本發(fā)明屬于生物，具體涉及一種間充質(zhì)干細(xì)胞治療肺纖維化的體外藥效分析方法。

背景技術(shù)：

1、肺纖維化是由急性肺損傷、哮喘、慢性阻塞性肺炎、肺癌等多種急慢性肺部疾病衍生而來(lái)的病理改變，其病理改變是以成纖維細(xì)胞異常增殖和細(xì)胞外基質(zhì)大量沉積并伴有彌漫性炎癥、肺組織結(jié)構(gòu)破壞為特征的一大類(lèi)肺疾病的終末期改變。特發(fā)性肺纖維化為其最常見(jiàn)的肺纖維化類(lèi)型，患者經(jīng)確診后平均生存期只有3-5年，且目前尚無(wú)治愈藥物。

2、對(duì)肺纖維化形成機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，肺纖維化形成的重要過(guò)程包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、機(jī)體氧化還原水平失衡、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal?transition，emt)、內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和成纖維細(xì)胞活化為肌成纖維細(xì)胞等。肺上皮細(xì)胞發(fā)生的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是肺纖維的重要發(fā)病機(jī)制之一，來(lái)源于emt的成纖維細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞分泌胞外基質(zhì)導(dǎo)致肺纖維化的進(jìn)展，在肺纖維化的生理過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。因此，逆轉(zhuǎn)和抑制emt的進(jìn)程可能是治療肺纖維化的主要途徑。

3、間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal?stem?cells，mscs)，具有向炎癥或損傷部位歸巢的特點(diǎn)，可以抑制炎癥反應(yīng)，促進(jìn)組織修復(fù)與再生和免疫調(diào)節(jié)作用等優(yōu)勢(shì)，經(jīng)靜脈注射后首先歸巢于肺部，對(duì)肺部疾病有很好的治療作用。但目前關(guān)于mscs治療肺纖維化的藥效學(xué)研究，主要存在于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等體內(nèi)藥效研究，對(duì)于體外藥效研究鮮有報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種間充質(zhì)干細(xì)胞治療肺纖維化的體外藥效分析方法。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明首先提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞治療纖維化的體外藥效分析方法。

3、本發(fā)明提供的間充質(zhì)干細(xì)胞治療纖維化的體外藥效分析方法包括如下步驟：

4、1)將含有間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系的嵌套培養(yǎng)小室插入含有纖維化細(xì)胞培養(yǎng)體系的細(xì)胞培養(yǎng)板中，使所述纖維化細(xì)胞與所述間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行非接觸式共培養(yǎng)，得到共培養(yǎng)后的纖維化細(xì)胞；所述纖維化細(xì)胞為誘導(dǎo)上皮細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化后得到的細(xì)胞；所述間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系和所述纖維化細(xì)胞培養(yǎng)體系中的培養(yǎng)基均為支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

5、2)從蛋白水平和/或mrna水平和/或因子分泌水平檢測(cè)所述共培養(yǎng)后的纖維化細(xì)胞，評(píng)價(jià)所述間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)纖維化的治療效果；

6、所述蛋白水平包括上皮細(xì)胞鈣粘素cd324的蛋白表達(dá)水平；

7、所述mrna水平包括纖連蛋白fibronectin的mrna表達(dá)水平和emt轉(zhuǎn)錄因子snail的mrna表達(dá)水平；

8、所述因子分泌水平包括基質(zhì)金屬蛋白酶1的分泌水平和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1的分泌水平。

9、上述方法中，所述上皮細(xì)胞包括不同組織或器官來(lái)源的上皮細(xì)胞。

10、所述組織或器官包括但不限于肺、肝、腎、子宮、呼吸道、肺泡，對(duì)應(yīng)的，所述上皮細(xì)胞包括但不限于肺上皮細(xì)胞、肝上皮細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞、呼吸道上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞。

11、在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述上皮細(xì)胞為肺上皮細(xì)胞；所述肺上皮細(xì)胞包括但不限于肺部支氣管上皮細(xì)胞beas-2b、氣道上皮細(xì)胞hbe、肺上皮細(xì)胞a549。

12、上述方法中，所述纖維化細(xì)胞包括但不限于肺纖維化細(xì)胞、肝纖維化細(xì)胞、腎纖維化細(xì)胞、宮腔黏連、呼吸道纖維化細(xì)胞、肺泡纖維化細(xì)胞。

13、在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述纖維化細(xì)胞為肺纖維化細(xì)胞。

14、上述方法中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞包括人源間充質(zhì)干細(xì)胞。

15、所述人源間充質(zhì)干細(xì)胞包括但不限于人骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞、人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞、人臍帶血源間充質(zhì)干細(xì)胞、人脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞。

16、在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞為人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞。

17、上述方法中，所述支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基(即下文實(shí)施例中的bebm培養(yǎng)基)不含血清且包含用于支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的必需和非必需氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物、激素、生長(zhǎng)因子和微量礦物質(zhì)。

18、在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基為lonza公司的產(chǎn)品，貨號(hào)為cc-3171。

19、上述方法中，所述上皮細(xì)胞和所述間充質(zhì)干細(xì)胞的個(gè)數(shù)比可為1：(1-3)。

20、在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述肺上皮細(xì)胞和所述間充質(zhì)干細(xì)胞的個(gè)數(shù)比為1：1。

21、上述方法中，所述共培養(yǎng)的條件可為5％?co2，飽和濕度，37℃共培養(yǎng)24-72h。

22、在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述共培養(yǎng)的條件為5％?co2，飽和濕度，37℃共培養(yǎng)48h。

23、上述方法具體可包括如下步驟：

24、m1)將上皮細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)，誘導(dǎo)所述上皮細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，得到含有纖維化細(xì)胞培養(yǎng)體系的細(xì)胞培養(yǎng)板；所述細(xì)胞培養(yǎng)板中含有添加tgf-β的支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

25、m2)將所述含有纖維化細(xì)胞培養(yǎng)體系的細(xì)胞培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基(添加tgf-β的支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基)更換為支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后將含有間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系(由間充質(zhì)干細(xì)胞和支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成)的嵌套培養(yǎng)小室插入所述細(xì)胞培養(yǎng)板中，使所述纖維化細(xì)胞與所述間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行非接觸式共培養(yǎng)，得到共培養(yǎng)后的纖維化細(xì)胞；

26、m3)檢測(cè)所述共培養(yǎng)后的纖維化細(xì)胞的上皮細(xì)胞鈣粘素cd324的蛋白表達(dá)水平、纖連蛋白fibronectin的mrna表達(dá)水平、emt轉(zhuǎn)錄因子snail的mrna表達(dá)水平、基質(zhì)金屬蛋白酶1的因子分泌水平和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1的因子分泌水平，評(píng)價(jià)所述間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)纖維化的治療效果。

27、上述m1)中，所述培養(yǎng)的條件可為5％?co2，飽和濕度，37℃培養(yǎng)2-24h，具體的，所述培養(yǎng)的條件為5％?co2，飽和濕度，37℃培養(yǎng)2h。

28、上述m1)中，所述tgf-β在所述支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的濃度可為5-20μg/ml；具體的，所述tgf-β在所述支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的濃度為10ng/ml。

29、上述m1)中，所述上皮細(xì)胞在誘導(dǎo)發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化之前采用begm培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

30、上述m2)中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞在進(jìn)行非接觸式共培養(yǎng)之前采用友康完全培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

31、上述m3)中，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)所述共培養(yǎng)后的纖維化細(xì)胞的上皮細(xì)胞鈣粘素cd324的蛋白表達(dá)水平。

32、上述m3)中，采用熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)所述共培養(yǎng)后的纖維化細(xì)胞的纖連蛋白fibronectin和emt轉(zhuǎn)錄因子snail的mrna表達(dá)水平。

33、上述m3)中，采用elisa技術(shù)檢測(cè)所述共培養(yǎng)后的纖維化細(xì)胞培養(yǎng)上清中的基質(zhì)金屬蛋白酶1和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1的因子分泌水平。

34、上述m3)中，可按照如下方法評(píng)價(jià)所述間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)纖維化的治療效果：若如下指標(biāo)中的一種或多種與對(duì)照相比有顯著差異：上皮細(xì)胞鈣粘素cd324的蛋白表達(dá)水平、纖連蛋白fibronectin的mrna表達(dá)水平、emt轉(zhuǎn)錄因子snail的mrna表達(dá)水平、基質(zhì)金屬蛋白酶1的因子分泌水平與基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1的因子分泌水平的比值，則指示所述間充質(zhì)干細(xì)胞可減輕纖維化程度，用于治療纖維化。

35、優(yōu)選的，若如下指標(biāo)均與對(duì)照相比有顯著差異：上皮細(xì)胞鈣粘素cd324的蛋白表達(dá)水平、纖連蛋白fibronectin的mrna表達(dá)水平、emt轉(zhuǎn)錄因子snail的mrna表達(dá)水平、基質(zhì)金屬蛋白酶1的因子分泌水平與基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1的因子分泌水平的比值，則指示所述間充質(zhì)干細(xì)胞可減輕纖維化程度，用于治療纖維化。

36、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明還提供了一種試劑盒；所述試劑盒的功能為如下p1)-p4)中的任一種：

37、p1)治療和/或輔助治療纖維化藥物的體外藥效分析；

38、p2)評(píng)價(jià)或輔助評(píng)價(jià)治療和/或輔助治療纖維化藥物的治療效果；

39、p3)篩選或輔助篩選治療和/或輔助治療纖維化的藥物；

40、p4)研究或輔助研究纖維化的發(fā)病機(jī)制。

41、本發(fā)明提供的試劑盒包括上述支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基、用于檢測(cè)上皮細(xì)胞鈣粘素cd324蛋白表達(dá)水平的物質(zhì)、用于檢測(cè)纖連蛋白fibronectin?mrna表達(dá)水平的物質(zhì)、用于檢測(cè)emt轉(zhuǎn)錄因子snail?mrna表達(dá)水平的物質(zhì)、用于檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶1含量的物質(zhì)和用于檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1含量的物質(zhì)。

42、上述試劑盒中，所述用于檢測(cè)上皮細(xì)胞鈣粘素cd324蛋白表達(dá)水平的物質(zhì)為采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)上皮細(xì)胞鈣粘素cd324蛋白表達(dá)水平的試劑和/或儀器。進(jìn)一步的，所述采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)上皮細(xì)胞鈣粘素cd324蛋白表達(dá)水平的試劑包括cd324抗體，所述采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)上皮細(xì)胞鈣粘素cd324蛋白表達(dá)水平的儀器包括流式細(xì)胞儀。

43、所述用于檢測(cè)纖連蛋白fibronectin?mrna表達(dá)水平的物質(zhì)為采用熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)纖連蛋白fibronectin?mrna表達(dá)水平的試劑和/或儀器。進(jìn)一步的，所述采用熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)纖連蛋白fibronectin?mrna表達(dá)水平的試劑包括采用熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)纖連蛋白fibronectin?mrna表達(dá)水平的pcr引物，所述采用熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)纖連蛋白fibronectin?mrna表達(dá)水平的儀器包括熒光定量pcr儀。更進(jìn)一步的，所述采用熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)纖連蛋白fibronectin?mrna表達(dá)水平的pcr引物序列如下：cggtggctgtcagtcaaag和aaacctcggcttcctccataa。

44、所述用于檢測(cè)emt轉(zhuǎn)錄因子snail?mrna表達(dá)水平的物質(zhì)為采用熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)emt轉(zhuǎn)錄因子snail?mrna表達(dá)水平的試劑和/或儀器。進(jìn)一步的，所述采用熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)emt轉(zhuǎn)錄因子snail?mrna表達(dá)水平的試劑包括采用熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)emt轉(zhuǎn)錄因子snail?mrna表達(dá)水平的pcr引物，所述采用熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)emt轉(zhuǎn)錄因子snailmrna表達(dá)水平的儀器包括熒光定量pcr儀。更進(jìn)一步的，所述采用熒光定量pcr技術(shù)檢測(cè)emt轉(zhuǎn)錄因子snail?mrna表達(dá)水平的pcr引物序列如下：ccccaatcggaagcctaact和cgtagggctgctggaaggta。

45、所述用于檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶1含量的物質(zhì)為采用elisa技術(shù)檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶1含量的試劑和/或儀器。進(jìn)一步的，所述采用elisa技術(shù)檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶1含量的試劑包括mmp1?elisa試劑盒中的試劑。更進(jìn)一步的，所述mmp1?elisa試劑盒為abcam公司的產(chǎn)品，貨號(hào)為ab215083。

46、所述用于檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1含量的物質(zhì)為采用elisa技術(shù)檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1含量的試劑和/或儀器。進(jìn)一步的，所述采用elisa技術(shù)檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1含量的試劑包括timp1?elisa試劑盒中的試劑。更進(jìn)一步的，所述timp1elisa試劑盒為novus公司的產(chǎn)品，貨號(hào)為dtm100。

47、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明還提供了如下n1)-n10)任一種應(yīng)用：

48、n1)上述方法或上述試劑盒在治療和/或輔助治療纖維化藥物的體外藥效分析中的應(yīng)用；

49、n2)上述方法或上述試劑盒在評(píng)價(jià)或輔助評(píng)價(jià)治療和/或輔助治療纖維化藥物的治療效果中的應(yīng)用；

50、n3)上述方法或上述試劑盒在篩選或輔助篩選治療和/或輔助治療纖維化的藥物中的應(yīng)用；

51、n4)上述方法或上述試劑盒在研究或輔助研究纖維化的發(fā)病機(jī)制中的應(yīng)用；

52、n5)上述試劑盒在制備治療和/或輔助治療纖維化藥物的體外藥效分析的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

53、n6)上述試劑盒在制備評(píng)價(jià)或輔助評(píng)價(jià)治療和/或輔助治療纖維化藥物的治療效果的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

54、n7)上述試劑盒在制備篩選或輔助篩選治療和/或輔助治療纖維化的藥物的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

55、n8)上述試劑盒在制備研究或輔助研究纖維化的發(fā)病機(jī)制的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

56、n9)上皮細(xì)胞鈣粘素cd324的蛋白表達(dá)水平、纖連蛋白fibronectin的mrna表達(dá)水平、emt轉(zhuǎn)錄因子snail的mrna表達(dá)水平、基質(zhì)金屬蛋白酶1的分泌水平和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1的分泌水平在作為評(píng)價(jià)藥物對(duì)纖維化治療效果的指標(biāo)中的應(yīng)用；

57、n10)上述用于檢測(cè)上皮細(xì)胞鈣粘素cd324蛋白表達(dá)水平的物質(zhì)、上述用于檢測(cè)纖連蛋白fibronectin?mrna表達(dá)水平的物質(zhì)、上述用于檢測(cè)emt轉(zhuǎn)錄因子snail?mrna表達(dá)水平的物質(zhì)、上述用于檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶1含量的物質(zhì)和上述用于檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1含量的物質(zhì)在制備評(píng)價(jià)藥物對(duì)纖維化治療效果的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

58、上述任一所述藥物包括間充質(zhì)干細(xì)胞。

59、進(jìn)一步的，所述間充質(zhì)干細(xì)胞包括人源間充質(zhì)干細(xì)胞。

60、再進(jìn)一步的，所述人源間充質(zhì)干細(xì)胞包括但不限于人骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞、人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞、人臍帶血源間充質(zhì)干細(xì)胞、人脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞。

61、在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞為人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞。

62、上述任一所述纖維化包括但不限于肺纖維化、肝纖維化、腎纖維化、宮腔黏連、呼吸道纖維化、肺泡纖維化。

63、在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述纖維化為肺纖維化。

64、上述任一所述纖連蛋白fibronectin的氨基酸序列如序列表中序列1所示。

65、上述任一所述emt轉(zhuǎn)錄因子snail的氨基酸序列如序列表中序列2所示。

66、上述任一所述上皮細(xì)胞鈣粘素cd324的氨基酸序列如序列表中序列3所示。

67、上述任一所述基質(zhì)金屬蛋白酶1的氨基酸序列如序列表中序列4所示。

68、上述任一所述基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1的氨基酸序列如序列表中序列5所示。

69、本發(fā)明提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞治療肺纖維化的體外藥效分析方法，所述方法是通過(guò)tgf-β誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞beas-2b發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，體外構(gòu)建得到肺纖維化細(xì)胞模型，然后在此基礎(chǔ)上給予間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)治療，最后分別從mrna水平、細(xì)胞表面表達(dá)蛋白水平和因子分泌水平探究間充質(zhì)干細(xì)胞抑制beas-2b細(xì)胞間質(zhì)情況，實(shí)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞治療肺纖維化的體外藥效分析。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明：支氣管上皮細(xì)胞beas-2b經(jīng)tgf-β刺激后，fibronectin表達(dá)量極顯著上升，說(shuō)明beas-2b細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)轉(zhuǎn)化，體外成功構(gòu)建得到肺纖維化細(xì)胞模型；在此基礎(chǔ)上分別給予不同批次人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行體外共培養(yǎng)治療，發(fā)現(xiàn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞降低了肺纖維化細(xì)胞中纖維化指標(biāo)纖連蛋白fibronectin以及轉(zhuǎn)錄因子snail的表達(dá)水平，提高了上皮細(xì)胞比率(cd324陽(yáng)性細(xì)胞占比)和上清中mmp1/timp1比值，證明了不同批次人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞均能緩解肺纖維化程度，對(duì)肺纖維化具有明顯治療效果。本發(fā)明提供的間充質(zhì)干細(xì)胞治療肺纖維化的體外藥效分析方法可穩(wěn)定指示間充質(zhì)干細(xì)胞治療肺纖維化的效果，在間充質(zhì)干細(xì)胞治療肺纖維化的體外藥效分析中具有良好的應(yīng)用前景。

70、本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)主要在于兩個(gè)方面：

71、(1)本發(fā)明建立了治療肺纖維化體外細(xì)胞模型，該模型采用肺部支氣管上皮細(xì)胞beas-2b作為受體細(xì)胞，使用tgf-β作為造模劑，共培養(yǎng)中采用bebm無(wú)血清體系，并明確了間充質(zhì)干細(xì)胞msc對(duì)肺纖維化進(jìn)行治療性給藥的各個(gè)參數(shù)。相比采用其他培養(yǎng)體系，采用bebm無(wú)血清體系可以極顯著降低各纖維化指標(biāo)，且可重復(fù)性高，多次重復(fù)試驗(yàn)均可以明確看到間充質(zhì)細(xì)胞對(duì)肺纖維化的治療效果。本發(fā)明建立的治療肺纖維化的體外細(xì)胞模型對(duì)后續(xù)開(kāi)發(fā)或篩選治療或預(yù)防纖維化藥物具有重要意義。

72、(2)在建立的治療肺纖維化體外細(xì)胞模型的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還從纖連蛋白fibronectin和emt轉(zhuǎn)錄因子snail的mrna表達(dá)水平、上皮細(xì)胞鈣粘素cd324的蛋白表達(dá)水平、基質(zhì)金屬蛋白酶1和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1含量三個(gè)方面都證明了間充質(zhì)干細(xì)胞msc對(duì)肺纖維化有治療作用，首次提出通過(guò)mrna表達(dá)水平、細(xì)胞表面表達(dá)蛋白水平和因子分泌水平三項(xiàng)組合綜合評(píng)價(jià)間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)纖維化治療效果的系統(tǒng)評(píng)價(jià)體系。相比于傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)僅以某一指標(biāo)有變化來(lái)評(píng)價(jià)間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)纖維化的治療效果，本發(fā)明建立的系統(tǒng)評(píng)價(jià)體系中的評(píng)價(jià)指標(biāo)更加全面，可以更準(zhǔn)確、更穩(wěn)定的指示間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)纖維化的治療效果，對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞治療纖維化的體外藥效分析具有重要意義。