一種熊果酸-阿司匹林偶聯(lián)物及其在制備預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移中藥物的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種熊果酸-阿司匹林偶聯(lián)物及其應(yīng)用，具體說是一種熊果酸-阿司 匹林偶聯(lián)物及其在制備預(yù)防和治療腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病之一，腫瘤患者死亡原因大多為惡性腫 瘤晚期轉(zhuǎn)移所致。腫瘤轉(zhuǎn)移（Cancermetastasis)是指腫瘤細(xì)胞從原發(fā)瘤游離，向周圍組 織浸潤、侵襲進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)并隨之在體內(nèi)轉(zhuǎn)移，并且與內(nèi)皮細(xì)胞粘附浸潤形成轉(zhuǎn)移瘤等過 程。腫瘤轉(zhuǎn)移是腫瘤難以治愈和復(fù)發(fā)的主要原因之一，也是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的關(guān)鍵因素。 臨床診斷結(jié)果顯示，約60%以上的初診腫瘤患者已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移，其5年生存率不到20%。目 前，只有極少數(shù)的腫瘤轉(zhuǎn)移患者能夠通過手術(shù)進(jìn)行有效治療，而其他臨床治療方式效果非 常有限。因此，腫瘤轉(zhuǎn)移的防治面臨著非常嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，如何阻斷腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移是提高腫 瘤治療水平及治愈腫瘤的關(guān)鍵。
[0003]目前臨床使用抗腫瘤藥物絕大數(shù)為化療藥物，這些藥物能作用在腫瘤細(xì)胞生長繁 殖的不同環(huán)節(jié)上，抑制或殺死腫瘤細(xì)胞?；熕幬镌跉[瘤細(xì)胞的同時(shí)，又殺傷正常組織 的細(xì)胞，尤其是殺傷人體中生長發(fā)育旺盛的血液、淋巴組織細(xì)胞等，而這些細(xì)胞與組織是人 體重要的免疫防御系統(tǒng)，破壞了人體的免疫系統(tǒng)，癌癥就可能迅速發(fā)展，造成嚴(yán)重后果。化 療藥物大多缺乏選擇性，體內(nèi)分布廣泛，易引發(fā)毒副作用，導(dǎo)致患者不能耐受，降低藥物療 效。因此，近年來人們一直致力于新型抗腫瘤藥物的研究，其中有效抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的藥 物是一個(gè)新的藥物開發(fā)方向。
[0004] 熊果酸（UrsolicAcid，簡稱UA)，又名烏索酸、是一種天然來源a-香樹脂醇型五 環(huán)三萜類化合物。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，在自然界中的34科108種植物中都能夠分離得到UA，其 主要分布在女貞子、山楂、車前草、連翹等藥用的植物中。UA具有廣泛的藥理學(xué)活性，如抗 癌、保肝、抗炎、抗病毒、抗氧化等。如今，UA正以其顯著高效低毒的特點(diǎn)及多樣化的抗癌作 用機(jī)制日益受到人們重視。另一方面，UA具有較好的保肝抗炎功效，并可增強(qiáng)機(jī)體免疫功 能。從而能夠克服常規(guī)化療藥物毒性大、安全系數(shù)低的局限，在治療的同時(shí)副作用小、毒性 低。近年來國內(nèi)外對UA的抗腫瘤研究日趨深入，并發(fā)現(xiàn)其在腫瘤預(yù)防、治療以及防止晚期 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等方面有著獨(dú)特的優(yōu)勢及潛在的應(yīng)用前景。
[0005] 阿司匹林（Aspirin，簡稱ASP)作為解熱鎮(zhèn)痛消炎藥，預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移藥的效果已 得到充分證明，炎癥對于腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移都有明顯的促進(jìn)作用，同時(shí)會降低人的自身免疫 力。某些炎癥因子還會促進(jìn)血管生成，阿司匹林則可以通過降低炎癥反應(yīng)而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。 同時(shí)其還可以抑制C0X-2酶的活性，而C0X-2酶具有促進(jìn)血管生成，使腫瘤細(xì)胞凋亡和增 殖的平衡被打破，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對基底膜的侵襲和浸潤，并同時(shí)降低患者的免疫力。在新發(fā) 表的《柳葉刀》文章中再次提及了腫瘤轉(zhuǎn)移和血小板的關(guān)系，并表明血小板在腫瘤細(xì)胞處的 凝聚會使血液中循環(huán)腫瘤細(xì)胞避免被機(jī)體的免疫細(xì)胞消滅，同時(shí)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞變得更具侵 襲性。阿司匹林具有抑制血小板聚集的作用，對于抑制腫瘤轉(zhuǎn)移也有一定的療效。因此阿 司匹林作為傳統(tǒng)的C0X-2酶的抑制劑和抗血小板聚集藥物能夠有效的降低其活性而達(dá)到 良好的預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移的效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對上述情況，為解決現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種具有預(yù)防腫 瘤轉(zhuǎn)移活性的化合物，通過將具有抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的臨床應(yīng)用藥物阿司匹林與高效低毒的 抗腫瘤天然產(chǎn)物熊果酸進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián)，考察其聯(lián)合增效作用，可望獲得較為安全可靠的抑 制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的新型防治腫瘤轉(zhuǎn)移候選藥物。
[0007] 本發(fā)明涉及一種如式（I)所示的熊果酸-阿司匹林偶聯(lián)物(之后簡寫為ASP-UA)及 其在制備預(yù)防和治療腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。
[0008]
[0009] 該偶聯(lián)物的制備方法如下： 室溫下，將乙酰水楊酸(阿司匹林)溶于干燥的二氯甲烷，加入草酰氯，攪拌l〇h，減壓蒸 除氣體和溶劑。重新加入二氯甲烷，溶液通過恒壓漏斗向溶有熊果酸和DMAP的吡啶：二氯 甲烷（lv/lv)混合溶液中滴加，滴加完成后繼續(xù)攪拌8-10h。反應(yīng)完全后，減壓蒸除二氯甲 烷。向反應(yīng)瓶中加入水析出產(chǎn)物，抽濾，并用水洗濾餅至中性，真空干燥，柱層析得該偶聯(lián) 物。
[0010] 上述熊果酸-阿司匹林偶聯(lián)物在抗腫瘤轉(zhuǎn)移的應(yīng)用中，所述腫瘤包括但不限于乳 腺癌。
[0011] 上述應(yīng)用中，該偶聯(lián)物在預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的含量大于等于50%。
[0012] 上述應(yīng)用中，該偶聯(lián)物可與藥學(xué)上可接受的載體共同制成各種劑型：散劑、片劑、 顆粒劑、膠囊劑、溶液劑、粉針、乳劑、脂質(zhì)體、混懸劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑、氣溶膠、粉霧 劑、洗劑、搽劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、貼劑、栓劑、滴劑或滴丸劑，在治療上也可通過各種給 藥方式實(shí)現(xiàn)：口服給藥、注射給藥、呼吸道給藥、皮膚給藥、粘膜給藥、腔道給藥等。
[0013] 本發(fā)明的有益效果： (1) .偶聯(lián)物在低濃度范圍內(nèi)對腫瘤細(xì)胞毒性較小，是一種潛在的高效低毒的抗腫瘤 轉(zhuǎn)移藥； (2) .偶聯(lián)物能抑制腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附； (3) .偶聯(lián)物能抑制腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動迀移能力； (4) .偶聯(lián)物能抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲能力； (5) .偶聯(lián)物能抑制腫瘤細(xì)胞表面粘附分子的表達(dá)； (6) .偶聯(lián)物能防治乳腺癌發(fā)生肺部轉(zhuǎn)移。
【附圖說明】
[0014] 圖1偶聯(lián)物ASP-UA的紅外表征圖譜； 圖2藥物對乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖抑制作用； 圖3藥物干預(yù)乳腺癌細(xì)胞MCF-7與FN細(xì)胞基質(zhì)膠的粘附能力； 圖4藥物對乳腺癌細(xì)胞MCF-7侵襲能力的影響； 圖5A和圖5B藥物對乳腺癌細(xì)胞MCF-7表面粘附因子CD44表達(dá)的影響； 圖6藥物抑制小鼠4T1乳腺癌的實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明所述的 技術(shù)方案做進(jìn)一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0016] 實(shí)施例1 室溫下，0.5g乙酰水楊酸(阿司匹林)溶于20mL干燥的二氯甲烷，加入2mL草酰氯， 磁力攪拌l〇h，減壓蒸除氣體和溶劑。重新向反應(yīng)瓶中加入20mL二氯甲烷，通過恒壓漏斗 向溶有1. 27g熊果酸和0.leqDMAP的20mLlv/lv吡啶：二氯甲烷混合溶液中滴加，滴加 完成后繼續(xù)攪拌8-10h。反應(yīng)完全后，減壓蒸除二氯甲烷。向反應(yīng)瓶中加入100mL水析出 產(chǎn)物，抽濾，用500mL水洗濾餅至中性，真空干燥，柱層析得ASP-UA. 性狀：白色粉末；產(chǎn)率：70. 51% ;產(chǎn)物表征數(shù)據(jù)如下：1HNMR(500MHz,⑶C13) 8 10.52 (s, 1H), 7.93 (dd,J= 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 1H), 7.01 (t, J= 6. 5Hz, 1H), 6.94 (t,J= 7.6Hz, 1H), 5.37 - 5.22 (m, 1H), 4.59 - 4.44 (m, 1H), 2.33 (d,J= 4. 3Hz, 1H), 2.29 (s, 1H), 2.22 (d,J= 11. 3Hz, 1H), 2.03 (dd,J= 13.4, 4.3Hz, 1H), 1.91 (ddd,J= 18.0, 11.2, 4.0 Hz, 3H), 1.80 -1.61 (m, 6H), 1.50 (ddd, J= 20.6, 12.6, 5.9Hz, 4H), 1.43 - 1.30 (m, 4H), 1.17 - 1.06 (m, 5H), 1.03 (dd,J= 10.4, 7.4Hz, 1H), 1.00 - 0.94 (m, 6H), 0.86 (ddd,J= 27.8, 20.2, 13. 5Hz, 13H). HRMS:理論值：641. 3813m/z實(shí)際值：641. 3820m/zDiff:_1. 21ppm紅外表征結(jié)果見圖1。
[0017] 實(shí)施例2 將處于對數(shù)生長期的小鼠乳腺癌細(xì)胞MCF-7消化后，細(xì)胞密度調(diào)整為1X105個(gè)/mL，接 種于96孔板，每孔100W，置37°C，5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h;移去舊的培養(yǎng)基，加入受 試藥物用培養(yǎng)基將受試藥物存儲液稀釋，設(shè)定不同的濃度，每孔100W，另設(shè)空白對照組，每 組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。藥物作用24h后，吸棄含藥培養(yǎng)基，于每孔中加入無血.無酚紅1640培養(yǎng)基 1001^1，再加入〇. 5mg/mlMTT的溶液100W，繼續(xù)孵育4h后，終止培養(yǎng)；小心吸棄96孔 板孔內(nèi)上清液，每孔加入lOOWDSM0,振蕩lOmin