本發(fā)明涉及真菌多糖應(yīng)用，具體涉及一種梭倫小滴孔菌中性多糖及其抗腫瘤用途。

背景技術(shù)：

1、真菌多糖源于真菌的子實(shí)體與菌絲體分泌產(chǎn)物，代表一類具備獨(dú)特生物合成特征的代謝物。近期研究表明，這類化合物展現(xiàn)出廣泛的生理活性，涵蓋免疫調(diào)節(jié)、抗癌、降血糖、抗病毒及肝保護(hù)作用。其中，靈芝、灰樹花及茯苓所含多糖成分已被確證能有效抑制腫瘤發(fā)展并增強(qiáng)宿主免疫機(jī)能。

2、真菌多糖的抗癌機(jī)制多元，包括激活t淋巴細(xì)胞、b淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等免疫效應(yīng)細(xì)胞，促進(jìn)免疫系統(tǒng)的活化與分化，增強(qiáng)其識別并清除腫瘤細(xì)胞的能力。此外，它們還能調(diào)控諸如白細(xì)胞介素和腫瘤壞死因子等關(guān)鍵免疫介質(zhì)的合成，進(jìn)一步鞏固機(jī)體的抗癌防線。部分多糖直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及抑制其增殖，展現(xiàn)直接的抗腫瘤效果。

3、與化學(xué)合成藥物相比較，真菌多糖展現(xiàn)出較低的毒性與多靶點(diǎn)作用優(yōu)勢，能通過復(fù)合機(jī)制阻抑腫瘤生長及轉(zhuǎn)移過程，減少藥物耐受性問題。臨床實(shí)踐中，這些天然多糖作為輔助治療手段，在胃癌、肺癌、肝癌等多種癌癥治療中發(fā)揮了重要作用，協(xié)同其他療法提升療效，延長生存期，改善患者福祉，值得注意是：常規(guī)技術(shù)在多糖提取和純化過程難以在低溫下有效去除雜質(zhì)，導(dǎo)致多糖純度不高，且高溫處理過程中容易破壞多糖的生物活性，降低了產(chǎn)品的功能性和應(yīng)用價(jià)值。此外，常規(guī)干燥方法無法徹底去除水分，導(dǎo)致最終產(chǎn)品的穩(wěn)定性差，易受環(huán)境因素影響，儲存和運(yùn)輸過程中容易降解或變性。

4、有鑒于此特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種梭倫小滴孔菌中性多糖及其抗腫瘤用途，解決了上述背景技術(shù)中提出的問題。

2、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用技術(shù)方案的基本構(gòu)思是：

3、一種梭倫小滴孔菌中性多糖，由梭倫小滴孔菌子實(shí)體提取得到并包含有多種單糖成分，單糖成分包括gal、fuc、man和glc共4種單糖，單糖成分的摩爾比依次為：（30-60）:（20-30）:（10-30）:（1-5），其分子量范圍為3.2×103-4.5×104?da。

4、可選的，梭倫小滴孔菌酸性多糖一級結(jié)構(gòu)中g(shù)al、fuc、man和glc的連接方式為：

5、。

6、一種梭倫小滴孔菌中性多糖，其制備方法包括以下步驟：

7、步驟（1）：將梭倫小滴孔菌子實(shí)體干燥，粉碎，過篩，得到粉末，置入快速溶劑萃取儀，以去離子水為溶劑進(jìn)行萃取，提取時(shí)間4-14?min，提取溫度30-80℃，提取壓力3-7?mpa，循環(huán)1-5次，得到產(chǎn)物i；

8、步驟（2）：將產(chǎn)物i、叔丁醇和硫酸銨水溶液按質(zhì)量比(10-20):(200-400):(40-80)混合均勻得到混合物；20-50℃下攪拌10-60?min，離心，保留下層溶液，將溶液抽濾、透析、濃縮、冷凍干燥后得到產(chǎn)物ii；

9、步驟（3）：得到產(chǎn)物ii于deae?sepharose?ff凝膠柱以去離子水為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集從柱子中流出的含有目標(biāo)多糖成分的洗脫液，最后對得到的含有目標(biāo)多糖成分的洗脫液進(jìn)行透析、濃縮和冷凍干燥，最終得到產(chǎn)物iii；

10、步驟（4）：將產(chǎn)物iii于sephacryl?s-400hr凝膠柱上樣，以去離子水為洗脫劑將目標(biāo)多糖從sephacryl?s-400hr凝膠柱上洗脫下來得到多糖溶液，最后多糖溶液經(jīng)透析、濃縮、冷凍干燥后得到梭倫小滴孔菌中性多糖。

11、可選的，梭倫小滴孔菌屬擔(dān)子菌門、傘菌亞門、傘菌綱、多孔菌目、擬層孔菌科，ncbi數(shù)據(jù)庫登記號為kr605741.1。

12、可選的，步驟（2）中的硫酸銨水溶液質(zhì)量濃度為50%-70%。

13、可選的，步驟（1）萃取時(shí)提取時(shí)間為4-14?min，提取溫度為30-80℃，提取壓力為3-7?mpa，循環(huán)1-5次。

14、可選的，步驟（4）在洗脫后還需要將多糖溶液逐漸降溫至4-10℃進(jìn)行初步結(jié)晶，然后再逐漸升溫至室溫進(jìn)行重結(jié)晶，最后進(jìn)行冷凍干燥。

15、通過在步驟（4）中將洗脫后的多糖溶液逐漸降溫至4-10℃進(jìn)行初步結(jié)晶，然后再逐漸升溫至室溫進(jìn)行重結(jié)晶，最后進(jìn)行冷凍干燥，這一系列過程能夠顯著提高梭倫小滴孔菌中性多糖的純度和質(zhì)量。具體來說，低溫初步結(jié)晶有助于優(yōu)先析出雜質(zhì)，而高純度多糖保持在溶液中，逐漸升溫重結(jié)晶則進(jìn)一步釋放殘留雜質(zhì)，提高純度，優(yōu)化晶體結(jié)構(gòu)。此外，冷凍干燥避免了高溫對多糖活性的破壞，最大限度地保留了生物活性，并通過徹底去除水分得到干燥粉末，增加了產(chǎn)品的穩(wěn)定性和便于儲存運(yùn)輸?shù)奶匦浴?/p>

16、根據(jù)上述方法制備的梭倫小滴孔菌中性多糖在制備用于預(yù)防或治療腫瘤的藥物、保健品和食品中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的梭倫小滴孔菌中性多糖，可與藥學(xué)上可接受的載體混合，用于制備有助于抗腫瘤的藥物、保健品或食品。

17、采用上述技術(shù)方案后，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下有益效果，當(dāng)然，實(shí)施本發(fā)明的任一產(chǎn)品并不一定需要同時(shí)達(dá)到以下所述的所有優(yōu)點(diǎn)：

18、本發(fā)明采用了高效的快速溶劑萃取技術(shù)，從梭倫小滴孔菌中獲取粗多糖，接著通過三相分離技術(shù)有效去除雜質(zhì)，隨后利用deae?sepharose?ff離子交換層析對多糖進(jìn)行初步純化，最后結(jié)合sephacryl?s-400?hr分子篩層析進(jìn)一步提純，成功獲得高純度的目標(biāo)中性多糖，這一系列創(chuàng)新性的提取與純化工藝顯著提高了多糖的純度和活性。

19、下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實(shí)施方式做進(jìn)一步詳細(xì)的描述。

技術(shù)特征：

1.一種梭倫小滴孔菌酸性多糖，其特征在于，由梭倫小滴孔菌子實(shí)體提取得到并包含有多種單糖成分，單糖成分包括gal、fuc、man和glc共4種單糖，單糖成分的摩爾比依次為：（30-60）:（20-30）:（10-30）:（1-5），其分子量范圍為3.2×103-4.5×104?da。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種梭倫小滴孔菌中性多糖，其特征在于，梭倫小滴孔菌酸性多糖一級結(jié)構(gòu)中g(shù)al、fuc、man和glc的連接方式為：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種梭倫小滴孔菌中性多糖，其特征在于，其制備方法包括以下步驟：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種梭倫小滴孔菌中性多糖的抗腫瘤用途，其特征在于，梭倫小滴孔菌屬擔(dān)子菌門、傘菌亞門、傘菌綱、多孔菌目、擬層孔菌科，ncbi數(shù)據(jù)庫登記號為kr605741.1。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種梭倫小滴孔菌中性多糖的抗腫瘤用途，其特征在于，步驟（2）中的硫酸銨水溶液質(zhì)量濃度為50%-70%。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種梭倫小滴孔菌中性多糖的抗腫瘤用途，其特征在于，步驟（1）萃取時(shí)提取時(shí)間為4-14?min，提取溫度為30-80℃，提取壓力為3-7?mpa，循環(huán)1-5次。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種梭倫小滴孔菌中性多糖的抗腫瘤用途，其特征在于，步驟（4）在洗脫后還需要將多糖溶液逐漸降溫至4-10℃進(jìn)行初步結(jié)晶，然后再逐漸升溫至室溫進(jìn)行重結(jié)晶，最后進(jìn)行冷凍干燥。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7所述的梭倫小滴孔菌中性多糖在制備用于預(yù)防或治療腫瘤的藥物、保健品和食品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種梭倫小滴孔菌中性多糖及其抗腫瘤用途。本發(fā)明由梭倫小滴孔菌子實(shí)體提取得到并包含有多種單糖成分，單糖成分包括Gal、Fuc、Man和Glc共4種單糖，單糖成分的摩爾比依次為：（30?60）:（20?30）:（10?30）:（1?5）。本發(fā)明采用了高效的快速溶劑萃取技術(shù)，從梭倫小滴孔菌中獲取粗多糖，接著通過三相分離技術(shù)有效去除雜質(zhì)，隨后利用DEAE?Sepharose?FF離子交換層析對多糖進(jìn)行初步純化，最后結(jié)合Sephacryl?S?400?HR分子篩層析進(jìn)一步提純，成功獲得高純度的目標(biāo)中性多糖，這一系列創(chuàng)新性的提取與純化工藝顯著提高了多糖的純度和活性。

技術(shù)研發(fā)人員：牛奎,梁力曼,王悅瑩,張辰颯,王曉晗,孫偉明,楊越冬,王同坤
受保護(hù)的技術(shù)使用者：河北科技師范學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21