一種脂肪酶抑制劑及其提取方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種脂肪酶抑制劑及其提取方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 膜和胃脂肪酶是腸道中脂肪消化吸收所必需的。食物中的脂肪被水解為甘油和游 離脂肪酸，在腸道被吸收，然后在體內(nèi)重新合成脂肪，造成脂肪堆積，最終可導(dǎo)致肥胖。應(yīng)用 脂肪酶抑制劑可有效抑制腸道中脂肪酶對(duì)脂肪的分解催化作用，達(dá)到減少脂肪吸收、控制 和治療肥胖的目的。它不作用于中樞神經(jīng)，通過減少脂肪吸收而降低能量的攝入，因而開發(fā) 和應(yīng)用有效的脂肪酶抑制劑受到人們的關(guān)注。
[0003] 目前唯一美國FDA批準(zhǔn)的減肥藥化Iistat就是脂肪酶的抑制劑。但是它有許多 副作用，包括影響脂溶性維生素A、E的吸收、導(dǎo)致油便、腸胃脹氣。
[0004] 因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于改進(jìn)和發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種脂肪酶抑制劑及其提取方 法與應(yīng)用，旨在解決現(xiàn)有脂肪酶抑制劑影響脂溶性維生素A、E的吸收、導(dǎo)致油便、腸胃脹氣 等副作用的問題。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 一種脂肪酶抑制劑，其中，所述脂肪酶抑制劑為阿克巧，所述阿克巧的結(jié)構(gòu)通式如下：
[0007] 所述的脂肪酶抑制劑，其中，所述阿克巧來源于紫莖女貞干葉。
[0008] -種如上所述的脂肪酶抑制劑的提取方法，其中，包括步驟： A、 取紫莖女貞干葉，搗碎，熱回流提取，靜置過濾，減壓濃縮，得提取物，反復(fù)操作2~3 次，將所得上清液合并，上大孔樹脂層析柱分離，得到分饋組分，W純品阿克巧為標(biāo)準(zhǔn)品對(duì) 分饋組分進(jìn)行TLC薄層層析檢測，W鑒定出分饋組分中含阿克巧單體的組分； B、 對(duì)步驟A中含阿克巧單體的組分進(jìn)行硅膠柱層析，洗脫得到饋分，再對(duì)饋分進(jìn)行化C 薄層層析檢測，W鑒定出饋分中含阿克巧單體的組分； C、 對(duì)步驟B中含阿克巧單體的組分再次硅膠柱層析，洗脫得到粗品，粗品再次經(jīng) Se地adexLH-20柱層析純化，得到阿克巧。
[0009] 所述的脂肪酶抑制劑的提取方法，其中，所述步驟A中，所述熱回流提取的溶劑為 乙醇。
[0010] 所述的脂肪酶抑制劑的提取方法，其中，所述步驟A中，反復(fù)操作3次。
[0011] 所述的脂肪酶抑制劑的提取方法，其中，所述步驟A中，所述大孔樹脂層析柱為 DlOl大孔樹脂層析柱。
[0012] 一種如上所述的脂肪酶抑制劑的應(yīng)用，其中，將所述阿克巧用于抑制脂肪酶的活 性。
[0013] 所述的脂肪酶抑制劑的應(yīng)用，其中，所述阿克巧用于抑制脂肪酶的活性時(shí)，所述阿 克巧與脂肪酶的用量摩爾比為60:1。
[0014] 有益效果：本發(fā)明的阿克巧對(duì)脂肪酶有顯著的抑制效果，從而有效抑制腸道中脂 肪酶對(duì)脂肪的分解催化作用，達(dá)到減少脂肪吸收、控制和治療肥胖的目的。與其他減肥化學(xué) 藥物不同，本發(fā)明所述阿克巧不作用于中樞神經(jīng)，副作用小。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 本發(fā)明提供一種脂肪酶抑制劑及其提取方法與應(yīng)用，為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方 案及效果更加清楚、明確，W下對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí) 施例僅僅用W解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0016] 本發(fā)明提供一種脂肪酶抑制劑，其中，所述脂肪酶抑制劑為阿克巧，所述阿克巧的 結(jié)構(gòu)通式如下：
[0017] 本發(fā)明上述結(jié)構(gòu)的阿克巧是一種天然化合物，而非化學(xué)合成物。所述阿克巧對(duì)脂 肪酶有顯著的抑制效果，從而有效抑制腸道中脂肪酶對(duì)脂肪的分解催化作用，達(dá)到減少脂 肪吸收、控制和治療肥胖的目的。與其他減肥化學(xué)藥物不同，本發(fā)明所述阿克巧不作用于中 樞神經(jīng)，副作用小。
[001引植物中多酪類化合物可作為獲取脂肪酶抑制劑的重要來源，將獲取的脂肪酶抑制 劑用于抑制脂肪酶的活性，減少機(jī)體對(duì)甘油=醋的吸收，從而減輕體重。且植物來源的天然 多酪類化合物具有結(jié)構(gòu)多樣性、低毒性、來源廣泛等，因此，本發(fā)明從植物中篩選新的副作 用小的脂肪酶抑制劑。優(yōu)選地，本發(fā)明從小葉苦下茶中提取脂肪酶抑制劑，小葉苦下茶是一 種保健茶飲料，具有清熱解暑、消渴、化食解膩，降壓減肥和活血化疲等營養(yǎng)保健功效，為木 禪科屬紫莖女貞化igustrumPU巧urascens)的植物葉。因此，本發(fā)明從紫莖女貞干葉中提 取脂肪酶抑制劑，即本發(fā)明的阿克巧來源于紫莖女貞干葉，紫莖女貞干葉中提取的上述阿 克巧是一種天然化合物，而非化學(xué)合成物。
[0019] 基于上述脂肪酶抑制劑，本發(fā)明還提供一種如上所述的脂肪酶抑制劑的提取方 法，其中，包括步驟： A、取紫莖女貞干葉，搗碎，熱回流提取，靜置過濾，減壓濃縮，得提取物，反復(fù)操作2~3 次，將所得上清液合并，上大孔樹脂層析柱分離，得到分饋組分，W純品阿克巧為標(biāo)準(zhǔn)品對(duì) 分饋組分進(jìn)行TLC薄層層析檢測，W鑒定出分饋組分中含阿克巧單體的組分； 優(yōu)選地，上述提取的溶劑可W為乙醇，也可W為甲醇、丙酬等。本發(fā)明靜置過濾和減壓 濃縮過程反復(fù)操作2~3次，優(yōu)選地，反復(fù)操作3次，W提高提取效率。優(yōu)選地，所述大孔樹脂 層析柱為DlOl大孔樹脂層析柱，所述DlOl大孔樹脂具有大的比表面積和適宜的孔徑，從而 利于提取物中有機(jī)物的提取。
[0020] B、對(duì)步驟A中含阿克巧單體的組分進(jìn)行硅膠柱層析，洗脫得到饋分，再對(duì)饋分進(jìn) 行TLC薄層層析檢測，W鑒定出饋分中含阿克巧單體的組分； C、對(duì)步驟B中含阿克巧單體的組分再次硅膠柱層析，洗脫得到粗品，粗品再次經(jīng)Se地adexLH-20柱層析純化，得到阿克巧。
[0021] 基于上述脂肪酶抑制劑，本發(fā)明還提供一種如上所述的脂肪酶抑制劑的應(yīng)用，其 中，將所述阿克巧用于抑制脂肪酶的活性。本發(fā)明的阿克巧是一種非競爭性抑制劑，與脂肪 酶非共價(jià)結(jié)合，導(dǎo)致酶蛋白構(gòu)象發(fā)生變化，從而影響脂肪酶的活性。其中，所述阿克巧用于 抑制脂肪酶的活性時(shí)，所述阿克巧與脂肪酶的用量摩爾比為50~60:1。優(yōu)選地，所述阿克巧 與脂肪酶的用量摩爾比為60:1，在該摩爾比下，阿克巧對(duì)脂肪酶的抑制率較高。
[0022] 下面W具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。 實(shí)施例
[002引 （1)阿克巧的提取 A、 取紫莖女貞干葉，搗碎，乙醇熱回流提取，靜置過濾，減壓濃縮，得提取物，反復(fù)操作3 次，將所得上清液合并，上DlOl大孔樹脂層析柱分離，得到分饋組分，W純品阿克巧為標(biāo)準(zhǔn) 品對(duì)分饋組分進(jìn)行TLC薄層層析檢測，W鑒定出分饋組分中含阿克巧單體的組分； B、 對(duì)步驟A中含阿克巧單體的組分進(jìn)行硅膠柱層析，洗脫得到饋分，再對(duì)饋分進(jìn)行化C 薄層層析檢測，W鑒定出饋分中含阿克巧單體的組分； C、 對(duì)步驟B中含阿克巧單體的組分再次硅膠柱層析，洗脫得到粗品，粗品再次經(jīng) Se地adexLH-20柱層析純化，得到阿克巧。
[0024] (2 )酶活力的測定 脂肪酶酶活力測定，W2,4-二硝基苯酪下酸醋值NPB)為底物。
[00幼酶活力的定義：在370°C下，pH=7. 7,每比催化分解1ymol的底物的酶量為1個(gè) 活力單位。
[0026] 酶活力的標(biāo)定方法主要參照Sigma-Al化ich公司產(chǎn)品說明書，W橄攬油為底物， 該底物在酶的催化作用下產(chǎn)生脂肪酸，根據(jù)生成的脂肪酸的含量計(jì)算酶的活性。
[0027] 步驟如下：向100血的S角瓶中加入2. 5血的蒸饋水，1血的200mMTris肥1緩沖 液（pH=7. 7)，W及3血橄攬油。充分?jǐn)埌韬?，向其中加?血濃度為5mg/血的脂肪酶液， 370°C反應(yīng)30min后，加入3mL濃度95%乙醇，充分振蕩，終止反應(yīng)。最后加入4滴百里酪 獻(xiàn)，搖勻后即用化OH(50mM)滴定，直至溶液呈亮藍(lán)色。對(duì)照Wl血的蒸饋水代替脂肪酶 液。
[0028]酶活力=1000X2V(化OH)XM(化OH)/IX5 其中，1000為將單位由mmol轉(zhuǎn)換成Jimo的轉(zhuǎn)換系數(shù)；2為將30min轉(zhuǎn)換成Ih的轉(zhuǎn)換 系數(shù)；V為處理與對(duì)照滴定所消耗的化OH的體積差；M為化OH的摩爾濃度；1為所用的酶 的體積，5為脂肪酶液的濃度。
[0029] 抑制率：脂肪酶反應(yīng)體系中加入不同濃度的阿克巧，按照酶活力測定方法，測定抑 制率； 抑制率％ =(對(duì)照酶活-加阿克巧酶活）/對(duì)照酶活XlOO 結(jié)果表明：阿克巧對(duì)脂肪酶有顯著的抑制效果，阿克巧對(duì)脂肪酶的抑制率達(dá)到43. 9%。
[0030] 綜上所述，本發(fā)明提供的一種脂肪酶抑制劑及其提取方法與應(yīng)用，本發(fā)明所述阿 克巧是一種天然化合物，而非化學(xué)合成物。所述阿克巧對(duì)脂肪酶有顯著的抑制效果，從而有 效抑制腸道中脂肪酶對(duì)脂肪的分解催化作用，達(dá)到減少脂肪吸收、控制和治療肥胖的目的。 與其他減肥化學(xué)藥物不同，本發(fā)明所述阿克巧不作用于中樞神經(jīng)，副作用小。
[0031] 應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不限于上述的舉例，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可 W根據(jù)上述說明加W改進(jìn)或變換，所有運(yùn)些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保 護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種脂肪酶抑制劑，其特征在于，所述脂肪酶抑制劑為阿克苷，所述阿克苷的結(jié)構(gòu)通 式如下：2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂肪酶抑制劑，其特征在于，所述阿克苷來源于紫莖女貞干 葉。3. -種如權(quán)利要求1所述的脂肪酶抑制劑的提取方法，其特征在于，包括步驟： A、 取紫莖女貞干葉，搗碎，熱回流提取，靜置過濾，減壓濃縮，得提取物，反復(fù)操作2~3 次，將所得上清液合并，上大孔樹脂層析柱分離，得到分餾組分，以純品阿克苷為標(biāo)準(zhǔn)品對(duì) 分餾組分進(jìn)行TLC薄層層析檢測，以鑒定出分餾組分中含阿克苷單體的組分； B、 對(duì)步驟A中含阿克苷單體的組分進(jìn)行硅膠柱層析，洗脫得到餾分，再對(duì)餾分進(jìn)行TLC 薄層層析檢測，以鑒定出餾分中含阿克苷單體的組分； C、 對(duì)步驟B中含阿克苷單體的組分再次硅膠柱層析，洗脫得到粗品，粗品再次經(jīng) SephadexLH-20柱層析純化，得到阿克苷。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的脂肪酶抑制劑的提取方法，其特征在于，所述步驟A中，所述 熱回流提取的溶劑為乙醇。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的脂肪酶抑制劑的提取方法，其特征在于，所述步驟A中，反復(fù) 操作3次。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的脂肪酶抑制劑的提取方法，其特征在于，所述步驟A中，所述 大孔樹脂層析柱為D101大孔樹脂層析柱。7. -種如權(quán)利要求1所述的脂肪酶抑制劑的應(yīng)用，其特征在于，將所述阿克苷用于抑 制脂肪酶的活性。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的脂肪酶抑制劑的應(yīng)用，其特征在于，所述阿克苷用于抑制脂 肪酶的活性時(shí)，所述阿克苷與脂肪酶的用量摩爾比為60:1。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種脂肪酶抑制劑及其提取方法與應(yīng)用，其中，所述脂肪酶抑制劑為阿克苷，所述阿克苷的結(jié)構(gòu)通式如下：。本發(fā)明的阿克苷對(duì)脂肪酶有顯著的抑制效果，從而有效抑制腸道中脂肪酶對(duì)脂肪的分解催化作用，達(dá)到減少脂肪吸收、控制和治療肥胖的目的。與其他減肥化學(xué)藥物不同，本發(fā)明所述阿克苷不作用于中樞神經(jīng)，副作用小。
【IPC分類】A61P3/04, C07H15/18, A61K31/7032
【公開號(hào)】CN105294788
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510704758
【發(fā)明人】吳序櫟, 賀震旦, 吳海強(qiáng)
【申請(qǐng)人】深圳大學(xué)
【公開日】2016年2月3日
【申請(qǐng)日】2015年10月27日