本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)耳聾基因試劑盒，具體為檢測(cè)4個(gè)耳聾基因的全外顯子的檢測(cè)試劑盒，屬于基因測(cè)序和生物檢驗(yàn)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：耳聾是一種最常見(jiàn)的感覺(jué)系統(tǒng)疾病，在新生兒中的發(fā)病率約為1/1000，其中約60％的耳聾患者是由于遺傳因素造成的。按表型特點(diǎn)不同分為綜合征性耳聾(SHI)和非綜合征性耳聾(NSHI)。根據(jù)遺傳方式不同將遺傳性耳聾分為常染色體顯性遺傳(AD)、常染色體隱性遺傳(AR)、X連鎖遺傳、Y連鎖遺傳及線粒體遺傳五類，其中以常染色體隱性遺傳性耳聾最多見(jiàn)，約占75％-80％。大規(guī)模耳聾分子流行病學(xué)研究表明，我國(guó)人群中最常見(jiàn)的致病基因包括GJB2、GJB3、SLC26A4(PDS)、線粒體DNA(12SrRNA)。GJB2基因定位在13q12區(qū)域，與DFNB1的表型相關(guān)，以輕度至極重度的語(yǔ)前感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失為多見(jiàn)，亦可表現(xiàn)進(jìn)行性聽(tīng)力損害。GJB2基因全長(zhǎng)4804bp，編碼區(qū)678bp，含2個(gè)外顯子，編碼縫隙連接蛋白connexin26(Cx26)。如果縫隙連接復(fù)合物中的Cx26蛋白缺乏，就會(huì)妨礙去極化相進(jìn)入細(xì)胞的鉀離子在復(fù)極相回流，使Corti器局部鉀離子中毒并造成耳聾。對(duì)GJB2基因型與表型的相關(guān)性研究，比較一致的認(rèn)識(shí)是GJB2基因的缺乏造成先天性聽(tīng)力損失，而缺失、框移、剪接和不穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄等涉及功能缺失的突變可能與綜合征或成年后耳聾有關(guān)，并且決定于突變位點(diǎn)的重要性及替換氨基酸的性質(zhì)。GJB2基因突變范圍幾乎涉及該基因所有編碼區(qū)域，突變形式包括剪切、無(wú)義突變、錯(cuò)義突變、插入及缺失導(dǎo)致移碼突變等。GJB3定位于人類染色體1p33-35，編碼有270個(gè)氨基酸的連接蛋白31，全長(zhǎng)3617bP。GJB3基因編碼的蛋白Cx31是間隙連接蛋白家族中的重要成員，分布在身體多個(gè)組織器官上，但以皮膚和內(nèi)耳最多，其突變可導(dǎo)致可變性紅斑皮膚角化病(EKV)、聽(tīng)力損傷和周圍神經(jīng)病變，是后天高頻感音神經(jīng)性耳聲患者的常見(jiàn)突變基因。SLC26A4基因又稱PDS基因，位于人類染色體7q31，含有21個(gè)外顯子，編碼含有780個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)Pendrin。SLC26A4基因與DFNB4表型相關(guān)，呈進(jìn)行性或波動(dòng)性癥狀，一般可以發(fā)展至極重度聽(tīng)力損失，累及所有頻率。線粒體DNA突變易導(dǎo)致藥物性耳聾，藥物中毒性耳聾指的是使用某些藥物治病或人體接觸某些化學(xué)制劑所引起的耳聾。對(duì)耳功能有毒性作用，引起耳聾的藥物，統(tǒng)稱為耳毒性藥物。多年來(lái)，由于大量化學(xué)藥物和抗生素的廣泛應(yīng)用，己發(fā)現(xiàn)近百種耳毒性藥物。mtDNA突變A1555G和C1494T，使得人體線粒體中的12SrRNA的結(jié)構(gòu)與細(xì)菌的16SrRNA的結(jié)構(gòu)更為相似，使得氨基糖苷類抗生素在與細(xì)菌結(jié)合的同時(shí)，與人體12SrRNA也形成了較為緊密的結(jié)合。已知AmAn發(fā)揮抗菌作用是靠其特異地與細(xì)菌核糖體結(jié)合，抑制蛋白合成或?qū)е耺RNA錯(cuò)譯。A1555G突變產(chǎn)生的G-C堿基對(duì)有利于與AmAn結(jié)合。其結(jié)果破壞了線粒體蛋白的合成及減少了ATP的產(chǎn)量，使細(xì)胞內(nèi)外離子濃度失衡，導(dǎo)致了耳蝸毛細(xì)胞的死亡。目前臨床上對(duì)遺傳性耳聾致病基因診斷的主要方法包括限制性長(zhǎng)度多態(tài)性分析(RFLP)、斑點(diǎn)雜交(ASO)、基因掃描、變性高效液相色譜分析(DHPLC)、直接測(cè)序、基因芯片方法等。但這些技術(shù)或耗時(shí)費(fèi)力，或成本較高，或難以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因的不同突變位點(diǎn)，或只能用于檢測(cè)已知突變對(duì)于新發(fā)突變或者低頻突變無(wú)法覆蓋。使用上述方法進(jìn)行檢測(cè)的主要用于檢測(cè)GJB2基因位點(diǎn)：35delG、235delC、299delAT、176del16；GJB3基因位點(diǎn)：538C＞T；SLC26A4基因位點(diǎn)：2168A＞G、IVS7-2A＞G；以及12SrRNA位點(diǎn)：1494C＞T、1555A＞G。以上位點(diǎn)檢測(cè)面窄，如GJB2基因的突變涉及所有外顯子區(qū)域，因此需要一種覆蓋度全的檢測(cè)方法，涉及4個(gè)基因的全外顯子區(qū)域。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本實(shí)用新型要解決的主要技術(shù)問(wèn)題是提供一個(gè)同時(shí)檢測(cè)GJB2基因、GJB3基因、12SrRNA基因和SLC26A4基因的全外顯子的耳聾基因檢測(cè)試劑盒。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采用以下設(shè)計(jì)方案：一種檢測(cè)耳聾基因的試劑盒，由帶蓋盒體、固定模塊和檢測(cè)試劑組成；帶蓋盒體內(nèi)設(shè)有第一固定模塊和第二固定模塊，固定模塊上設(shè)有檢測(cè)試劑容置孔，檢測(cè)試劑放置于固定模塊上的檢測(cè)試劑容置孔內(nèi)，兩個(gè)固定模塊接觸相接放置在帶蓋盒體內(nèi)，兩個(gè)固定模塊的縱截面為直角梯形，當(dāng)兩個(gè)直角梯形的斜邊重合時(shí)，兩直角邊平行。所述直角梯形的銳角為45°至87°。所述直角梯形的銳角為60°至80°。固定模塊的材質(zhì)可以是紙質(zhì)、高分子材質(zhì)或海綿等。進(jìn)一步地，所述放置在第一固定模塊的檢測(cè)試劑容置孔內(nèi)的檢測(cè)試劑為引物池1試劑、引物池2試劑、引物池3試劑、引物池4試劑、rTaq酶試劑、10×PCR反應(yīng)緩沖液試劑、多重PCR引物試劑；放置在第二固定模塊的檢測(cè)試劑容置孔內(nèi)的檢測(cè)試劑為引物池5試劑、引物池6試劑、引物池7試劑、引物池8試劑、LATaq酶試劑、2×GC反應(yīng)緩沖液試劑、dNTP混合液試劑。進(jìn)一步地，所述放置在第一固定模塊和/或第二固定模塊的檢測(cè)試劑容置孔內(nèi)的檢測(cè)試劑還包括滅菌蒸餾水。所述rTaq酶試劑的濃度為5U/ul，LATaq酶試劑的濃度為5U/ul，dNTP混合液試劑的濃度為2.5mM。所述引物池1試劑、引物池2試劑、引物池3試劑、引物池4試劑、引物池5試劑、引物池6試劑、引物池7試劑和引物池8試劑選自序列表SEQIDNo.1至SEQIDNo.170所示的引物序列。所述引物序列的5’端帶有一個(gè)樣本標(biāo)簽序列。所述樣本標(biāo)簽序列為6～12個(gè)堿基的核苷酸序列。所述樣本標(biāo)簽序列選自下述核苷酸序列中的一個(gè)或多個(gè)：(1)CTGCGACT；(2)TGTAGATA；(3)TGATATCT；(4)CGATGCTA；(5)AGACTAGA；(6)TGTCTGTG；(7)CATACTGA；(8)TGCTCGCA；(9)ATGAGTAG；(10)CTCACTAT；(11)GTACTACT；(12)TAGACTAG；(13)TATGCTAC；(14)ACTCGCTG；(15)ATCACGCA；(16)GCATGTGA。本實(shí)用新型根據(jù)選擇目的基因GJB2/GJB3/SLC26A4/12SrRNA的外顯子的DNA序列設(shè)計(jì)特異性引物。引物與引物之間不形成二聚體，引物自身不形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，引物與模板之間不發(fā)生錯(cuò)配，且引物設(shè)計(jì)區(qū)域不存在突變位點(diǎn)。同時(shí)，在引物設(shè)計(jì)時(shí)，每對(duì)引物之間的退火溫度差異小于2攝氏度，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度在100-250bp之間。所述耳聾基因檢測(cè)引物，能夠同時(shí)檢測(cè)GJB2基因、GJB3基因、12SrRNA基因和SLC26A4基因的全外顯子。表1耳聾基因擴(kuò)增引物本實(shí)用新型采用多重PCR反應(yīng)。根據(jù)引物設(shè)計(jì)方案，將表1中引物序列分組為8個(gè)引物池(引物pool)，參見(jiàn)表2所示，每個(gè)引物池中的引物為10-16對(duì)。表2耳聾基因擴(kuò)增引物池(引物pool)其中引物池IDNO：1至引物池IDNO：4使用rTaq酶進(jìn)行擴(kuò)增；引物池IDNO：5至引物池IDNO：8使用LATaq酶進(jìn)行擴(kuò)增。為了區(qū)別不同樣本，所有引物均在5’端帶有樣本標(biāo)簽序列，不同樣本使用不同的標(biāo)簽序列。樣本標(biāo)簽序列為6～12個(gè)堿基的核苷酸序列，優(yōu)選8個(gè)堿基，如表3中的16個(gè)標(biāo)簽序列。所述標(biāo)簽只是為了區(qū)別每個(gè)樣品，以便用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要以及通常的引物設(shè)計(jì)原則選擇使用不同的標(biāo)簽，而實(shí)現(xiàn)本實(shí)用新型的目的。因此，在一些實(shí)施方案中可以使用任何可以達(dá)到上述目的，且不會(huì)與檢測(cè)目的物相互作用的標(biāo)簽序列。表3樣本標(biāo)簽序列表本實(shí)用新型中，全外顯子檢測(cè)試劑分為兩組同時(shí)使用：其中一組采用編號(hào)為No.1-No.4的4個(gè)引物池試劑、rTaq酶試劑、10×PCR反應(yīng)緩沖液試劑進(jìn)行擴(kuò)增及測(cè)序；另一組采用編號(hào)為No.6-No.8的4個(gè)引物池試劑、LATaq酶試劑、2×GC反應(yīng)緩沖液試劑進(jìn)行擴(kuò)增及測(cè)序。由于測(cè)定中兩組試劑同時(shí)使用，容易產(chǎn)生混淆，因此將兩組試劑分別置于兩個(gè)固定模塊上，在試劑瓶上還可以為同組試劑增加相同顏色標(biāo)簽以區(qū)別于另一組試劑。兩個(gè)固定模塊以斜面相接放置在盒體內(nèi)，形成一個(gè)長(zhǎng)方體，該斜面設(shè)計(jì)使兩個(gè)固定模塊具有較大的接觸面，模塊縱截面的直角梯形的銳角越小，兩斜面的相對(duì)接觸面積越大，產(chǎn)生摩擦力也越大，從而避免了在運(yùn)輸過(guò)程中兩個(gè)固定模塊的相互碰撞，起到了良好的減震作用。本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是：本實(shí)用新型設(shè)計(jì)了一套全新的同時(shí)檢測(cè)4個(gè)耳聾基因的全外顯子共計(jì)9497bp的特異性多重PCR引物及使用該引物進(jìn)行檢測(cè)的方法。與現(xiàn)有技術(shù)相比，上述技術(shù)方案應(yīng)用高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)，可以快速準(zhǔn)確的檢測(cè)所有位于4個(gè)耳聾基因上的突變位點(diǎn)，包括一直熱點(diǎn)突變和新發(fā)突變。具有高通量、低成本、檢出率高等特點(diǎn)。下面結(jié)合說(shuō)明書(shū)附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本實(shí)用新型做進(jìn)一步說(shuō)明，并非對(duì)本實(shí)用新型的限制。凡依照本實(shí)用新型公開(kāi)內(nèi)容所進(jìn)行的本領(lǐng)域等同替換，均屬于本實(shí)用新型保護(hù)范圍。附圖說(shuō)明圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖圖2為實(shí)施例1盒體內(nèi)部試劑排布示意圖圖3為實(shí)施例1的固定模塊的縱剖面圖。具體實(shí)施方式在本實(shí)用新型的實(shí)施例中，采用本實(shí)用新型的特異性引物及高通量測(cè)序方法，對(duì)從血液從提取的DNA樣本進(jìn)行檢測(cè)，獲得樣本的耳聾基因檢測(cè)結(jié)果。以下實(shí)施例的試劑及來(lái)源如下：DNA提取試劑：購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司。PCR反應(yīng)試劑：擴(kuò)增引物包括序列表SEQIDNo.1-SEQIDNo.170的核苷酸序列，每條引物的5’端連接表3中的同一個(gè)樣品標(biāo)簽序列，每一組擴(kuò)增引物均按表2分成8個(gè)引物池，引物池IDNo.1-引物池IDNo.8；由英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司合成；PCR反應(yīng)試劑：購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司。純化試劑：無(wú)水乙醇購(gòu)自上海西巴斯生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；Nuclease-FreeWater購(gòu)自英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司；AgencourtAMPureXP-核酸純化試劑盒購(gòu)自貝克曼庫(kù)爾特公司；文庫(kù)制備試劑：購(gòu)自英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司；測(cè)序試劑：OneTouch試劑購(gòu)自英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司；測(cè)序試劑購(gòu)自英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司。臨床標(biāo)本：遵循知情同意的原則，由連云港市婦幼保健院收集13個(gè)家系，43例耳聾患者的臨床資料及血液樣本，對(duì)所有患者進(jìn)行詳細(xì)的病史調(diào)查、全身檢查及聽(tīng)力學(xué)檢查，并抽取5ml靜脈血用于基因組DNA的提取。實(shí)施例1：檢測(cè)耳聾基因的試劑盒一、檢測(cè)試劑組成1、rTaq酶，5U/ul2、10XPCR反應(yīng)緩沖液，市售3、dNTP混合液，2.5mM4、LATaq酶，5U/ul5、2×GC反應(yīng)緩沖液，市售6、滅菌蒸餾水7、引物混合液(100uM)：引物混合液為引物池1，引物池2，引物池3，引物池4，引物池5，引物池6，引物池7，引物池8。各引物池中引物的序列和引物池分組情況見(jiàn)表1和表2。二、試劑盒結(jié)構(gòu)參閱圖1至圖3所示，檢測(cè)耳聾基因的試劑盒，由帶蓋盒體(1)、固定模塊和檢測(cè)試劑組成；帶蓋盒體(1)內(nèi)設(shè)有第一固定模塊(21)和第二固定模塊(22)，固定模塊上設(shè)有檢測(cè)試劑容置孔，檢測(cè)試劑分別放置于固定模塊內(nèi)，兩個(gè)固定模塊接觸相接放置在盒體內(nèi)，兩個(gè)固定模塊的縱截面為直角梯形，直角梯形的銳角為60°，當(dāng)兩個(gè)直角梯形的斜邊重合時(shí)，兩直角邊平行。固定模塊的材質(zhì)為高分子材質(zhì)。放置在第一固定模塊(21)的試劑容置孔內(nèi)的檢測(cè)試劑為：引物池1試劑(31)、引物池2試劑(32)、引物池3試劑(33)、引物池4試劑(34)、rTaq酶試劑(41)、10×PCR反應(yīng)緩沖液試劑(5)、多重PCR引物試劑(6)；放置在第二固定模塊(22)的試劑容置孔內(nèi)的檢測(cè)試劑為：引物池5試劑(35)、引物池6試劑(36)、引物池7試劑(37)、引物池8試劑(38)、LATaq酶試劑(42)、2×GC反應(yīng)緩沖液試劑(7)、dNTP混合液試劑(8)、滅菌蒸餾水(9)。三、耳聾基因檢測(cè)試劑盒的使用方法：1、使用市場(chǎng)通用DNA提取試劑盒提取出待測(cè)樣本DNA，見(jiàn)實(shí)施例2；2、使用本試劑盒對(duì)提取好的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，見(jiàn)實(shí)施例3；3、而后使用LIFETECHNOLOGY公司通用建庫(kù)及測(cè)序試劑進(jìn)行二代測(cè)序，見(jiàn)實(shí)施例4和5；4、測(cè)序結(jié)果使用計(jì)算機(jī)進(jìn)行自動(dòng)分析，根據(jù)分析結(jié)果判定是否存在突變，見(jiàn)實(shí)施例6。實(shí)施例2：提取全血標(biāo)本中的DNA1)從-20℃冰箱中取出樣品，置于室溫下溶解，同時(shí)打開(kāi)水浴鍋設(shè)為56℃。2)在1.5ml離心管中加入20ul蛋白酶K，加入200ul充分溶解的全血(使用前顛倒混勻)，振蕩混勻，短時(shí)離心以去除管內(nèi)壁的液滴。3)加入200ul緩沖液GB，振蕩混勻，短時(shí)離心以去除管內(nèi)壁的液滴將離心管放入56℃中水浴10min，并不時(shí)輕搖樣品。4)將離心管從水浴鍋中取出，稍冷，加入200ul無(wú)水乙醇，振蕩混勻，短時(shí)離心后于室溫靜置3分鐘。5)將上述混合液轉(zhuǎn)入吸附柱CR2中，應(yīng)謹(jǐn)慎操作以避免污染提取柱管口，12000rpm離心30sec，棄廢液液，將吸附柱CR2放回收集管中。6)向吸附柱中加入500ul緩沖液GD(使用前先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心30sec，棄廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。7)向洗脫柱中加入600ul漂洗液PW(使用前先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心30sec，棄廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。8)向洗脫柱中加入600ul漂洗液PW，12000rpm離心30sec，棄廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。9)12000rpm離心2min，將吸附柱放在新的1.5ml離心管上晾干3min至乙醇充分揮發(fā)。10)加入50ul洗脫緩沖液TB，室溫溶解5min，12000rpm離心2min。11)在離心管上貼好相應(yīng)的條形碼，取1μl樣品，用于DNA定量分析。12)保存核酸標(biāo)本至-20攝氏度冰箱。實(shí)施例3：多重PCR擴(kuò)增使用實(shí)施例2得到的DNA為模板，進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增。其中所述的多重PCR反應(yīng)體系為25u1體系，具體反應(yīng)體系及反應(yīng)程序如下表所示。表4：引物池IDNo.1-引物池IDNo.4的反應(yīng)體系表5：引物池IDNo.5-引物池IDNo.8的反應(yīng)體系序號(hào)試劑體積(ul)1模板DNA22LATaq聚合酶0.232XGC緩沖液12.54dNTP混合液(2.5mM)45多重PCR引物(100uM)46滅菌蒸餾水2.3Total25表6：PCR反應(yīng)程序結(jié)果：每個(gè)樣本得到8個(gè)多重PCR產(chǎn)物。實(shí)施例4：文庫(kù)制備將實(shí)施例3得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行混合后使用AgencourtAMPureXP-核酸純化試劑盒進(jìn)行純化。純化后的產(chǎn)物進(jìn)行文庫(kù)制備，文庫(kù)制備步驟如下：1、末端修復(fù)表7：末端修復(fù)反應(yīng)體系將反應(yīng)體系震蕩混勻并離心后，室溫孵育20min。孵育結(jié)束后使用AgencourtAMPureXP-核酸純化試劑盒進(jìn)行純化，最后溶解在27ul無(wú)核酶水中。2、接頭連接表8：接頭連接反應(yīng)體系將接頭連接反應(yīng)混合震蕩混勻并離心后，置于PCR儀上，25攝氏度孵育15min，72攝氏度孵育5min。孵育結(jié)束后，使用AgencourtAMPureXP-核酸純化試劑盒進(jìn)行純化，最后溶解在30ul無(wú)核酶水中。3、PCR反應(yīng)表9：PCR反應(yīng)體系：將接頭連接反應(yīng)MIX震蕩混勻并離心后，置于PCR儀上，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，具體反應(yīng)程序如下：表10：PCR反應(yīng)程序PCR反應(yīng)在ABI公司的VERITIPCR儀上進(jìn)行。PCR反應(yīng)結(jié)束后，使用AgencourtAMPureXP-核酸純化試劑盒進(jìn)行純化，最后溶解在25u1無(wú)核酶水中，使用QUBIT熒光計(jì)對(duì)純化后的產(chǎn)物進(jìn)行定量，得到擴(kuò)增文庫(kù)。實(shí)施例5：高通量測(cè)序反應(yīng)將實(shí)施例4得到的制備好的擴(kuò)增文庫(kù)，經(jīng)過(guò)oneTouch試劑進(jìn)行油包水反應(yīng)，而后將油包水反應(yīng)產(chǎn)物上樣至測(cè)序反應(yīng)芯片上，最后使用LIFETECHNOLOGY公司測(cè)序儀PGM進(jìn)行測(cè)序。具體操作步驟如下：1、將實(shí)施例4制備好的文庫(kù)稀釋成100pM；2、按照LIFETECHNOLOGY公司OneTouch2儀器操作說(shuō)明，安裝好OT2儀器相關(guān)耗材；3、按照表10配制OT2擴(kuò)增反應(yīng)液表114、將制備好的OT2擴(kuò)增反應(yīng)液及油相反應(yīng)液按照操作說(shuō)明加入至適配器中，啟動(dòng)OT2儀器開(kāi)始進(jìn)行油包水反應(yīng)；5、油包水反應(yīng)完成后，使用OT2ES系統(tǒng)對(duì)油包水?dāng)U增反應(yīng)完成的產(chǎn)物進(jìn)行回收富集；6、將回收富集好的油包水PCR反應(yīng)產(chǎn)物中加5ulControlIonSphereParticles(質(zhì)控離子球顆粒，ISP)，然后再加100ulAnnealingBuffer(退火緩沖液)，用吸頭吹打混勻，15500g離心2min(注意離心管方向)。小心去除上清至剩余3ul，往管里面加3ulSequencingPrimer(測(cè)序引物)，用移液器吹打混勻，使ISPs懸浮。將離心管放在PCR儀上運(yùn)行以下程序：95℃，2min；37℃，2min；15℃，∞。從PCR儀上取出樣品，往里面加入1ulPGM200SequencingPolymerase(測(cè)序反應(yīng)聚合酶)，使總體積為7ul，吹打混勻后室溫孵育5min。7、準(zhǔn)備好PGM測(cè)序儀初始化試劑，將PGM測(cè)序儀進(jìn)行初始化，初始化試劑如表12：表128、孵育好的油包水反應(yīng)產(chǎn)物上樣至PGM測(cè)序儀配套314芯片上，上樣完成后直接置于初始化完成的測(cè)序儀上開(kāi)始測(cè)序反應(yīng)。實(shí)施例6：信息分析檢測(cè)耳聾基因突變將本是用新型檢測(cè)方法用于43例臨床標(biāo)本檢測(cè)，得到4個(gè)基因所有SNP結(jié)果，經(jīng)過(guò)過(guò)濾得到每個(gè)樣本的基因突變結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果與sanger測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，比對(duì)結(jié)果如下：表13綜上所述，使用本實(shí)用新型所述引物及檢測(cè)方法，可以準(zhǔn)確快速的檢測(cè)非綜合征型耳聾基因多態(tài)性，且準(zhǔn)確性與sdnger測(cè)序法進(jìn)行比較，一致性達(dá)到100％。因此，本實(shí)用新型可用于耳聾基因檢測(cè)，在臨床上具有較大的應(yīng)用及推廣價(jià)值。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3