陽離子性脂質(zhì)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種陽離子性脂質(zhì)，該陽離子性脂質(zhì)可利用于向細(xì)胞質(zhì)的核酸傳遞，而可解決脂質(zhì)復(fù)合物的物理穩(wěn)定性的課題。本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)的特征在于：它是下述通式(3)所表示的化合物或其藥劑學(xué)上可接受的鹽。[化66][式(3)中，L表示碳數(shù)7～12的烷基或碳數(shù)7～12的烯基，R表示碳數(shù)1～2的烷基；n1及n2分別獨(dú)立地表示1～3的整數(shù)。]。
【專利說明】
陽離子性脂質(zhì)
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種新穎的陽離子性脂質(zhì)。
[0002] 本申請案是基于2014年1月9日在美國提出申請的臨時申請案61/925,267號而主 張優(yōu)先權(quán)，并將其內(nèi)容引用到本文中。
【背景技術(shù)】
[0003] siRNA(小干擾RNA)、miRNA(微小RNA)、shRNA(短發(fā)夾RNA、或小發(fā)夾RNA)表達(dá)載體、 反義寡核苷酸等核酸是在活體內(nèi)誘導(dǎo)序列特異性基因表達(dá)抑制的核酸，其作為核酸醫(yī)藥而 為公眾所知。
[0004] 在這些核酸醫(yī)藥中，特別是siRNA備受矚目。siRNA是包含19~23個堿基對的雙鏈 RNA，其會誘導(dǎo)被稱為RNA干擾(RNA interference;RNAi)的序列特異性基因表達(dá)抑制。
[0005] 然而，siRNA雖化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，但在治療用途中存在如下問題：容易被血漿中的 RNase(核糖核酸酶，ribonuclease)分解、及當(dāng)單獨(dú)存在時難以透過細(xì)胞膜(例如，專利文獻(xiàn) 1)〇
[0006] 針對所述問題，已知有通過將siRNA封入到含有陽離子性脂質(zhì)的微粒子內(nèi)，而保護(hù) 所封入的siRNA免于在血漿中發(fā)生分解，且可使siRNA透過脂溶性細(xì)胞膜，作為此種含有陽 離子性脂質(zhì)的脂質(zhì)粒子，提出了含有特定的陽離子性脂質(zhì)并通過擠出法或線內(nèi)混合法而制 備的脂質(zhì)制劑(例如，參照專利文獻(xiàn)1)。
[0007] 專利文獻(xiàn)1中所記載的脂質(zhì)制劑是在微粒子中封入了核酸等高分子的核酸-脂質(zhì) 粒子組合物，并且披露了該脂質(zhì)制劑可將核酸導(dǎo)入到細(xì)胞中。
[0008] 另外，作為被期待利用于核酸醫(yī)藥的陽離子性脂質(zhì)，現(xiàn)在開發(fā)出了各種化合物(例 如，參照專利文獻(xiàn)2~6及非專利文獻(xiàn)1)，但已知含有具有非對稱結(jié)構(gòu)的陽離子性脂質(zhì)的脂 質(zhì)納米粒(Lipid nanoparticles，LNPs)在保管期間粒徑會增大，也就是說在物理穩(wěn)定性方 面存在課題(非專利文獻(xiàn)2)。
[0009] 針對所述問題，非專利文獻(xiàn)2中披露了通過對含有具有非對稱結(jié)構(gòu)的陽離子性脂 質(zhì)的LNPs選擇性地使用某種磷脂質(zhì)，而使粒徑的增大得到抑制。
[0010]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0011] 專利文獻(xiàn)
[0012] 專利文獻(xiàn)1:日本專利特表2012-530059號公報 [0013] 專利文獻(xiàn)2:國際公開第2012/040184號
[0014] 專利文獻(xiàn)3:國際公開第2013/059496號
[0015] 專利文獻(xiàn)4:國際公開第2010/144740號 [0016] 專利文獻(xiàn)5:美國公開第2013/0178541號 [0017] 專利文獻(xiàn)6:美國專利第8158601號 [0018]非專利文獻(xiàn)
[0019]非專利文獻(xiàn) l:Angew.Chem.Int.Ed.(德國應(yīng)用化學(xué)）2012,51,8529-8533
[0020] 非專利文獻(xiàn)2:Mol .Pharmaceutics(分子制藥）2014,3,11(11) ,4143-53

【發(fā)明內(nèi)容】

[0021] 發(fā)明所要解決的技術(shù)問題
[0022] 然而，盡管最近有所進(jìn)展，但可利用于向細(xì)胞質(zhì)的核酸傳遞而可解決如上所述的 物理穩(wěn)定性的課題的陽離子性脂質(zhì)仍然是必要的。
[0023]解決問題的技術(shù)手段
[0024] 本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)的特征在于:它是下述通式（1)所表示的化合物或其藥劑 學(xué)上可接受的鹽。
[0025] [化1]
[0026]
[0027]通式（1)中，R1及R2分別獨(dú)立地表示碳數(shù)4~24的烷基或碳數(shù)4~24的烯基，m及Π 2 分別獨(dú)立為1~3的整數(shù)，R3為碳數(shù)1~3的烷基。
[0028] 所述通式（1)中，R1也可具有由碳鏈的一部分縮合而形成的1個以上的環(huán)丙烷。
[0029] 所述通式（1)中，R1也可具有由碳鏈的一部分縮合而形成的1個環(huán)丙烷。
[0030] 所述通式（1)中，R1為
[0031] [化2]
[0032] (2)
[0033] R2為表示碳數(shù)7~12的烷基或碳數(shù)7~12的烯基的L、R3為碳數(shù)1~2的烷基R的本發(fā) 明的陽離子性脂質(zhì)是以下述通式(3)表示。
[0034] [化3]
[0035]
[0036] 關(guān)于本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)，在通式(3)中，m及112也可分別獨(dú)立為1~2的整數(shù)。
[0037] 本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)也可為選自以下化合物中的化合物或其藥劑學(xué)上可接受 的鹽。
[0038] 1)[化4]
[0050] 7)[化 10]
[0054] 本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)也可為下述式(4)所表示的化合物或其藥劑學(xué)上可接受的 鹽。
[0055] [化12]
[0056]
[0057] 本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)也可為下述式(5)所表示的化合物或其藥劑學(xué)上可接受的 鹽。
[0058] [化13]
[0059]
[0060] 本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)也可為下述式（10)所表示的化合物或其藥劑學(xué)上可接受 的鹽。
[0061] [化 14]
[0062]
[0063] 本發(fā)明的組合物的特征在于含有：（1)本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)、（II)選自由中性脂 質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的組中的至少一種脂質(zhì)及（III)核酸。
[0064] 本發(fā)明的組合物可通過如下制造方法而制造，該制造方法包括:將包含（I)本發(fā)明 的陽離子性脂質(zhì)和（II)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的組中的至少一 種脂質(zhì)的含極性有機(jī)溶劑的水溶液、與含有（III)核酸的水溶液加以混合而獲得混合液的 步驟;以及使所述混合液中的極性有機(jī)溶劑的含量減少的步驟。
[0065]發(fā)明效果
[0066]根據(jù)本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)，可向細(xì)胞質(zhì)高效率地釋放核酸。另外，根據(jù)本發(fā)明的 陽離子性脂質(zhì)，可解決如上所述的物理穩(wěn)定性的課題。因此，本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)具有作 為用于向細(xì)胞質(zhì)傳遞核酸的脂質(zhì)的可利用性。
【附圖說明】
[0067]圖1是表示實(shí)施例20及比較例1的組合物的平均粒徑隨時間經(jīng)過而產(chǎn)生的變化。 [0068]圖2是表示實(shí)施例21~25及比較例2的組合物在保管前后的平均粒徑變化。
【具體實(shí)施方式】
[0069]《陽離子性脂質(zhì)》
[0070] 在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種陽離子性脂質(zhì)，它是下述通式（1)所表示的化 合物或其藥劑學(xué)上可接受的鹽。陽離子性脂質(zhì)也可為所述鹽的水合物或所述鹽的溶劑合 物。
[0071] [化15]
[0072]
[0073]通式（1)中，R1及R2分別獨(dú)立地表示碳數(shù)4~24的烷基或碳數(shù)4~24的烯基，m及Π 2 分別獨(dú)立為1~3的整數(shù)，R3為碳數(shù)1~3的烷基。
[0074]通式（1)中，R1可具有由碳鏈的一部分縮合而形成的1個以上的環(huán)丙烷，也可具有1 個環(huán)丙烷。
[0075] 所述通式（1)中，R1以 [0076][化 16]
[0077]
[0078] 表示、R2為表示碳數(shù)7~12的烷基或碳數(shù)7~12的烯基的L、R3為碳數(shù)1~2的烷基R的 本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)是以下述通式(3)表示。
[0079] [化 17]
[0080]
[0081] 關(guān)于本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)，在通式(3)中，m及112也可分別獨(dú)立為1~2的整數(shù)。
[0082] 在本發(fā)明中，所謂陽離子性脂質(zhì)，是指下述式所表示的具有脂質(zhì)親和性區(qū)域X和親 水性區(qū)域Z的兩親分子(amphiphilic molecule)，該脂質(zhì)親和性區(qū)域X含有一個以上的經(jīng) 基，該親水性區(qū)域Z含有在生理pH值下會質(zhì)子化的極性基。此外，本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)也 可在脂質(zhì)親和性區(qū)域和親水性區(qū)域之間具有連結(jié)區(qū)Y。
[0083] [化 18]
[0084] X-Y-Z
[0085] 在本說明書中，所謂"烷基"，是指具有指定個數(shù)的碳原子的直鏈狀、環(huán)狀或支鏈狀 的飽和脂肪族烴基。
[0086] 在本說明書中，所謂"烯基"，是指具有指定個數(shù)的碳數(shù)的直鏈狀、環(huán)狀或支鏈狀的 不飽和脂肪族烴基，例如可列舉二烯、三烯及四烯等，但并不限定于這些。
[0087]作為所述環(huán)狀"烷基"或環(huán)狀"烯基"，例如可列舉具有1個以上由碳鏈的一部分縮 合而形成的環(huán)丙烷或環(huán)丁烷等環(huán)的基，但并不限定于這些。
[0088] 作為所述通式(3)所表示的化合物，可列舉以下的化合物。
[0089] [化 19]

[0105] 本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)是所述通式（1)所表示的化合物或其藥劑學(xué)上可接受的 鹽。即，本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)可發(fā)生質(zhì)子化而含有下述通式0-)所表示的陽離子。
[0106] [化 27]
[0107]
[0108] [通式（Γ)中，R1~R3、m及112分別表示與所述通式（1)中的R 1~R3、m及112相同的含 義]
[0109] 作為與所述通式（Γ)所表示的陽離子成對，且本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)可含有的陰 離子，只要為藥劑學(xué)上可接受的陰離子，則沒有特別限定，例如可列舉:氯化物離子、溴化物 離子、硝酸根離子、硫酸根離子、磷酸根離子等無機(jī)離子;醋酸根離子、草酸根離子、馬來酸 根離子、富馬酸根離子、檸檬酸根離子、苯甲酸根離子、甲磺酸根離子等有機(jī)酸根離子等。 [0110]《陽離子性脂質(zhì)的制造方法》
[0111] 對本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)的制造方法進(jìn)行說明。下述式（12)及（13)中表示陽離子 性脂質(zhì)的合成流程的一個實(shí)施方式。
[0112] [化 28]
[0113] 合成流程1
[0114]
[0115] 合成流程2
[0116]
[0117] 通式中，R4是以下述通式（14)表示。
[0118] [化 29]
[0119]
[0120] 通式中，R3、nLSn2分別表示與所述通式(1)中的R 3、nLSn2相同的含義。
[0121 ]通式中，a及b分別表示0以上且a與b的和成為17以下的整數(shù)。
[0122] 新穎陽離子性脂質(zhì)（1-5)的合成例如可依照合成流程1而合成。通過對化合物（1-1)縮合叱0-二甲基羥基胺而獲得溫勒伯酰胺(1以1^4 &1^如）（1-2)。通過添加格氏試劑 (Grignard reagent)而獲得酮（1-3)。并且，通過利用氫化錯鋰進(jìn)行還原，而獲得醇（1-4)。 通過使該醇（1 -4)和羧酸進(jìn)行縮合而獲得酯（1 -5)。
[0123] 含有環(huán)丙基的新穎陽離子性脂質(zhì)（1-10)的合成例如可依照合成流程2而進(jìn)行。通 過西蒙斯-史密斯環(huán)丙烷化(Simmons-Smith clopropanation)，由不飽和的溫勒伯酰胺（1-6)而獲得含有環(huán)丙基的溫勒伯酰胺（1-7)。通過添加格氏試劑而獲得酮（1-8)。并且，通過利 用氫化鋁鋰進(jìn)行還原，而獲得醇（1 -9)。通過使該醇（1 -9)和羧酸進(jìn)行縮合而獲得酯（1 -10)。
[0124] 《組合物》
[0125] 在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種組合物，其含有（I)本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)、 (II)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的組中的至少一種脂質(zhì)及（III)核 酸。
[0126] 以下，對本發(fā)明的組合物的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行說明，但該實(shí)施方式是為了更好地 理解發(fā)明的主旨而具體地進(jìn)行說明，只要沒有特別指定，則并不限定本發(fā)明。
[0127] 本實(shí)施方式的組合物中的脂質(zhì)組成優(yōu)選含有本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)10摩爾％~ 100摩爾％，更優(yōu)選含有20摩爾％~90摩爾％，特別優(yōu)選含有40摩爾％~70摩爾％。
[0128] 作為本實(shí)施方式的組合物中的核酸，可列舉:siRNA、miRNA、shRNA表達(dá)載體、反義 寡核苷酸、核酶等，優(yōu)選s iRNA、miRNA。
[0129] 本實(shí)施方式的組合物優(yōu)選含有核酸0.01重量％~50重量％，更優(yōu)選含有0.1重 量％~30重量％，特別優(yōu)選含有1重量％~10重量％。
[0130] 本實(shí)施方式的組合物中的脂質(zhì)組成中含有(I)本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)和（II)選自 由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的組中的至少一種脂質(zhì)。
[0131]作為中性脂質(zhì)，可列舉：二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE)、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿 (P0PC)、卵磷脂酰膽堿(EPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、 二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二花生酰磷脂酰膽堿(DAPC)、二山崳酰磷脂酰膽堿(DBPC)、二 (二十四酰)磷脂酰膽堿(DLPC)、二油酰磷脂酰膽堿(D0PC)、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、二油酰磷脂 酰甘油(D0PG)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰-磷脂酰乙醇胺 4- (N-馬來酰亞胺甲基)-環(huán)己烷-1 -羧酸酯(DOPE-ma 1)等。
[0132] 本實(shí)施方式的組合物中的脂質(zhì)組成中優(yōu)選含有中性脂質(zhì)0摩爾％~50摩爾％，更 優(yōu)選含有〇摩爾％~40摩爾％，特別優(yōu)選含有0摩爾％~30摩爾％。
[0133] 作為聚乙二醇修飾脂質(zhì)，可列舉：PEG2000-DMG(PEG2000-二肉豆蔻基甘油、 PEG2000-DPG(PEG2000-二棕櫚酰甘油）、PEG2000-DSG(PEG2000-二硬脂酰甘油）、PEG5000-DMG(PEG5000-二肉豆蔻基甘油）、PEG5000-DPG(PEG5000-二棕櫚酰甘油）、PEG5000-DSG (PEG5000-二硬脂酰甘油）、PEG-cDMA(N-[(甲氧基聚（乙二醇)2000)氨基甲?；鵠-1，2-二肉 豆蔻基氧基丙基-3-胺）、PEG-C-D0MG(R-3-[(co-甲氧基-聚（乙二醇)2000)氨基甲?；鵠-1， 2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺）、聚乙二醇(PEG)-二酰甘油(DAG)、PEG-二烷氧基丙基(DAA)、 PEG-磷脂質(zhì)、PEG-神經(jīng)酰胺(Cer)等。
[0134] 作為PEG-二烷氧基丙基，可列舉:PEG-二月桂氧基丙基、PEG-二肉豆蔻氧基丙基、 PEG-二棕櫚氧基丙基、PEG-二硬脂氧基丙基等。
[0135] 本實(shí)施方式的組合物中的脂質(zhì)組成中優(yōu)選含有聚乙二醇修飾脂質(zhì)0摩爾％~30摩 爾％，更優(yōu)選含有〇摩爾％~20摩爾％，特別優(yōu)選含有0摩爾％~10摩爾％。
[0136] 作為固醇，可列舉:膽固醇、二氫膽固醇、羊毛固醇、β-谷固醇、菜油固醇、豆固醇、 菜籽固醇、麥角固醇、巖藻固醇、3β-[Ν_(Ν'，Ν'_二甲基氨基乙基)氨基甲?；鵠膽固醇(DC-Chol)等。
[0137] 本實(shí)施方式的組合物中的脂質(zhì)組成中優(yōu)選含有固醇0摩爾％~90摩爾％，更優(yōu)選 含有10摩爾％~80摩爾％，特別優(yōu)選含有20摩爾％~50摩爾％。
[0138] 本實(shí)施方式的組合物中的脂質(zhì)組成的組合沒有特別限定，例如優(yōu)選本發(fā)明的陽離 子性脂質(zhì)、中性脂質(zhì)及固醇的組合，或本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)、中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂 質(zhì)及固醇的組合。
[0139] 此外，本實(shí)施方式的組合物也可含有蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、乳糖等糖；谷氨酰 胺、谷氨酸、谷氨酸鈉、組氨酸等氨基酸；檸檬酸、磷酸、醋酸、乳酸、碳酸、酒石酸等酸的鹽 等。
[0140]本實(shí)施方式的組合物也可制劑化為醫(yī)藥組合物。作為醫(yī)藥組合物的劑型，例如可 列舉注射劑。
[0141 ]本實(shí)施方式的組合物例如可為通過冷凍干燥等而去除了溶劑的粉末狀態(tài)，也可為 液體狀態(tài)。在組合物為粉末狀態(tài)的情況下，可在使用前懸浮或溶解到藥學(xué)上可接受的介質(zhì) 中制成注射劑而使用。在組合物為液體狀態(tài)的情況下，可直接使用或者懸浮或溶解到藥學(xué) 上可接受的介質(zhì)中制成注射劑而使用。
[0142] 作為藥學(xué)上可接受的介質(zhì)，可列舉:無菌水;生理鹽水;含有葡萄糖、D-山梨糖醇、 D-甘露糖、D-甘露糖醇、氯化鈉等輔助藥的等滲液等。本實(shí)施方式的組合物還可含有乙醇、 丙二醇、聚乙二醇等醇等溶解輔助劑，穩(wěn)定劑、抗氧化劑、防腐劑等添加劑。
[0143] 本實(shí)施方式的組合物形成由含有陽離子性脂質(zhì)的脂質(zhì)所構(gòu)成的微粒子內(nèi)封入了 核酸的脂質(zhì)復(fù)合物。脂質(zhì)復(fù)合物的"平均粒徑"可通過體積平均、數(shù)量平均、Z-平均的任一種 方法算出。在本實(shí)施方式的組合物中，脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑（Z-平均）例如優(yōu)選10nm~ 1 OOOnm，更優(yōu)選30nm~500nm，特別優(yōu)選30nm~200nm。
[0144] 本實(shí)施方式的組合物優(yōu)選在保管期間，粒徑和保管前相比不會過度增大的組合 物。例如，優(yōu)選在4°C下保管6個月的情況下的粒徑的大小相對于保管前的粒徑的大小為1.6 倍以下的組合物，更優(yōu)選1.3倍以下，特別優(yōu)選1.2倍以下。
[0145] 關(guān)于本實(shí)施方式的組合物，為了使其不容易引起非特異性吸附或免疫反應(yīng)，優(yōu)選 在pH值約7.4的環(huán)境下（例如，血液中）其表面幾乎無電荷的組合物。另外，關(guān)于本實(shí)施方式 的組合物，為了在因內(nèi)吞作用而被吞入到細(xì)胞內(nèi)時，容易和內(nèi)吞體膜融合，優(yōu)選在低pH值環(huán) 境下帶正電的組合物。
[0146] 《組合物的制造方法》
[0147] 在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種組合物的制造方法，該制造方法包括步驟(a) 及步驟(b)，步驟(a)是將包含(I)本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)和（II)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇 修飾脂質(zhì)及固醇所組成的組中的至少一種脂質(zhì)的含極性有機(jī)溶劑的水溶液、與含有（III) 核酸的水溶液加以混合而獲得混合液，步驟(b)是使所述混合液中的極性有機(jī)溶劑的含量 減少。
[0148] 以下，對本發(fā)明的組合物的制造方法的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行說明，但該實(shí)施方式是 為了更好地理解發(fā)明的主旨而具體地進(jìn)行說明，只要沒有特別指定，則并不限定本發(fā)明。
[0149] 通過水溶性的核酸和上述陽離子性脂質(zhì)的靜電相互作用及脂質(zhì)間的疏水相互作 用，可形成由脂質(zhì)構(gòu)成的微粒子內(nèi)封入了核酸的脂質(zhì)復(fù)合物。例如，通過改變含有（I)本發(fā) 明的陽離子性脂質(zhì)和（II)選自由中性脂質(zhì)、聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的組中的至少 一種脂質(zhì)的脂質(zhì)成分在含極性有機(jī)溶劑的水溶液中的溶解度，可形成脂質(zhì)復(fù)合物。作為極 性有機(jī)溶劑，可列舉乙醇等醇。
[0150] 首先，在步驟(a)中，將溶解了（I)本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)和（II)選自由中性脂質(zhì)、 聚乙二醇修飾脂質(zhì)及固醇所組成的組中的至少一種脂質(zhì)的含極性有機(jī)溶劑的水溶液、與含 有（III)核酸的水溶液加以混合而獲得混合液。含極性有機(jī)溶劑的水溶液中的極性有機(jī)溶 劑的濃度只要在與核酸的水溶液混合后仍然滿足溶解脂質(zhì)分子的條件，則沒有特別限定。
[0151] 接著，在步驟(b)中，向所述混合液中添加水等，由此使極性有機(jī)溶劑的含量減少。 由此，可形成脂質(zhì)復(fù)合物。為了高效率地形成脂質(zhì)復(fù)合物，優(yōu)選使極性有機(jī)溶劑的含量急劇 降低。
[0152] 根據(jù)本實(shí)施方式的組合物的制造方法，可獲得核酸被高效率地封入到微粒子內(nèi)部 的脂質(zhì)復(fù)合物。
[0153] 在封入到組合物中的核酸為核酸醫(yī)藥的情況下，可用作醫(yī)藥組合物。
[0154] 實(shí)施例
[0155] 以下，列舉實(shí)施例更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限定于這些實(shí)施例。另外， 實(shí)施例中的化合物名是使用Marvin Sketch ver.5.4(ChemAxion)進(jìn)行命名。
[0156] <陽離子性脂質(zhì)的合成>
[0157] 實(shí)施例1 : 1-甲基哌啶-4-羧酸1-(2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-酯（1-(2-octylcyclopropyl )heptadecan-8-yl l-methylpiperidine-4_carboxylate)(以下，稱為 "陽離子性脂質(zhì)Γ)的合成
[0158] 依照所述合成流程1或2,合成陽離子性脂質(zhì)1。
[0159] 第1步驟：
[0160] 向?qū)⒂退幔?5.0g，265.5mmol)溶解到二氯甲烷（531.0mL)中而成的溶液中，添加 WSC(water soluble carbohydrate，水溶性碳水化合物）（101.8g，531.05mmol)、三乙基胺 (53.748,531.05!11111〇1)、10-二甲基羥基胺鹽酸鹽(51.88,531.05111111〇1)。在室溫下攪拌到次 日后，添加水，將有機(jī)層分液。將有機(jī)層利用水清洗5次后，利用1M氫氧化鈉水溶液清洗1次， 利用無水硫酸鎂將其干燥。通過過濾將干燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。對于所獲得的組 合物1 (88.92g)，不進(jìn)行純化而用于下一步驟。
[0161] 第2步驟：
[0162] 將二乙基鋅(764.9mL，764.9mmol [ 1M溶液])溶解到二氯甲烷（1416.5mL)中，并冷 卻到0°C。向該溶液中緩慢地滴加 TFA(Trif louroacetic acid，三氟醋酸）（87.2g， 764.9mmo 1)。因?yàn)橐焉郎?，所以再次冷卻至IjO °C后添加二碘甲烷(204.9g，764.9mmo 1)，并在0 °C的狀態(tài)下攪拌30分鐘。向該溶液中添加粗產(chǎn)物1 (83.0g，255. Ommol)，升溫到室溫并攪拌1 小時。在確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束后，利用氯化銨(300mL)使反應(yīng)淬滅。將分液所獲得的有機(jī)層利用無 水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過過濾將干燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。通過硅膠柱色譜法進(jìn)行 純化，而獲得化合物2 (73.0g)。
[0163] 第3步驟：
[0164] 將化合物2(17.(^，50.07_〇1)溶解到1'冊（161:抑117(11'〇;1^11抑11，四氫咲喃）（1001111^) 中，在氮?dú)猸h(huán)境下且室溫下滴加1M的溴化壬基鎂（100 1^，100!11111〇1)。攪拌1小時，確認(rèn)反應(yīng)結(jié) 束后添加充分量的氯化銨水溶液而使反應(yīng)淬滅。對反應(yīng)溶液進(jìn)行水洗，將有機(jī)層利用無水 硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過過濾將干燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。通過硅膠柱色譜法進(jìn)行純 化，而獲得化合物3(11.7g)。
[0165] 第4步驟：
[0166] 向?qū)⑺@得的化合物3(25.0g，61.5mmol)溶解到四氫呋喃（123mL)而成的溶液中， 添加氫化鋁鋰(2.3g，61.47_〇1)，并加熱回流一小時。在確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)體系中依 序緩慢地添加水(2.3mL)、15 %氫氧化鈉水溶液(2.3mL)、水(6.9mL)而使反應(yīng)淬滅。對該溶 液進(jìn)行硅藻土過濾，將濾液在減壓下濃縮。通過硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得化合物4。
[0167] 第5步驟：
[0168] 向?qū)⑺@得的化合物(0.5g，1.22mmo 1)溶解到二氯甲烷(4.9mL)而成的溶液中，添 加吧以0.478,2.45!11111〇1)、二甲基氨基吡啶(0.03 8,0.24臟〇1)、1-甲基哌啶-4-羧酸(0.358， 2.45_〇1)。在室溫下攪拌到次日后，添加水，將有機(jī)層分液。將有機(jī)層利用水清洗5次后，利 用1N氫氧化鈉水溶液清洗1次，并利用無水硫酸鎂將其干燥。通過過濾將干燥劑去除，將濾 液在減壓下濃縮。通過硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得下述式(4)所表示的陽離子性脂質(zhì)1 (0.2g,0.37mmol)〇
[0169] [化 30]
[0170]
[0171 ]在以下條件下利用HPLC_LC/MS(high performance liquid chromatography-liquid chromatography/mass spectrometry，高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用）對所獲得的化合 物進(jìn)行確認(rèn)。色譜柱：YMC-TriartC18、150-4 · 6mm、5μπι，洗提液:MeOH(均勻溶劑），流速： 1. OmL/分鐘，運(yùn)行時間：15分鐘，柱溫:45°C，檢測:UV( 215nm)、電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)。
[0172] HPLC-LC/MS，Rt 11.3分鐘，ESI-MS(M+H)計算值533.5、測量值534.6，咕 NMR (400MHz，CDCl3)S4.87(lH，q)，2.81(2H，d)，2.26(3H，s)，2.23(lH，m)，1.98(2H，t)，1.93 (2H，d)，1.80(2H，m)，1.50(4H，m)，1.37(6H，m)，1.27(32H，m)，1.13(2H，s)，0.87(6H，dd), 0.64(2H,dd),0.55(lH,m),-0.34(lH,dd)
[0173] 實(shí)施例2~9、參考例1~4
[0174] 和實(shí)施例1同樣地合成下述的陽離子性脂質(zhì)2~13。
[0175] 實(shí)施例2:1-甲基吡咯烷-3-羧酸1-(2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-酯（1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl l-methylpyrrolidine-3_carboxylate)(陽離子性 脂質(zhì)2)
[0176] [化 31]
[0177]
[0178] HPLC-LC/MS，Rt 11.0min，ESI-MS(M+H)計算值519.5、測量值520.6，1H NMR (400MHz,CDC13)54.85(lH,ddd),3.03(lH,t),2.87(lH,t),2.64(lH,dd),2.59(lH,dd), 2.47(lH,d),2.35(3H,s),2.09(2h,ddd),1.50(4H,m),1.36-1.25(37H,m),1.12(3H,m), 0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(lH,m),-0.34(lH,dd)
[0179] 實(shí)施例3: 1-乙基吡咯烷-4-羧酸1-(2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-酯（1-(2-octylcyclopropyl )heptadecan-8-yl l-ethylpiperidine-4_carboxylate)(陽離子性月旨 質(zhì)3)
[0180] [化 32]
[0181]
[0182] HPLC-LC/MS，Rt 12.1min，ESI-MS(M+H)計算值547.5、測量值548·6，1Η NMR (400MHz,CDC13)54.88(lH,ddd),2.90(2H,d),2.49(2H,dd),2.27(lH,m),1.98(4H,m),1.78 (2H,m),1.49(4H,m),l.36-1.25(37H,m),1.12(6H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H, m),-0.34(lH,dd)
[0183] 實(shí)施例4:1-甲基吖丁啶-3-羧酸1-(2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-酯（1-(2-octylcyclopropyl )heptadecan-8-yl l-methylazetidine-3_carboxylate)(陽離子性月旨 質(zhì)4)
[0184] [化 33]
[0185]
[0186] HPLC-LC/MS，Rt 9.65min，ESI-MS(M+H)計算值505.5、測量值506.5，1H NMR (400MHz,CDC13)54.88(lH,d),3.56(2H,m),3.26(3H,m),2.31(3H,s),1.76(lH,m),1.51 (4H,m),1.36-1.25(36H,m),1.12(3H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(lH,m),-0.34 (lH,dd)
[0187] 實(shí)施例5: 1-甲基哌啶-4-羧酸1-( 2-辛基環(huán)丙基）十五烷-8-酯（1-(2-octylcyclopropyl )pentadecan-8-yl l-methylpiperidine-4_carboxylate)(陽離子性月旨 質(zhì)5)
[0188] [化 34]
[0189]
[0190] HPLC-LC/MS，Rt 11.5min，ESI-MS(M+H)計算值505.5、測量值506.7，1H NMR (400MHz，CDC13)S4.87(lH，d)，2.81(2H，d)，2.33(3H，s),2.25(lH，m)，2.01(2H，ddd)，1.90 (2H，dd)，1.79(2H，ddd)，1.72(lH，m)，1.50(4H，m)，1.36-1.25(32H，m)，1.12(3H，m)，0.87 (6H，m)，0.62(2H，dd)，0.55(lH，m)，-0.34(lH，dd)
[0191] 實(shí)施例6: 1-甲基哌啶-4-羧酸1-( 2-辛基環(huán)丙基）十六烷-8-酯（1-(2_ octylcyclopropyl )hexadecan-8-yl l-methylpiperidine-4_carboxylate)(陽離子性月旨 質(zhì)6)
[0192] [化 35]
[0193]
[0194] HPLC-LC/MS，Rt 13.1min，ESI-MS(M+H)計算值5丄9.5、測量值520·6，1Η NMR (400MHz，CDC13)S4.87(lH，d)，2.81(2H，d)，2.33(3H，s),2.25(lH，m)，2.01(2H，ddd),1.90 (2H，dd)，1.79(2H，ddd)，1.72(lH，m)，1.50(4H，m)，1.36-1.25(34H，m)，1.12(3H，m)，0.87 (6H，m)，0.62(2H，dd)，0.55(lH，m)，-0.34(lH，dd)
[0195] 實(shí)施例7: 1-甲基哌啶-4-羧酸1-( 2-辛基環(huán)丙基）十八烷-8-酯（1_(2_ octylcyclopropyl )octadecan-8-yl l-methylpiperidine-4_carboxylate)(陽離子性月旨 質(zhì)7)
[0196] [化 36]
[0197]
[0198] HPLC-LC/MS，Rt 17.1min，ESI-MS(M+H)計算值547.5、測量值548.5，1H NMR (400MHz，CDC13)S4.87(lH，d)，2.81(2H，d)，2.33(3H，s),2.25(lH，m)，2.01(2H，ddd)，1.90 (2H，dd)，1.79(2H，ddd)，1.72(lH，m)，1.50(4H，m)，1.36-1.25(38H，m)，1.12(3H，m)，0.87 (6H，m)，0.62(2H，dd)，0.55(lH，m)，-0.34(lH，dd)
[0199] 實(shí)施例8: 1-甲基哌啶-4-羧酸1-( 2-辛基環(huán)丙基）二十烷-8-酯（1_(2_ octy lcyclopropy 1) icosan-8-y 1 l-methylpiperidine-4_carboxylate)(陽離子性月旨質(zhì) 8)
[0200] [化 37]
[0201]
[0202] HPLC-LC/MS，Rt 22.6min，ESI-MS(M+H)計算值575.5、測量值576.5，1H NMR (400MHz，CDC13)S4.87(lH，d)，2.81(2H，d)，2.33(3H，s),2.25(lH，m)，2.01(2H，ddd)，1.90 (2H，dd)，1.79(2H，ddd)，1.72(lH，m)，1.50(4H，m)，1.36-1.25(42H，m)，1.12(3H，m)，0.87 (6H，m)，0.62(2H，dd)，0.55(lH，m)，-0.34(lH，dd)
[0203] 實(shí)施例9: 1-乙基吡咯烷-3-羧酸1-(2-辛基環(huán)丙基）十七碳-8-酯（1-(2-octylcyclopropyl )heptadecan-8-yl l-ethylpyrrolidine-3_carboxylate)(陽離子性月旨 質(zhì)9)
[0204] [化 38]
[0205]
[0206] HPLC-LC/MS，Rt 11.9min，ESI-MS(M+H)計算值533.5、測量值534·6，1Η NMR (400MHz，CDC13)S4.86(lH，ddd)，3.00(2H，m)，2.73(lH，dd)，2.54(2H，dd)，2.47(2H，ddd)， 2.08(2H，m)，1.50(5H，m)，1.36-1.25(36H，m)，1.12(6H，m)，0.87(6H，m)，0.62(2H，dd)，0.55 (lH，m)，-0.34(lH，dd)
[0207] 參考例1 :3-(二甲基氨基）丙酸1-( 2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-酯（1_(2_ octylcyclopropyl)heptadecan_8-yl 3-(dimethylamino)propanoate)(陽離子性脂質(zhì) 10)
[0208] [化 39]
[0209]
[0210] HPLC-LC/MS，Rt 10.4min，ESI-MS(M+H)計算值507.5、測量值508.6，1H NMR (400MHz，CDC13)S4.88(lH，q)，2.61(2H，dd)，2.45(2H，dd)，2.24(6H，s)，1.51(4H，m)，1.34 (6H，m)，1.27(32H，m)，1.13(2H，m)，0.88(6H，m)，0.64(2H，m)，0.56(lH，dd)，-0.34(lH，dd)
[0211] 參考例2 :4-(二甲基氨基）丁酸1-( 2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-酯（1-( 2-octylcyclopropyl)heptadecan_8-yl 4_(dimethylamino)butanoate)(陽離子性脂質(zhì)11) [0212][化 40]
[0213]
[0214] HPLC-LC/MS，Rt 10.5min，ESI-MS(M+H)計算值521.5、測量值522.6，1H NMR (400MHz,CDC13)54.87(lH,q),2.31(4H,m),2.21(6H,s),2.17(lH,s),1.80(2H,m),1.61 (lH,s),1.50(2H,d),1.37(6H,m),1.27(32H,m),1.14(2H,m),0.87(6H,dd),0.64(2H,dd), 0.55(lH,m),-0.34(lH,dd)
[0215] 參考例3 :3-(二甲基氨基）-2-甲基丙酸1-(2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-酯（1-(2-octylcyclopropyl )heptadecan-8-yl3-(dimethylamino)-2_methylpropanoate)(陽離子 性脂質(zhì)12)
[0216] [化 41]
[0217]
[0218] HPLC-LC/MS，Rt 12.5min，ESI-MS(M+H)計算值521.5、測量值522·6，1Η NMR (400MHz，CDC13)S4.87(lH，q)，2.66(2H，t)，2.22(6H，s)，1.51(4H，m),1.36-1.27(38H，m)， 1.15(6H，m)，0.88(6H，dd)，0.64(2H，dd)，0.55(lH，m)，-0.34(lH，dd)
[0219] 參考例4 :3-(哌啶-1-基）丙酸1-( 2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-酯（1-( 2-octylcyclopropyl )heptadecan_8-yl 3-(piperidin-l_yl )propanoate)(陽離子性脂質(zhì) 13)
[0220] [化 42]
[0221]
[0222] HPLC-LC/MS，Rt 14.1min，ESI-MS(M+H)計算值547.5、測量值548.6，1H NMR (400MHz,CDC13)54.87(lH,q),3.59(2H,m),2.66(2H,t),2.48(2H,t),2.39(2H,m),1.58 (4H,m),1.49(4H,m),1.43-1.27(38H,m),1.13(4H,m),0.88(6H,dd),0.64(2H,dd),0.55 (lH,m),-0.34(lH,dd)
[0223] 參考例5:2-(二甲基氨基)-N_[ 1-(2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-基]乙酰胺（以下，稱 為"陽離子性脂質(zhì)14"）的合成
[0224] 依照下述合成流程3或4,而合成陽離子性脂質(zhì)14。
[0225] [化 43]
[0226] 合成流程3
[0227]
[0228] 合成流程4
[0229]
[0230] 第1步驟：
[0231] 向?qū)⒂退幔?5 · 0g，265 · 5mmol)溶解到二氯甲烷(531 · OmL)而成的溶液中，添加 WSC (101.88,531.05謹(jǐn)〇1)、三乙基胺（53.748,531.05臟〇1)、叱0-二甲基羥基胺鹽酸鹽（51.88， 531.05_〇1)。在室溫下攪拌到次日后，添加水，將有機(jī)層分液。將有機(jī)層利用水清洗5次后， 利用1M氫氧化鈉水溶液清洗1次，并利用無水硫酸鎂將其干燥。通過過濾將干燥劑去除，將 濾液在減壓下濃縮。對于所獲得的粗產(chǎn)物1(88.92g)，不進(jìn)行純化而用于下一步驟。
[0232] 第2步驟：
[0233] 將二乙基鋅(764.9mL，764.9mmol [ 1M溶液])溶解到二氯甲烷（1416.5mL)中，并冷 卻至Ijo °C。向該溶液中緩慢地滴加 TFA(87.2g，764.9mmo 1)。因?yàn)橐焉郎?，所以再次冷卻到0 °C 后添加二碘甲烷(204.9g，764.9mmol)，并在0°C的狀態(tài)下攪拌30分鐘。向該溶液中添加粗產(chǎn) 物l(83.0g，255.Ommo 1)，升溫到室溫并攪拌1小時。在確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束后，利用氯化銨(300mL) 使反應(yīng)淬滅。將分液所獲得的有機(jī)層利用無水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過過濾將干燥劑去除，將 濾液在減壓下濃縮。通過硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得化合物2(73.0g)。
[0234] 第3步驟：
[0235] 將化合物2( 17.0g，50.07mmol)溶解到THF( 100mL)中，在氮?dú)猸h(huán)境下且室溫下滴加 1M的溴化壬基鎂（10011^，100_〇1)。攪拌1小時，確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束后添加充分量的氯化銨水溶 液而使反應(yīng)淬滅。對反應(yīng)溶液進(jìn)行水洗，將有機(jī)層利用無水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過過濾將干 燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。通過硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得化合物3 (11.7g)。
[0236] 第4步驟：
[0237] 向?qū)⑺@得的化合物3(11.0g，27. Ommol)溶解到乙醇（108mL)而成的溶液中，添加 羥基胺鹽酸鹽(2.4g，35. lmmol)、吡啶（18. OmL)，在室溫下攪拌一晚。將反應(yīng)溶液濃縮，利用 醋酸乙酯進(jìn)行萃取，并水洗，將有機(jī)層利用無水硫酸鎂進(jìn)行干燥。通過硅膠柱色譜法進(jìn)行純 化，而獲得化合物4(10.8g)。
[0238] 第5步驟：
[0239] 將所獲得的化合物4(10.0g，23.7mmo 1)溶解到THF(237mL)中，并冷卻到0 °C。向該 溶液中添加氫化鋁鋰(〇. 9g，23.7mmol)，加熱回流1小時。在確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)體系中 依序緩慢地添加水(〇 . 9mL)、15 %氫氧化鈉水溶液(0.9mL)、水(2.7mL)而使反應(yīng)淬滅。對該 溶液進(jìn)行硅藻土過濾，將濾液在減壓下濃縮。通過硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得化合物5 (5.5g)〇
[0240] 第6步驟：
[0241] 向?qū)⑺@得的化合物(0.5g，1.23mmo 1)溶解到二氯甲烷(4.9mL)而成的溶液中，添 加 ￥3(：(0.478,2.45111111〇1)、三乙基胺（0.258,2.45111111〇1)川川-二甲基甘氨酸（0.25 8， 2.45_〇1)。在室溫下攪拌到次日后，添加水，將有機(jī)層分液。將有機(jī)層利用水清洗5次后，利 用1N氫氧化鈉水溶液清洗1次，并利用無水硫酸鎂將其干燥。通過過濾將干燥劑去除，將濾 液在減壓下濃縮。通過硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，而獲得下述式(20)所表示的陽離子性脂質(zhì) 14(Ο·4g，Ο·8mmo1)〇
[0242] [化 44]
[0243]
[0244] HPLC-LC/MS，Rt 6.91 分鐘，ESI-MS(M+H)計算值492.5、測量值493.6/Η NMR (400MHz,CDC13)56.84(lH,d),3.88(lH,dd),2.93(2H,s),2.29(6H,s),1.64(lH,m),1.49 (2H,m),1.27(39H,m),0.89(2H,m),0.88(6H,m),0.64(2H,m),0.56(lH,dd),-0.34(lH,dd)
[0245] 參考例6~13
[0246] 和參考例5同樣地，依照所述合成流程3或4合成下述的陽離子性脂質(zhì)15~22。
[0247] 參考例6:3-(二甲基氨基）-N_[ 1-(2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-基]丙酰胺（3_ (dimethylamino)-N_[ l-(2_octylcyclopropyl )heptadecan_8-yl ]propanamide)(陽離子 性脂質(zhì)15)
[0248] [化 45]
[0249]
[0250] HPLC-LC/MS，Rt 7.10min，ESI-MS(M+H)計算值506.5、測量值507·5，1Η NMR (400MHz,CDC13)56.84(lH,d),3.88(lH,dd),2.93(2H,s),2.29(6H,s),1.64(lH,m),1.49 (2H,m),1.27(41H,m),0.89(2H,m),0.88(6H,m),0.64(2H,m),0.56(lH,dd),-0.34(lH,dd)
[0251] 參考例7 :4-(二甲基氨基）-N_[ 1-(2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-基]丁酰胺（4_ (dimethylamino)-N_[ l-(2_octylcyclopropyl )heptadecan_8-yl]butanamide)(陽離子性 脂質(zhì)16)
[0252] [化 46]
[0254] nrLL-LL/Mb , κτ ? · ζιιπιιη，?：5?-Μ：5、Μ+??/)ΤΓ#1Μ·?3Ζ?)·ο、?κ?]Μ1Μ·521·5，1ΗΝΜΚ (400MHz,CDC13)56.06(lH,d),3.88(lH,dd),2.28(4H,m),2.21(6H,s),1.78(2H,q),1.64 (4H,s),1.27(40H,m),0.88(6H,m),0.64(2H,m),0.56(lH,dd),-0.34(lH,dd)[0255] 參考例8:2_(二甲基氛基）_N_[ (20Z, 23Z)_二十七碳-20,23-二稀-l0-基]乙醜胺 (2_(dimethylamino)-N_[ (20Z，23Z)-heptacosa_20，23-dien_l0-yl ]acetamide)(陽離子 性脂質(zhì)17)
[0253]
[0256] [化 47]
[0257]
[0258] HPLC-LC/MS，Rt 6.50min，ESI-MS(M+H)計算值476.5、測量值477·5，1Η NMR (400MHz,CDC13)56.84(lH,d),5.35(4H,m),3.88(lH,dd),2.93(2H,s),2.77(2H,t),2.29 (6H,s),2.17(2H,s),2.05(4H,m),1.63(4H,m),1.36(3H,t),1.25(25H,m),0.88(6H,dd)
[0259] 參考例9:2-(二甲基氛基）-N_[(18Z)-二十七碳-18-稀_l0-基]乙醜胺（2_ (dimethylamino)-N_[ (18Z)-heptacos-18-en_l0-yl] acetamide)(陽離子性脂質(zhì) 18)
[0260] [化 48]
[0261]
[0262] HPLC-LC/MS，Rt 7.98min，ESI-MS(M+H)計算值478.5、測量值479.5，1H NMR (400MHz,CDC13)56.83(lH,d),5.36(2H,m),3.88(2H,m),3.74(lH,t),2.93(2H,s),2.28 (2H,m),2.17(2H,s),2.00(3H,m),1.85(lH,m),1.50(3H,m),1.25(37H,m),0.86(6H,dd)
[0263] 參考例10:1-甲基-N-[l_(2-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-基]吡咯烷-2-甲酰胺（1-methyl_N-[l-(2_octylcyclopropyl)heptadecan_8-yl]pyrrolidine-2_carboxamide)(陽 離子性脂質(zhì)19)
[0264] [化 49]
[0265]
[0266] HPLC-LC/MS，Rt 8.14min，ESI-MS(M+H)計算值518.5、測量值519.7，1H NMR (400MHz,CDC13)56.99(lH,d),3.85(lH,m),3.07(lH,m),2.85(lH,m),2.35(3H,s),2.33 (2H,m),2.23(lH,m),1.76(4H,m),1.47(4H,m),1.26-1.25(35H,m),1.12(3H,m),0.87(6H, m),0.62(2H,dd),0.55(lH,m),-0.34(lH,dd)
[0267] 參考例11:1-乙基-n-U-U-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-基]吡咯烷-2-甲酰胺（1-ethyl_N_[l-(2_octylcyclopropyl)heptadecan_8-yl]pyrrolidine-2_carboxamide)(陽 離子性脂質(zhì)20)
[0268] [化 50]
[0269]
[0270] HPLC-LC/MS，Rt 8.95min，ESI-MS(M+H)計算值532.5、測量值533·6，1Η NMR (400ΜΗζ，αΧ：13)δ7·17(lH，d)，3.84(lH，m)，3.16(lH，t)，3.00(lH，dd)，2.64(lH，ddd),2.47 (lH，ddd)，2.27(lH，ddd)，2.15(lH，ddd)，1.76(4H，m)，1.47(2H，m)，1.26-1.25(37H，m), 1.12(3H,m),1.06(4H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(lH,m),-0.34(lH,dd)
[0271] 參考例12:1-甲基-n-U-U-辛基環(huán)丙基）十七烷-8-基]哌啶-2-甲酰胺（卜 methyl_N-[l-(2_octylcyclopropyl)heptadecan_8-yl]piperidine-2_carboxamide)(陽 離子性脂質(zhì)21)
[0272] 「化 511
[0273]
[0274] HPLC-LC/MS，Rt 7.43min，ESI-MS(M+H)計算值532.5、測量值533·6，1Η NMR (400MHz，CDC13)S6.28(lH，d)，3.88(lH，m)，2.89(lH，d)，2.42(lH，dd)，2.21(3H，s),2.00 (2H，m)，1.72(2H，m)，1.49(4H，m),1.26-1.25(40H，m)，1.12(3H，m)，0.87(6H，m)，0.62(2H， dd)，0.55(lH，m)，-0.34(lH，dd)
[0275] 參考例13:1-乙基4-[1-(2-辛基環(huán)丙基)十七烷-8-基]哌啶-2-甲酰胺（1-6讓71-N_[ l-(2_octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl ]piperidine-2_carboxamide)(陽離子性月旨 質(zhì)22)
[0276] [化 52]
[0277]
[0278] HPLC-LC/MS，Rt 8.03min，ESI-MS(M+H)計算值546.6、測量值547·6，1Η NMR (400MHz,CDC13)53.88(lH,m),2.89(lH,m),2.85(lH,m),2.48(3H,s),1.89(lH,m),1.76 (2H,m),1.63(2H,m),1.47(2H,m),1.26-1.25(41H,m),1.12(6H,m),0.87(6H,m),0.62(2H, dd),0.55(lH,m),-0.34(lH,dd)
[0279] <組合物的制備（1)>
[0280] 實(shí)施例10
[0281] 使用實(shí)施例1的陽離子性脂質(zhì)1而制備組合物。作為核酸，使用如下核酸，該核酸是 包含有義鏈5 ' -GGAf Uf CAf Uf Cf Uf CAAGf Uf CfUfUAf CT*T-3 '（序列編號^^嫩彳山代二〗'-Fluoro RNA，* =硫代磷酸酯連結(jié)子）、反義鏈5 '-GfUAAGAfCfUfUGAGAfUGAfUfCfCT*T-3 '（序 列編號2，1':0嫩，仰、沈=2'4111(^〇1?熟，* =硫代磷酸酯連結(jié)子）的堿基序列且抑制?&(^(^ VII(凝血因子VII)基因的表達(dá)的siRNA，而且是經(jīng)過退火的核酸(基因設(shè)計(GeneDesign)股 份有限公司，以下有稱為"Factor VIIsiRNA"的情況）。
[0282] 將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為216yg/mL，而制成siRNA稀 釋液。另外，將陽離子性脂質(zhì)1、DSPC(日本精化股份有限公司）、膽固醇（日本精化股份有限 公司）、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司）以60/8.5/30/1.5(摩爾比）的比例以總脂質(zhì)濃度 成為15mM的方式溶解到乙醇中，而制成脂質(zhì)溶液。將siRNA稀釋液和脂質(zhì)溶液分別以2.4mL/ 分鐘、1.29mL/分鐘的流速進(jìn)行混合，進(jìn)而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以9.25mL/分鐘的流速進(jìn) 行混合，由此獲得脂質(zhì)復(fù)合物水溶液。將所獲得的脂質(zhì)復(fù)合物水溶液供于使用透析膜(商品 名"Float-A-Lyzer G2"，美國斯百全（SPECTRUM)公司，50K MWC0)的透析，將外液置換成磷 酸緩沖液(PBS，pH值7.5)。透析后，進(jìn)行濃縮及過濾滅菌，而獲得實(shí)施例10的組合物。
[0283] 實(shí)施例11
[0284] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用實(shí)施例4的陽離子性脂質(zhì)4代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例10同樣地獲得實(shí)施例11的組合物。
[0285] 實(shí)施例12
[0286] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用實(shí)施例5的陽離子性脂質(zhì)5代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例1 〇同樣地獲得實(shí)施例12的組合物。
[0287] 實(shí)施例13
[0288] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用實(shí)施例6的陽離子性脂質(zhì)6代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例1 〇同樣地獲得實(shí)施例13的組合物。
[0289] 實(shí)施例14
[0290] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用實(shí)施例7的陽離子性脂質(zhì)7代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例1 〇同樣地獲得實(shí)施例14的組合物。
[0291] 實(shí)施例15
[0292] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用實(shí)施例8的陽離子性脂質(zhì)8代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例1 〇同樣地獲得實(shí)施例15的組合物。
[0293] <組合物的分析（1)>
[0294] 針對實(shí)施例10~15的組合物，測定s iRNA向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率。
[0295] 具體而言，利用無 RNA酶水（RNase Free Water)稀釋組合物，使用Quant-iT RiboGreen RNA試劑（美國英杰（Invitrogen)公司）進(jìn)行測定，將所測得的siRNA濃度(A)設(shè) 為脂質(zhì)復(fù)合物外液中所存在的siRNA。
[0296] 另外，將組合物利用l%Triton X-100進(jìn)行稀釋并測定，將所測得的siRNA濃度(B) 設(shè)為脂質(zhì)組合物中的總siRNA濃度。接著，通過下式(F1)算出核酸的封入率。
[0297] 封入率（％) = 1〇〇 -（A/B)X100(F1)
[0298] 另外，利用粒徑測定裝置(商品名"Zetasizer Nano ZS"，英國馬爾文(Malvern)公 司制造)測定復(fù)合物的平均粒徑。
[0299] 表1中表示siRNA的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(Z-平均）。
[0300] [表1]
[0301]
[0302] <組合物的制備（2) >
[0303] 實(shí)施例16
[0304] 使用實(shí)施例2的陽離子性脂質(zhì)2而制備組合物。作為核酸，使用和實(shí)施例10的組合 物中所使用的核酸相同的Factor VII siRNA。
[0305] 將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為538yg/mL，而制成siRNA稀 釋液。另外，將陽離子性脂質(zhì)2、DSPC(日本精化股份有限公司）、膽固醇（日本精化股份有限 公司）、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司）以60/8/30/2(摩爾比）的比例以總脂質(zhì)濃度成為 30mM的方式溶解到乙醇中，而制成脂質(zhì)溶液。將siRNA稀釋液和脂質(zhì)溶液分別以2.0mL/分 鐘、1.08mL/分鐘的流速進(jìn)行混合，進(jìn)而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以18.45mL/分鐘的流速進(jìn) 行混合，由此獲得脂質(zhì)復(fù)合物水溶液。將所獲得的脂質(zhì)復(fù)合物水溶液供于使用透析膜(商品 名"Float-A-Lyzer G2"，美國斯百全（SPECTRUM)公司，50K MWC0)的透析，將外液置換成磷 酸緩沖液(PBS，pH值7.5)。透析后，進(jìn)行濃縮及過濾滅菌，而獲得實(shí)施例16的組合物。
[0306] 實(shí)施例17
[0307] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用實(shí)施例3的陽離子性脂質(zhì)3代替陽離子性脂質(zhì)2,除此以 外，和實(shí)施例16同樣地獲得實(shí)施例17的組合物。
[0308] 參考例14
[0309] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用參考例10的陽離子性脂質(zhì)19代替陽離子性脂質(zhì)2,除此以 外，和實(shí)施例16同樣地獲得參考例14的組合物。
[0310] 參考例15
[0311] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用參考例12的陽離子性脂質(zhì)21代替陽離子性脂質(zhì)2,除此以 外，和實(shí)施例16同樣地獲得實(shí)施例15的組合物。
[0312] <組合物的分析(2) >
[0313] 和實(shí)施例10的組合物同樣地，針對實(shí)施例16、17及參考例14、15的組合物，測定 siRNA向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率及平均粒徑。
[0314] 表2中表示siRNA的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(Z-平均）。
[0315] [表 2]
[0316]
L〇317j <組合物的制備（3) >
[0318] 實(shí)施例18
[0319] 使用實(shí)施例1的陽離子性脂質(zhì)1而制備組合物。作為核酸，使用和實(shí)施例10的組合 物中所使用的核酸相同的Factor VII siRNA。
[0320] 將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為400yg/mL，而制成siRNA稀 釋液。另外，將陽離子性脂質(zhì)1、DSPC(日本精化股份有限公司）、膽固醇（日本精化股份有限 公司）、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司）以60/8/30/2(摩爾比）的比例以總脂質(zhì)濃度成為 12mM的方式溶解到乙醇中，而制成脂質(zhì)溶液。將siRNA稀釋液和脂質(zhì)溶液分別以2.0mL/分 鐘、2. OmL/分鐘的流速進(jìn)行混合，進(jìn)而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以12. OmL/分鐘的流速進(jìn)行 混合，由此獲得脂質(zhì)復(fù)合物水溶液。將所獲得的脂質(zhì)復(fù)合物水溶液供于使用透析膜(商品名 "Float-A-Lyzer G2"，美國斯百全(SPECTRUM)公司，50K MWC0)的透析，將外液置換成磷酸 緩沖液(PBS，pH值7.5)。透析后，進(jìn)行濃縮及過濾滅菌，而獲得實(shí)施例18的組合物。
[0321] 實(shí)施例19
[0322] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用實(shí)施例9的陽離子性脂質(zhì)9代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例18同樣地獲得實(shí)施例19的組合物。
[0323] 參考例16
[0324] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用參考例1的陽離子性脂質(zhì)10代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例18同樣地獲得參考例16的組合物。
[0325] 參考例17
[0326] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用參考例2的陽離子性脂質(zhì)11代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例18同樣地獲得參考例17的組合物。
[0327] 參考例18
[0328] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用參考例3的陽離子性脂質(zhì)12代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例18同樣地獲得參考例18的組合物。
[0329] 參考例19
[0330] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用參考例4的陽離子性脂質(zhì)13代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例18同樣地獲得參考例19的組合物。
[0331] 參考例20
[0332] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用參考例5的陽離子性脂質(zhì)14代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例18同樣地獲得參考例20的組合物。
[0333] 參考例21
[0334] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用參考例8的陽離子性脂質(zhì)17代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例18同樣地獲得參考例21的組合物。
[0335] 參考例22
[0336] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用參考例9的陽離子性脂質(zhì)18代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例18同樣地獲得參考例22的組合物。
[0337] 參考例23
[0338] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用參考例11的陽離子性脂質(zhì)20代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例18同樣地獲得參考例23的組合物。
[0339] 參考例24
[0340] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用參考例13的陽離子性脂質(zhì)22代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例18同樣地獲得參考例24的組合物。
[0341] <組合物的分析(3) >
[0342] 和實(shí)施例10的組合物同樣地，針對實(shí)施例18、19及參考例16~24的組合物，測定 siRNA向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率及平均粒徑。
[0343] 表3中表示siRNA的封入率及脂質(zhì)復(fù)合物的平均粒徑(Z-平均）。
[0344] [表3]
[0345]
[0346] <組合物的制備(4) >
[0347] 實(shí)施例20
[0348] 使用實(shí)施例1的陽離子性脂質(zhì)1而制備組合物。作為核酸，使用和實(shí)施例10的組合 物中所使用的核酸相同的Factor VII siRNA。
[0349 ]和實(shí)施例18同樣地獲得實(shí)施例20的組合物。
[0350] 比較例1
[0351] 作為陽離子性脂質(zhì)，依照專利文獻(xiàn)2中所記載的方法合成專利文獻(xiàn)2中所記載的下 述式(29)所表示的(化學(xué)名）（以下，稱為ML-5)，使用其代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以外，和實(shí) 施例20同樣地獲得比較例1的組合物。
[0352] [化 53]
[0353]
[0354] <組合物的分析（4) >
[0355] 和實(shí)施例10的組合物同樣地，針對實(shí)施例20及比較例1的組合物，測定siRNA向脂 質(zhì)復(fù)合物中的封入率及粒徑。另外，將所述組合物在密閉的玻璃小瓶中在4 °C下保管，同樣 地測定保管后第1個月、第2個月、第4個月、第6個月、第9個月、及第12個月的siRNA的封入率 及粒徑。
[0356] 表4、表5及圖1中分別表示實(shí)施例20及比較例1的siRNA向脂質(zhì)復(fù)合物中的封入率 及平均粒徑(Z-平均）的隨時間經(jīng)過而產(chǎn)生的變化。
[0357] [表 4]
[0358]
[0361] 顯示出和比較例1的組合物相比，實(shí)施例20的組合物在保管期間粒徑的增大更加 得到抑制。
[0362] <組合物的制備(5) >
[0363] 實(shí)施例21
[0364] 使用實(shí)施例1的陽離子性脂質(zhì)1而制備組合物。作為核酸，使用和實(shí)施例10的組合 物中所使用的核酸相同的Factor VII siRNA。
[0365] 將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為 108yg/mL，而制成siRNA稀 釋液。另外，將陽離子性脂質(zhì)1、DSPC(日本精化股份有限公司）、膽固醇（日本精化股份有限 公司）、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司）以60/8/30/2(摩爾比）的比例以總脂質(zhì)濃度成為 6mM的方式溶解到乙醇中，而制成脂質(zhì)溶液。將siRNA稀釋液和脂質(zhì)溶液分別以3.36mL/分 鐘、1.81mL/分鐘的流速進(jìn)行混合，進(jìn)而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以12.95mL/分鐘的流速進(jìn) 行混合，由此獲得脂質(zhì)復(fù)合物水溶液。將所獲得的脂質(zhì)復(fù)合物水溶液供于使用透析膜(商品 名"Float-A-Lyzer G2"，美國斯百全（SPECTRUM)公司，50K MWC0)的透析，將外液置換成磷 酸緩沖液(PBS，pH值7.5)。透析后，進(jìn)行濃縮及過濾滅菌，而獲得實(shí)施例21的組合物。
[0366] 實(shí)施例22
[0367] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用實(shí)施例2的陽離子性脂質(zhì)2代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例21同樣地獲得實(shí)施例22的組合物。
[0368] 實(shí)施例23
[0369] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用實(shí)施例4的陽離子性脂質(zhì)4代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例21同樣地獲得實(shí)施例23的組合物。
[0370] 實(shí)施例24
[0371] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用實(shí)施例5的陽離子性脂質(zhì)5代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例21同樣地獲得實(shí)施例24的組合物。
[0372] 實(shí)施例25
[0373] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用實(shí)施例8的陽離子性脂質(zhì)8代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以 外，和實(shí)施例21同樣地獲得實(shí)施例25的組合物。
[0374] 比較例2
[0375] 作為陽離子性脂質(zhì)，使用所述的ML-5代替陽離子性脂質(zhì)1，除此以外，和實(shí)施例21 同樣地獲得比較例2的組合物。
[0376] <組合物的分析(5) >
[0377] 和實(shí)施例10的組合物同樣地，針對實(shí)施例21~25及比較例2的組合物，測定平均粒 徑。另外，將所述組合物在密閉的玻璃小瓶中在4°C下保管，測定2周后的平均粒徑。
[0378] 表6及圖2中表示組合物的平均粒徑(體積平均）的隨時間經(jīng)過而產(chǎn)生的變化。
[0379] [表 6]
[0380]
[0381] 顯示出和比較例2的組合物相比，實(shí)施例21~25的組合物在保管期間粒徑的增大 更加得到抑制。
[0382] <組合物的活性評價（1)>
[0383] 試驗(yàn)例1
[0384] 將實(shí)施例10~15的組合物以封入到脂質(zhì)復(fù)合物中的Factor VII siRNA濃度成為 l〇yg/mL的方式利用PBS進(jìn)行稀釋。將各組合物以10mL/kg的投予體積尾靜脈內(nèi)投予C57/BL6 小鼠（5周齡，雄性），從投予起24小時后在麻醉下實(shí)施采血及肝臟的采集。通過離心將血漿 從血液分離，利用市售的試劑盒(商品名"BIOPHEN FVII"，HYPHEN BioMed公司）對血漿中的 Factor VII蛋白質(zhì)濃度進(jìn)行定量。作為陰性對照，對投予了PBS的組群進(jìn)行相同處理。
[0385] 將roS投予組的Factor VII蛋白質(zhì)濃度設(shè)為100%，以相對值算出組合物投予組的 Factor VII蛋白質(zhì)濃度。將結(jié)果示于表7。
[0386] [表 7]
[0387]
[0388] 顯示出實(shí)施例10~15的組合物的Factor VII蛋白質(zhì)的表達(dá)抑制效果較高。即，顯 示出利用本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)會將核酸高效率地釋放到細(xì)胞質(zhì)中。
[0389] <組合物的活性評價(2) >
[0390] 試驗(yàn)例2
[0391] 將實(shí)施例16、17及參考例14、15的組合物以封入到脂質(zhì)復(fù)合物中的Factor VII siRNA濃度成為30yg/mL的方式利用roS進(jìn)行稀釋。將各組合物以10mL/kg的投予體積尾靜脈 內(nèi)投予C57/BL6小鼠（5周齡，雄性），從投予起24小時后在麻醉下實(shí)施采血及肝臟的采集。利 用離心將血漿從血液分離，利用市售的試劑盒（商品名"BIOPHEN FVII"，HYPHEN BioMed公 司）對血漿中的Factor VII蛋白質(zhì)濃度進(jìn)行定量。作為陰性對照，對投予了PBS的組群進(jìn)行 相同處理。
[0392] 將roS投予組的Factor VII蛋白質(zhì)濃度設(shè)為100%，以相對值算出組合物投予組的 Factor VII蛋白質(zhì)濃度。將結(jié)果示于表8。
[0393] [表 8]
[0394]
1234 顯示出實(shí)施例16、17的組合物的Factor VII蛋白質(zhì)的表達(dá)抑制效果高于參考例 14、15的組合物。即，顯示出利用本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)會將核酸高效率地釋放到細(xì)胞質(zhì) 中。 2 <組合物的活性評價(3) > 3 試驗(yàn)例3 4 和試驗(yàn)例2同樣地對C57/BL6小鼠（5周齡，雄性)投予實(shí)施例18、19及參考例16~24 的組合物，算出從投予起24小時后的血漿中的FactorVII蛋白質(zhì)濃度的相對值及殘存在肝 臟中的陽離子性脂質(zhì)量的相對值。將結(jié)果示于表9。
[0399] [表 9]
[0400]
[0401 ] 顯不出頭施例i8的組貧物的Factor V11宙日質(zhì)的衣込仰制雙朱咼t穸考例ib~ 24的任一組合物。即，顯示出利用本發(fā)明的陽離子性脂質(zhì)會將核酸高效率地釋放到細(xì)胞質(zhì) 中。
[0402]由以上結(jié)果得知，根據(jù)本發(fā)明，可提供可將核酸高效率地釋放到細(xì)胞質(zhì)中的陽離 子性脂質(zhì)。
[0403]另外，根據(jù)本發(fā)明，可提供可解決在將脂質(zhì)復(fù)合物保管一定期間時粒徑增大這一 物理穩(wěn)定性課題的陽離子性脂質(zhì)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種陽離子性脂質(zhì)，其特征在于:它是下述通式(3)所表示的化合物或其藥劑學(xué)上可 接受的鹽，所述通式(3)中，L表示碳數(shù)7~12的烷基或碳數(shù)7~12的締基，R表示碳數(shù)1~2的烷基;m 及m分別獨(dú)立為1~3的整數(shù)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的陽離子性脂質(zhì)，其特征在于:通式(3)中，m及m分別獨(dú)立為1~ 2的整數(shù)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的陽離子性脂質(zhì)，其特征在于:它是選自W下的化合物(4)~ (11)中的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的陽離子性脂質(zhì)，其特征在于:它是下述式(4)所表 示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽， [化 63] 示表
【文檔編號】C12N15/09GK105916839SQ201580003735
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2015年1月7日
【發(fā)明人】鈴木裕太, 兵頭健治, 田中陽平
【申請人】衛(wèi)材R&D管理有限公司