急性心肌梗死相關(guān)基因serpinb13及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及急性心肌梗死相關(guān)基因SERPINB13及其應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，隨著生活環(huán)境和生活方式的改變及人口老齡化進(jìn)程的加快，冠狀動脈粥 樣硬化性心臟病己成為嚴(yán)重危及人類健康的疾病之一。特別是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病 的最嚴(yán)重臨床類型--急性心肌梗死（AcuteMyocardialInfarction，AMI)。如何能降低 冠心病及急性心肌梗死的發(fā)生率和死亡率，提高冠心病患者的生活質(zhì)量，減少個人和社會 的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，己成為醫(yī)學(xué)界的一大難題。隨著人類基因組計(jì)劃完成和基因芯片技術(shù)的發(fā)展， 許多單基因疾病的致病基因被發(fā)現(xiàn)，并應(yīng)用到疾病的診斷與治療當(dāng)中。而AMI作為一種受 多種遺傳與環(huán)境因素影響的疾病，遺傳學(xué)在AMI發(fā)病中的作用仍未明確。具體是哪些基因， 通過何種細(xì)胞過程，有哪些通路參與了AMI過程尚未明確。
[0003] 本研究通過AMI的外周血RNA表達(dá)譜差異分析，來研究具體有哪些基因參與了AMI 過程，為將來AMI早期基因診斷奠定基礎(chǔ)。發(fā)明人對6例急性心肌梗死病例組和6對照組 血液樣本進(jìn)行高通量測序，結(jié)合生物信息學(xué)方法進(jìn)行基因篩選，在差異表達(dá)明顯的基因中 挑選出高表達(dá)的候選基因SERPINB13,現(xiàn)有研究中并沒有SERPINB13和急性心肌梗死相關(guān) 的報道，進(jìn)一步，發(fā)明人進(jìn)行了分子驗(yàn)證，證實(shí)了SERPINB13在急性心肌梗死組中高表達(dá)， SERPINB13抑制劑可用于制備治療急性心肌梗死藥物。本發(fā)明提供了一種新的急性心肌梗 死的監(jiān)測治療靶點(diǎn)，具有重要的臨床應(yīng)用價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種急性心肌梗死診斷制劑，所述急性心肌梗死診斷制劑 檢測SERPINB13基因和/或SERPINB13基因的表達(dá)產(chǎn)物。
[0005] 進(jìn)一步，所述急性心肌梗死診斷制劑采用熒光定量PCR試劑盒、基因芯片、免疫 方法檢測急性心肌梗死組織或外周血中SERPINB13基因的表達(dá)，優(yōu)選的，所述的熒光定 量PCR試劑盒中含有一對特異性擴(kuò)增SERPINB13基因的引物；所述的基因芯片中包括與 SERPINB13基因的核酸序列雜交的探針，更優(yōu)選的，熒光定量PCR試劑盒內(nèi)含有特異性檢測 SERPINB13基因的上游引物和下游引物，上游引物序列為SEQIDN0.9，下游引物序列為SEQ IDNO. 10 〇
[0006] 進(jìn)一步，直接檢測急性心肌梗死組織或外周血中SERPINB13基因和/或基因的表 達(dá)產(chǎn)物。
[0007] 進(jìn)一步，所述的急性心肌梗死的診斷制劑采用免疫方法檢測急性心肌梗死組織或 外周血中SERPINB13基因的表達(dá)產(chǎn)物，優(yōu)選的，所述免疫方法為ELISA檢測和/或膠體金檢 測。
[0008] 進(jìn)一步，所述檢測SERPINB13表達(dá)產(chǎn)物的ELISA法為使用ELISA檢測試劑盒。所 述試劑盒中的抗體可采用市售的SERPINB13單克隆抗體。進(jìn)一步，所述的試劑盒包括：包被SERPINB13單克隆抗體的固相載體，酶標(biāo)抗體，酶的底物，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，陰性對照品，稀釋液， 洗滌液，酶反應(yīng)終止液等。
[0009] 進(jìn)一步，所述檢測SERPINB13蛋白的膠體金法為使用檢測試劑盒，所述的抗體可 采用市售的SERPINB13單克隆抗體。進(jìn)一步，所述的膠體金檢測試劑盒采用膠體金免疫層 析技術(shù)或膠體金滲濾法。進(jìn)一步，所述的膠體金檢測試劑盒硝酸纖維素膜上的檢測區(qū)（T) 噴點(diǎn)有抗SERPINB13單克隆抗體、質(zhì)控區(qū)（C)噴點(diǎn)有免疫球蛋白IgG。
[0010] 本發(fā)明的目的在于提供上述急性心肌梗死診斷制劑在制備急性心肌梗死診斷工 具中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明的目的在于提供一種治療急性心肌梗死的制劑，所述制劑中含有抑制 SERPINB13基因的轉(zhuǎn)錄或表達(dá)的試劑或化合物。
[0012] 進(jìn)一步，所述治療急性心肌梗死的制劑中含有激活SERPINB13的抑制基因、激活 抑制SERPINB13表達(dá)的蛋白、導(dǎo)入抑制SERPINB13轉(zhuǎn)錄或表達(dá)的siRNA、激活促進(jìn)SERPINB13 mRNA降解的microRNA、導(dǎo)入促進(jìn)SERPINB13蛋白降解的分子、抑制促進(jìn)SERPINB13表達(dá)的 因子及蛋白的表達(dá)。
[0013] 優(yōu)選的，所述治療急性心肌梗死的制劑含有下列中的一組或幾組siRNA :SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4、SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO.6。更優(yōu)選 的，所述治療急性心肌梗死的制劑含有siRNA序列為SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO.6。
[0014] 本發(fā)明的目的在于提供上述治療急性心肌梗死的制劑在制備急性心肌梗死治療 藥物或試劑中的應(yīng)用。
[0015] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明首先通過高通量測序結(jié)合生物信息學(xué)方法篩選到候選基 因SERPINB13基因，進(jìn)而通過分子細(xì)胞生物學(xué)方法驗(yàn)證了SERPINB13基因與急性心肌梗死 的關(guān)系：SERPINB13基因在外周血中尚表達(dá)，與急性心肌梗死具有很好的相關(guān)性，可用于制 備急性心肌梗死輔助診斷制劑，具有重要的臨床應(yīng)用價值。
[0016] 本領(lǐng)域人員熟知抑制基因及其表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)通常可以采用下述方法中的一種 和/或幾種：通過激活目的基因的抑制基因、激活目的基因的抑制基因表達(dá)的蛋白、采用RNA干擾技術(shù)抑制目的基因表達(dá)、激活促進(jìn)目的基因mRNA降解的microRNA、導(dǎo)入促進(jìn)目的 基因編碼蛋白降解的分子、抑制促進(jìn)目的基因表達(dá)的因子及蛋白的表達(dá)。
[0017] RNA干擾（RNAi)是指外源性和內(nèi)源性雙鏈RNA在生物體內(nèi)誘導(dǎo)同源靶基因的 mRNA特異性降解，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄后基因沉默的現(xiàn)象，是一種使用小的雙鏈RNA高效、特異地阻斷 體內(nèi)某種特定基因的表達(dá)，促使mRNA降解，使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失表型的技術(shù)。siRNA 設(shè)計(jì)完成后可以采用直接合成法或者構(gòu)建siRNA表達(dá)載體，制備好的siRNA可以通過磷酸 I丐共沉淀法、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene法、顯微注射或基因槍等機(jī)械法、陽離子 脂質(zhì)體試劑法等途徑轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
[0018] 熒光定量PCR法是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo) 記跟蹤，實(shí)時在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測樣品模板 的初始濃度。熒光定量PCR的出現(xiàn)，極大地簡化了定量檢測的過程，而且真正實(shí)現(xiàn)了絕對定 量。多種檢測系統(tǒng)的出現(xiàn)，使實(shí)驗(yàn)的選擇性更強(qiáng)。自動化操作提高了工作效率，反應(yīng)快速、 重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果清晰。
[0019] 基因芯片又稱為DNA微陣列（DNAmicroarray)，可分為三種主要類型：1)固定在 聚合物基片（尼龍膜，硝酸纖維膜等）表面上的核酸探針或cDNA片段，通常用同位素標(biāo)記 的靶基因與其雜交，通過放射顯影技術(shù)進(jìn)行檢測。2)用點(diǎn)樣法固定在玻璃板上的DNA探針 陣列，通過與熒光標(biāo)記的靶基因雜交進(jìn)行檢測。3)在玻璃等硬質(zhì)表面上直接合成的寡核苷 酸探針陣列，與熒光標(biāo)記的靶基因雜交進(jìn)行檢測?；蛐酒鳛橐环N先進(jìn)的、大規(guī)模、高通 量檢測技術(shù)，應(yīng)用于疾病的診斷，其優(yōu)點(diǎn)有以下幾個方面：一是高度的靈敏性和準(zhǔn)確性；二 是快速簡便；二是可同時檢測多種疾病。
[0020] 本發(fā)明的目的在于提供一種檢測急性心肌梗死的基因檢測試劑盒，所述試劑盒檢 測基因SERPINB13,采用特異的上游引物和下游引物，上游引物序列為SEQIDN0. 9,下游引 物序列為SEQIDNO. 10。
[0021] 進(jìn)一步，該P(yáng)CR試劑盒適合于目前存在市場上的所有類型熒光定量基因擴(kuò)增儀， 靈敏度高，定量快速準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好，具有良好的應(yīng)用前景。
[0022] 進(jìn)一步，上述熒光定量PCR試劑盒組分包括：特異性引物、內(nèi)參引物、熒光定量PCR 反應(yīng)液。所述內(nèi)參為GAPDH。
[0023] 所述的試劑盒還包含RNA抽提試劑。
[0024] 本發(fā)明目的是提供了一種急性心肌梗死蛋白檢測試劑盒，所述的檢測試劑盒檢測 SERPINB13蛋白。進(jìn)一步的，所述的試劑盒還包括其他檢測試劑。
[0025] 本發(fā)明目的是提供了一種檢測急性心肌梗死的基因芯片，所述的基因芯片包括與 SERPINB13基因的核酸序列雜交的探針。
【附圖說明】
[0026] 圖1是siRNA干擾后各組SERPINB13mRNA相對表達(dá)量的圖
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步