一種用于規(guī)模化生產(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及細胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于規(guī)模化生產(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]紅豆杉又稱紫杉，也稱赤柏松，是中國國家一級珍稀保護樹種，也是世界上公認的瀕臨滅絕的天然珍稀抗癌植物。
[0003]紫杉醇及其類似物迄今為止僅存在于裸子植物紅豆杉科的紅豆杉屬和澳洲紅豆杉屬中，紅豆杉屬植物全世界共有11種，廣泛分布于歐亞大陸和北美的寒帶、溫帶及亞熱帶地區(qū)，但分布零散且生長緩慢。澳洲紅豆杉屬僅分布于南半球，數(shù)量稀少，紫杉醇在紅豆杉植物中含量普遍很低，即使當前公認含量最高的短葉紅豆杉樹皮中也不到0.1%，但其需求量很大。
[0004]為了解決紫杉醇供需之間的尖銳矛盾，多年來相關(guān)研究者在尋找及擴大紫杉醇藥源途徑方面進行了大量研究。紫杉醇的化學全合成雖已取得成功，但因路線長、收率低等原因目前無法實現(xiàn)工業(yè)化。近年來，利用紅豆杉細胞離體培養(yǎng)以制備紫杉醇得到了越來越多的關(guān)注，由于離體條件下細胞的培養(yǎng)方式可以得到更加多樣的控制，因此其生產(chǎn)效率相對較高。然而，以制備紫杉醇為目的的細胞培養(yǎng)并不容易，首先需要篩選生產(chǎn)性能強的細胞株，同時還要匹配適宜的培養(yǎng)條件，此外在營養(yǎng)供給等方面需要針對細胞株特點及代謝特性進行設(shè)計，從而保證較高的培養(yǎng)密度和紫杉醇產(chǎn)率?，F(xiàn)有技術(shù)的培養(yǎng)基在促進紅豆杉細胞分泌紫杉醇方面仍不夠理想。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在針對現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，以解決現(xiàn)有技術(shù)中用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基對其分泌紫杉醇的促進作用較低的技術(shù)問題。
[0006]為實現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
[0007]—種用于規(guī)模化生產(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，包括以下重量份的成分:硝酸鈉8?10份，磷酸氫二鉀4?6份，硫酸鎂2?3份，氯化鈣1?2份，蛋白胨1?2份，蟲白蠟1?2份，八月札1?2份，山藥1?2份，雌黃1?2份，鳳眼草1?2份，水50?60份。
[0008]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的杜仲。
[0009]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的地黃。
[0010]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的蜂蠟。
[0011]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的麥冬。
[0012]作為優(yōu)選，所述培養(yǎng)基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9份，磷酸氫二鉀5份，硫酸鎂2.5份，氯化鈣1.5份，蛋白胨1.5份，蟲白蠟1.5份，八月札1.5份，山藥1.5份，雌黃1.5份，鳳眼草1.5份，水55份。
[0013]作為優(yōu)選，所述培養(yǎng)基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.5份，磷酸氫二鉀5.5份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.7份，蟲白蠟1.6份，八月札1.2份，山藥1.1份，雌黃1.4份，鳳眼草1.5份，杜仲1.4份，地黃1.1份，蜂蠟1.5份，麥冬1.8份，水57份。
[0014]在以上技術(shù)方案中，所述培養(yǎng)基是將配方量的各成分混合后粉碎、再與水混合得到的，所述粉碎可以利用本技術(shù)領(lǐng)域公知的各類物料粉碎手段實現(xiàn)。本發(fā)明所述的培養(yǎng)基尤其適用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養(yǎng)，當然也可制備成為固體培養(yǎng)基用于種子培養(yǎng)或傳代培養(yǎng)。
[0015]本發(fā)明通過實驗手段廣泛篩選了作為紅豆杉細胞生長的營養(yǎng)物質(zhì)，依據(jù)紅豆杉細胞自身代謝特性和實際使用效果確定了本發(fā)明配方。該配方以傳統(tǒng)自養(yǎng)培養(yǎng)基提供氮源和磷源，并添加了一定的鈣離子，在此基礎(chǔ)上意外的發(fā)現(xiàn)通過添加特定種類及成分的中藥材有助于促進紫杉醇的產(chǎn)率。基于以上有益的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過實驗手段優(yōu)選了蟲白蠟、八月札、山藥、雌黃等原本用于人類疾病治療的中藥材成分，所得培養(yǎng)基意外獲得了突出的培養(yǎng)效果，使得紅豆杉細胞的紫杉醇產(chǎn)率得到顯著提升，同時其生產(chǎn)周期更短。本發(fā)明以創(chuàng)新性的技術(shù)手段獲得優(yōu)越的技術(shù)效果，同時成本較低、易于實現(xiàn)，因此具有良好的應(yīng)用前景。
【具體實施方式】
[0016]以下將對本發(fā)明的【具體實施方式】進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節(jié)，在以下實施例中對屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進行詳細描述。除有定義外，以下實施例中所用的技術(shù)和科學術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。
[0017]實施例1
[0018]—種用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8份，磷酸氫二鉀4份，硫酸鎂2份，氯化鈣1份，蛋白胨1份，蟲白蠟1份，Λ月札1份，山藥1份，雌黃1份，鳳眼草1份，水50份。
[0019]實施例2
[0020]—種用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉10份，磷酸氫二鉀6份，硫酸鎂3份，氯化鈣2份，蛋白胨2份，蟲白蠟2份，八月札2份，山藥2份，雌黃2份，鳳眼草2份，水60份。
[0021]實施例3
[0022]—種用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9份，磷酸氫二鉀5份，硫酸鎂2.3份，氯化鈣1.8份，蛋白胨1.5份，蟲白蠟1.6份，八月札1.7份，山藥1.8份，雌黃1.2份，鳳眼草1.8份，水55份。
[0023]實施例4
[0024]—種用于規(guī)模化生產(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.8份，磷酸氫二鉀5.4份，硫酸鎂2.7份，氯化鈣1.2份，蛋白胨1.2份，蟲白蠟1.2份，八月札1.5份，山藥1.6份，雌黃1.4份，鳳眼草1.7份，杜仲1份，麥冬1.1份，水52份。
[0025]實施例5
[0026]—種用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9.4份，磷酸氫二鉀4.2份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.1份，蟲白蠟1份，八月札2份，山藥1.9份，雌黃1.2份，鳳眼草1.9份，地黃1.3份，蜂蠟1.2份，麥冬1.6份，水58份。
[0027]實施例6
[0028]—種用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.8份，磷酸氫二鉀5.4份，硫酸鎂2.7份，氯化鈣1.2份，蛋白胨1.2份，蟲白蠟1.2份，八月札1.5份，山藥1.6份，雌黃1.4份，鳳眼草1.7份，杜仲1.5份，水55份。
[0029]實施例7
[0030]—種用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9.2份，磷酸氫二鉀5.7份，硫酸鎂2.4份，氯化鈣1.5份，蛋白胨1.5份，蟲白蠟1.7份，八月札1.7份，山藥1.2份，雌黃1.9份，鳳眼草2份，蜂蠟1.8份，水59份。
[0031]實施例8
[0032]—種用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.5份，磷酸氫二鉀5.5份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.7份，蟲白蠟1.6份，八月札1.2份，山藥1.1份，雌黃1.4份，鳳眼草1.5份，杜仲1.4份，地黃1.1份，蜂蠟
1.5份，麥冬1.8份，水57份。
[0033]以上對本發(fā)明的實施例進行了詳細說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的申請范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，其特征在于包括以下重量份的成分:硝酸鈉8?10份，磷酸氫二鉀4?6份，硫酸鎂2?3份，氯化鈣1?2份，蛋白胨1?.2份，蟲白蠟1?2份，八月札1?2份，山藥1?2份，雌黃1?2份，鳳眼草1?2份，水.50?60份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，其特征在于還包括1?2重量份的杜仲。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于規(guī)模化生產(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，其特征在于還包括1?2重量份的地黃。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，其特征在于還包括1?2重量份的蜂錯。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，其特征在于還包括1?2重量份的麥冬。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9份，磷酸氫二鉀5份，硫酸鎂2.5份，氯化鈣.1.5份，蛋白胨1.5份，蟲白蠟1.5份，八月札1.5份，山藥1.5份，雌黃1.5份，鳳眼草1.5份，水55份。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.5份，磷酸氫二鉀5.5份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.7份，蟲白蠟1.6份，八月札1.2份，山藥1.1份，雌黃1.4份，鳳眼草.1.5份，杜仲1.4份，地黃1.1份，蜂蠟1.5份，麥冬1.8份，水57份。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用于規(guī)模化生產(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細胞培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基以傳統(tǒng)自養(yǎng)培養(yǎng)基提供氮源和磷源，并添加了一定的鈣離子，在此基礎(chǔ)上意外的發(fā)現(xiàn)通過添加特定種類及成分的中藥材有助于促進紫杉醇的產(chǎn)率?；谝陨嫌幸娴陌l(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過實驗手段優(yōu)選了蟲白蠟、八月札、山藥、雌黃、鳳眼草、杜仲、地黃、蜂蠟、麥冬等原本用于人類疾病治療的中藥材成分，所得培養(yǎng)基意外獲得了突出的培養(yǎng)效果，使得紅豆杉細胞的紫杉醇產(chǎn)率得到顯著提升，同時其生產(chǎn)周期更短。本發(fā)明以創(chuàng)新性的技術(shù)手段獲得優(yōu)越的技術(shù)效果，同時成本較低、易于實現(xiàn)，因此具有良好的應(yīng)用前景。
【IPC分類】C12P17/02, C12N5/04
【公開號】CN105368891
【申請?zhí)枴緾N201510960018
【發(fā)明人】馬丹, 夏津城
【申請人】天津市博愛生物藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年3月2日
【申請日】2015年12月18日