(xì)胞發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞時(shí)，不需使用抗體或其他免疫系統(tǒng)感應(yīng)體就能直接殺死癌 細(xì)胞。巖藻聚糖硫酸醋能活化巨隧細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞及自然殺手細(xì)胞等免疫細(xì)胞活性，并 調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)對(duì)外來(lái)病原體的抵抗力等。
[0003] 對(duì)巖藻聚糖硫酸醋的研究分析始終存在=個(gè)難點(diǎn)：一是不同的文獻(xiàn)中使用的巖藻 聚糖硫酸醋的來(lái)源包括其分子結(jié)構(gòu)、組成單位不同，二是即使文獻(xiàn)中的巖藻聚糖硫酸醋都 來(lái)自于同一種海藻，但是提取得到的巖藻聚糖硫酸醋在組成、硫酸化程度、硫酸化位點(diǎn)等方 面也有較大的差異，=是由于海藻中還具有其它的生物活性物質(zhì)如多酪等，因此不純的巖 藻聚糖硫酸醋由于其純度不夠高，由此得到的研究數(shù)據(jù)也不夠精確。天然的巖藻聚糖硫酸 醋因其提取得到的產(chǎn)物的復(fù)雜性，包括分子結(jié)構(gòu)的組成、硫酸化的位點(diǎn)、硫酸化的程度、產(chǎn) 物的純度等多方面因素，目前的研究面臨較大的挑戰(zhàn)，進(jìn)展較為緩慢，因此，通過(guò)定向合成 得到結(jié)構(gòu)清晰明確的巖藻聚糖硫酸醋至關(guān)重要。但是糖分子中多個(gè)徑基及Q-和e-異構(gòu)體的 存在W及糖分子徑基選擇性地保護(hù)和脫保護(hù)的繁瑣性，使得寡糖的合成成為研究糖化學(xué)的 難點(diǎn)。目前關(guān)于寡糖合成中因保護(hù)與脫保護(hù)過(guò)程所增加的反應(yīng)步驟W及由增加的步驟所可 能引發(fā)的副產(chǎn)物等問(wèn)題，W及為結(jié)構(gòu)清晰明確的巖藻聚糖硫酸醋進(jìn)行針對(duì)性的生物活性研 究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供含巖藻糖=糖硫酸醋及其 制備方法和應(yīng)用的技術(shù)方案。
[0005] 本發(fā)明具體是通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的： W全S甲基娃烷基(TMS)保護(hù)的巖藻糖基艦作為糖給體，WS乙胺作為反應(yīng)促進(jìn)劑，單 徑基的S甲基娃烷基保護(hù)的二糖為糖受體，采用一鍋法合成了 W單一的a-糖巧鍵結(jié)合的S 糖(其中采用化學(xué)方法見(jiàn)同研究組崔艷麗等人專利201510607428.7,201410655465.0)，TMS 保護(hù)的=糖轉(zhuǎn)化為全乙酷化=糖，全乙酷化=糖去乙酷基獲得=糖，隨后對(duì)新合成的=糖 用s〇3 ?肥t3進(jìn)行硫酸醋化處理得到含巖藻糖S糖硫酸醋。優(yōu)選含巖藻糖S糖硫酸醋ni勺化 學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0006] 該含巖藻糖=糖硫酸醋的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是:巖藻糖的1位與乳糖的非還原糖基的6位W Ct-糖巧鍵相連接;S糖的徑基全部硫酸醋化。
[0007] 本發(fā)明所述的含巖藻糖=糖硫酸醋的制備方法，其特征在于所述的一鍋法反應(yīng)中 新合成的S甲基娃烷基S糖采用乙酢與DMAP，在DMF溶劑中，室溫下TMS全部轉(zhuǎn)化成乙酷基 保護(hù)。
[000引本發(fā)明所述的含巖藻糖S糖硫酸醋的制備方法，其特征在于所述TMS保護(hù)的S糖 轉(zhuǎn)化為全乙酷化S糖，S糖還原端基為a-糖巧鍵。
[0009] 本發(fā)明所述的含巖藻糖=糖硫酸醋的制備方法，其特征在于所述的新合成的=糖 用S〇3 ?肥t3進(jìn)行硫酸醋化處理，獲得S糖的徑基全部硫酸醋化。
[0010] 本發(fā)明所述的含巖藻糖=糖硫酸醋的制備方法，其特征在于所述的新合成的=糖 的徑基全部硫酸醋化。S糖還原端基為a-糖巧鍵或0-糖巧鍵。
[0011] 本發(fā)明的含巖藻糖=糖硫酸醋的體外抗腫瘤活性，還可用于抑制其他腫瘤細(xì)胞。
[0012] 本發(fā)明所述的在進(jìn)行含巖藻糖=糖硫酸醋的抗腫瘤活性評(píng)估時(shí)，采用的人源腫瘤 細(xì)胞分別為肝癌細(xì)胞化h7、膜腺癌細(xì)胞BxPC-3、胃癌細(xì)胞BGC-823等，并與常規(guī)的化療藥物 5-氣尿喀晚與日本產(chǎn)天然褐藻搪膠進(jìn)行了陽(yáng)性對(duì)照和空白試驗(yàn)。
[0013] 本發(fā)明的含巖藻糖=糖硫酸醋的體外抗腫瘤活性，其在1.0 mg/mL時(shí)對(duì)人源腫瘤 細(xì)胞體外增殖有明顯的抑制作用，優(yōu)選含巖藻糖S糖硫酸醋化對(duì)膜腺腫瘤細(xì)胞BxPC-3體外 增殖有明顯的抑制作用，比天然的褐藻搪膠的抑制效果好。
[0014] 本發(fā)明的含巖藻糖=糖硫酸醋的體外抗腫瘤活性，其在1.0 mg/mL時(shí)肝腫瘤細(xì)胞 體外增殖有明顯的抑制作用，優(yōu)選含巖藻糖S糖硫酸醋化對(duì)肝腫瘤細(xì)胞化h7體外增殖有明 顯的抑制作用，比天然的褐藻搪膠的抑制效果好。
[0015] 本發(fā)明的含巖藻糖S糖硫酸醋的體外抗腫瘤活性，其在1.0 mg/mL時(shí)對(duì)人源胃腫 瘤細(xì)胞體外增殖有明顯的抑制作用，優(yōu)選含巖藻糖S糖硫酸醋化對(duì)人源胃腫瘤細(xì)胞BGC- 823體外增殖有明顯的抑制作用，比天然的褐藻搪膠的抑制效果好。
[0016] 本發(fā)明的含巖藻糖=糖硫酸醋可用于新的抗腫瘤藥物、食療品、營(yíng)養(yǎng)品和食品的 添加劑。
[0017] 本發(fā)明的有益效果如下： 1.確定的含巖藻糖S糖硫酸醋合成路線短，TMS作為保護(hù)基團(tuán)在加上和脫除時(shí)操作條 件溫和方便，利于產(chǎn)品工業(yè)化。2.含巖藻糖=糖硫酸醋的是全硫酸醋化，水溶性提高，有利 于糖分子與目標(biāo)細(xì)胞的作用。3.新設(shè)計(jì)的含巖藻糖=糖硫酸醋對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有明顯的抑 制作用，在0.1 mg/mL、0.4 mg/mL、1.0 mg/mL濃度下對(duì)多種腫瘤細(xì)胞抑制效果比天然的褐 藻搪膠的好;在1.0 mg/mL濃度下比化療藥物5-氣尿喀晚的抑制效果還要好。4.克服了天然 的褐藻搪膠的有效結(jié)構(gòu)不明的缺點(diǎn)，更有針對(duì)性用藥，可減少服用量。5.含巖藻糖=糖硫 酸醋與天然糖結(jié)構(gòu)相似，與人體的生物相容性好，據(jù)觀察并與天然褐藻搪膠的抗腫瘤通路 相似，可避免化療藥物對(duì)病人的毒副作用。6.含巖藻糖=糖硫酸醋用途廣泛，還可W由于 治療其他疾病、并可W用于食品、營(yíng)養(yǎng)品的添加劑等的潛力。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作詳細(xì)說(shuō)明： 實(shí)施例1 巖藻糖=糖硫酸醋合成 第一步TMS保護(hù)的S糖的合成
在30血的燒瓶中加入0.17 g(0.37 mmol)的全TMS的巖藻糖，并在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入3.7 mL干燥的二氯甲燒，隨后在0 °C條件下逐滴滴加50化(0.37 mmol)的TMSI，在0 °C條件下 攬拌15 min后，將溶劑減壓旋干，再在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下加入3.7 mL二氯甲燒溶液溶解，將此 瓶標(biāo)為瓶1待用。另取一個(gè)30 mL的燒瓶，在其中加入6'-OH TMS保護(hù)的乳糖0.11 g(0.12 mmol)，4A分子篩100mg，巧U4NI0.30g(0.81mmol)，并在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下加入3.7血二 氯甲燒和51 iiUO.37 mmol)的S乙胺，常溫下攬拌20 min,將此瓶標(biāo)為瓶2,隨后，將剛剛標(biāo) 記為瓶1中的溶液逐滴滴加至瓶2中，隨后，反應(yīng)在室溫下攬拌12 h，化C檢測(cè)（石油酸/乙 酸乙醋=15/1 )，反應(yīng)完全。將溶劑減壓旋干，得到85.0 mg無(wú)色粘稠液體，收率為58.6%。
[0019] 第^擊.TMS化執(zhí)的二牆掉化責(zé)全7,郵化二牆
在上述得到的^(2,3,4-四乙醜-aA-巖藻糖）-(1 一 6)-2,3,4-四乙醜-P-D-半 乳糖-(1 一4)-1，2,3,6-四乙酷-a-D-葡萄糖85.0 mg(0.07 mmol)中加入4.0 mg的DMAP， 溶于DMF中，并加入35 yL的Ac2〇,室溫下攬拌12 hJLC檢測(cè)(Rf = 0.46,石油酸/乙酸乙醋 = 1/1)，反應(yīng)完全，然后減壓旋干，用石油酸/乙酸乙醋= 2/1過(guò)柱，得到63.23 mg無(wú)色泡沫 狀固體，收率為99%。
[0020] 第=步:全乙酷化=糖去乙酷基獲得=糖
在30血的圓底燒瓶中加入^(2,3,4-四乙酷-CtA-巖藻糖)-(1 一6)-2,3,4-四 乙酷-P-D-半乳糖-(1 一4)-1，2，3,6-四乙酷-a-D-葡萄糖62.23 mg(0.069 mmol)，接著 在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入10 ml 0.05M的甲醇鋼/甲醇溶液，室溫下攬拌16 h，TLC檢測(cè)(二氯甲 燒/甲醇/水=20/5/1 )，反應(yīng)完全。隨后用1 M的鹽酸溶液中和至中性，減壓旋干，得到32.0 mg白色固體，收率為95%。
[0021] 第四步糖的硫酸醋化反應(yīng)
將32.0 mg(0.065 mmol)的6Ka-L-巖藻糖)-(1 一6)-e-D-半乳糖-(1 一4)-a-D-葡萄糖 加入到5 mL的DMF中，再向其中加入1.75 g(9.68 mmol)的S〇3 ?肥t3,反應(yīng)在0 °C下攬拌10 min,隨后在-20 °C條件下逐滴加入10化(0.104 mmol)的TfOH，之后溫度回升，反應(yīng)在20 °C下攬拌24 h?；疌檢測(cè)（氯仿/甲醇/水=10/5/2)，反應(yīng)完全。然后減壓旋干，再溶于少量 水中，用凝膠LH-20柱過(guò)柱，得到79.4 mg無(wú)色泡沫狀固體，收率為81%</H醒R (101 MHz, 〇2〇) 5 =5.95(1 H), 5.02(2 H), 4.79(1 H), 4.64-4.56(4 H), 4.51-4.42(3 H), 4.57-4.50(3 H), 4.27-4.08(10 H), 4.04-3.98(3 H), 3.92(1 H)，l.49(3 H)UC NMR (101 MHz, D2O) 5 = 100.85， 96.89， 96.22， 95.55， 95.06， 89.86， 83.45， 83.28， 78.73, 76.85, 75.79, 75.66, 75.23, 73.83, 72.42, 72.21, 72.04, 71.25, 68.27, 68.06， 67.70， 67.59， 65.46， 64.54， 44.85， 34.71， 16.32.ESIMS[M-2Na]1461.56。
[0022] 實(shí)施例2 生物實(shí)驗(yàn)所采用的細(xì)胞為人源肝癌細(xì)胞化h7、膜腺癌細(xì)胞BxPC-3、胃癌細(xì)胞BGC-823 等，培養(yǎng)體系均為DMEM培養(yǎng)液，內(nèi)含10%的胎牛血清，然后置于37 °C、5% CO2、飽和濕度下培 養(yǎng)。含巖藻糖S糖硫酸醋W及對(duì)照物5-氣尿喀晚、天然的褐藻糖膠均用DMSO分別配制成10 mg/mL、40 mg/mL、100 mg/mL的母液，所有樣品均需充分溶解。
[0023] (1)選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，分別接種在不同的96孔平 面培養(yǎng)板中，調(diào)整細(xì)胞數(shù)目使一致，每個(gè)孔的細(xì)胞數(shù)為3000個(gè)，懸液200 iiL。
[0024] (2)將培養(yǎng)板置于37 °C、5% CO2、飽和濕度下培養(yǎng)24 h，隨后分為實(shí)驗(yàn)孔、陽(yáng)性對(duì) 照孔和空白對(duì)照孔。實(shí)驗(yàn)孔分別加入體積為2化的濃度為10 mg/血、40 mg/mL、100 mg/mL 的樣品母液；陽(yáng)性對(duì)照孔為2組，加入同濃度、同體積的5-氣尿喀晚母液和天然的褐藻糖膠 母液;空白對(duì)照孔只加相同體積的DMSO，每組分別設(shè)置4個(gè)平行孔。
[0025] (3)在此環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)72 h，在每孔中分別加入相同體積的配制好的MlT溶液巧 mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，隨后，停止反應(yīng)，小屯、吸棄上清液，再在每孔中分別加入相同體積的 DMS0,待紫藍(lán)色結(jié)晶體完全溶解后用酶標(biāo)儀490 nm的波長(zhǎng)測(cè)出各個(gè)孔的吸光度值。
[0026] 細(xì)胞存活率的計(jì)算方法:細(xì)胞存活率=(實(shí)驗(yàn)組平均吸光度值/空白對(duì)照組平均吸 光度值）X 100% 不同底物、不同劑量對(duì)細(xì)胞的增殖活性有不同的影響，不同細(xì)胞對(duì)同一化合物的敏感 性也不完全一致。抑制作用較強(qiáng)的化合物可直接引起培養(yǎng)細(xì)胞調(diào)亡壞死而脫壁懸浮。
[0027] 實(shí)施例3 具體步驟參見(jiàn)實(shí)例2 本次MT實(shí)驗(yàn)采用了膜腺癌細(xì)胞BxPC-3。樣品為合成的含巖藻糖S糖硫酸醋化，用與樣 品結(jié)構(gòu)類似的天然褐藻糖膠和常用的化療藥5-氣尿喀晚作為陽(yáng)性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所 /J、- O
[0028] 表1不同底物對(duì)膜腺癌細(xì)胞BxPC-3體外增殖活性的影響
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)處理濃度為0.1 mg/mL時(shí)，樣品對(duì)膜腺癌細(xì)胞BxPC-3增殖的抑制作用 不明顯，當(dāng)處理濃度為0.4 mg/mL時(shí)，樣品細(xì)胞增殖的抑制作用有一定的增強(qiáng)，比天然褐藻 搪膠增強(qiáng)快；當(dāng)處理濃度增至1.0 mg/mL時(shí)，樣品對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用顯著增強(qiáng)，此時(shí)細(xì) 胞存活率已經(jīng)低于30%，甚至強(qiáng)于常見(jiàn)的化療藥5-氣尿喀晚的抑制作用。當(dāng)處理濃度為0.1 mg/mL時(shí)，5-氣尿喀晚對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用明顯，但隨著濃度增加，抑制效果增加不明顯， 可W推測(cè)5-氣尿喀晚與合成樣品FL抑制腫瘤細(xì)胞的通路不同。
[0029] 實(shí)施例4 具體步驟參見(jiàn)實(shí)例2 本次MTT實(shí)驗(yàn)采用了肝癌細(xì)胞化h7。樣品為合成的含巖藻糖S糖硫酸醋化，用與樣品結(jié) 構(gòu)類似的天然褐藻糖膠和常用的化療藥5-氣尿喀晚作為陽(yáng)性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示。
[0030] 表2不同底物對(duì)肝癌細(xì)胞化h7體外增殖活性的影響
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)處理濃度為O. I mg/血時(shí)，樣品對(duì)肝癌細(xì)胞化h7的增殖的抑制作用較 小，當(dāng)處理濃度為0.4 mg/mL時(shí)，樣品對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用顯著增強(qiáng)，此時(shí)細(xì)胞存活率已 經(jīng)低于55%，當(dāng)處理濃度增至1.0 mg/mL時(shí)，樣品對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用進(jìn)一步增強(qiáng)，此時(shí)細(xì) 胞存活率已經(jīng)低于30%，并且遠(yuǎn)強(qiáng)于5-氣尿喀晚的抑制作用（表2)。樣品對(duì)細(xì)胞化h7的增殖 抑制增強(qiáng)趨勢(shì)強(qiáng)于天然褐藻搪膠。當(dāng)處理濃度為0.1 mg/mL時(shí)，5-氣尿喀晚對(duì)細(xì)胞的增殖抑 制作用明顯，但隨著濃度增加，抑制效果增加不明顯；5-氣尿喀晚對(duì)肝癌細(xì)胞化h7沒(méi)有對(duì)膜 腺癌細(xì)胞BxPC-3和胃癌細(xì)胞BGC-823敏感。
[0031] 實(shí)施例5 具體步驟參見(jiàn)實(shí)例2 本次MTT實(shí)驗(yàn)采用了胃癌細(xì)胞BGC-823。樣品為合成的含巖藻糖S糖硫酸醋化，與樣品 結(jié)構(gòu)類似的天然褐藻糖膠和常用的化療藥5-氣尿喀晚作為陽(yáng)性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所 /J、- O
[0032] 表3不同底物對(duì)胃癌細(xì)胞BGC-823體外增殖活性的影響
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)處理濃度為0.1 mg/mL時(shí)，樣品對(duì)胃癌細(xì)胞BGC-823的增殖具有一定 的抑制作用，當(dāng)處理濃度為0.4 mg/mL時(shí)，樣品對(duì)胃癌細(xì)胞BGC-823增殖的抑制作用顯著增 強(qiáng)，此時(shí)細(xì)胞存活率已經(jīng)低于30%，并且遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于5-氣尿喀晚的抑制作用，當(dāng)處理濃度增至 1.0 mg/mL時(shí)，樣品對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用進(jìn)一步增強(qiáng)，此時(shí)細(xì)胞存活率已經(jīng)低于20%(表 3)。樣品對(duì)細(xì)胞BGC-823的增殖抑制增強(qiáng)趨勢(shì)強(qiáng)于天然褐藻搪膠。當(dāng)處理濃度為0.1 mg/mL 時(shí)，5-氣尿喀晚對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用明顯，但隨著濃度增加，抑制效果增加不明顯，可W 推測(cè)5-氣尿喀晚與合成樣品FL抑制腫瘤細(xì)胞的通路不同。
[0033] 結(jié)合W上不同的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果可W看出，相較于樣品來(lái)說(shuō)，褐藻糖膠對(duì)上述=種 癌細(xì)胞的增殖抑制作用不是太明顯，由于的褐藻糖膠其中具有生物活性的巖藻糖硫酸醋的 片段不集中，相對(duì)濃度低，從而活性略低。同時(shí)可W發(fā)現(xiàn)，隨著底物處理濃度的逐漸增加，樣 品對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸增強(qiáng)，當(dāng)含巖藻糖S糖硫酸醋化的處理濃度為1.0 mg/ mL時(shí)，對(duì)上述=種腫瘤細(xì)胞的增殖均有顯著的抑制作用，同樣處理濃度抑制腫瘤細(xì)胞的作 用次序，胃癌細(xì)胞BGC-823>肝癌細(xì)胞化h7-膜腺癌細(xì)胞BxPC-3。由此證實(shí)新合成的含巖藻 糖S糖硫酸醋化具有良好的體外抗腫瘤活性，可見(jiàn)巖藻糖硫酸醋的生物活性與糖的組成、 結(jié)構(gòu)、分子量等方面均有關(guān)系。
[0034] W上列舉的僅是本發(fā)明的部分具體實(shí)施例，顯然，本發(fā)明不限于W上實(shí)施例，還可 W有許多變形，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開(kāi)的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變 形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0035] 項(xiàng)目資助：國(guó)家自然科學(xué)基金30870553;國(guó)家國(guó)際科技合作項(xiàng)目2010DFA34370;浙 江省國(guó)際科技合作專項(xiàng)2013C14012。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 含巖藻糖三糖硫酸酯FL，其特征在于其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：2. 如權(quán)利要求1所述的含巖藻糖三糖硫酸酯FL，其特征在于三糖的末端是巖藻糖，巖藻 糖的1位與二糖的一糖基的6位以α-糖苷鍵相連接。3. 如權(quán)利要求1所述的含巖藻糖三糖硫酸酯FL，其特征在于三糖的羥基全部硫酸酯化。4. 如權(quán)利要求1所述的含巖藻糖三糖硫酸酯的制備方法，其特征在于所述的包括以下 步驟：以全三甲基硅烷基保護(hù)的巖藻糖基碘作為糖給體，單羥基的三甲基硅烷基保護(hù)的二 糖為糖受體，采用一鍋法合成了以單一的α_糖苷鍵結(jié)合的三糖，TMS保護(hù)的三糖轉(zhuǎn)化為全乙 ?；?，全乙酰化三糖去乙?；@得三糖，然后對(duì)新合成的三糖進(jìn)行硫酸酯化處理得到 含巖藻糖三糖硫酸酯。5. 如權(quán)利要求4所述的含巖藻糖三糖硫酸酯的制備方法，其特征在于所述的一鍋法反 應(yīng)中新合成的TMS三糖采用乙酐與DMAP，在DMF溶劑中，室溫下TMS全部轉(zhuǎn)化成乙?；Ｗo(hù)。6. 如權(quán)利要求4所述的含巖藻糖三糖硫酸酯的制備方法，其特征在于所述TMS保護(hù)的三 糖轉(zhuǎn)化為全乙?；?，三糖還原端基為α_糖苷鍵。7. 如權(quán)利要求4所述的含巖藻糖三糖硫酸酯的制備方法，其特征在于所述的新合成的 三糖用S03 · NEt3進(jìn)行硫酸酯化處理，獲得三糖的羥基全部硫酸酯化。8. 如權(quán)利要求4所述的含巖藻糖三糖硫酸酯的制備方法，其特征在于所述的新合成的 三糖的羥基全部硫酸酯化，三糖還原端基為糖苷鍵或糖苷鍵。9. 如權(quán)利要求1所述的含巖藻糖三糖硫酸酯在制備抑制人源腫瘤細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng) 用。10. 如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述的人源腫瘤細(xì)胞為肝癌細(xì)胞Huh7、胰腺 癌細(xì)胞BxPC-3和胃癌細(xì)胞BGC-8 2 3。
【文檔編號(hào)】C07H1/00GK105924480SQ201610305433
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年5月10日
【發(fā)明人】崔艷麗, 毛旸易, 李順堯, 牟曉洲
【申請(qǐng)人】浙江大學(xué)