用于生物材料和微生物的保存和保護(hù)的糖肽衍生物的制作方法

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本發(fā)明涉及糖肽衍生物及其制備方法，和其作為佐劑用于生物材料或微生物的保存和/或保護(hù)和/或再生以及用于化妝品應(yīng)用如抗老化、皮膚保護(hù)或皮膚再生的用途。

背景技術(shù)：

生物材料的保存已成為深入研究的主題。已確認(rèn)抗凍糖蛋白具有用于這種應(yīng)用的可能性。

在二十世紀(jì)60年代后期，Arthur DeVries證明南極魚類的抗凍性是由于血清糖蛋白，所述血清糖蛋白通過抑制冰的生長(zhǎng)并保護(hù)細(xì)胞免受低體溫?fù)p傷將所述魚類的冰凍溫度降低至包圍其的零下的海水冰凍溫度以下。

被稱為抗凍糖蛋白AFGPs的這些糖蛋白具有一種結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)由一些(Ala-Ala-Thr)n的重復(fù)單元與作為糖苷被連接至Thr殘基的羥基氧的二糖β-D-半乳糖基-(1→3)-α-N-乙酰基-D-半乳糖胺組成。

糖肽有八個(gè)不同的亞型，其分子質(zhì)量在2.6kDa(n＝4)至33.7kDa(n＝50)間變動(dòng)。已觀察到AFGPs保護(hù)物種免受寒冷誘導(dǎo)的損傷。

Rubinsky等人已在WO 1991/010361中強(qiáng)調(diào)了用于這些應(yīng)用的含有抗凍糖蛋白的制劑的作用。

然而，在以上專利申請(qǐng)或在以下出版物(Chem.Rev.(1996),96(2),601-617；Ann.Rev.Biophys.Chem.(1986),15,59-78)中進(jìn)行的大部分研究主要顯示了在低體溫條件尤其是冰凍和/或玻璃化條件中的保存作用。

此外，天然的AFGPs有許多缺點(diǎn)，這構(gòu)成了其商業(yè)應(yīng)用的限制。它們分離自天然來(lái)源：魚類。提取1kg的AFGPs需要100噸魚。純化和分離是困難的。分離的化合物的純度非常低(約70％)，且提取物被其它蛋白質(zhì)和非人類抗原性材料污染。此外，僅能夠分離具有一定分子大小范圍的級(jí)分，而非單個(gè)化合物。這些化合物具有高的分子量(2,6kDa至33,7kDa之間)。它們是不穩(wěn)定的。它們對(duì)酸和堿水解高度敏感，它們?cè)趐H>9時(shí)經(jīng)歷β-消除，在酸性條件下經(jīng)歷O-糖苷鍵的裂解。它們還對(duì)酶水解非常敏感，這意味著它們還在含有糖苷酶的生物介質(zhì)中經(jīng)歷O-糖苷鍵的裂解。這種化合物具有短的半衰期和低的生物處理性(biodisponibility)。它們還顯示出一些細(xì)胞毒性問題。

為了解決這些缺點(diǎn)中的一些尤其是穩(wěn)定性問題，已開發(fā)了C-糖苷衍生物。

Ben等人(Bioconjugate Chemistry(2011)22(9),1804-1810；CA 2653153；Journal of the American Chemical Society(2009),131(43),15745-15753；Biomacromolecules(2007),8(5),1456-1462；Organic Letters(2005)7(12),2385-2388；Cell Biochemistry and Biophysics(2003),38(2),115-124)已提供了CH₂-糖肽類似物以克服這種穩(wěn)定性問題，并開發(fā)了化合物家族，其通過TH(熱滯后)和IRI(冰重結(jié)晶抑制(ice recristallization inhibition))顯示出抗凍性質(zhì)。然而，這些化合物中沒有一個(gè)顯示出用于對(duì)抗各種應(yīng)激的生物材料保護(hù)的其他可能性，它們僅顯示出對(duì)冰凍的物理性質(zhì)的可能作用。它們還強(qiáng)調(diào)了對(duì)具有糖三氨基酸(glycotriaminoacid)的重復(fù)單元的聚合結(jié)構(gòu)的需要，以具有功效。

在WO 2006/059227和WO 2007/125203中還描述了對(duì)應(yīng)于CF₂-糖肽類似物的其他衍生物以克服天然化合物的問題，并發(fā)現(xiàn)了該類化合物用于生物材料保存的令人驚訝的性質(zhì)。事實(shí)上，除了低體溫保存，這些化合物顯示出對(duì)抗不同類型的應(yīng)激的保存作用，且不需要聚合形式以具有功效。然而，這些化合物仍然遭受穩(wěn)定性問題，并且通過釋放高細(xì)胞毒性的二氟化(difluorinated)強(qiáng)酸在非常敏感的CF₂-C(＝O)-NH官能團(tuán)處分解。

這種不穩(wěn)定性是主要問題，尤其由于化合物必須在生物介質(zhì)中被中和，并且其對(duì)堿性中和特別敏感。

因此，需要佐劑，所述佐劑允許通過提高生物材料和微生物的質(zhì)量和保存期，通過保護(hù)其對(duì)抗不同的應(yīng)激(如氧化、UV、輻射、pH、溫度(低體溫至高體溫)、饑餓、化學(xué)或細(xì)菌污染等)，或通過在不同的應(yīng)激后使其恢復(fù)，和/或通過改進(jìn)現(xiàn)有的用于生物材料和微生物保存的方案以使其更加可重復(fù)或更容易進(jìn)行，來(lái)改進(jìn)生物材料(如細(xì)胞、組織、體液和器官)和微生物的保存/保護(hù)或甚至再生。

這種佐劑還將有利地顯示在化妝品或皮膚病學(xué)制劑中所需的所有特征，以保護(hù)和/或保存皮膚細(xì)胞和組織，或甚至使皮膚細(xì)胞和組織再生，并因此產(chǎn)生用于抗老化或皮膚保護(hù)，或甚至用于皮膚再生的高效產(chǎn)品。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的發(fā)明人最近確認(rèn)了CF₂-糖肽的新家族，其解決與在前面的糖肽衍生物中觀察到的穩(wěn)定性問題有關(guān)的缺點(diǎn)，其顯示用于在不同條件下生物材料和微生物保存和保護(hù)甚至再生的性質(zhì)，其具有用于化妝品或皮膚病學(xué)應(yīng)用(抗老化、皮膚保護(hù)、皮膚再生等)的可能性，并且其可以容易地合成。

因此，本發(fā)明涉及下式(I)的化合物：

尤其涉及下式(I’)的化合物：

或其鹽、溶劑化物、互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體以任何比例的混合物，特別是對(duì)映異構(gòu)體的混合物，特別是外消旋體混合物，

其中：

-m表示0或1，

-p表示0或1，尤其表示1，

-R₀表示氫原子、O-保護(hù)基或(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、(C₃-C₇)環(huán)烷基、5至7元雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳基-(C₁-C₆)烷基、雜芳基-(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)-烷基-芳基或(C₁-C₆)-烷基-雜芳基，該基團(tuán)可以被選自鹵原子、(C₁-C₆)烷氧基、OH、COOH和CHO的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，

-R_5a、R_6a和R_7a彼此獨(dú)立地表示氫或N-保護(hù)基，以及

-R₅、R₆和R₇彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；或下式的基團(tuán)：

或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

條件是，當(dāng)m＝p＝1時(shí)，R₅、R₆和R₇中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝0且p＝1時(shí)，R₅和R₆中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝1且p＝0時(shí)，R₅和R₇中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝p＝0時(shí)，R₅，表示下式的基團(tuán)：

其中

-n表示1至6的整數(shù)，

-R表示氫原子或氟原子或CH₃、CH₂F、CH₂OSiR^a1R^b1R^c1、CH₂OR₈、CH₂OC(O)R₉、CH₂OCO₂R₁₀、CH₂OC(O)NR₁₁R₁₂、CH₂OP(O)(OR₁₃)₂或CH₂OSO₃R₁₄基團(tuán)，

-R₁和R₂彼此獨(dú)立地表示氟原子或OSiR^a2R^b2R^c2、OR₁₅、OC(O)R₁₆、OCO₂R₁₇、OC(O)NR₁₈R₁₉、OP(O)(OR₂₀)₂或OSO₃R₂₁基團(tuán)，

-R₃表示氟原子或OSiR^a3R^b3R^c3、OR₂₂、OC(O)R₂₃、OCO₂R₂₄、OCONR₂₅R₂₆、OP(O)(OR₂₇)₂、OSO₃R₂₈、N₃、鄰苯二甲酰亞胺基(phtalimidyl)、NR₂₉R₃₀、NR₃₁C(O)R₃₂、NR₃₃C(O)OR₃₄、N(C(O)R₃₅)C(O)R₃₆、N(C(O)R₃₇)C(O)OR₃₈和N(C(O)OR₃₉)C(O)OR₄₀基團(tuán)，

-R₄表示氫原子或鹵原子或OSiR^a4R^b4R^c4、OR₄₁、OC(O)R₄₂、OCO₂R₄₃、OCONR₄₄R₄₅、OP(O)(OR₄₆)₂或OSO₃R₄₇基團(tuán)，

或R和R₁與攜帶它們的碳原子一起形成具有下式的環(huán)縮醛：

和/或(R₁和R₂)、(R₂和R₃)和/或(R₃和R₄)與攜帶它們的碳原子一起形成具有下式的環(huán)縮醛：

-R₈、R₁₅、R₂₂和R₄₁彼此獨(dú)立地表示氫原子、O-保護(hù)基或(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、(C₃-C₇)環(huán)烷基、5至7元雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳基-(C₁-C₆)烷基、雜芳基-(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)-烷基-芳基、(C₁-C₆)-烷基-雜芳基、糖基或多糖基，該基團(tuán)可以被選自鹵原子、(C₁-C₆)烷氧基、OH、COOH和CHO的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；特別地表示氫原子、(C₁-C₆)烷基、芳基、芳基-(C₁-C₆)烷基、糖基或多糖基，該基團(tuán)可以被選自鹵原子、(C₁-C₆)烷氧基、OH、COOH和CHO的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；更特別地表示氫原子、(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基，該基團(tuán)可以被選自鹵原子、(C₁-C₆)烷氧基、OH、COOH和CHO的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，

-R₉、R₁₀、R₁₆、R₁₇、R₂₃、R₂₄、R₃₂、R₃₄至R₄₀、R₄₂和R₄₃彼此獨(dú)立地表示(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、(C₃-C₇)環(huán)烷基、5至7元雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳基-(C₁-C₆)烷基、雜芳基-(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)-烷基-芳基或(C₁-C₆)-烷基-雜芳基，該基團(tuán)可以被選自鹵原子、(C₁-C₆)烷氧基、OH、COOH和CHO的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；特別地表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基，該基團(tuán)可以被選自鹵原子、(C₁-C₆)烷氧基、OH、COOH和CHO的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，

-R₁₁、R₁₂、R₁₈、R₁₉、R₂₅、R₂₆、R₂₉至R₃₁、R₃₃、R₄₄和R₄₅彼此獨(dú)立地表示氫原子或(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、芳基、雜芳基、芳基-(C₁-C₆)烷基、雜芳基-(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)-烷基-芳基或(C₁-C₆)-烷基-雜芳基，該基團(tuán)可以被選自鹵原子、(C₁-C₆)烷氧基、OH、COOH和CHO的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；有利地表示氫原子或(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、芳基-(C₁-C₆)烷基、雜芳基-(C₁-C₆)烷基，該基團(tuán)可以被選自鹵原子、(C₁-C₆)烷氧基、OH、COOH和CHO的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；特別地表示氫原子或(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基，該基團(tuán)可以被選自鹵原子、(C₁-C₆)烷氧基、OH、COOH和CHO的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，

-R₁₃、R₁₄、R₂₀、R₂₁、R₂₇、R₂₈、R₄₆和R₄₇彼此獨(dú)立地表示氫原子或(C₁-C₆)烷基，

-R^a1至R^a4、R^b1至R^b4和R^c1至R^c4彼此獨(dú)立地表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基，以及

-R^d和R^e彼此獨(dú)立地表示氫原子或(C₁-C₆)烷基。

在本發(fā)明的情況下，鹽可以為：

(1)與無(wú)機(jī)酸或與有機(jī)酸形成的酸加成鹽，所述無(wú)機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸和磷酸等；所述有機(jī)酸如乙酸、苯磺酸、富馬酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羥基萘甲酸、2-羥基乙磺酸、乳酸、馬來(lái)酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘康酸、2-萘磺酸、丙酸、琥珀酸、二苯甲?；?L-酒石酸、酒石酸、對(duì)甲苯磺酸、三甲基乙酸和三氟乙酸等，或者

(2)當(dāng)化合物中存在的酸質(zhì)子被金屬離子，如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子替代時(shí)形成的鹽；或與有機(jī)或無(wú)機(jī)堿配位形成的鹽?？山邮艿挠袡C(jī)堿包含二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺、氨丁三醇等?？山邮艿臒o(wú)機(jī)堿包含氫氧化鋁、氫氧化鈣、氫氧化鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉等。

在本發(fā)明的情況下，本發(fā)明的化合物的溶劑化物包括常規(guī)的溶劑化物，如由于溶劑的存在，在本發(fā)明化合物的制備的最后一步期間形成的那些。作為示例，可以提及由于水(這些溶劑化物也被稱作水合物)或乙醇的存在的溶劑化物。

對(duì)于本發(fā)明的目的，“互變異構(gòu)體”是指化合物(I)的糖可以呈現(xiàn)的各種互變異構(gòu)體形式，即吡喃糖(6元環(huán))、呋喃糖(5元環(huán))或直鏈(開環(huán)形式)形式。然而，出于實(shí)際原因，在本說明書中以其吡喃糖形式表示化合物(I)的糖。

然而，僅當(dāng)基團(tuán)(radical)R₄表示OH基團(tuán)，R₁也表示OH基團(tuán)時(shí)，本發(fā)明的化合物可以呈現(xiàn)各種互變異構(gòu)體形式以使得本發(fā)明的化合物可以為呋喃糖形式。

因此，例如在半乳糖系列中，本發(fā)明的化合物可以以下列各種形式出現(xiàn)：

因此當(dāng)R₄＝R₁＝OH時(shí)，基團(tuán)可以呈現(xiàn)以下互變異構(gòu)體形式：

-吡喃糖形式：

-呋喃糖形式：和

-直鏈形式：

同樣地，因此當(dāng)R₄＝R₁＝OH時(shí)，基團(tuán)可以呈現(xiàn)以下互變異構(gòu)體形式：

-吡喃糖形式：

-呋喃糖形式：和

-直鏈形式：

在封閉的吡喃糖和呋喃糖形式中，異頭碳可以以兩種不同的構(gòu)型出現(xiàn)。

本發(fā)明的化合物可以呈現(xiàn)不同的互變異構(gòu)體形式，其可以以平衡狀態(tài)存在于溶液中，其中任選有主要的互變異構(gòu)體形式相對(duì)于其他互變異構(gòu)體形式，或者本發(fā)明的化合物可以僅呈現(xiàn)一種互變異構(gòu)體形式，如僅呈現(xiàn)吡喃糖形式。這將尤其取決于介質(zhì)的性質(zhì)、溫度、化合物的濃度等。

在最后一種情況下，其中糖僅呈現(xiàn)一種互變異構(gòu)體形式，當(dāng)R₄＝OH被轉(zhuǎn)化時(shí)，尤其是通過OH基團(tuán)的取代或轉(zhuǎn)換為氫原子或鹵素原子時(shí)，能夠限制該互變異構(gòu)體形式中糖的構(gòu)型。

在本發(fā)明的意義范圍內(nèi)，“立體異構(gòu)體”是指非對(duì)映異構(gòu)體或?qū)τ钞悩?gòu)體。因此，它們?yōu)楣鈱W(xué)異構(gòu)體。因此，彼此不為鏡像的立體異構(gòu)體被稱作“非對(duì)映異構(gòu)體”，彼此為不可重疊的鏡像的立體異構(gòu)體被稱作“對(duì)映異構(gòu)體”。

尤其地，本發(fā)明的化合物的糖部分和氨基酸部分可以屬于D或L系列。

結(jié)合至四個(gè)不相同的取代基的碳原子被稱作“手性中心”。

兩種對(duì)映異構(gòu)體的等摩爾混合物被稱作外消旋混合物。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指氟、溴、氯或碘的原子。有利地，其為氟原子。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“(C₁-C₆)-烷基”是指包含1至6個(gè)碳原子的飽和的、直鏈或支鏈烴鏈，特別是指甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“(C₂-C₆)-烯基”是指包含至少一個(gè)雙鍵并包含2至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，例如乙烯基(乙烯基(vinyl))或丙烯基(例如烯丙基)。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“(C₂-C₆)-炔基”是指包含至少一個(gè)三鍵并包含2至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，例如乙炔基或丙炔基。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“(C₁-C₆)烷氧基”是指經(jīng)由氧原子結(jié)合至分子的如以上所定義的(C₁-C₆)烷基，包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基等。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“(C₁-C₆)硫代烷氧基”是指經(jīng)由硫原子結(jié)合至分子的如以上所定義的(C₁-C₆)烷基，包括但不限于硫代甲氧基、硫代乙氧基、硫代正丙氧基、硫代異丙氧基、硫代正丁氧基、硫代異丁氧基、硫代仲丁氧基、硫代叔丁氧基、硫代正戊氧基、硫代正己氧基等。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“(C₃-C₇)-環(huán)烷基”是指包含3至7個(gè)碳原子，有利地包含5至7個(gè)碳原子的飽和烴環(huán)，特別是環(huán)己基、環(huán)戊基或環(huán)庚基。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)烷基”是指具有5至7元的飽和烴環(huán)，其中一個(gè)或多個(gè)碳原子，有利地一個(gè)或兩個(gè)碳原子各自被雜原子如硫、氮或氧原子替代。其尤其可以為四氫呋喃基、哌啶基、吡咯烷基、四氫吡喃基或1,3-二氧戊環(huán)基。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“芳基”是指優(yōu)選包含6至10個(gè)碳原子且包含一個(gè)或多個(gè)稠環(huán)的芳香烴基，例如苯基或萘基。有利地，其將為苯基。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指包含一個(gè)或多個(gè)稠環(huán)的芳香基，優(yōu)選5至10元芳香基，其中環(huán)原子由一個(gè)或多個(gè)，有利地1至4個(gè)，更有利地1或2個(gè)雜原子如氮、氧或硫原子組成，其余的為碳原子。雜芳基尤其可以為噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、咪唑基、四唑基或吲哚基。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“芳基-(C₁-C₆)-烷基”是指如以上所定義的任何芳基，其利用如以上所定義的(C₁-C₆)烷基結(jié)合至分子。特別地，其可以為芐基。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“雜芳基-(C₁-C₆)-烷基”是指如以上所定義的雜芳基，其利用如以上所定義的(C₁-C₆)烷基結(jié)合至分子。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“(C₁-C₆)-烷基-芳基”是指如以上所定義的(C₁-C₆)-烷基，其利用如以上所定義的芳基結(jié)合至分子。特別地，其可以為甲基苯基。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“(C₁-C₆)-烷基-雜芳基”是指如以上所定義的(C₁-C₆)-烷基，其利用如以上所定義的雜芳基結(jié)合至分子。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“三烷基甲硅烷基”是指-SiAlk₁Alk₂Alk₃基團(tuán)，其中Alk₁、Alk₂和Alk₃表示相同的或不同的如以上所定義的(C₁-C₆)-烷基。例如，其可以為三甲基甲硅烷基或三乙基甲硅烷基。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“保護(hù)基”是指化學(xué)基，其在多官能團(tuán)化合物中選擇性阻斷反應(yīng)位點(diǎn)，以允許在另一個(gè)未保護(hù)的反應(yīng)位點(diǎn)選擇性進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“N-保護(hù)基”是指旨在合成程序期間保護(hù)胺官能團(tuán)對(duì)抗不期望的反應(yīng)的那些基團(tuán)。在Greene,"Protective Groups In Organic Synthesis,"(John Wiley&Sons,New York(1981))中公開了常用的N-保護(hù)基。被N-保護(hù)基保護(hù)的胺官能團(tuán)可以為氨基甲酸酯、酰胺、磺酰胺、N-烷基衍生物、氨基縮醛衍生物、N-芐基衍生物、亞胺衍生物、烯胺衍生物或N-雜原子衍生物。特別地，N-保護(hù)基可以為甲?；环蓟?，如苯基，其任選被一個(gè)或幾個(gè)甲氧基取代，如對(duì)甲氧基苯基(PMP)；芳基-(C₁-C₆)烷基，如芐基，芳基部分任選被一個(gè)或幾個(gè)甲氧基取代，如芐基(Bn)、對(duì)甲氧基芐基(PMB)或3,4-二甲氧基芐基(DMPM)；-CO-R_GP1，如乙酰基(Ac)、新戊?；?Piv或Pv)、苯甲?；?Bz)或?qū)籽趸S基羰基(Moz)；-CO₂-R_GP1，如叔丁氧羰基(Boc)、三氯乙氧羰基(TROC)、烯丙氧羰基(Alloc)、芐氧羰基(Cbz或Z)或9-芴甲氧羰基(Fmoc)；-SO₂-R_GP1，如苯磺酰基、甲苯磺?；?Ts或Tos)或2-硝基苯磺?；?也被稱作硝基苯磺?；?nosyl)-Nos或Ns)；等等，

其中R_GP1表示任選被一個(gè)或幾個(gè)鹵原子如F或Cl取代的(C₁-C₆)烷基；(C₂-C₆)烯基，如烯丙基；芳基，如苯基，其任選被一個(gè)或幾個(gè)選自O(shè)Me(甲氧基)和NO₂(硝基)的基團(tuán)取代；芳基-(C₁-C₆)烷基，如芐基，芳基部分任選被一個(gè)或幾個(gè)甲氧基取代；或9-芴甲基。

N-保護(hù)基可以特別地為-CO₂-R_GP1，如Cbz、Boc或Fmoc，尤其是Cbz。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“O-保護(hù)基”是指在合成程序期間保護(hù)羥基對(duì)抗不期望的反應(yīng)的取代基，如在Greene,"Protective Groups In Organic Synthesis,"(John Wiley&Sons,New York(1981))中公開的那些O-保護(hù)基。被O-保護(hù)基保護(hù)的羥基可以為例如醚、酯、碳酸酯、縮醛等。特別地，O-保護(hù)基可以為任選被一個(gè)或幾個(gè)(尤其是1至3個(gè))鹵原子(如氯原子)取代的(C₁-C₆)烷基，如甲基、乙基、叔丁基或2,2,2-三氯乙基；芳基-(C₁-C₆)烷基，如芐基，芳基部分任選被一個(gè)或幾個(gè)甲氧基取代，如芐基(Bn)或?qū)籽趸S基(PMB)；式–CAr₁Ar₂Ar₃的三苯甲基(trityl)，如三苯基甲基(也被稱作三苯甲基-Tr)、(4-甲氧基苯基)二苯基甲基(也被稱作甲氧基三苯甲基-NMT)或雙-(4-甲氧基苯基)苯基甲基(也被稱作二甲氧基三苯甲基-DMT)；式-CH₂OR_GP2或-CH₂SR_GP2(特別是-CH₂OR_GP2)的取代甲基，例如甲氧基甲基(MOM)、芐氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基或甲硫基甲基；式-CH₂CH₂OR_GP2或–CH₂CH₂SR_GP2(特別是–CH₂CH₂OR_GP2)的取代乙基，例如乙氧基乙基(EE)；式-SiR_GP3R_GP4R_GP5的甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基(TMS)、三乙基甲硅烷基(TES)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS或TBDMS)和叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)；式-CO-R_GP6的羰基化基團(tuán)，如乙酰基(Ac)、新戊?；?Piv或Pv)或苯甲酰基(Bz)，或者式–CO₂-R_GP7的羰基化基團(tuán)，如烯丙氧羰基(Alloc)或9-芴甲氧羰基(Fmoc)；或者四氫吡喃基(THP)或四氫呋喃基

其中Ar₁、Ar₂和Ar₃彼此獨(dú)立地表示n芳基，如苯基，其任選被一個(gè)或幾個(gè)甲氧基取代；R_GP2表示任選被芳基(如苯基)、(C₁-C₆)烷氧基(如甲氧基)或三烷基甲硅基(如SiMe₃)取代的(C₁-C₆)烷基(如甲基或乙基)；R_GP3、R_GP4和R_GP5彼此獨(dú)立地表示(C₁-C₆)烷基或芳基(如苯基)；R_GP6和R_GP7彼此獨(dú)立地表示(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、芳基、芳基-(C₁-C₆)烷基或9-芴甲基。

O-保護(hù)基可以特別地為(C₁-C₆)烷基或芳基-(C₁-C₆)烷基(如芐基)。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“糖”是指D或L形式的赤蘚糖、蘇糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、來(lái)蘇糖、阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔羅糖、赤蘚酮糖、核酮糖、木酮糖、阿洛酮糖、果糖、山梨糖或塔格糖。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“糖基”是指如以上所定義的糖，其利用存在于其異頭中心的氧原子結(jié)合至分子。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“多糖”是指包含至少2個(gè)，優(yōu)選2至10個(gè)如以上所定義的糖的鏈，所述糖利用氧橋結(jié)合在一起，在糖的異頭位OH官能團(tuán)和另一個(gè)糖的非異頭位OH官能團(tuán)間形成所述氧橋。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“多糖基”是指如以上所定義的多糖，其利用存在于末端糖的異頭中心的氧原子結(jié)合至分子。

根據(jù)本發(fā)明的化合物可以具有下式(Ia)：

尤其可以具有下式(Ia’)：

其中m、p、R₀、R₅、R_5a、R₆、R_6a、R₇和R_7a如以上所定義，尤其p＝1。

式(I)的化合物可以有利地為酸加成鹽的形式，所述酸尤其為鹽酸。所述酸還可以為乙酸。

m值可以特別地為1。特別地，m＝p＝1。

根據(jù)特別的實(shí)施方案，R₅、R₆和R₇彼此獨(dú)立地表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃(特別是CH₂Ph-pOCH₃)、CH₂CH₂SCH₃或下式的基團(tuán)：

或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，R₅、R₆和R₇彼此獨(dú)立地表示氫原子、(C₁-C₆)烷基、芳基、芳基-(C₁-C₆)烷基，芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基的芳基部分任選被OH或(C₁-C₆)烷氧基取代，或表示下式的基團(tuán)：

或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，R₅、R₆和R₇彼此獨(dú)立地表示氫原子；(C₁-C₆)烷基；芳基；任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基，或代表下式的基團(tuán)：

或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

根據(jù)又一個(gè)特別的實(shí)施方案，R₅、R₆和R₇彼此獨(dú)立地表示氫原子、(C₁-C₆)烷基(如甲基)或下式的基團(tuán)：

或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

根據(jù)又一個(gè)特別的實(shí)施方案，R₅、R₆和R₇彼此獨(dú)立地表示(C₁-C₆)烷基(如甲基)或下式的基團(tuán)：

當(dāng)R₅表示時(shí)，R_5a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子。

那么：

-當(dāng)m＝p＝1時(shí)，R₆和R₇彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃或CH₂CH₂SCH₃，R_6a和R_7a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子，

或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

-當(dāng)m＝0且p＝1時(shí)，R₇不存在，R₆彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃或CH₂CH₂SCH₃，且R_6a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子，

或R₆和R_6a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

-當(dāng)m＝1且p＝0時(shí)，R₆不存在，R₇彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃或CH₂CH₂SCH₃，且R_7a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子，

或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

-當(dāng)m＝p＝0時(shí)，R₆和R₇不存在。

當(dāng)m＝p＝1時(shí)，R₆和R₇還可以彼此獨(dú)立地表示氫、(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；特別地表示(C₁-C₆)烷基(如甲基)，且R_6a和R_7a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子。

當(dāng)m＝0且p＝1時(shí)，R₆還可以彼此獨(dú)立地表示氫、(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；特別地表示(C₁-C₆)烷基(如甲基)，且R_6a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子。

當(dāng)m＝1且p＝0時(shí)，R₇還可以彼此獨(dú)立地表示氫、(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；特別地表示(C₁-C₆)烷基(如甲基)，且R_7a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子。

當(dāng)R₆表示時(shí)，R_6a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子，且p表示1。

那么：

-當(dāng)m＝1時(shí)，R₅和R₇彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃或CH₂CH₂SCH₃，且R_5a和R_7a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子，或R₅和R_5a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)以及

-當(dāng)m＝0時(shí)，R₇不存在，R₅彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃或CH₂CH₂SCH₃，且R_5a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子，

或R₅和R_5a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

當(dāng)m＝1時(shí)，R₅和R₇還可以彼此獨(dú)立地表示氫、(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；特別地表示(C₁-C₆)烷基(如甲基)，且R_5a和R_7a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子。

當(dāng)m＝0時(shí)，R₅還可以彼此獨(dú)立地表示氫、(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；特別地表示(C₁-C₆)烷基(如甲基)，且R_5a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子。

當(dāng)R₇表示時(shí)，R_7a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子，m表示1。有利地，p＝1。

那么：

-當(dāng)p＝1時(shí)，R₅和R₆彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃或CH₂CH₂SCH₃，且R_5a和R_6a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子，或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

-當(dāng)p＝0時(shí)，R₆不存在，R₅表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃或CH₂CH₂SCH₃，且R_5a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子，或R₅和R_5a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

當(dāng)p＝1時(shí)，R₅和R₆還可以彼此獨(dú)立地表示氫、(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；特別地表示(C₁-C₆)烷基(如甲基)，且R_5a和R_6a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子。

當(dāng)p＝0時(shí)，R₅還可以表示氫、(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；特別地表示(C₁-C₆)烷基(如甲基)，且R_5a表示氫或N-保護(hù)基，尤其是氫原子。

根據(jù)一個(gè)特別的實(shí)施方案，當(dāng)m＝p＝1時(shí)，選自R₅、R₆和R₇的兩個(gè)基團(tuán)彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃(特別是CH₂Ph-pOCH₃)或CH₂CH₂SCH₃。

然后，剩余的基團(tuán)表示下式的基團(tuán)：

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，當(dāng)m＝0且p＝1時(shí)，R₅和R₆之一表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃(特別是CH₂Ph-pOCH₃)或CH₂CH₂SCH₃。

然后，剩余的基團(tuán)表示下式的基團(tuán)：

這個(gè)特別的實(shí)施方案還對(duì)應(yīng)于特別的實(shí)施方案，當(dāng)m＝1且p＝0時(shí)，R₅和R₇之一表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃(特別是CH₂Ph-pOCH₃)或CH₂CH₂SCH₃，然后剩余的基團(tuán)表示下式的基團(tuán)：

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，當(dāng)m＝p＝0時(shí)，R₅表示下式的基團(tuán)：

當(dāng)R_5a、R_6a和/或R_7a表示N-保護(hù)基時(shí)，所述N-保護(hù)基如以上所定義。其可以特別地為芳基，如苯基，任選被一個(gè)或幾個(gè)甲氧基取代；芳基-(C₁-C₆)烷基，如芐基，芳基部分任選被一個(gè)或幾個(gè)甲氧基取代；-CO-R_GP1；-CO₂-R_GP1；或-SO₂-R_GP1，其中R_GP1如以上所定義。N-保護(hù)基尤其可以為-CO₂-R_GP1基團(tuán)，如Cbz、Boc或Fmoc，尤其是Cbz。

因此，R_5a、R_6a和R_7a彼此獨(dú)立地表示氫或N-保護(hù)基如-CO₂-R_GP1，尤其是氫，或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

特別地，R_5a、R_6a和R_7a每個(gè)都表示氫。

下式的基團(tuán)：

可以特別地具有以下立體化學(xué)：

例如

n值可以特別地為2、3或4，尤其是4。

R₀尤其可以表示氫原子或O-保護(hù)基(例如芳基-(C₁-C₆)烷基，如Bn)，特別是氫原子。

R₀還可以表示氫原子或(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基，該基團(tuán)不被取代，或被選自鹵原子、(C₁-C₆)烷氧基、OH、COOH和CHO的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，該基團(tuán)尤其不被取代。

R₀可以特別地表示氫原子或(C₁-C₆)烷基或芳基-(C₁-C₆)烷基，尤其表示H、Bn或Et。

R可以表示CH₂OSiR^a1R^b1R^c1、CH₂OR₈、CH₂OC(O)R₉、CH₂OCO₂R₁₀、CH₂OC(O)NR₁₁R₁₂、CH₂OP(O)(OR₁₃)₂或CH₂OSO₃R₁₄基團(tuán)，有利地表示CH₂OSiR^a1R^b1R^c1、CH₂OR₈或CH₂OC(O)R₉基團(tuán)，更有利地表示CH₂OR₈或CH₂OC(O)R₉基團(tuán)，甚至更有利地表示CH₂OR₈基團(tuán)。

R可以特別地表示CH₂OR₈基團(tuán)，其中R₈表示氫原子、O-保護(hù)基或(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；或CH₂OC(O)R₉基團(tuán)，其中R₉表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基。

R可以更特別地表示CH₂OR₈基團(tuán)，其中R₈表示氫原子或O-保護(hù)基。例如，R可以表示CH₂OH或CH₂OBn基團(tuán)。

R₁和R₂可以彼此獨(dú)立地表示OSiR^a2R^b2R^c2、OR₁₅、OC(O)R₁₆、OCO₂R₁₇或OC(O)NR₁₈R₁₉基團(tuán)，有利地表示OSiR^a2R^b2R^c2、OR₁₅或OC(O)R₁₆基團(tuán)，更有利地表示OR₁₅或OC(O)R₁₆基團(tuán)，甚至更有利地表示OR₁₅基團(tuán)。

R₁和R₂可以特別地彼此獨(dú)立地表示OR₁₅基團(tuán)，其中R₁₅表示氫原子、O-保護(hù)基或(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；或OC(O)R₁₆基團(tuán)，其中R₁₆表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基。

R₁和R₂可以更特別地彼此獨(dú)立地表示OR₁₅基團(tuán)，其中R₁₅表示氫原子或O-保護(hù)基。例如，R₁和R₂可以表示OH或OBn基團(tuán)。

優(yōu)選地，R₁和R₂是相同的，尤其表示OH或OBn基團(tuán)。

特別地，R表示CH₂OR₈基團(tuán)，R₁和R₂彼此獨(dú)立地表示OR₁₅基團(tuán)，R₈和R₁₅有利地表示氫原子或O-保護(hù)基(例如Bn)。R₈和兩個(gè)R₁₅基團(tuán)可以是相同的，如H或O-保護(hù)基(例如Bn)。

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，R＝CH₂OH且R₁＝R₂＝OH，或R＝CH₂OBn且R₁＝R₂＝OBn。

根據(jù)第一實(shí)施方案，R₃表示OSiR^a3R^b3R^c3、OR₂₂、OC(O)R₂₃、OCO₂R₂₄、OCONR₂₅R₂₆、NR₂₉R₃₀、NR₃₁C(O)R₃₂、NR₃₃C(O)OR₃₄、N(C(O)R₃₅)C(O)R₃₆、N(C(O)R₃₇)C(O)OR₃₈或N(C(O)OR₃₉)C(O)OR₄₀基團(tuán)，有利地表示OSiR^a3R^b3R^c3、OR₂₂、OC(O)R₂₃、NR₂₉R₃₀、NR₃₁C(O)R₃₂或NR₃₃C(O)OR₃₄基團(tuán)，更有利地表示OR₂₂、OC(O)R₂₃或NR₃₁C(O)R₃₂基團(tuán)，甚至更有利地表示OR₂₂或NR₃₁C(O)R₃₂基團(tuán)。

R₃可以特別地表示OR₂₂基團(tuán)，其中R₂₂表示氫原子、O-保護(hù)基或(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；OC(O)R₂₃基團(tuán)，其中R₂₃表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基；或NR₃₁C(O)R₃₂基團(tuán)，其中R₃₁表示氫原子或(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基，R₃₂表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基。

R₃可以更特別地表示OR₂₂基團(tuán)，其中R₂₂表示氫原子或O-保護(hù)基(例如Bn)；或NR₃₁C(O)R₃₂基團(tuán)，其中R₃₁表示氫原子，R₃₂表示(C₁-C₆)烷基。例如，R₃可以表示OH、OBn、OMOM或NHAc基團(tuán)，特別地表示OH或OBn。

根據(jù)第二實(shí)施方案，R₃可以表示OSiR^a3R^b3R^c3、OR₂₂、OC(O)R₂₃、OCO₂R₂₄或OCONR₂₅R₂₆基團(tuán)，有利地表示OSiR^a3R^b3R^c3、OR₂₂或OC(O)R₂₃基團(tuán)，更有利地表示OR₂₂或OC(O)R₂₃基團(tuán)，甚至更有利地表示OR₂₂基團(tuán)。

R₃可以特別地表示OR₂₂基團(tuán)，其中R₂₂表示氫原子、O-保護(hù)基或(C₁-C₆)-烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)-烷基；或OC(O)R₂₃基團(tuán)，其中R₂₃表示(C₁-C₆)-烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)-烷基。

R₃可以更特別地表示OR₂₂基團(tuán)，其中R₂₂表示氫原子或O-保護(hù)基(例如Bn)。例如，R₃可以表示OH或OBn基團(tuán)。

根據(jù)一個(gè)特別的實(shí)施方案，R₁、R₂和R₃是相同的。

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，R表示CH₂OR₈基團(tuán)；R₁和R₂彼此獨(dú)立地表示OR₁₅基團(tuán)；R₃表示OR₂₂基團(tuán)，R₈、R₁₅和R₂₂有利地表示氫原子或O-保護(hù)基(例如Bn)。R₈和兩個(gè)R₁₅基團(tuán)可以是相同的，如H或O-保護(hù)基(例如Bn)。R₈、兩個(gè)R₁₅和R₂₂基團(tuán)也可以是相同的，如H或O-保護(hù)基(例如Bn)。

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，R＝CH₂OH，R₁＝R₂＝OH或R₁＝R₂＝R₃＝OH。

R₄可以有利地表示氫原子或鹵原子或OR₄₁基團(tuán)；特別地表示氫原子或OR₄₁基團(tuán)；更特別地表示OR₄₁基團(tuán)。

甚至更有利地，R₄可以表示氫原子或鹵原子或OH、O-保護(hù)基、-O-(C₁-C₆)-烷基、-O-芳基和–O-(C₁-C₆)-烷基-芳基；特別地表示氫原子或OH、O-保護(hù)基、-O-(C₁-C₆)-烷基、-O-芳基和–O-(C₁-C₆)-烷基-芳基；更特別地表示OH、O-保護(hù)基、-O-(C₁-C₆)-烷基、-O-芳基和–O-(C₁-C₆)-烷基-芳基。

R₄還可以表示氫原子或鹵原子或OH、-O-(C₁-C₆)-烷基、-O-芳基和–O-(C₁-C₆)-烷基-芳基；特別地表示氫原子或OH、-O-(C₁-C₆)-烷基、-O-芳基和–O-(C₁-C₆)-烷基-芳基；更特別地表示OH、-O-(C₁-C₆)-烷基、-O-芳基和–O-(C₁-C₆)-烷基-芳基。

特別地，R₄可以表示氫原子或鹵原子(如Br、Cl、F)或OH或O-保護(hù)基(例如OMe或OBn)；有利地表示氫原子或OH或O-保護(hù)基(例如OMe或OBn)；特別地表示OH或O-保護(hù)基，如OH、OMe或OBn。

根據(jù)一個(gè)特別的實(shí)施方案，R₀＝H、Et或Bn，R＝CH₂OH或CH₂OBn，且R₁＝R₂＝R₃＝OH或OBn。

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，R₀＝H或Bn，R＝CH₂OH或CH₂OBn，且R₁＝R₂＝R₃＝OH或OBn。

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，R₀＝H，R＝CH₂OH，且R₁＝R₂＝R₃＝OH。

根據(jù)又一個(gè)特別的實(shí)施方案，R₀＝H，R＝CH₂OH，R₁＝R₂＝R₃＝OH，且R₄＝H或OH，特別是OH。

根據(jù)一個(gè)特別的實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物為式(I)的化合物：

其中：

-m表示0或1，

-p表示0或1，尤其表示1，

-R₀表示氫原子或O-保護(hù)基(例如(C₁-C₆)烷基或芳基-(C₁-C₆)烷基)，

-R_5a、R_6a和R_7a彼此獨(dú)立地表示氫或N-保護(hù)基(例如-CO₂-R_GP1)，以及

或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

其中

-n表示1至6的整數(shù)，

-R表示CH₂OR₈，

-R₁和R₂彼此獨(dú)立地表示OR₁₅，

-R₃表示OR₂₂，

-R₄表示H或OR₄₁，特別地表示OR₄₁，

或R和R₁與攜帶它們的碳原子一起形成具有下式的環(huán)縮醛：

和/或(R₁和R₂)、(R₂和R₃)和/或(R₃和R₄)與攜帶它們的碳原子一起形成具有下式的環(huán)縮醛：

-R₈、R₁₅和R₂₂彼此獨(dú)立地表示氫原子或O-保護(hù)基(例如(C₁-C₆)烷基或芳基-(C₁-C₆)烷基)，

-R₄₁表示氫原子、O-保護(hù)基(例如(C₁-C₆)烷基或芳基-(C₁-C₆)烷基)或(C₁-C₆)烷基、芳基、芳基-(C₁-C₆)烷基或(C₁-C₆)-烷基-芳基，該基團(tuán)可以不被取代，或被選自鹵原子和(C₁-C₆)烷氧基的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，以及

-R^d和R^e彼此獨(dú)立地表示氫原子或(C₁-C₆)烷基。

根據(jù)一個(gè)特別的實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物具有下式(Ib)、(Ic)、(Id1)、(Id2)、(Ie1)和(Ie2)之一，尤其具有下式(Ib)、(Ic)、(Id2)和(Ie2)之一：

其中n、R₀、R、R₁、R₂、R₃、R₄、R_5a、R₆、R_6a、R₇和R_7a如以上所定義。

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物具有下式(If)、(Ig)、(Ih1)、(Ih2)、(Ii1)和(Ii2)之一，尤其具有下式(If)、(Ig)、(Ih2)和(Ii2)之一：

其中n、R₀、R、R₁、R₂、R₃、R₄、R_5a、R₆和R_6a如以上所定義。

根據(jù)又一個(gè)特別的實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物具有下式(Ij)、(Ik)、(Il1)、(Il2)、(Im1)和(Im2)之一，尤其具有下式(Ij)、(Ik)、(Il2)和(Im2)之一：

其中n、R₀、R、R₁、R₂、R₃、R₄、R_5a、R₆、R_6a、R₇和R_7a如以上所定義。

根據(jù)再一個(gè)特別的實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物具有下式(In)、(Io)、(Ip1)、(Ip2)、(Iq1)和(Iq2)之一，尤其具有下式(In)、(Io)、(Ip2)和(Iq2)之一：

其中n、R₀、R、R₁、R₂、R₃、R₄和R_5a如以上所定義。

有利地，本發(fā)明的化合物為式(Ib)、(If)、(Ij)或(In)的化合物，尤其為式(Ib)、(If)或(Ij)的化合物，特別地為式(Ib)的化合物。

優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物為式(Ie1)、(Ii1)、(Im1)或(Iq1)的化合物，尤其為式(Ie1)、(Ii1)或(Im1)的化合物，特別地為式(Ie1)的化合物。

特別地，本發(fā)明的化合物為式(Ie2)、(Ii2)、(Im2)或(Iq2)的化合物，尤其為式(Ie2)、(Ii2)或(Im2)的化合物，特別地為式(Ie2)的化合物。

式(I)的化合物可以選自以下化合物：

和其鹽和溶劑化物(尤其是酸加成鹽，特別是與鹽酸或乙酸的酸加成鹽，更特別是與鹽酸的酸加成鹽)。

特別地，式(I)的化合物可以選自以下化合物：

本發(fā)明還涉及如以上所定義的式(I)的化合物用于生物材料和微生物的保存和/或保護(hù)和/或再生的用途。

本發(fā)明還涉及通過將生物材料放置于含有如以上所定義的式(I)的化合物的介質(zhì)中保存和/或保護(hù)生物材料和微生物的方法。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“保存”生物材料或微生物是指維持生物材料或微生物的當(dāng)前存在的狀態(tài)(尤其是結(jié)構(gòu)和功能)的事實(shí)，或者防止或限制該狀態(tài)的降解的事實(shí)。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“保護(hù)”生物材料或微生物是指保護(hù)生物材料或微生物對(duì)抗內(nèi)部或外部侵襲，如應(yīng)激，例如氧化應(yīng)激(例如UV)、溫度的變化、pH的變化、化學(xué)或細(xì)菌污染、饑餓條件等的事實(shí)。

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“再生”生物材料或微生物是指使生物材料或微生物的狀態(tài)(尤其是結(jié)構(gòu)和功能)恢復(fù)至內(nèi)部或外部侵襲以前存在的狀態(tài)的事實(shí)，所述內(nèi)部或外部侵襲如應(yīng)激，例如氧化應(yīng)激(例如UV)、溫度的變化、pH的變化、化學(xué)或細(xì)菌污染、饑餓條件等。其更特別地涉及生物材料，如細(xì)胞。

特別地，當(dāng)被放置于低于37℃，如低于0℃的溫度時(shí)，尤其在特別用于生物材料如人體器官、組織(例如，用于移植)、體液或細(xì)胞的低溫貯藏的條件下，可以保護(hù)/保存生物材料或微生物。

生物材料或微生物的低溫貯藏意味著將生物材料或微生物降溫至零下的溫度，尤其是通過使用液氮降溫至約-196℃的溫度。

所述生物材料可以特別地為細(xì)胞、組織、體液或器官。

所述微生物可以特別地為原核或真核微生物，尤其是單細(xì)胞的或多細(xì)胞的。

所述微生物尤其可以選自細(xì)菌，真菌，包括酵母，藻類，病毒，包括噬菌體，微寄生物(也被稱作寄生微生物)和原生動(dòng)物。

本發(fā)明還涉及如以上所定義的式(I)的化合物作為佐劑在培養(yǎng)、儲(chǔ)存和/或保存介質(zhì)中的用途。

所述培養(yǎng)、儲(chǔ)存和/或保存介質(zhì)旨在用于生物材料或微生物的培養(yǎng)、儲(chǔ)存和/或保存。對(duì)于培養(yǎng)介質(zhì)，生物材料將更特別地為細(xì)胞或組織。

本發(fā)明還涉及一種培養(yǎng)、儲(chǔ)存和/或保存介質(zhì)，其包含至少一種如以上所定義的式(I)的化合物。

所述培養(yǎng)、儲(chǔ)存和/或保存介質(zhì)可以為液體或?yàn)槟z的形式。因此其含有水。然而，所述介質(zhì)可以為脫水的形式，其可以通過加水被再水化。

其可以含有一種或幾種組分，所述組分選自共溶劑(例如二甲基亞砜(DMSO))，鹽(例如NaCl、MgCl₂、ZnCl₂、MnCl₂、CuCl₂、K₂PO₄、KH₂PO₄、K₂HPO₄、Na₂S₂O₃、K₂SO₄、MgSO₄、KNO₃、Ca(NO₃)₂、Na₂CO₃、NaHCO₃等)，碳源如碳水化合物(例如葡萄糖、乳糖或蔗糖)或多元醇(例如甘露醇或甘油)，維生素(例如維生素B1、B2、B6、B12、B3、B5、B9、B7、C、A、D、E和K)，氮和氨基酸源(例如蛋白胨、牛肉或酵母提取物、血清等)，生長(zhǎng)因子(例如胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖連蛋白、白蛋白)，分化因子，抗生素和抗真菌劑(antimycotics)(也被稱作抗菌劑和抗真菌劑(antifungal agent)-例如放線菌素D、兩性霉素B、氨芐西林、羧芐西林、頭孢噻肟、膦胺霉素、慶大霉素、卡那霉素、新霉素、鏈霉素、青霉素、多粘菌素B)，激素，細(xì)胞因子和微量元素。

可以存在其他添加劑，如指示劑(例如pH指示劑)、抑制劑等。

當(dāng)其為凝膠的形式時(shí)，培養(yǎng)介質(zhì)可以進(jìn)一步包含膠凝劑如瓊脂、明膠、硅膠等。

優(yōu)選地，對(duì)于這種應(yīng)用，R₀＝H，R＝CH₂OH且R₁＝R₂＝R₃＝OH。有利地，R_5a、R_6a和R_7a彼此獨(dú)立地表示氫，或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

本發(fā)明還涉及式(I)的化合物用于抗老化和皮膚保護(hù)，或用于皮膚再生的化妝品用途。

本發(fā)明還涉及通過將如以上所定義的式(I)的化合物應(yīng)用至皮膚，用于抗老化和皮膚保護(hù)，或用于皮膚再生的化妝方法。

本發(fā)明還涉及通過將有效量的如以上所定義的式(I)的化合物應(yīng)用至需要其的人的皮膚，用于抗老化和皮膚保護(hù)，或用于皮膚再生的方法。

在這種用途或方法中，可以將式(I)的化合物局部應(yīng)用于皮膚上。

本發(fā)明還涉及一種化妝品或皮膚病學(xué)組合物，其包含至少一種如以上所定義的式(I)的化合物和至少一種化妝品或皮膚病學(xué)上可接受的賦形劑。

優(yōu)選地，對(duì)于這種化妝品應(yīng)用，R₀＝H，R＝CH₂OH且R₁＝R₂＝R₃＝OH。有利地，R_5a、R_6a和R_7a彼此獨(dú)立地表示氫，或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

本發(fā)明的化妝品或皮膚病學(xué)組合物還可以包含一種或多種添加劑，如抗微生物劑(用于皮膚病學(xué)組合物)、抗氧化劑、皮膚病學(xué)活性劑(用于皮膚病學(xué)組合物)、潤(rùn)膚劑、保濕劑、增稠劑、芳香劑、防腐劑、色素或著色劑或遮光劑。這些添加劑對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是常規(guī)的。

在下面以及Wenninger和McEwen編著的International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook(The Cosmetic,Toiletry,and Fragrance Assoc.,華盛頓特區(qū),第7版,1997)(在下文中稱為“ICT手冊(cè)”)中列舉了這些添加劑的示例。

當(dāng)將組合物應(yīng)用至易受微生物(例如細(xì)菌、真菌或原生動(dòng)物)感染的皮膚時(shí)，可以使用抗微生物劑。這種試劑的示例包括芐醇、氯丁醇、苯乙醇、乙酸苯汞、山梨酸鉀、山梨酸、苯甲酸、苯氧乙醇、對(duì)羥基苯甲酸丁酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯和苯甲酸鈉，特別是對(duì)羥基苯甲酸甲酯。在ICT手冊(cè)的第1612頁(yè)列舉了其他的抗微生物劑。

可以使用抗氧化劑以保護(hù)組合物的成分對(duì)抗包含在組合物中的或與組合物接觸的氧化劑?？寡趸瘎┑氖纠箟难嶙貦八狨?、丁基化羥基苯甲醚、丁基化羥基甲苯、沒食子酸丙酯鉀(potassium propyl gallate)、沒食子酸辛酯、沒食子酸十二烷酯、苯基-α-萘基胺和生育酚如α-生育酚。在ICT手冊(cè)的第1612-13頁(yè)列舉了其他的抗氧化劑。

皮膚病學(xué)活性劑包括用于治療傷口愈合、炎癥、痤瘡、銀屑病、膿皰病、皰疹、皮炎、疼痛、瘙癢或皮膚刺激的試劑。這種皮膚病學(xué)活性劑的示例包括氫化可的松、地塞米松、泛醇、苯酚、鹽酸四環(huán)素、酵母、己基間苯二酚，核纖層蛋白、激動(dòng)素、倍他米松、曲安西龍、氟輕松、甲基強(qiáng)的松龍、類視黃醇如視黃醇及視黃酸、氨苯砜、柳氮磺吡啶、間苯二酚、水楊酸、過氧化苯甲酰、紅霉素-過氧化苯甲酰、紅霉素、克林霉素、莫匹羅星、灰黃霉素、唑類如咪康唑、益康唑、伊曲康唑、氟康唑和酮康唑、環(huán)吡酮、烯丙胺類如萘替芬和特比萘芬(terfinafine)、阿昔洛韋、泛昔洛韋、伐昔洛韋、苯佐卡因、利多卡因、地布卡因、普莫卡因鹽酸鹽、水楊酸甲酯、樟腦、薄荷醇、間苯二酚(resocinol)、以及維生素如生育酚和乙酸生育酚。

潤(rùn)膚劑為軟化和平滑皮膚的試劑。潤(rùn)膚劑的示例包括油和蠟如微晶蠟、聚乙烯、甘油三酸酯如蓖麻油、可可脂、紅花油、玉米油、橄欖油、魚肝油、杏仁油、棕櫚油、角鯊烯和大豆油的甘油三酸酯、乙?；瘑胃视王ァ⒁已趸视王?、脂肪酸、脂肪酸的烷基酯、脂肪酸的烯基酯、脂肪醇、脂肪醇醚、醚-酯、羊毛脂和羊毛脂衍生物、多元醇酯、蠟酯如蜂蠟、植物蠟、磷脂(phospholid)和甾醇、棕櫚酸異丙酯或硬脂酸甘油酯，特別是杏仁油或脂肪醇如鯨蠟醇、硬脂醇和/或肉豆蔻醇。在ICT手冊(cè)的第1656-61頁(yè)列舉了其他的潤(rùn)膚劑。

硅氧烷是特別優(yōu)選的潤(rùn)膚劑?？梢栽诒景l(fā)明中使用的硅氧烷包括但不限于二甲基硅氧烷、環(huán)甲基硅氧烷、苯基三甲基硅氧烷、苯基二甲基硅氧烷、鯨蠟基二甲基硅氧烷、硬脂基二甲基硅氧烷、氨端二甲基硅氧烷、C_30-45烷基二甲基硅氧烷、C_30-45烷基甲基硅氧烷、鯨蠟硬脂基甲基硅氧烷、二甲基硅氧烷共聚物(dimethicone copolyol)、環(huán)戊基硅氧烷、環(huán)己基硅氧烷或其任何組合。特別地，在本發(fā)明中可以使用氨端二甲基硅氧烷作為潤(rùn)膚劑。

增稠劑可以特別地為脂肪醇如鯨蠟醇、硬脂醇和/或肉豆蔻醇。

芳香劑或香料的示例包括胡椒薄荷、玫瑰油、玫瑰水、蘆薈、丁香油、薄荷腦、樟腦、桉樹油和其他植物提取物。為了消除組合物的某些氣味，可以使用掩蔽劑。在ICT手冊(cè)的第1639-40頁(yè)列舉了其他的芳香劑和掩蔽劑。

可以使用防腐劑以保護(hù)組合物免受降解。防腐劑的示例包括苯氧乙醇、對(duì)羥基苯甲酸丁酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、苯扎氯銨、芐索氯銨、苯甲酸、苯甲醇，以及其混合物如liquipar油。特別地，其可以為苯氧乙醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯或其混合物。在ICT手冊(cè)的第1654-55頁(yè)列舉了其他的防腐劑。然而，本發(fā)明的組合物可以不含防腐劑。

使用色素或著色劑以改變組合物的顏色，如獲得白色的組合物。其可以特別地為二氧化鈦。

在澄清或透明的組合物中使用遮光劑如氧化鈦，以使其不透明。

特別地，根據(jù)本發(fā)明的化妝品或皮膚病學(xué)組合物可以被配制用于局部施用。因此，其可以為洗劑、泡沫劑、凝膠、分散劑、混懸劑、噴霧劑、精華素、霜?jiǎng)?、乳劑、身體乳、洗發(fā)水或面膜。

特別地，化妝品或皮膚病學(xué)組合物旨在用于抗老化和皮膚保護(hù)，或用于皮膚再生。

因此，本發(fā)明的發(fā)明人開發(fā)了方法以制備根據(jù)本發(fā)明的化合物。因此，本發(fā)明還涉及用于制備如以上所定義的式(I)的化合物的方法。

用于制備如以上所定義的式(I)的化合物的第一種方法包括以下連續(xù)步驟：

(a)將下式(II)的化合物的亞胺官能團(tuán)還原以獲得式(I)的化合物：

其中：

-m、p、R₀、R_5a、R_6a和R_7a如以上所定義，以及

-R_5b、R_6b和R_7b彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；或下式的基團(tuán)：

其中n、R、R₁、R₂、R₃和R₄如以上所定義，

或R_5b和R_5a和/或R_6b和R_6a和/或R_7b和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

條件是，當(dāng)m＝p＝1時(shí)，R_5b、R_6b和R_7b中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝0且p＝1時(shí)，R_5b和R_6b中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝1且p＝0時(shí)，R_5b和R_7b中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝p＝0時(shí)，R_5b，表示下式的基團(tuán)：

以及

(b)任選使在前一步驟(a)中獲得的化合物成鹽或溶劑化，以獲得式(I)的化合物的鹽或溶劑化物。可以在該步驟之后、之前和或期間進(jìn)行脫保護(hù)步驟。

步驟(a)：

可以在硼氫化物如NaBH₃CN或NaBH(OAc)₃的存在下進(jìn)行還原反應(yīng)。

可以通過將下式(III)的化合物或其鹽(尤其是酸加成鹽，例如與三氟乙酸或鹽酸的酸加成鹽)與下式(IV)的化合物反應(yīng)制備式(II)的化合物：

其中：

-m、p、R₀、R_5a、R_6a和R_7a如以上所定義，以及

-R_5c、R_6c和R_7c彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；或下式的基團(tuán)：

其中n如以上所定義，

或R_5c和R_5a和/或R_6c和R_6a和/或R_7c和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

條件是，當(dāng)m＝p＝1時(shí)，R_5c、R_6c和R_7c中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝0且p＝1時(shí)，R_5c和R_6c中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝1且p＝0時(shí)，R_5c和R_7c中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝p＝0時(shí)，R_5c，表示下式的基團(tuán)：

其中R、R₁、R₂、R₃和R₄如以上所定義，A₁表示CHO或C(OA₂)(OA₃)，其中A₂和A₃彼此獨(dú)立地表示H、(C₁-C₆)烷基或芳基-(C₁-C₆)烷基；尤其A₂＝H，A₃表示(C₁-C₆)烷基或芳基-(C₁-C₆)烷基，尤其表示(C₁-C₆)烷基。

可以在Dean-Stark裝置的存在下，在甲苯中在回流溫度進(jìn)行該反應(yīng)。

還可以在堿如三乙胺，和干燥劑如MgSO₄的存在下進(jìn)行該反應(yīng)。在這種情況下，可以使用二氯甲烷作為溶劑。

對(duì)于該反應(yīng)，有利地R₀≠H，R_5a≠H，R≠CH₂OH，R₁≠H，R₂≠H，R₃≠H，R₄≠OH。因此，為了制備具有這種取代基的化合物，在進(jìn)行式(III)和(IV)的化合物的反應(yīng)前，OH或NH官能團(tuán)應(yīng)當(dāng)優(yōu)選被如以上所定義的保護(hù)基保護(hù)?？梢栽谠摬襟E后，尤其在方法的最終步驟進(jìn)行脫保護(hù)步驟。

尤其可以通過下式(V)的化合物的還原制備式(IV)的化合物：

其中A₃、R、R₁、R₂、R₃和R₄如以上所定義。

可以在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的條件下，尤其是在還原劑如DIBAl-H的存在下進(jìn)行該還原反應(yīng)。

可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法或文獻(xiàn)中描述的方法制備式(V)的化合物。

對(duì)于該反應(yīng)，有利地R≠CH₂OH，R₁≠H，R₂≠H，R₃≠H，且R₄≠OH。因此，為了制備具有這種取代基的化合物，在進(jìn)行式(III)和(IV)的化合物的反應(yīng)前，OH官能團(tuán)應(yīng)當(dāng)優(yōu)選被如以上所定義的O-保護(hù)基保護(hù)。可以在該步驟后，尤其在方法的最終步驟進(jìn)行脫保護(hù)步驟。

步驟(b)：

可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法，特別是通過在步驟(a)中獲得的式(I)的化合物與如前面所定義的有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸、有機(jī)堿或無(wú)機(jī)堿或溶劑的反應(yīng)，進(jìn)行成鹽或溶劑化步驟。

溶劑尤其可以為在制備根據(jù)本發(fā)明的化合物的最終步驟中使用的溶劑，特別是在步驟(a)中使用的溶劑。

因此，可以在單個(gè)步驟中進(jìn)行步驟(a)和(b)，不用分離中間化合物。

可以在該步驟之后、之前和或期間進(jìn)行脫保護(hù)步驟。

用于制備如以上所定義的式(I)的化合物的第二種方法包括以下連續(xù)步驟：

(i)將下式(IX)的化合物與如以上所定義的式(III)的化合物或其鹽(尤其是酸加成鹽，例如與三氟乙酸的酸加成鹽)反應(yīng)，

以獲得式(I)的化合物：

其中R、R₁、R₂、R₃和R₄如以上所定義，LG表示離去基，

以及

(ii)任選使在前一步驟(i)中獲得的化合物成鹽或溶劑化，以獲得式(I)的化合物的鹽或溶劑化物。

步驟(i)：

如本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)“離去基”是指化學(xué)基，在親核取代反應(yīng)期間，所述化學(xué)基可以容易地被親核試劑替代，在該情況中所述親核試劑為胺，即帶有NH₂基團(tuán)的分子(任選為鹽的形式)。該離去基可以特別地為鹵原子或磺酸酯?；撬狨ヌ貏e地為–OSO₂-R₄₈基團(tuán)，其中R₄₈表示(C₁-C₆)烷基、芳基、芳基-(C₁-C₆)烷基或(C₁-C₆)烷基-芳基，所述基團(tuán)任選被一個(gè)或幾個(gè)鹵原子如氟原子取代?；撬狨ビ绕淇梢詾榧谆撬狨?CH₃-S(O₂)O-)、三氟甲磺酸酯(CF₃-S(O)₂O-)或?qū)妆交撬狨?p-Me-C₆H₄-S(O)₂O-)。

離去基LG將尤其為磺酸酯如三氟甲磺酸酯。

有利地，在堿如K₂CO₃的存在下進(jìn)行步驟(i)的取代反應(yīng)。可以在溶劑如DMF中進(jìn)行反應(yīng)。

對(duì)于步驟(i)的反應(yīng)，有利地，R₀≠H，R_5a≠H，R≠CH₂OH，R₁≠H，R₂≠H，R₃≠H，且R₄≠OH。因此，為了制備具有這種取代基的化合物，在進(jìn)行式(III)和(IX)的化合物的反應(yīng)前，OH或NH官能團(tuán)應(yīng)當(dāng)優(yōu)選被如以上所定義的保護(hù)基保護(hù)?？梢栽谠摬襟E后，尤其在方法的最終步驟進(jìn)行脫保護(hù)步驟。

可以通過將下式(X)的化合物的羥基官能團(tuán)(OH)轉(zhuǎn)化為離去基制備式(IX)的化合物：

其中R、R₁、R₂、R₃和R₄如以上所定義。

本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知將OH官能團(tuán)轉(zhuǎn)化為離去基的反應(yīng)。當(dāng)LG＝OTf時(shí)，可以在Tf₂O和堿如吡啶的存在下進(jìn)行反應(yīng)?？梢栽谌軇┤缍燃淄橹羞M(jìn)行反應(yīng)。

對(duì)于該反應(yīng)，有利地，R≠CH₂OH、R₁≠H、R₂≠H、R₃≠H、且R₄≠OH。因此，為了制備具有這種取代基的化合物，在進(jìn)行該反應(yīng)前，OH官能團(tuán)應(yīng)當(dāng)優(yōu)選被如以上所定義的O-保護(hù)基保護(hù)?？梢栽谠摬襟E后，尤其在方法的最終步驟進(jìn)行脫保護(hù)步驟。

可以通過使用標(biāo)準(zhǔn)的還原劑如NaBH₄，例如在溶劑如THF、MeOH或THF/MeOH混合物中的還原步驟，由式(V)的化合物制備式(X)的化合物。

步驟(ii)：

可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法，特別是通過在步驟(i)中獲得的式(I)的化合物與如前面所定義的有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸、有機(jī)堿或無(wú)機(jī)堿或溶劑的反應(yīng)，進(jìn)行成鹽或溶劑化步驟。

溶劑尤其可以為在制備根據(jù)本發(fā)明的化合物的最終步驟中使用的溶劑，特別是在步驟(i)中使用的溶劑。

因此，可以在單個(gè)步驟中進(jìn)行步驟(i)和(ii)，不用分離中間化合物。

可以在該步驟之后、之前或期間進(jìn)行脫保護(hù)步驟。

用于制備如以上所定義的式(I)的化合物的第三種方法，其中m和p不都為0，R₅表示下式的基團(tuán)：

所述方法包括以下連續(xù)步驟：

(1)將下式(XIa)的化合物或其鹽(尤其是酸加成鹽，例如與鹽酸的酸加成鹽)與下式(VII)的化合物或其鹽(尤其是酸加成鹽，例如與三氟乙酸或鹽酸的酸加成鹽)反應(yīng)以獲得式(I)的化合物：

其中n、R、R₁、R₂、R₃、R₄和R_5a如以上所定義，

其中m、p、R₀、R_6a和R_7a如以上所定義(m和p不都為0)，并且R_6d和R_7d彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；或R_6d和R_6a和/或R_7d和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

以及

(2)任選使在前一步驟(1)中獲得的化合物成鹽或溶劑化，以獲得式(I)的化合物的鹽或溶劑化物。

步驟(1)：

可以在用于肽偶聯(lián)的常規(guī)條件下進(jìn)行步驟(1)的反應(yīng)，這些條件是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。

可以在偶聯(lián)劑的存在下進(jìn)行肽偶聯(lián)，所述偶聯(lián)劑如二異丙基碳二亞胺(DIC)、二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、羰基二咪唑(CDI)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸鹽(HATU)或(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸鹽(PyBOP)；任選與添加劑或堿如N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、N-羥基-苯并三唑(HOBt)、3,4-二氫-3-羥基-4-氧代-1,2,3-苯并三唑(HOOBt)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(HAt)、N-羥基磺基琥珀酰亞胺(磺基NHS)、二甲基氨基吡啶(DMAP)或N-甲基嗎啉(NMM)聯(lián)合。在該情況中，可以在PyBOP和NMM的存在下進(jìn)行反應(yīng)。

有利地，用式(VII)的化合物進(jìn)行該反應(yīng)，在式(VII)的化合物中如果p＝1則R_6a＝H，如果p＝0則R_7a＝H。因此，可以進(jìn)行取代胺官能團(tuán)的額外的步驟，以獲得式(I)的化合物，在式(I)的化合物中如果p＝1則R_6a≠H，如果p＝0則R_7a≠H。可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法進(jìn)行該取代步驟。

對(duì)于該反應(yīng)，有利地，R₀≠H，R_5a≠H，R≠CH₂OH，R₁≠H，R₂≠H，R₃≠H，且R₄≠OH。因此，為了制備具有這種取代基的化合物，在進(jìn)行式(III)和(IV)的化合物的反應(yīng)前，OH或NH官能團(tuán)應(yīng)當(dāng)優(yōu)選被如以上所定義的保護(hù)基保護(hù)?？梢栽谠摬襟E后，尤其在方法的最終步驟進(jìn)行脫保護(hù)步驟。

可以通過下式(VI)的化合物的亞胺官能團(tuán)的還原獲得下式(XIb)的化合物，然后進(jìn)行帶有PG基團(tuán)的羧酸官能團(tuán)的脫保護(hù)步驟制備式(XIa)的化合物：

其中n、PG、R、R₁、R₂、R₃、R₄和R_5a如以上所定義，且PG表示O-保護(hù)基如(C₁-C₆)烷基(例如乙基)，

其中n、PG、R、R₁、R₂、R₃、R₄和R_5a如以上所定義。

可以在硼氫化物如NaBH₃CN或NaBH(OAc)₃的存在下進(jìn)行還原反應(yīng)。

可以通過將下式(VIII)的化合物與式(IX)的化合物反應(yīng)制備式(XIb)的化合物：

其中n和R_5a如以上所定義，且PG表示O-保護(hù)基如(C₁-C₆)烷基(例如乙基)。

可以在堿如K₂CO₃的存在下進(jìn)行該反應(yīng)?？梢栽谌軇┤鏒MF中進(jìn)行反應(yīng)。

對(duì)于該反應(yīng)，有利地，R₀≠H，R_5a≠H，R≠CH₂OH，R₁≠H，R₂≠H，R₃≠H，且R₄≠OH。因此，為了制備具有這種取代基的化合物，在進(jìn)行式(III)和(IX)的化合物的反應(yīng)前，OH或NH官能團(tuán)應(yīng)當(dāng)優(yōu)選被如以上所定義的保護(hù)基保護(hù)。可以在該步驟后，尤其在方法的最終步驟進(jìn)行脫保護(hù)步驟。

步驟(2)：

可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法，特別是通過在步驟(1)中獲得的式(I)的化合物與如前面所定義的有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸、有機(jī)堿或無(wú)機(jī)堿或溶劑的反應(yīng)，進(jìn)行成鹽或溶劑化步驟。

溶劑尤其可以為在制備根據(jù)本發(fā)明的化合物的最終步驟中使用的溶劑，特別是在步驟(1)中使用的溶劑。

因此，可以在單個(gè)步驟中進(jìn)行步驟(1)和(2)，不用分離中間化合物。

可以在該步驟之后、之前和或期間進(jìn)行脫保護(hù)步驟。

可以在以上描述的方法中進(jìn)行進(jìn)一步的保護(hù)/脫保護(hù)步驟，所述步驟和其反應(yīng)條件是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。

可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法，如通過萃取、蒸發(fā)溶劑或通過沉淀或結(jié)晶(然后過濾)，將由前面任何方法所獲得的化合物從反應(yīng)介質(zhì)中分離。

如有必要，還可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法，如通過重結(jié)晶、蒸餾、硅膠柱色譜法或高效液相色譜法(HPLC)將化合物純化。

本發(fā)明還涉及：

·下式(II)的化合物：

其中m、p、R₀、R_5a、R_5b、R_6a、R_6b、R_7a和R_7b如以上所定義，且m和p不都為0，

下式(VI)的化合物：

其中n、R、R₁、R₂、R₃、R₄、R_5a和PG如以上所定義，

下式(XI)的化合物：

其中n、R、R₁、R₂、R₃、R₄和R_5a如以上所定義，R₄₉表示H或O-保護(hù)基如(C₁-C₆)烷基，

或其鹽、溶劑化物、互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體以任何比例的混合物，特別是對(duì)映異構(gòu)體的混合物，特別是外消旋體混合物。

這些式(II)、(VI)或(XI)的化合物作為合成中間體在式(I)的化合物的制備中是有用的。

以下實(shí)施例闡明本發(fā)明，但不以任何形式限制其范圍。

附圖說明

圖1表示在普通培養(yǎng)基中(存活對(duì)照)，在饑餓介質(zhì)中(無(wú)血清對(duì)照)和在含有5mg/mL化合物17的饑餓介質(zhì)中孵育后，隨著時(shí)間(0至12天)成纖維細(xì)胞活力的百分比。

圖2和3分別表示在加入0或8當(dāng)量NaOD并反應(yīng)2h30后化合物17的溶液的¹H RMN譜。

圖4和5分別表示在加入0或8當(dāng)量NaOD并反應(yīng)2h30后化合物X的溶液的¹H RMN譜。

圖6表示在加入8當(dāng)量NaOD并反應(yīng)3天后化合物X的溶液的¹H RMN譜。

圖7和8表示在加入8當(dāng)量NaOD并反應(yīng)3天后化合物X的溶液的質(zhì)譜，分別為ESI⁺和ESI^-模式。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例

使用了以下縮寫：

Ala ：丙氨酸

Ac ：乙?；?COCH₃)

Bn ：芐基(CH₂Ph)

Cbz ：芐氧羰基(CO₂CH₂Ph)

CDI ：羰基二咪唑

Dab ：2,4-二氨基丁酸

DCE ：二氯乙烷

DMEM ：Dulbecco改進(jìn)的Eagle介質(zhì)

DMF ：二甲基甲酰胺

DIBAl-H ：二異丁基氫化鋁

DIEA ：N,N-二異丙基乙胺

EDTA ：乙二胺四乙酸

ESI ：電噴霧電離

Et ：乙基(CH₂CH₃)

FBS ：胎牛血清

Gly ：甘氨酸

Lys ：賴氨酸

Me ：甲基(CH₃)

MEM ：最小必需介質(zhì)

NMM ：N-甲基嗎啉

NMR ：核磁共振

OD ：光密度

Orn ：鳥氨酸

PBS ：磷酸鹽緩沖鹽水

Pro ：脯氨酸

PSNEt₂ ：二乙基氨基甲基-聚苯乙烯

PyBOP ：(1H-苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸鹽

Tf ：三氟甲磺酰基(SO₂CF₃)

TFA ：三氟乙酸

THF ：四氫呋喃

Tyr ：酪氨酸

Z ：芐氧羰基(CO₂CH₂Ph)

I-根據(jù)本發(fā)明的化合物的合成

應(yīng)注意如在以上的說明書中所解釋，可以以互變異構(gòu)體形式的混合物的形式獲得R₄＝R₁＝OH的根據(jù)本發(fā)明的化合物。出于實(shí)踐原因，通過其吡喃糖形式表示這些化合物。其涉及根據(jù)本發(fā)明的化合物17、19、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40和44。

I-1.一般程序

肽中間體的合成

(其中aa₁和aa₂彼此獨(dú)立地表示氨基酸殘基)

肽中間體的合成的實(shí)施例

一般程序A

Boc-aa₁-OH和HCl.H₂N-aa₂-OBn偶聯(lián)：將Boc-aa₁-OH溶解于二氯甲烷中，并分批加入羰基二咪唑(1.03當(dāng)量)。在攪拌1h后，滴加HCl.H₂N-aa₂-OBn(1當(dāng)量)和DIEA(2.1當(dāng)量)的二氯甲烷溶液。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。加入1N鹽酸水溶液，并將混合物劇烈攪拌10min。分層，并用二氯甲烷萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥并真空濃縮。通過閃式柱色譜法純化獲得的殘余物，以獲得Boc-aa₁-aa₂-OBn。

一般程序B

使用TFA的N-脫保護(hù)：將N-Boc肽溶解于二氯甲烷中，并滴加三氟乙酸(20當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^夜，然后真空濃縮，以獲得肽的三氟乙酸銨鹽(X^-＝CF₃CO₂^-)。

一般程序C

使用HCl的N-脫保護(hù)：將N-Boc肽溶解于二氯甲烷中，并滴加4M的HCl二氧六環(huán)溶液(10當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?h，然后真空濃縮，以獲得肽的鹽酸銨鹽(X^-＝Cl^-)。

一般程序D

Z,Boc保護(hù)的氨基酸和^-X.⁺H₃N-aa₁-aa₂-OBn偶聯(lián)：將Z,Boc保護(hù)的氨基酸溶解于二氯甲烷中，并分批加入羰基二咪唑(1.2當(dāng)量)。在攪拌1h后，滴加^-X.⁺H₃N-aa₁-aa₂-OBn(1當(dāng)量)和DIEA(2.1當(dāng)量)的二氯甲烷溶液。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。加入1M的HCl水溶液，并將混合物劇烈攪拌10min。分層，并用二氯甲烷萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥并真空濃縮。通過閃式柱色譜法純化獲得的殘余物，以獲得偶聯(lián)的殘余物。

Boc-Ala-Ala-OBn：用Boc-Ala-OH(10g,52.9mmol,1當(dāng)量)和HCl.H₂N-Ala-OBn(11.4g,52.9mmol,1當(dāng)量)使用一般程序A。淺黃色油狀物(18.2g,98％)。

MS(ESI⁺):351.2[M+H]⁺；373.2[M+Na]⁺；389.1[M+K]⁺

HCl.H₂N-Ala-Ala-OBn：由Boc-Ala-Ala-OBn(18.04g,51.5mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序C。白色固體(14.75g,100％)。

MS(ESI⁺):251.1[M-HCl+H]⁺；273.1[M-HCl+Na]⁺；289.1[M-HCl+K]⁺

TFA.H₂N-Ala-Ala-OBn：由Boc-Ala-Ala-OBn(17.2g,49.03mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序B。淺黃色油狀物(17.9g,100％)。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz):1.3-1.5(m,6H),4.0-4.2(m,1H),4.3-4.5(m,1H),5.02(d,1H,¹J_H-H＝11.5Hz),5.11(d,1H,¹J_H-H＝11.5Hz),7.1-7.4(m,5H),7.65(d,1H,³J_H-H＝6Hz),7.8-8.3(m,2H)

Z-Lys(Boc)-Ala-Ala-OBn：由HCl.H₂N-ALa-Ala-OBn(15g,52.3mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(Boc)-OH(19.9g,52.5mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序D。白色固體(21.2g,67％)。

MS(ESI⁺):613.3[M+H]⁺；635.2[M+Na]⁺；651.2[M+K]⁺

Z-Lys(HCl)-Ala-Ala-OBn：由Z-Lys(Boc)-Ala-Ala-OBn(21g,34.3mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序C。白色固體(16.4g,87％)。

MS(ESI⁺):513.2[M-HCl+H]⁺；535.2[M-HCl+Na]⁺；551.2[M-HCl+K]⁺

Z-Lys(Boc)-Ala-OBn：用Z-Lys(Boc)-OH(2g,5.26mmol,1當(dāng)量)和HCl.H₂N-Ala-OBn(1.13g,5.26mmol,1當(dāng)量)代替HCl.H₂N-aa₁-aa₂-OBn使用一般程序D。淺黃色固體(1.89g,66％)。

¹H NMR_(CDCl₃,300MHz):1.3(m,16H)；1.6-1.7(m,2H)；3.0(m,2H)；4.1(m,1H)；4.5(m,1H)；4.6(m,1H)；5.0(s,2H)；5.1(m,1H)；5,5(d,7Hz,1H)；6,8(d,6.5Hz,1H,)；7.3(m,10H)。

Z-Lys(HCl)-Ala-OBn：由Z-Lys(Boc)-Ala-OBn(756mg,1.40mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序C。白色固體(778mg,100％)。

MS(ESI⁺):223.1[M+H]⁺；245.1[M+Na]⁺；261.1[M+K]⁺

Boc-Gly-Gly-OBn：用Boc-Gly-OH(800mg,4.57mmol,1當(dāng)量)和HCl.H₂N-Gly-OBn(922mg,4.57mmol,1當(dāng)量)使用一般程序A。無(wú)色油狀物(1.40g,95％)。

MS(ESI⁺):323.2[M+H]⁺；345.1[M+Na]⁺；361.1[M+K]⁺

HCl.H₂N-Gly-Gly-OBn：由Boc-Gly-Gly-OBn(1.37g,4.25mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序C。白色固體(1.14g,100％)。

MS(ESI⁺):223.1[M-HCl+H]⁺；245.1[M-HCl+Na]⁺；261.1[M-HCl+K]⁺

Z-Lys(Boc)-Gly-Gly-OBn：由HCl.H₂N-Gly-Gly-OBn(1.12g,4.17mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(Boc)-OH(1.68g,4.17mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序D。黃色油狀物(1.69g,69％)。

MS(ESI⁺):585.3[M+H]⁺；607.2[M+Na]⁺；623.2[M+K]⁺

Z-Lys(HCl)-Gly-Gly-OBn：由Z-Lys(Boc)-Gly-Gly-OBn(1.60g,2.79mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序C。白色固體(1.59g,100％)。

MS(ESI⁺):485.2[M-HCl+H]⁺；507.2[M-HCl+Na]⁺；523.2[M-HCl+K]⁺

Boc-Ala-Gly-OBn：用Boc-Ala-OH(400mg,2.11mmol,1當(dāng)量)和HCl.H₂N-Gly-OBn(425mg,2.11mmol,1當(dāng)量)使用一般程序A。無(wú)色油狀物(666mg,94％)。

MS(ESI⁺):359.2[M+Na]⁺；375.1[M+K]⁺

TFA.H₂N-Ala-Gly-OBn：由Boc-Ala-Gly-OBn(646mg,1.92mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序B。黃色油狀物(759mg,100％)。

MS(ESI⁺):237.1[M-TFA+H]⁺；259.1[M-TFA+Na]⁺

Z-Lys(Boc)-Ala-Gly-OBn：由TFA.H₂N-Ala-Gly-OBn(739mg,1.87mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(Boc)-OH(711mg,1.87mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序D。白色固體(797mg,71％)。

MS(ESI⁺):621.4[M+Na]⁺；637.4[M+K]⁺

Z-Lys(TFA)-Ala-Gly-OBn：由Z-Lys(Boc)-Ala-Gly-OBn(777mg,1.30mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序B。黃色油狀物(947mg,100％)。

MS(ESI⁺):499.3[M-TFA+H]⁺；521.3[M-TFA+Na]⁺；537.3[M-TFA+K]⁺

Boc-Gly-Ala-OBn：用Boc-Gly-OH(400mg,2.29mmol,1當(dāng)量)和HCl.H₂N-Ala-OBn(494mg,2.29mmol,1當(dāng)量)使用一般程序A。無(wú)色油狀物(703mg,91％)。

MS(ESI⁺):359.2[M+Na]⁺；375.1[M+K]⁺

TFA.H₂N-Gly-Ala-OBn：由Boc-Gly-Ala-OBn(683mg,2.03mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序B。黃色油狀物(772mg,100％)。

MS(ESI⁺):237.1[M-TFA+H]⁺；259.1[M-TFA+Na]⁺

Z-Lys(Boc)-Gly-Ala-OBn：由TFA.H₂N-Gly-Ala-OBn(753mg,1.98mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(Boc)-OH(753mg,1.98mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序D。黃色油狀物(939mg,79％)。

MS(ESI⁺):621.4[M+Na]⁺；637.4[M+K]⁺

Z-Lys(TFA)-Gly-Ala-OBn：由Z-Lys(Boc)-Gly-Ala-OBn(919mg,1.53mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序B。黃色油狀物(1.10g,100％)。

MS(ESI⁺):499.3[M-TFA+H]⁺；521.3[M-TFA+Na]⁺

Z-Orn(Boc)-Ala-Ala-OBn：由TFA.H₂N-Ala-Ala-OBn(878mg,2.41mmol,1.04當(dāng)量)和Z-Orn(Boc)-OH(850mg,2.32mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序D。白色固體(879mg,63％)。

MS(ESI⁺):599.3[M+H]⁺；621.3[M+Na]⁺；637.3[M+K]⁺

Z-Orn(HCl)-Ala-Ala-OBn：由Z-Orn(Boc)-Ala-Ala-OBn(874mg,1.46mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序C。白色固體(822mg,100％)。

MS(ESI⁺):499.3[M-HCl+H]⁺；521.2[M-HCl+Na]⁺

Z-Dab(Boc)-Ala-Ala-OBn：由TFA.H₂N-Ala-Ala-OBn(463mg,1.27mmol,1當(dāng)量)和Z-Dab(Boc)-OH(447mg,1.27mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序D。由Z-Dab(Boc)-OH.DCHA(二環(huán)己胺鹽)制備Z-Dab(Boc)-OH如下：將鹽在二氯甲烷中稀釋，將該溶液用硫酸氫鉀的飽和水溶液洗滌三次，用無(wú)水硫酸鈉干燥并真空濃縮。白色固體(402mg,54％)。

MS(ESI⁺):585.3[M+H]⁺；607.3[M+Na]⁺；623.3[M+K]⁺

Z-Dab(HCl)-Ala-Ala-OBn：由Z-Dab(Boc)-Ala-Ala-OBn(400mg,0.684mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序C。白色固體(413mg,100％)。

MS(ESI⁺):485.2[M-HCl+H]⁺；507.2[M-HCl+Na]⁺

Boc-Ala-Pro-OBn：在N₂氣氛下，將Boc-Ala-OH(1.00g,5.28mmol,1當(dāng)量)溶解于二氯甲烷(8mL)中。順序加入HCl.H₂N-Pro-OBn(1.40g,5.81mmol,1.1當(dāng)量)和2-溴乙基吡啶(1.59g,5.81mmol,1.1當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，并滴加N,N-二異丙基乙胺(2.8mL,16.9mmol,3.2當(dāng)量)。使混合物升至室溫，并攪拌5h。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物用二氯甲烷(20mL)稀釋。將獲得的溶液用檸檬酸水溶液(10％,15mL)洗滌，然后用碳酸氫鈉水溶液(5％,15mL)洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥并真空濃縮。通過閃式柱色譜法純化獲得的殘余物，以獲得淺黃色油狀物的Boc-Ala-Pro-OBn(1.34g,67％)。

MS(ESI⁺):399.2[M+Na]⁺

TFA.H₂N-Ala-Pro-OBn：由Boc-Ala-Pro-OBn(1.27g,3.7mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序B。淺棕色油狀物(1.31g,100％)。

MS(ESI⁺):277.2[M-TFA+H]⁺；299.1[M-TFA+Na]⁺

Z-Lys(Boc)-Ala-Pro-OBn：由Z-Lys(Boc)-OH(1.30mg,3.43mmol,1當(dāng)量)和TFA.H₂N-Ala-Pro-OBn(1.34mg,3.43mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序D。白色固體(1.24g,57％)。

MS(ESI⁺):639.3[M+H]⁺；661.3[M+Na]⁺；677.3[M+K]⁺

Z-Lys(TFA)-Ala-Pro-OBn：由Z-Lys(Boc)-Ala-Pro-OBn(1.08g,1.69mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序B。淺棕色固體(1.1g,56％)。

MS(ESI⁺):539.3[M-TFA+H]⁺

Boc-Pro-Ala-OBn：用Boc-Pro-OH(2.0g,9.29mmol,1當(dāng)量)和HCl.H₂N-Ala-OBn(2.04mg,9.29mmol,1當(dāng)量)使用一般程序A。白色固體(2.79g,80％)。

MS(ESI⁺):399.2[M+Na]⁺；415.2[M+K]⁺

TFA.H₂N-Pro-Ala-OBn：由Boc-Pro-Ala-OBn(537mg,1.43mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序B。淺黃色固體(558mg,100％)。

MS(ESI⁺):277.2[M-TFA+H]⁺；299.1[M-TFA+Na]⁺

Z-Lys(Boc)-Pro-Ala-OBn：在N₂氣氛下，將TFA.H₂N-Pro-Ala-OBn(542mg,1.39mmol,1.1當(dāng)量)溶解于二氯甲烷(7mL)中。順序加入Z-Lys(Boc)-OH(479mg,1.26mmol,1當(dāng)量)和2-溴乙基吡啶(380mg,1.39mmol,1.1當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，并滴加N,N-二異丙基乙胺(670μL,4.03mmol,3.2當(dāng)量)。使混合物升至室溫，并攪拌5h。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物用二氯甲烷(15mL)稀釋。將獲得的溶液用檸檬酸水溶液(10％,10mL)洗滌，然后用碳酸氫鈉水溶液(5％,10mL)洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥并真空濃縮。通過閃式柱色譜法純化獲得的殘余物，以獲得白色固體的Z-Lys(Boc)-Pro-Ala-OBn(382mg,43％)。

MS(ESI⁺):639.5[M+H]⁺；661.5[M+Na]⁺；677.4[M+K]⁺

Z-Lys(TFA)-Pro-Ala-OBn：由Z-Lys(Boc)-Pro-Ala-OBn(358mg,0.56mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序B。淺棕色固體(365mg,100％)。

MS(ESI⁺):539.3[M-TFA+H]⁺

Z-Ala-Lys(Boc)-OMe：由Z-Ala-OH(500mg,2.24mmol,1當(dāng)量)和HCl.H₂N-Lys(Boc)-OMe(665mg,2.24mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序A。粘稠的無(wú)色油狀物(863mg,83％)。

MS(ESI⁺):466.3[M+H]⁺；488.2[M+Na]⁺；504.2[M+K]⁺

Z-Ala-Lys(Boc)-OH：向Z-Ala-Lys(Boc)-OMe(786mg,1.69mmol)的四氫呋喃(49mL)溶液中加入氫氧化鋰(121mg,3當(dāng)量)的水(5.6mL)溶液。將反應(yīng)混合物攪拌16h，然后加入鹽酸水溶液(1M)直至pH 1，并將混合物用乙酸乙酯萃取3次。將合并的有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥并真空濃縮，以獲得淺黃色油狀物(763mg,100％)。

MS(ESI⁺):452.2[M+H]⁺；474.2[M+Na]⁺；490.2[M+K]⁺

Z-Ala-Lys(Boc)-Ala-OBn：由Z-Ala-Lys(Boc)-OH(585mg,1.23mmol,1當(dāng)量)代替Boc-aa₁-OH和HCl.H₂N-Ala-OBn(265mg,1.23mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序A。白色固體(364mg,48％)。

MS(ESI⁺):613.3[M+H]⁺；635.3[M+Na]⁺；651.3[M+K]⁺

Z-Ala-Lys(HCl)-Ala-OBn：由Z-Ala-Lys(Boc)-Ala-OBn(364mg,mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序C。白色固體(326mg,100％)。

MS(ESI⁺):513.3[M-HCl+H]⁺；535.3[M-HCl+Na]⁺；551.2[M-HCl+K]⁺

Boc-Tyr(OMe)-Ala-OBn：由Boc-Tyr(OMe)-OH(1.35g,4.57mmol,1當(dāng)量)和HCl.H₂N-Ala-OBn(1.084mg,5.03mmol,1.1當(dāng)量)起始使用一般程序A。白色固體(863mg,83％)。

MS(ESI⁺):457.2[M+H]⁺；479.2[M+Na]⁺；495.2[M+K]⁺

HCl.H₂N-Tyr(OMe)-Ala-OBn：由Boc-Tyr(OMe)-Ala-OBn(1.7g,mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序C。白色固體(1.51g,100％)。

MS(ESI⁺):357.2[M-HCl+H]⁺；379.2[M-HCl+Na]⁺

Z-Lys(Boc)-Tyr(OMe)-Ala-OBn：由HCl.H₂N-Tyr(OMe)-Ala-OBn(1.53g,3.89mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(Boc)-OH(1.63g,4.28mmol,1.1當(dāng)量)起始使用一般程序D。淺黃色固體(1.01g,40％)。

MS(ESI⁺):720.4[M+H]⁺；766.5[M+K]⁺

Z-Lys(HCl)-Tyr(OMe)-Ala-OBn：由Z-Lys(Boc)-Tyr(OMe)-Ala-OBn(970mg,1.35mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序C。淺黃色固體(880mg,100％)。

MS(ESI⁺):619.3[M-HCl+H]⁺；641.3[M-HCl+Na]⁺；657.3[M-HCl+K]⁺

中間體化合物2和4的合成：

其中R₁＝Bn

向由WO 2012/085221 A1中描述的方法獲得的化合物1(1.0g,1.33mmol,1當(dāng)量)的冷(-78℃)無(wú)水甲苯(13mL)溶液中滴加二異丁基氫化鋁溶液(甲苯中1.2M,1.4mL,1.66mmol,1.25當(dāng)量)，并在氮?dú)夥障聦⒎磻?yīng)混合物在相同溫度攪拌6h30。將反應(yīng)混合物用乙醇(3mL)淬滅，升溫至-20℃，并在該溫度攪拌15分鐘。加入洛瑟爾氏鹽(Rochelle’s salt)溶液(20％,8ml)，將混合物升至室溫并攪拌1h。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(30mL)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮，以獲得化合物2(987mg，無(wú)色油狀物)，其不作任何進(jìn)一步的純化在下一步中使用。

質(zhì)量(ESI⁺)：777.4[M+Na]⁺,793.4[M+K]⁺

其中R₁＝Me

如以上相同的程序，使用在Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2010,20,5251-5254中描述的化合物3(3.56g,5.26mmol)作為起始材料，得到化合物4(3.11g，淺黃色油狀物)。

質(zhì)量(ESI⁺)：701.3[M+Na]⁺,717.3[M+K]⁺

化合物15、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39和43的合成

將肽或氨基酸縮合至半縮酮2和隨后的還原：在氮?dú)夥障拢瑢肟s酮2衍生物溶解于二氯乙烷(0.05M)中。順序加入硫酸鎂(3當(dāng)量)、肽或氨基酸衍生物(0.95至1當(dāng)量)和PS-NEt₂(3.2mmol.g^-1,2當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?0min，然后回流20h。反應(yīng)完成后(通過¹⁹F NMR監(jiān)測(cè))，將反應(yīng)混合物在填料(plug of)上快速過濾，用二氯乙烷(約初始量的10％)洗滌所述填料。將獲得的溶液冷卻至0℃，在氮?dú)鈿夥罩许樞蚣尤肴阴Ｑ趸饸浠c(2當(dāng)量)和乙酸(1當(dāng)量)。在0℃攪拌30min后，將反應(yīng)混合物升至室溫并攪拌過夜。緩慢加入碳酸氫鈉的飽和水溶液，并將混合物攪拌2h。將層分開，并用二氯甲烷萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥并真空濃縮，以獲得粗糖肽衍生物，其通過閃式柱色譜法純化。

化合物15：由半縮酮2(9.63g,12.76mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(TFA)-Ala-Ala-OBn(7.59g,12.12mmol,0.95當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(6.71g,46％)。

MS(ESI⁺):1205.6[M+H]⁺

化合物21：由半縮酮2(1.02g,1.35mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(HCl)-Ala-OBn(751mg,1.35mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。淺黃色油狀物(1.14g,74％)。

MS(ESI⁺):1134.5[M+H]⁺；1156.5[M+Na]⁺

化合物23：由半縮酮2(1.02g,1.35mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(HCl)-Gly-Gly-OBn(786mg,1.35mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(1.03g,65％)。

MS(ESI⁺):1177.5[M+H]⁺；1199.5[M+Na]⁺

化合物25：由半縮酮2(1.01g,1.34mmol,當(dāng)量)和Z-Lys(TFA)-Ala-Gly-OBn(924mg,1.27mmol,0.95當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(719mg,47％)。

MS(ESI⁺):1191.5[M+H]⁺；1213.5[M+Na]⁺；1229.5[M+K]⁺

化合物27：由半縮酮2(1.13g,1.49mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(TFA)-Gly-Ala-OBn(1.02g,1.42mmol,0.95當(dāng)量)起始使用一般程序。淺黃色油狀物(774mg,46％)。

MS(ESI⁺):1191.5[M+H]⁺；1213.5[M+Na]⁺；1229.5[M+K]⁺

化合物29：由半縮酮2(1.07g,1.42mmol,1當(dāng)量)和Z-Orn(HCl)-Ala-Ala-OBn(802mg,1.42mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(1.23g,73％)。

MS(ESI⁺):1191.5[M+H]⁺

化合物31：由半縮酮2(516mg,684mmol,1當(dāng)量)和Z-Dab(HCl)-Ala-Ala-OBn(413mg,684mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。無(wú)色油狀物(588mg,73％)。

MS(ESI⁺):1177.5[M+H]⁺；1199.5[M+Na]⁺；1215.5[M+K]⁺

化合物33：由半縮酮2(497mg,0.658mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(TFA)-Ala-Pro-OBn(408mg,0.625mmol,0.95當(dāng)量)起始使用一般程序。淺黃色油狀物(466mg,61％)。

RMN ¹⁹F(CDCl₃,282.5MHz)(無(wú)¹H偶聯(lián)):-110.1(d,²J_F-F＝257Hz),-111.0(d,²J_F-F＝257Hz)

化合物35：由半縮酮2(396mg,0.524mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(TFA)-Pro-Ala-OBn(326mg,0.498mmol,0.95當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(409mg,67％)。

MS(ESI⁺):1231.6[M+H]⁺

化合物37：由半縮酮2(448mg,0.594mmol,1當(dāng)量)和Z-Ala-Lys(HCl)-Ala-OBn(331mg,0.594mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。無(wú)色油狀物(470mg,66％)。

MS(ESI⁺):1205.6[M+H]⁺；1227.5[M+Na]⁺；1243.5[M+K]⁺

化合物39：由半縮酮2(1.01g,1.34mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(HCl)-Tyr(OMe)-Ala-OBn(830mg,1.27mmol,0.95當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(1.02g,59％)。

MS(ESI⁺):1311.6[M+H]⁺；1333.6[M+Na]⁺；1349.6[M+K]⁺

化合物43：由半縮酮2(408mg,0.54mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(HCl)-OBn(255mg,0.54mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。無(wú)色油狀物(310mg,54％)。

MS(ESI⁺):1063.4[M+H]⁺

化合物17、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40和44的合成

使用氫解的糖肽脫保護(hù)：在惰性氣氛下，向受保護(hù)的糖肽的四氫呋喃溶液(0.025M)中加入鹽酸水溶液(1.0M,3.6當(dāng)量)，然后加入Pd/C(10％Pd,0.1當(dāng)量)。將燒瓶抽真空并充滿H₂(3次)。將反應(yīng)混合物在H₂氣氛下劇烈攪拌18h。反應(yīng)完成后，將混合物過濾(Millipore 0.45μm)，并將過濾器用水洗滌。將濾液真空濃縮，將獲得的殘余物溶解于水中并冷凍干燥，以獲得期望的化合物。

化合物17：由化合物15(6.48g,5.38mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(3.21g,99％)。

MS(ESI⁺):531.2[M-2HCl+H]⁺；553.2[M-2HCl+Na]⁺；569.2[M-2HCl+K]⁺

化合物22：由化合物21(702mg,0.619mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(330mg,100％)。

MS(ESI⁺):460.2[M-2HCl+H]⁺；482.2[M-2HCl+Na]⁺；498.1[M-2HCl+K]⁺

化合物24：由化合物23(700mg,0.595mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(344mg,100％)。

MS(ESI⁺):503.2[M-2HCl+H]⁺；525.2[M-2HCl+Na]⁺；541.2[M-2HCl+K]⁺

化合物26：由化合物25(640mg,0.537mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(307mg,97％)。

MS(ESI⁺):517.2[M-2HCl+H]⁺；539.2[M-2HCl+Na]⁺；555.2[M-2HCl+K]⁺

化合物28：由化合物27(604mg,0.507mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(290mg,97％)。

MS(ESI⁺):517.2[M-2HCl+H]⁺；539.2[M-2HCl+Na]⁺；555.2[M-2HCl+K]⁺

化合物30：由化合物29(700mg,0.588mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(356mg,100％)。

MS(ESI⁺):517.2[M-2HCl+H]⁺；539.2[M-2HCl+Na]⁺

化合物32：由化合物31(643mg,0.55mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。淺橙色固體(290mg,92％)。

MS(ESI^-):501.2[M-2HCl-H]^-

化合物34：由化合物33(436mg,0.354mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(227mg,100％)。

MS(ESI⁺):557.2[M-2HCl+H]⁺

化合物36：由化合物35(380mg,0.309mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(196mg,100％)。

MS(ESI⁺):557.2[M-2HCl+H]⁺

化合物38：由化合物37(470mg,0.39mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(235mg,100％)。

MS(ESI^-):529.3[M-2HCl-H]^-

化合物40：由化合物39(50mg,0.038mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(21mg,78％)。

MS(ESI^-):635.2[M-2HCl-H]^-

化合物44：由化合物43(750mg,0.705mmol,1當(dāng)量)起始使用一般程序。白色固體(305mg,94％)。

MS(ESI^-):387.1[M-2HCl-H]^-

I-2.特別程序

中間體化合物5和6的合成：

其中R₁＝Bn

在氮?dú)夥障?，使用迪?斯塔克裝置將化合物2(606mg,0.80mmol,1當(dāng)量)和N-羧基苯甲酰基-乙基-賴氨酸(485mg,1.61mmol,2當(dāng)量)在甲苯(8mL)中回流。3h后，將混合物真空濃縮，以獲得化合物5，其不作進(jìn)一步的純化在下一步中使用。

¹⁹F NMR(CDCl₃,282.5MHz)(無(wú)H偶聯(lián)):-110.2(d,J＝263Hz,1F)；-114.1(d,J＝263Hz,1F)。

其中R₁＝Me

如以上相同的程序，使用化合物4(1.08g,1.59mmol)作為起始材料，得到化合物6，其不作進(jìn)一步的純化在下一步中使用。

¹⁹F NMR(CDCl₃,282.5MHz)(無(wú)H偶聯(lián)):-109.7(d,J＝263Hz,1F)；-114.5(d,J＝263Hz,1F).

化合物7和8的合成：

其中R₁＝Bn

在氮?dú)夥障?，將氰基硼氫化鈉(151mg,2.41mmol,3當(dāng)量)加入至化合物5(802mg,0.803mmol,1當(dāng)量)在四氫呋喃(1.6mL)和甲醇(7.4mL)中的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6h。加入飽和氯化銨水溶液(8mL)，并將混合物用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(15mL)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮。通過閃式柱色譜法純化殘余物，以獲得化合物7(382mg，31％，無(wú)色油狀物)。

質(zhì)量(ESI⁺):1001.6[M+H]⁺,1023.5[M+Na]⁺,1039.5[M+K]⁺

其中R₁＝Me

如以上相同的程序，使用化合物6(1.47g,1.59mmol)作為起始材料，得到化合物8(796mg，54％，淺棕色油狀物)。

質(zhì)量(ESI⁺):925.3[M+H]⁺

使用取代途徑的化合物8(R₁＝Me)的可選合成：

中間體化合物9(R₁＝Me)的合成：

在氮?dú)夥障拢瑢⑴饸浠c(1g,26.4mmol,7當(dāng)量)分批加入至冷的(0℃)化合物3(2.55g,3.77mmol,1當(dāng)量)的甲醇(30mL)和THF(2.5mL)溶液中。使反應(yīng)混合物升至室溫，并攪拌3h30。加入飽和氯化銨溶液(10mL)和鹽水(10mL)，并將混合物用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(30mL)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮，以獲得化合物9(2.35g，98％，淺黃色油狀物)。

質(zhì)量(ESI⁺):657.3[M+Na]⁺,673.3[M+K]⁺

¹⁹F NMR(CDCl₃,282.5MHz)(無(wú)H偶聯(lián)):-113.6(d,J＝262Hz,1F)；-114.6(d,J＝262Hz,1F)。

中間體化合物10(R₁＝Me)的合成：

在氮?dú)夥障拢瑢⑦拎?650μL,7.97mmol,2.2當(dāng)量)和三氟甲磺酸酐(1.3mL,7.97mmol,2.2當(dāng)量)依次加入至冷的(-78℃)化合物9(2.3g,3.62mmol,1當(dāng)量)的二氯甲烷(36mL)溶液中。使反應(yīng)混合物升至室溫，并攪拌2h。加入水(20mL)，并將混合物用二氯甲烷(3×30mL)萃取。將合并的有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮，以獲得化合物10(2.79g，100％，淡橙色油狀物)。

質(zhì)量(ESI⁺):789.3[M+Na]⁺,805.2[M+K]⁺

¹⁹F NMR(CDCl₃,282.5MHz)(無(wú)H偶聯(lián)):-113.4(d,J＝259Hz,1F)；-115.6(d,J＝259Hz,1F)。

化合物8(R₁＝Me)的合成：

在氮?dú)夥障?，向化合?u>10(100mg,0.13mmol,1當(dāng)量)的干燥DMF(0.65mL)溶液中加入Z-Lys(NH₂)-OEt(80mg,0.26mmol,2當(dāng)量)的干燥DMF(0.65mL)溶液和碳酸鉀(22mg,0.261mmol,2當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?h30，并在50℃攪拌15h。冷卻后，加入飽和氯化銨溶液(5mL)和鹽水(5mL)，并將混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(2×20mL)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮，以獲得化合物8(15mg，13％，無(wú)色油狀物)。

質(zhì)量(ESI⁺):925.3[M+H]⁺

化合物11和12的合成：

其中R₁＝Bn

將2N氫氧化鋰水溶液(75μL,0.015mmol,2當(dāng)量)滴加至冷的(0℃)化合物7(75mg,0.075mmol,1當(dāng)量)的四氫呋喃(750μL)溶液中。然后使反應(yīng)升至室溫，并攪拌18h。加入1N HCl水溶液至pH＝1。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(3×8mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(8mL)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮，以獲得粗化合物11(76mg，93％，淺橙色固體)，其不作進(jìn)一步的純化在下一步中使用。

質(zhì)量(ESI⁺):973.3[M-HCl+H]⁺,995.4[M-HCl+Na]⁺

¹⁹F NMR(CDCl₃,282.5MHz)(無(wú)H偶聯(lián)):-106.8(d,J＝261Hz,1F)；-109.6(d,J＝261Hz,1F)。

其中R₁＝Me

如以上相同的程序，使用化合物8(604mg,0.652mmol)作為起始材料，得到化合物12(578mg，淺橙色固體，95％)。

質(zhì)量(ESI⁺):897.5[M-HCl+H]⁺,919.5[M-HCl+Na]⁺,935.4[M-HCl+K]⁺

¹⁹F NMR(CDCl₃,282.5MHz)(無(wú)H偶聯(lián)):-106.1(d,J＝263Hz,1F)；-108.7(d,J＝263Hz,1F)。

中間體化合物13和14的合成：

其中R₁＝Bn

在氮?dú)夥障拢褂玫习?斯塔克裝置將化合物2(45mg,0.073mmol,1當(dāng)量)和Z-Lys(NH₂)AlaAla-OBn(75mg,0.15mmol,2當(dāng)量)在甲苯(5mL)中回流。反應(yīng)完成后，將混合物真空濃縮，以獲得化合物13，其不作進(jìn)一步的純化在下一步中使用。

¹⁹F NMR(CDCl₃,282.5MHz)(無(wú)H偶聯(lián)):-110.3(d,J＝263Hz,1F)；-114.0(d,J＝263Hz,1F)。

其中R₁＝Me

如以上相同的程序，使用化合物4(200mg,0.32mmol)作為起始材料，得到化合物14，其不作進(jìn)一步的純化在下一步中使用。

¹⁹F NMR(CDCl₃,282.5MHz)(無(wú)H偶聯(lián)):-109.5(d,J＝264Hz,1F)；-114.1(d,J＝264Hz,1F)。

中間體化合物13(R₁＝Bn)的可選合成：

其中R₁＝Bn

在氮?dú)夥障?，將三乙?116μL,0.83mmol,1當(dāng)量)滴加至攪拌的化合物2(628mg,0.83mmol,1當(dāng)量)的二氯甲烷(8.3mL)溶液中，依次加入Z-Lys(NH₃⁺TFA^-)AlaAla-OBn(521mg,0.83mmol,1當(dāng)量)和無(wú)水硫酸鎂(151mg,1.25mmol,1.5當(dāng)量)，將混合物在室溫?cái)嚢?h然后過濾。將過濾器用少量二氯甲烷洗滌，將濾液用水(5mL)洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥并蒸發(fā)，以獲得純化合物13(878mg，88％，無(wú)色油狀物)。

¹⁹F NMR(CDCl₃,282.5MHz)(無(wú)H偶聯(lián)):-110.3(d,J＝263Hz,1F)；-114.0(d,J＝263Hz,1F)。

化合物15的可選合成和化合物16的合成：

其中R₁＝Bn

在氮?dú)夥障拢蚧衔?u>11(347mg,0.34mmol,1當(dāng)量)的DMF(3.5mL)溶液中加入TFA^-+H₃N-AlaAla-OBn(163mg,0.45mmol,1.3當(dāng)量)的DMF(3.5mL)溶液、PyBOP(521mg,0.722mmol,2.1當(dāng)量)、N-甲基嗎啉(150μL,13.8mmol,4當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物攪拌72小時(shí)。加入鹽水(4mL)，將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(3×8mL)萃取。將合并的有機(jī)層用10％檸檬酸水溶液(8mL)、1N氫氧化鈉水溶液(8mL)和鹽水(2×8mL)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮。通過閃式柱色譜法純化殘余物，以獲得化合物15(219mg，53％，白色固體)。

質(zhì)量(ESI⁺):1205.4[M+H]⁺

其中R₁＝Me

如以上相同的程序，使用化合物12(556mg,0.595mmol)作為起始材料，得到化合物16(544mg，淺黃色油狀物，81％)。

質(zhì)量(ESI⁺):1129.4[M+H]⁺,1151.5[M+Na]⁺,1167.5[M+K]⁺

化合物15和16的可選合成：

其中R₁＝Bn

在氮?dú)夥障拢瑢⑶杌饸浠c(32mg,0.51mmol,6.9當(dāng)量)加入至化合物13(88mg,0.073mmol,1當(dāng)量)在四氫呋喃(0.8mL)和甲醇(1.9mL)中的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?0h。加入飽和氯化銨水溶液(10mL)，并將混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(20mL)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮。通過閃式柱色譜法純化殘余物，以獲得化合物15(57mg，68％，淺黃色固體)。

質(zhì)量(ESI⁺):1205.6[M+H]⁺

其中R₁＝Me

如以上相同的程序，使用化合物14(364mg,0.32mmol)作為起始材料，得到化合物16(113mg，32％，無(wú)色油狀物)。

質(zhì)量(ESI⁺):1129.5[M+H]⁺,1151.5[M+Na]⁺,1167.5[M+K]⁺

化合物18的合成：

將化合物16(100mg,0.089mmol,1當(dāng)量)溶解于四氫呋喃(798μL)和鹽酸水溶液(2M,88μL,2當(dāng)量)中。將燒瓶放置于氮?dú)夥罩?，并加?0％Pd/C(30mg,0.32當(dāng)量)。然后，將燒瓶充滿氫氣氛并將反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)，然后用Millipore過濾并真空濃縮。將殘余物溶解于水中，用Millipore過濾(0.2μm)并冷凍干燥，以獲得淺橙色固體的化合物18(55mg,100％)。

質(zhì)量(ESI⁺):545.3[M-2HCl+H]⁺,562.4[M-2HCl+NH₄]⁺

¹⁹F NMR(CDCl₃,282.5MHz)(無(wú)H偶聯(lián)):-109.1(d,J＝258Hz,1F)；-110.8(d,J＝258Hz,1F)。

化合物19的合成：

將化合物17(323mg,0.54mmol)溶解于水(7mL)中，并加入安伯來(lái)特(Amberlite^TM)IRA-67(1.3g，預(yù)先用水洗滌)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后用Millipore過濾(0.2μm)，用水稀釋并冷凍干燥，以獲得化合物19(223mg,78％)。

質(zhì)量(ESI⁺):531.2[M+H]⁺,553.2[M+Na]⁺,569.2[M+K]⁺

化合物20的合成：

將化合物15(150mg,0.124mmol,1當(dāng)量)溶解于四氫呋喃(1.5mL)、水(1.5mL)和乙酸(5.3mL)中。將燒瓶放置于氮?dú)夥罩?，并加?0％Pd/C(26mg,0.2當(dāng)量)。然后，將燒瓶充滿氫氣氛并將反應(yīng)混合物劇烈攪拌24小時(shí)，然后用Millipore過濾并真空濃縮。將殘余物溶解于水中，用Millipore過濾(0.2μm)并冷凍干燥，以獲得淺黃色固體的化合物20(66mg,82％)。

質(zhì)量(ESI⁺):531.2[M-2AcOH+H]⁺,553.2[M-2AcOH+Na]⁺,569.2[M-2AcOH+K]⁺

化合物20的可選合成：

將化合物19溶解于水(10.4mL)中。滴加AcOH(6當(dāng)量,1M,2.34mL,2.34mmol)，在1h30期間將混合物手動(dòng)搖動(dòng)(agitate)數(shù)次。然后將混合物冷凍干燥，以獲得白色固體的化合物20(244mg,0.375mmol,96％)。

質(zhì)量(ESI⁺):531.2[M-2AcOH+H]⁺,553.2[M-2AcOH+Na]⁺,569.2[M-2AcOH+K]⁺

化合物41和42的合成：

在氮?dú)夥障拢瑢肟s酮45(1g,1.58mmol,1當(dāng)量)溶解于二氯乙烷(32mL)中。順序加入硫酸鎂(570mg,4.73mmol,3當(dāng)量)、Z-Lys(HCl)-Ala-Ala-OBn(820mg,1.50mmol,0.95當(dāng)量)和PS-NEt₂(3.2mmol.g^-1,980mg,3.15mmol,2當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?0min，然后回流20h。反應(yīng)完成后(通過¹⁹F NMR監(jiān)測(cè))，將反應(yīng)混合物在填料上快速過濾，用二氯乙烷洗滌所述填料。將獲得的溶液冷卻至0℃，在氮?dú)夥障马樞蚣尤肴阴Ｑ趸饸浠c(634mg,2.99mmol,2當(dāng)量)和乙酸(86μl,1.50mmol,1當(dāng)量)。在0℃攪拌30min后，將反應(yīng)混合物升至室溫并攪拌過夜。緩慢加入碳酸氫鈉的飽和水溶液，并將混合物攪拌2h。分層，并用二氯甲烷萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥并真空濃縮，以獲得白色固體的化合物41(611mg,37％)。

MS(ESI⁺):1099.4[M+H]⁺；1121.4[M+Na]⁺；1137.4[M+K]⁺

在惰性氣氛中，向化合物41(585mg,0.45mmol,1當(dāng)量)的THF(17.8mL)溶液中加入鹽酸水溶液(1.61ml,1.61mmol,3.6當(dāng)量)，然后加入Pd/C(10％Pd,4.7mg,0.045mmol,0.1當(dāng)量)。將燒瓶抽真空并充滿H₂(3次)。將反應(yīng)混合物在H₂氣氛中劇烈攪拌18h。反應(yīng)完成后，將混合物過濾(Millipore 0.45μm)，并將過濾器用水洗滌。將濾液真空濃縮，將獲得的殘余物溶解于水中并冷凍干燥，以獲得作為淺橙色固體的化合物42(262mg,100％)。

MS(ESI⁺):515.3[M-2HCl+H]⁺；537.2[M-2HCl+Na]⁺；553.2[M-2HCl+K]⁺

中間體化合物45的合成：

向根據(jù)Synlett 2005,17,2627-2630和Org.Lett.2002,4,757-759(還參見WO 2004/014928、WO 2007/125203和WO 2007/125194)合成的、冷的(-78℃)二氟酯(2.19g,3.39mmol,1當(dāng)量)的無(wú)水甲苯(34mL)溶液中加入二異丁基氫化鋁(甲苯中1.2M；3.7mL；4.4mmol；1.2當(dāng)量)溶液，將所得的混合物在該溫度攪拌3h。然后，將反應(yīng)用甲醇(6mL)淬滅，并將溶液升溫至-20℃持續(xù)15min。然后，加入洛瑟爾氏鹽溶液(20％,60ml)，并將溶液劇烈攪拌30min。然后將混合物用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，以獲得無(wú)色油狀物的化合物45(2.15g,93％)。

質(zhì)量(ESI⁺):652.2[M+H₂O]⁺

II-生物活性：

II-1.糖肽17對(duì)饑餓條件下的新生兒(neonatal)皮膚成纖維細(xì)胞的保存/保護(hù)的作用。通過臺(tái)盼藍(lán)拒染法(trypan blue exclusion method)評(píng)估。

材料和方法

傳代培養(yǎng)

·在補(bǔ)充有最終10％的胎牛血清、最終1％的抗生素(青霉素/鏈霉素)和最終0.1％的兩性霉素B的DMEM介質(zhì)中培養(yǎng)新生兒皮膚成纖維細(xì)胞(細(xì)胞系：CCD-27SK，ATCC號(hào)CRL-1475)。

·在37℃和10％CO₂的孵育器中，在75cm²的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)成纖維細(xì)胞至80％的細(xì)胞融合。每?jī)商煊妙A(yù)熱至37℃的新鮮介質(zhì)替換介質(zhì)。

饑餓介質(zhì)

·該介質(zhì)由45％不含胎牛血清的傳代培養(yǎng)介質(zhì)和55％含有EDTA(最終濃度0.45mM)的磷酸鹽緩沖液鹽水1X混合組成。其被稱作無(wú)血清介質(zhì)。

產(chǎn)品制備

·在饑餓介質(zhì)中將化合物17(MM＝603.4g/mol)稀釋至最終5mg/ml，并通過加入1N NaOH將pH調(diào)節(jié)至7.4。

一般實(shí)驗(yàn)程序

在96孔板上的測(cè)試

·將成纖維細(xì)胞濃縮至2.10⁵細(xì)胞/ml，將100μl細(xì)胞懸液加入至96孔板的孔中，并在37℃和10％CO₂的孵育器中孵育4小時(shí)。

·細(xì)胞粘附后，將介質(zhì)替換，將板孵育(37℃-10％CO₂)以進(jìn)行如下測(cè)試：

ο每個(gè)采樣時(shí)間對(duì)應(yīng)一個(gè)板：D0、D3、D4、D5、D6、D7、D10、D12天

ο加入了120μl培養(yǎng)基(存活對(duì)照)、饑餓介質(zhì)(無(wú)血清對(duì)照)或5mg/ml化合物17的溶液的每個(gè)條件對(duì)應(yīng)三個(gè)孔(一式三份計(jì)數(shù))。

活力測(cè)試

·通過臺(tái)盼藍(lán)拒染技術(shù)評(píng)估細(xì)胞活力，所述技術(shù)的原理基于活細(xì)胞具有排斥臺(tái)盼藍(lán)染料的完整的細(xì)胞膜。因此，在用顯微鏡觀察時(shí)只有死細(xì)胞是藍(lán)色的。

對(duì)于采樣，將110μl臺(tái)盼藍(lán)(SIGMAT8154)加入至對(duì)應(yīng)孔的110μl胰蛋白酶處理的(trypsinated)細(xì)胞懸液中用于計(jì)數(shù)。

將200μl臺(tái)盼藍(lán)/細(xì)胞混合物滴至血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中。通過使用Neubauer計(jì)數(shù)室將細(xì)胞計(jì)數(shù)。在形成9mm²大方格的9個(gè)1mm²區(qū)域中將未染色的(有活力的)和染色的(無(wú)活力的)細(xì)胞分別計(jì)數(shù)，并相加以獲得每個(gè)樣品中細(xì)胞的總數(shù)量。使用三次計(jì)數(shù)的平均值計(jì)算活力百分比如下：

[有活力的細(xì)胞的數(shù)量/細(xì)胞的總數(shù)量]*100

·在加入后的幾天中(D0、D3、D4、D5、D6、D7、D10、D12)，將饑餓條件下的培養(yǎng)物的細(xì)胞活力百分比與對(duì)照培養(yǎng)物作比較。

結(jié)果

結(jié)果繪制于圖1的柱狀圖中，其表示在12天的時(shí)期期間體外的成纖維細(xì)胞活力的發(fā)展，結(jié)果還繪制于下表1中。

表1

存活對(duì)照在D0至D12顯示了非常好的活力(活力>90％)。

在饑餓介質(zhì)中的細(xì)胞(無(wú)血清對(duì)照)從D5顯示了其活力明顯的下降(59％)；在D6(34％)、D7(15％)該現(xiàn)象更嚴(yán)重，在D10達(dá)到了100％死亡。

在饑餓介質(zhì)中培養(yǎng)但用5mg/ml化合物17處理的細(xì)胞的活力在D0(97％)至D12(77％)之間非常輕微地下降，但依然明顯高于無(wú)血清對(duì)照。因此，化合物17顯示了對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞顯著的保存/保護(hù)作用，因?yàn)樵诓焕谏L(zhǎng)的條件下細(xì)胞被維持在健康的狀態(tài)。

II-2.糖肽在不同的應(yīng)激條件中對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞或鼻上皮細(xì)胞的保存/保護(hù)的作用。

測(cè)試了不同的應(yīng)激條件，以評(píng)估幾種化合物對(duì)2種類型的細(xì)胞：人皮膚成纖維細(xì)胞(剝奪(deprivation)、UV應(yīng)激、氧化應(yīng)激或細(xì)菌應(yīng)激)或人鼻上皮細(xì)胞(剝奪)的保存/保護(hù)作用。不同的方案描述如下。

材料和方法

傳代培養(yǎng)

·在補(bǔ)充有最終10％的FBS、最終1％的抗生素(混合Dutscher L0010，青霉素/鏈霉素/兩性霉素B)和最終1％的L-谷氨酰胺的DMEM介質(zhì)中培養(yǎng)人新生兒皮膚成纖維細(xì)胞(細(xì)胞系：CCD-27SK，ATCC CRL-1475)。在補(bǔ)充有10％FBS、1％抗生素和1％L-谷氨酰胺的MEM介質(zhì)中培養(yǎng)人鼻上皮細(xì)胞(細(xì)胞系：RPMI2650，ATCC CCL-30)。

·在37℃和10％CO₂的孵育器中，在75cm²的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)細(xì)胞至80％的細(xì)胞融合，然后在3個(gè)瓶中傳代培養(yǎng)。每?jī)商煊妙A(yù)熱至37℃的新鮮介質(zhì)替換介質(zhì)。

測(cè)試介質(zhì)

·對(duì)于饑餓測(cè)試，介質(zhì)由45％不含F(xiàn)BS的傳代培養(yǎng)介質(zhì)和55％含有EDTA(最終濃度0.45mM)的PBS 1X混合組成。其被稱作饑餓介質(zhì)。

·對(duì)于氧化、細(xì)菌和UV應(yīng)激，介質(zhì)由45％傳代培養(yǎng)介質(zhì)和55％含有EDTA(最終濃度0.45mM)的PBS 1X混合組成。

化合物溶液

·將測(cè)試化合物溶解于PBS(總體積的10％)中，然后在合適的測(cè)試介質(zhì)中稀釋至確定的最終濃度。必要時(shí)，通過加入1N NaOH將pH調(diào)節(jié)至7.4。

一般實(shí)驗(yàn)程序

在24孔板上的測(cè)試

·將細(xì)胞濃縮至1.10⁵細(xì)胞/ml，將500μl細(xì)胞懸液加入至24孔板的孔中，并在37℃和10％CO₂的孵育器中孵育。

·孵育3天后，去除介質(zhì)以根據(jù)應(yīng)激條件進(jìn)行測(cè)試。

·進(jìn)行幾個(gè)對(duì)照，即，陽(yáng)性對(duì)照(無(wú)應(yīng)激)和應(yīng)激對(duì)照(應(yīng)激，無(wú)化合物)，所述陽(yáng)性對(duì)照被視為100％活力，將所述應(yīng)激對(duì)照與測(cè)試(應(yīng)激+化合物)比較以顯示測(cè)試化合物潛在的保存作用。

對(duì)于細(xì)菌應(yīng)激，僅在3個(gè)測(cè)試間比較細(xì)胞的溶解(應(yīng)激+3個(gè)不同濃度的化合物)。

如下進(jìn)行誘導(dǎo)的應(yīng)激：

ο饑餓

向每種條件的三個(gè)孔(一式三份計(jì)數(shù))中加入1ml培養(yǎng)基(陽(yáng)性對(duì)照)或饑餓介質(zhì)(應(yīng)激對(duì)照)或加入有確定濃度的測(cè)試化合物的饑餓介質(zhì)。將板在37℃和10％CO₂中孵育不同時(shí)間(1、4、6、7或8天)，然后使用中性紅攝入法分析細(xì)胞活力。

ο氧化應(yīng)激

向每種條件的三個(gè)孔(一式三份計(jì)數(shù))中加入0.8ml培養(yǎng)基(對(duì)照)或每個(gè)測(cè)試化合物的溶液。將板在37℃和10％CO₂中孵育24h。

然后，如下進(jìn)行氧化應(yīng)激：向除了陰性對(duì)照外的孔中加入0.2ml的500μM H₂O₂溶液，向陰性對(duì)照的孔中加入0.2ml培養(yǎng)基。

將板在37℃和10％CO₂中孵育持續(xù)不同的暴露時(shí)間(1h和24h)，然后使用中性紅攝入法分析細(xì)胞活力。

οUV應(yīng)激

向每種條件的三個(gè)孔(一式三份計(jì)數(shù))中加入1ml培養(yǎng)基(對(duì)照)或1ml每個(gè)測(cè)試化合物的溶液。

將板在37℃和10％CO₂中孵育24h。

然后，如下進(jìn)行UV應(yīng)激：使板在UVA CUBE 400(HONLE UV technology)中經(jīng)受11焦耳/cm²，將經(jīng)照射的板在37℃和10％CO₂中孵育不同時(shí)間(1h、3h和24h)，然后使用中性紅攝入法分析細(xì)胞活力。

ο細(xì)菌應(yīng)激

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)培養(yǎng)物的上清液的制備。

在37℃攪拌下，在16小時(shí)期間，在大豆胰蛋白酶解肉湯(Tryptic Soy Broth)中進(jìn)行金黃色葡萄球菌的預(yù)培養(yǎng)。

孵育后，通過離心(4000rpm,10分鐘)收集細(xì)菌，并將其懸浮以在不含抗生素的細(xì)胞培養(yǎng)基中獲得OD_620nm＝3.3。在37℃攪拌下，在24小時(shí)期間進(jìn)行培養(yǎng)。然后，在離心(4000rpm,10分鐘)后回收上清液，并通過0.22μm過濾滅菌。將抗生素(混合Dutscher L0010，青霉素/鏈霉素/兩性霉素B)以1％加入至各份細(xì)胞培養(yǎng)基中。在深凍冰箱中儲(chǔ)存的上清液含有在細(xì)菌生長(zhǎng)期間產(chǎn)生的所有毒素和代謝廢物。

測(cè)試。

如下進(jìn)行測(cè)試：

·在培養(yǎng)基中稀釋(1/2)金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物的上清液。

·向每種條件的三個(gè)孔(一式三份計(jì)數(shù))中加入0.5ml測(cè)試化合物的溶液。將板在37℃和10％CO₂中溫育24小時(shí)。

·然后，使用稀釋的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物上清液進(jìn)行細(xì)菌應(yīng)激，以使細(xì)胞受應(yīng)激。將每個(gè)孔中的溶液去除并用0.5ml稀釋的上清液和0.5ml 2X濃縮的化合物溶液替代。將板在37℃和10％CO₂中孵育48h。

·然后，使用乳酸脫氫酶(LDH)生物測(cè)試分析細(xì)胞溶解。

活力測(cè)試(中性紅攝入)

中性紅攝入測(cè)試用于測(cè)定細(xì)胞活力。該測(cè)試基于有活力的細(xì)胞將離體活體染料中性紅吸收并結(jié)合至其溶酶體的能力。因此，僅有活力的細(xì)胞被染色。在應(yīng)激測(cè)試(T0)后的不同時(shí)間，將板與中性紅溶液孵育3.5小時(shí)。然后洗滌細(xì)胞，在每個(gè)孔中取出染料，并使用分光光度計(jì)讀取吸光度。

對(duì)于采樣，將1mL含有中性紅的DMEM(不含酚紅指示劑)(OD＝0.110)加入至細(xì)胞中持續(xù)3.5小時(shí)(37℃,10％CO₂)。孵育后，去除介質(zhì)，用PBS洗滌兩次，并加入1mL提取溶液(49％絕對(duì)乙醇、49％超純水、2％冰乙酸)。將板在旋轉(zhuǎn)搖蕩器中避光放置15分鐘，然后在540nm讀取OD。

計(jì)算

陽(yáng)性對(duì)照的OD_540nm平均值被視為100％活力。

每個(gè)測(cè)試的活力的百分比計(jì)算如下：

活力測(cè)試％＝(測(cè)試溶液的OD_540nm-空白)*100/(陽(yáng)性對(duì)照的OD_540nm-空白)。

在不同時(shí)間，將由加入有測(cè)試化合物的應(yīng)激培養(yǎng)物計(jì)算的細(xì)胞活力百分比與應(yīng)激-對(duì)照培養(yǎng)物作比較。

LDH生物測(cè)試

通過LDH生物測(cè)試的分子的作用的啟示

使用比色測(cè)試測(cè)定細(xì)胞溶解，所述比色測(cè)試定量地測(cè)量乳酸脫氫酶(LDH)，所述乳酸脫氫酶是一種在細(xì)胞溶解時(shí)釋放的穩(wěn)定的胞質(zhì)酶。

在暴露于細(xì)菌應(yīng)激48小時(shí)后，進(jìn)行LDH生物測(cè)試。使用試劑盒“CytoToxNon-Radioactive Cytotoxicity Assay”(Promega)和其方案，以確定在不同孔中含有的LDH的濃度。

490nm處的OD值表示細(xì)胞溶解的水平。將每個(gè)測(cè)試化合物溶液的OD_490nm平均值一起作比較。

結(jié)果

a)饑餓

根據(jù)經(jīng)測(cè)試的化合物或細(xì)胞，用不同糖肽獲得的結(jié)果匯集在表2至5中。

·人新生兒皮膚成纖維細(xì)胞

表2：在血清剝奪后培養(yǎng)7天，化合物17、化合物19和化合物20對(duì)人成纖維細(xì)胞的保存作用

如表2中所示，在饑餓介質(zhì)(應(yīng)激對(duì)照)中的細(xì)胞從D1(77％)至D7(8％)顯示了其活力明顯的下降。同樣地，結(jié)果顯示用5mg/ml化合物17、化合物19或化合物20處理的應(yīng)激細(xì)胞的活力在D1(73至87％)和D7(45至50％)輕微下降，但在D7依然明顯高于應(yīng)激對(duì)照。

因此，化合物17、19或20顯示了對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞顯著的保存/保護(hù)作用，因?yàn)樵诓焕谏L(zhǎng)的條件下細(xì)胞被維持在健康的狀態(tài)。

表3：在血清剝奪后培養(yǎng)8天，化合物44、化合物24、化合物26、化合物28、化合物30、化合物34和化合物38對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞的保存作用

(*在該測(cè)試中，僅陽(yáng)性對(duì)照是用補(bǔ)充有5％FBS而非10％FBS的培養(yǎng)基制備的)

如表3中所示，在饑餓介質(zhì)(應(yīng)激對(duì)照)中的細(xì)胞在8天內(nèi)顯示了其活力明顯的下降(34％)。在D8，在饑餓介質(zhì)中培養(yǎng)并加入有10mg/ml化合物44、24、26、28、30、34和38的皮膚成纖維細(xì)胞的活力依然明顯高于應(yīng)激對(duì)照的活力(64至108％對(duì)比于34％)。

這些結(jié)果顯示了化合物44、24、26、28、30、34和38對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞的顯著的保存/保護(hù)作用，所述化合物在不利于生長(zhǎng)的條件下將細(xì)胞維持在健康的狀態(tài)。

表4：在血清剝奪后培養(yǎng)4天，化合物17和化合物22對(duì)人成纖維細(xì)胞的保存作用

如表4中所示，在饑餓介質(zhì)(應(yīng)激對(duì)照)中的細(xì)胞在4天內(nèi)顯示了其活力明顯的下降(57％)，然而用10mg/ml化合物17或化合物22處理的應(yīng)激細(xì)胞的細(xì)胞活力依然非常高(分別為116％和93％)。這些結(jié)果顯示了化合物17和22顯著的保存/保護(hù)作用。

·人鼻上皮細(xì)胞

表5：在血清剝奪后培養(yǎng)6天，化合物19對(duì)人鼻上皮細(xì)胞的保存作用

如上表中所示，在饑餓介質(zhì)(應(yīng)激對(duì)照)中的細(xì)胞在D4(27％)至D6(7％)顯示了其活力明顯的下降。同樣地，結(jié)果顯示加入有10mg/ml化合物19的應(yīng)激細(xì)胞的活力在6天內(nèi)下降，但依然高于應(yīng)激對(duì)照(在D6，26％對(duì)比于7％)。因此，化合物19顯示了對(duì)人鼻上皮細(xì)胞的保存/保護(hù)作用。

b)氧化應(yīng)激

用不同濃度的化合物19獲得的結(jié)果匯集在下表中。

表6：在加入H₂O₂后培養(yǎng)24h，人新生兒皮膚成纖維細(xì)胞的活力

表6中的結(jié)果顯示加入有5mg/ml、10mg/ml或15mg/ml化合物19的應(yīng)激細(xì)胞的活力在24h內(nèi)上升，并且依然大大高于應(yīng)激對(duì)照的活力(在氧化應(yīng)激后24h，分別為109至127％對(duì)比于74％)。因此，化合物19顯示了對(duì)抗氧化應(yīng)激的保存/保護(hù)作用，所述作用是劑量依賴的。

此外在加入有化合物19的培養(yǎng)物中，細(xì)胞活力隨著時(shí)間上升，顯示了對(duì)應(yīng)激細(xì)胞的生長(zhǎng)/再生作用。

c)UV應(yīng)激

用不同濃度的化合物17和化合物19獲得的結(jié)果匯集在下表7中。

表7：在UV照射后培養(yǎng)24h，人新生兒皮膚成纖維細(xì)胞的活力

如上表中所示，應(yīng)激對(duì)照測(cè)試中的經(jīng)照射的細(xì)胞在UV照射后1h顯示了其活力明顯的下降(10％活力)，然而加入有5mg/ml化合物17或19的應(yīng)激細(xì)胞的活力在24h內(nèi)上升，并且依然大大高于應(yīng)激對(duì)照的活力(在UV應(yīng)激后24h，分別為82％和89％對(duì)比于12％)。

因此，化合物17和19顯示了對(duì)抗UV應(yīng)激的保存/保護(hù)作用。

此外在加入有化合物17或19的培養(yǎng)物中，細(xì)胞活力隨著時(shí)間上升，顯示了對(duì)應(yīng)激細(xì)胞的生長(zhǎng)或再生作用。

d)細(xì)菌應(yīng)激

在下表8中比較了用5、10或15mg/mL的化合物17的3種溶液獲得的OD_490nm值。

表8：在細(xì)菌應(yīng)激后48h人新生兒皮膚成纖維細(xì)胞的溶解

當(dāng)化合物17的量從5mg/ml升高至15mg/ml時(shí)，OD_490nm下降，所述OD_490nm表示細(xì)菌應(yīng)激后48h的細(xì)胞溶解。因此，化合物17顯示了細(xì)胞對(duì)抗細(xì)菌應(yīng)激的保護(hù)作用。

III-比較研究

化合物17和化合物X(在WO 2006/059227中被稱作化合物15)間的比較穩(wěn)定性研究

該研究的目的在于證明化合物17相比于化合物X在堿性條件中穩(wěn)定性的巨大改善。為此，進(jìn)行了下組實(shí)驗(yàn)。

在第一組實(shí)驗(yàn)中(表9中的實(shí)驗(yàn)1至7)，在總體積355μL的氧化氘([X]＝4.810^-2mmol.mL^-1)中，將X(10mg,1.72 10^-2mmol)與2至8當(dāng)量的NaOD反應(yīng)2h30，然后用D₂O中的1M DCl酸化。為了確保溶液中所有化合物都為其酸性形式，將DCl的當(dāng)量調(diào)節(jié)為比中和溶液所需的量多3個(gè)DCl的當(dāng)量(n_DCl＝n_NaOD+3)。用氧化氘將體積調(diào)節(jié)至544μL。

在第二組實(shí)驗(yàn)中(表9中的實(shí)驗(yàn)8至14)，在總體積343μL的氧化氘([17]＝4.8 10^-2mmol.mL^-1)中，將17(10mg,1.66 10^-2mmol)與2至8當(dāng)量的NaOD反應(yīng)2h30，然后用D₂O中的1M DCl酸化。為了確保溶液中所有化合物都為其酸性形式，將DCl的當(dāng)量調(diào)節(jié)為比中和溶液所需的量多3個(gè)DCl的當(dāng)量(n_DCl＝n_NaOD+3)。用氧化氘將體積調(diào)節(jié)至526μL。

表9

對(duì)每個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行¹H NMR分析。這就是為什么在氧化氘中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并使用D₂O中的1M NaOD作為堿和使用D₂O中的1M DCl作為酸。這些¹H NMR分析允許顯示不存在化合物17的降解，以及化合物X的降解，如以下方案1中所示：

事實(shí)上，通過比較對(duì)應(yīng)于連接至X(CH₂NGP)中的氮原子的賴氨酸側(cè)鏈的亞甲基的積分(3.3ppm)與X1(水解的CH₂Lys)中相同的亞甲基的積分(3.0ppm)，¹H NMR允許確定形成的化合物X1的量。結(jié)果描述于下表10中。

表10

對(duì)于這些結(jié)果，看起來(lái)化合物X對(duì)堿性介質(zhì)敏感，而化合物17則不然。事實(shí)上，化合物17的原始¹H NMR譜(對(duì)照-圖2)與實(shí)驗(yàn)8至14的¹H NMR譜(實(shí)驗(yàn)14的¹H NMR譜表示在圖3中)是非常相似的，而化合物X的原始¹H NMR譜(對(duì)照-圖4)與實(shí)驗(yàn)1至7的¹H NMR譜(實(shí)驗(yàn)7的¹H NMR譜表示在圖5中)的比較通過化合物X1(和因此化合物X2)的逐步形成顯示了化合物X的逐步水解，其中在實(shí)驗(yàn)7中水解高達(dá)22％(8當(dāng)量的NaOD持續(xù)2h30)。

為了確定來(lái)自于X水解的化合物X1和X2的結(jié)構(gòu)，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)，其中在總體積355μL的氧化氘([X]＝4.8 10^-2mmol.mL^-1)中，將X(10mg,1.72 10^-2mmol)與8當(dāng)量的NaOD反應(yīng)3天，然后用D₂O中的1M DCl酸化。在這些條件下，幾乎所有的化合物X都被水解，如通過¹H NMR所確定，化合物X的水解百分比為85％，如表11中所證明。

表11

實(shí)驗(yàn)A和B的溶液的¹H NMR譜分別表示在圖4和圖6中。

通過質(zhì)譜(ESI⁺和ESI^-)分析實(shí)驗(yàn)B的溶液。在ESI⁺中，探測(cè)到質(zhì)量為289.2和311.2的兩種離子加合物，其分別對(duì)應(yīng)于[X1-2HCl+H]⁺和[X1-2HCl+Na]⁺(質(zhì)譜呈現(xiàn)在圖7中)。在ESI^-中，探測(cè)到質(zhì)量為273.1和287.2的兩種離子加合物，其分別對(duì)應(yīng)于[X2-H]^-和[X1-2HCl-H]^-(質(zhì)譜呈現(xiàn)在圖8中)。

權(quán)利要求書(按照條約第19條的修改)

1.一種下式(I)的化合物：

其中：

-m表示0或1，

-p表示0或1，

-R_5a、R_6a和R_7a彼此獨(dú)立地表示氫或N-保護(hù)基，以及

或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

其中

-n表示1至6的整數(shù)，

-R₁和R₂彼此獨(dú)立地表示氟原子或OSiR^a2R^b2R^c2、OR₁₅、OC(O)R₁₆、OCO₂R₁₇、OC(O)NR₁₈R₁₉、OP(O)(OR₂₀)₂或OSO₃R₂₁基團(tuán)，

-R₃表示氟原子或OSiR^a3R^b3R^c3、OR₂₂、OC(O)R₂₃、OCO₂R₂₄、OCONR₂₅R₂₆、OP(O)(OR₂₇)₂、OSO₃R₂₈、N₃、鄰苯二甲酰亞胺基、NR₂₉R₃₀、NR₃₁C(O)R₃₂、NR₃₃C(O)OR₃₄、N(C(O)R₃₅)C(O)R₃₆、N(C(O)R₃₇)C(O)OR₃₈和N(C(O)OR₃₉)C(O)OR₄₀基團(tuán)，

-R₄表示氫原子或鹵原子或OSiR^a4R^b4R^c4、OR₄₁、OC(O)R₄₂、OCO₂R₄₃、OCONR₄₄R₄₅、OP(O)(OR₄₆)₂或OSO₃R₄₇基團(tuán)，

或R和R₁與攜帶它們的碳原子一起形成具有下式的環(huán)縮醛：

和/或(R₁和R₂)、(R₂和R₃)和/或(R₃和R₄)與攜帶它們的碳原子一起形成具有下式的環(huán)縮醛：

-R₁₃、R₁₄、R₂₀、R₂₁、R₂₇、R₂₈、R₄₆和R₄₇彼此獨(dú)立地表示氫原子或(C₁-C₆)烷基，

-R^a1至R^a4、R^b1至R^b4和R^c1至R^c4彼此獨(dú)立地表示(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基，以及

-R^d和R^e彼此獨(dú)立地表示氫原子或(C₁-C₆)烷基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中其為下式(Ie1)、(Ii1)、(Im1)或(Iq1)的化合物，優(yōu)選為下式(Ie1)的化合物：

或其鹽、溶劑化物或互變異構(gòu)體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R₅、R₆和R₇彼此獨(dú)立地表示氫原子、(C₁-C₆)烷基、芳基、任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基，或表示下式的基團(tuán)：

且優(yōu)選下式的基團(tuán)：

如

或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

條件是，當(dāng)m＝p＝1時(shí)，R₅、R₆和R₇中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝0且p＝1時(shí)，則R₅和R₆中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝1且p＝0時(shí)，則R₅和R₇中的至少一個(gè)且僅一個(gè)基團(tuán)，或當(dāng)m＝p＝0時(shí)，R₅，表示下式的基團(tuán)：

且優(yōu)選下式的基團(tuán)：

如

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R₅、R₆和R₇彼此獨(dú)立地表示H、CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂CH(CH₃)₂、CH(CH₃)CH₂CH₃、CH₂Ph、CH₂PhOCH₃、CH₂CH₂SCH₃或下式的基團(tuán)：

且優(yōu)選下式的基團(tuán)：

如

或R₅和R_5a和/或R₆和R_6a和/或R₇和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

且優(yōu)選下式的基團(tuán)：

如

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的化合物，其中n的值為2、3或4。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R₀表示氫原子或(C₁-C₆)烷基、芳基或芳基-(C₁-C₆)烷基，該基團(tuán)不被取代，或被選自鹵原子、(C₁-C₆)烷氧基、OH、COOH和CHO的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；

R表示CH₂OR₈基團(tuán)；R₁和R₂彼此獨(dú)立地表示OR₁₅基團(tuán)；R₃表示OR₂₂基團(tuán)，其中R₈、R₁₅和R₂₂有利地表示氫原子或O-保護(hù)基；以及

R₄表示氫原子或OR₄₁基團(tuán)，其中R₄₁有利地表示氫原子、O-保護(hù)基或(C₁-C₆)烷基、芳基、芳基-(C₁-C₆)烷基或(C₁-C₆)-烷基-芳基，該基團(tuán)不被取代，或可以被選自鹵原子和(C₁-C₆)烷氧基的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R₀＝H、Et或Bn，R＝CH₂OH或CH₂OBn，R₁＝R₂＝R₃＝OH或OBn，且R₄＝H、OH、OMe或OBn。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R₀＝H，R＝CH₂OH，R₁＝R₂＝R₃＝OH，且R₄＝H或OH。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的化合物，其中其選自以下化合物：

和其鹽和溶劑化物，特別是與鹽酸或乙酸的酸加成鹽。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物用于生物材料，如細(xì)胞、組織、體液和器官，以及微生物的保存和/或保護(hù)和/或再生的用途。

11.一種培養(yǎng)、儲(chǔ)存和/或保存介質(zhì)，其包含至少一種根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物。

12.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物，其在抗老化、皮膚保護(hù)或皮膚再生中的用途。

13.一種化妝品或皮膚病學(xué)組合物，其包含至少一種根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物和至少一種化妝品或皮膚病學(xué)上可接受的賦形劑。

14.一種用于制備根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的式(I)的化合物的方法，其包括以下連續(xù)步驟：

(a)將下式(II)的化合物的亞胺官能團(tuán)還原以獲得式(I)的化合物：

其中：

-m、p、R₀、R_5a、R_6a和R_7a如權(quán)利要求1中所定義，以及

其中n、R、R₁、R₂、R₃和R₄如權(quán)利要求1中所定義，

或R_5b和R_5a和/或R_6b和R_6a和/或R_7b和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

以及

(b)任選使在前一步驟(a)中獲得的化合物成鹽或溶劑化，以獲得式(I)的化合物的鹽或溶劑化物。

15.一種用于制備根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的式(I)的化合物的方法，其包括以下連續(xù)步驟：

(i)將下式(IX)的化合物與下式(III)的化合物或其鹽，如與三氟乙酸或鹽酸的酸加成鹽反應(yīng)以獲得式(I)的化合物：

其中R、R₁、R₂、R₃和R₄如權(quán)利要求1中所定義，LG表示離去基，

其中：

-m、p、R₀、R_5a、R_6a和R_7a如權(quán)利要求1中所定義，以及

其中n如權(quán)利要求1中所定義，

或R_5c和R_5a和/或R_6c和R_6a和/或R_7c和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

以及

(ii)任選使在前一步驟(i)中獲得的化合物成鹽或溶劑化，以獲得式(I)的化合物的鹽或溶劑化物。

16.一種用于制備根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的式(I)的化合物的方法，其中m和p不都為0，且R₅表示下式的基團(tuán)：

所述方法包括以下連續(xù)步驟：

(1)將下式(XIa)的化合物或其鹽，如與鹽酸的酸加成鹽，與下式(VII)的化合物或其鹽，如與三氟乙酸或鹽酸的酸加成鹽，反應(yīng)以獲得式(I)的化合物：

其中n、R、R₁、R₂、R₃、R₄和R_5a如權(quán)利要求1中所定義，

其中m、p、R₀、R_6a和R_7a如權(quán)利要求1中所定義，條件是，m和p不都為0，且R_6d和R_7d彼此獨(dú)立地表示氫；任選被(C₁-C₆)烷氧基或(C₁-C₆)硫代烷氧基取代的(C₁-C₆)烷基；芳基；或任選被(C₁-C₆)烷氧基取代的芳基-(C₁-C₆)烷基；或R_6d和R_6a和/或R_7d和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

以及

(2)任選使在前一步驟(1)中獲得的化合物成鹽或溶劑化，以獲得式(I)的化合物的鹽或溶劑化物。

17.一種下式(II)、(VI)或(XI)的化合物：

其中：

-n、m、p、R₀、R、R₁、R₂、R₃、R₄、R_5a、R_6a和R_7a如權(quán)利要求1中所定義，

其中n、R、R₁、R₂、R₃和R₄如權(quán)利要求1中所定義，

或R_5b和R_5a和/或R_6b和R_6a和/或R_7b和R_7a與攜帶它們的氮原子和碳原子形成吡咯烷環(huán)

-R₄₉表示H或O-保護(hù)基如(C₁-C₆)烷基，以及

-PG表示O-保護(hù)基如(C₁-C₆)烷基。

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