專利名稱：血纖維蛋白原受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是1991年2月1日提交的美國(guó)申請(qǐng)第07/650，389號(hào)的續(xù)篇，而后者又是1990年9月27日提交的美國(guó)申請(qǐng)第07/589，175號(hào)的續(xù)篇。
本發(fā)明涉及式Ⅰ所示的血纖維蛋白原受體拮抗劑的發(fā)現(xiàn)，當(dāng)該拮抗劑給動(dòng)物(最好是人)服用時(shí)，能抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合，并能抑制血小板凝結(jié)。
在止血法的保持中，血小板與凝固和溶解纖維蛋白原的體系的相互作用可能致病，需要防治。式Ⅰ血纖維蛋白原受體拮抗劑可用來(lái)治療各種與血小板凝結(jié)和血纖維蛋白形成有關(guān)的疾病。
人們對(duì)血小板和血栓形成在血管疾病包括不穩(wěn)定咽痛、急性心肌梗塞和中風(fēng)的發(fā)病機(jī)理中的作用的進(jìn)一步了解導(dǎo)致了對(duì)血小板抑制劑再次出現(xiàn)興趣。
血小板是類似細(xì)胞的失核碎片，存在于所有哺乳動(dòng)物的血液中，它參與凝血。血纖維蛋白原是一種糖蛋白，它是血漿中的正常成份。血纖維蛋白原參與血凝塊機(jī)制中的血小板凝結(jié)和血纖維蛋白形成。血小板沉積于血管傷口處，在該處多種生理抗體引發(fā)血小板凝結(jié)，以血小板塞的形成告終，使失血量達(dá)到最小。如果因小板塞在血管腔內(nèi)形成的話，正常血液流動(dòng)便被削弱。
血小板膜受體對(duì)于血小板粘連和凝結(jié)起重要作用。血纖維蛋白原與血小板膜復(fù)合體Ⅱb/Ⅲa上的受體之間的相互作用對(duì)于血小板的正常功能是重要的。
Zimmerman等人在美國(guó)專利第4，683，291號(hào)中描述了在血纖維蛋白原-血小板、血小板-血小板和細(xì)胞-細(xì)胞相互作用的研究中有多種用途的肽。肽被認(rèn)為在需要抑制或防止血液中血栓或血塊的形成具有效用。該肽的通式是
其中Ch和Cx是氨基酸的順序。
Pierschbacher等人的美國(guó)專利第4，589，881號(hào)中描述了纖維結(jié)合素的11，5 KDal多肽碎片，它體現(xiàn)了纖維結(jié)合素的細(xì)胞連接促進(jìn)活性。一個(gè)具體描述的碎片是H-Tyr-Ala-Val-Thr-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ser-Lys-Pro-Ile-Ser-Ile-Asn-Tyr-Arg-Thr-Glu-Ile-Asp-Lys-Pro-Ser-Gln-Met-OHRuoslahti等人美國(guó)專利第4，614，517號(hào)中描述了能改變細(xì)胞與各類底物的細(xì)胞連結(jié)活性的四肽。上述肽被認(rèn)為主要包含下列順序X-Arg-Gly-Asp-Ser-Y其中X是H或一種或多種氨基酸，Y是OH或一種或多種氨基酸，

圖1列出了Ruoslahti等人在“測(cè)定表現(xiàn)出細(xì)胞連接活性”的最小肽時(shí)所合成的多肽。Ruoslahti等人在美國(guó)專利第4，578，079中描述了類似的四肽，其中Ser被Thr或Cys取代。
Pierschacher等人在Proc.Natl.Acad，Sci，USA，Vol.81，PP.5985-5988，October 1984，中描述了保持連接促進(jìn)活性的纖維結(jié)合素的細(xì)胞識(shí)別部位的變體。Pierschbacher等人進(jìn)一步檢定了許多結(jié)構(gòu)非常接近Arg-Gly-Asp-Ser肽的連接促進(jìn)活性，發(fā)現(xiàn)“即使用非常相近的氨基酸也不能置換精氨酸、甘氨酸和天冬氨酸殘留物，但有幾種氨基酸能置換絲氨酸而不失活”Ruoslahti等人在Science，Vol238 Pp.491-497，October 23，1987中討論了細(xì)胞粘合蛋白質(zhì)。他們特別敘述了“對(duì)纖維結(jié)合素中細(xì)胞連接微區(qū)的氨基酸順序的解釋及其用合成肽進(jìn)行的復(fù)制確立了順序Arg-Gly-Asp(RGD)作為通過(guò)纖維結(jié)合素中的細(xì)胞來(lái)辨識(shí)的實(shí)質(zhì)結(jié)構(gòu)”cheresh在Proc.Natl.Acad，Sci，USA vol 84，pp，6471-6475 September 1987中描述了血纖維蛋白原的連接中包含的Arg-Gly-Asp指向的粘合受體和Von Willebrand因子。
Adams等人在美國(guó)專利第4，857，508中描述了抑制血小板凝固的血栓形成的四肽，四肽的結(jié)構(gòu)式如下X-Gly-Asp-Y其中X可以是
，其中Z＝H、NH2或NH-Ac且n＝1-4;其中Y可以是Tyr-NH2、Phe-NH2或特別定義結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)。
因而，本發(fā)明的目的之一是提供血纖維蛋白原受體拮抗劑，用以抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合，以及抑制血小板的凝結(jié)，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供新的血纖維蛋白原受體拮抗劑化合物。本發(fā)明的其它目的是提供通過(guò)服用新的血纖維蛋白原受體拮抗劑來(lái)抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合和抑制血小板的凝結(jié)的方法。本發(fā)明按下面詳述的方式完成上述目的和其它目的。
本發(fā)明提供下式血纖維蛋白原受體拮抗劑化合物
用以抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合和抑制血小板的凝結(jié)。上述化合物可用于作用于血纖維蛋白原受體的方法中，該方法包括使哺乳動(dòng)物(最好是人)服用治療有效量但無(wú)毒量的此化合物。本發(fā)明的另一特征是含有藥學(xué)上可接受的載體，其中分散有有效但無(wú)毒量的該化合物的藥用組合物。
式Ⅰ的血纖維蛋白原受體拮抗劑化合物可用于抑制血纖維蛋白原與血小板結(jié)合以及抑制血小板凝結(jié)的方法中，本發(fā)明血纖維蛋白原受體拮抗劑是具有下式結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或其光學(xué)異構(gòu)體
R和R1各自是氫;
芳基，其中芳基定義為五元或六元單環(huán)多環(huán)芳香環(huán)體系，該體系含0、1、2、3或4個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子，它可以是未取代的或由選自下列的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的羥基、囟素、氰基、三氟甲基、C1-3烷氧基、C1-5烷基羰氧基、C1-5烷氧基羰基、C1-5烷基、氨基C1-5烷基、羥基羰基C0-5烷基或羥基羰基C1-5烷氧基。
C0-6烷基，它可以是未取代的或被下列一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的囟素、羥基、C1-5烷基羰基氨基、芳基C1-5烷基羰基氨基、芳氧基、C1-10烷氧基、C1-5烷氧基羰基、C0-5烷氨基羰基、C1-5烷基羰基氧基、C3-8環(huán)烷基、芳基、氧、氨基、C1-6烷基、C1-3烷氨基、氨基C1-3烷基、芳基C0-5烷氨基羰基、亞乙基苯基C1-3烷氨基、氨基羰基C0-4烷基或羥基羰基C0-5烷基，但必須與R和R1連接的碳原子只與一個(gè)雜原子相連。
R2、R3和R4各自是氫;
C1-12烷基，它可以是未取代的或由一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基取代的;
芳基C0-4烷基;或氰基;
須當(dāng)R2和R3各自是氰
時(shí)，
R5是氫;
C1-6烷基，它可以是未取代的或由一或或多個(gè)下列基團(tuán)取代的C1-6烷基、C1-5烷氧基、C1-5烷氧基羰基、羥基羰基C0-4烷基、芳基、氨基C1-4烷基、芳基氨基羰基C0-4烷基、C1-4烷基磺酰基、苯基C0-4烷基磺酰基、羥基或氨基;
羥基羰基;
羥基或氨基，但必須當(dāng)R5是羥基或氨基時(shí)，R5不與帶有雜原子的碳連接;
R6是氫;
C1-12烷基，它可以是未取代的或由一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基取代的;
芳基C0-3烷基C1-4烷氧基羰基;
芳基C1-4烷氧基羰基;
C1-4烷氨基羰基;芳基C1-4烷氨基羰基;
C2-5烷氧基;
羥基羰基C2-5烷基;
氨基羰基C2-5烷基;
R7是氫;
C1-12烷基，它可以是未取代的或由一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、羥基、羥基羰基、氨基羰基、氧、芳基取代的;
芳基;或C3-7環(huán)烷基m取1-10n取0-9q取0-2p取1-6Z是O、N或S。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，血纖維蛋白原受體拮抗劑是下式結(jié)構(gòu)的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其光學(xué)異構(gòu)體
R和R1各自選自苯基、噻吩、咪唑、萘基、吲哚、硫茚、它們可以是未取代的或被羥基、囟素、羥基羰基C0-5烷基、C1-3烷基取代的，該C1-3烷基又可以是未取代的或被下列一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的芳基、芳氧基、C1-10烷氧基、C0-5烷氨基羰基、芳基C0-5烷氨基羰基。
氫;
C1-6烷基，它可以是未取代的或是被一個(gè)或多個(gè)下列基團(tuán)取代的苯基、噻吩、咪唑、萘基、吲哚、硫茚;
R2、R3和R4各自是氫，或C1-3烷基，它可以是未取代的或是被一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基取代的;
R5是氫C1-3烷基，它可以是未取代的或是被一個(gè)或多個(gè)氨基、氨基C1-4烷基、羥基、芳基、芳氨基羰基C0-4烷基取代的;
R6是氫;或羥基羰基C2-4烷基;
R7是氫;
C1-12烷基，它可以是未取代的或由一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、羥基、羥基羰基、氨基羰基、氧、芳基取代的。
芳基;或C3-7環(huán)烷基m取1-5n取0-4q取0-2p取1-3Z是S。
在本發(fā)明的第二實(shí)施例中，血纖維蛋白原受體拮抗劑是下式結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其光學(xué)異構(gòu)體
R和R1各自選自苯基、咪唑、吲哚、吲唑，它們可以是未取代的，或是被甲基、羥基羰基C0-2烷基取代的，氫，C1-6烷基，它可以是未取代的或是被一個(gè)或多個(gè)苯基、咪唑、吲哚、吲唑取代的;
R2、R3和R4是氫;
R5是氫或C1-3烷基;
R6是氫;
R7是氫;
C1-6烷基、它可以是未取代的或是被一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基或芳基取代的;
m取1-5n取0-3p取3。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物包括下列化合物(1)Pib-Gly-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸
(2)Pib-Gly-3-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸
(3)Pib-Gly-3(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基)β-丙氨酸
(4)Pib-Gly-3(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基)β-丙氨酸
(5)Pib-Sar-3(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基)β-丙氨酸
(6)[2(R)-丙基-4-(哌啶-4-基)]-Sar-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸
本發(fā)明包括下列縮寫Sar，絲氨酸;Bn，芐基;NMM，N-甲基嗎啉;HOBt，1-羥基苯并三唑;EDC，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽;DMF，二甲基甲酰胺;Pib，4-(4-哌啶基)丁?；?和Boc-Asp(Bn)，N-Boc-Asp-β-芐酯。PTSA，對(duì)甲苯磺酸;DMS，甲硫醚;除非另有說(shuō)明，所有手性α-氨基酸均為S-構(gòu)型。
式Ⅰ化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括常規(guī)無(wú)毒鹽或者式Ⅰ化合物的季胺鹽，例如由無(wú)毒無(wú)機(jī)或有機(jī)酸形成的季胺鹽;例如，這樣的常規(guī)無(wú)毒鹽包括由無(wú)機(jī)酸(如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等)生成的鹽;以及有機(jī)酸生成的鹽，所述有機(jī)酸的例子有乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、萍果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、棕櫚酸、馬來(lái)酸、羥基馬來(lái)酸、芐乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羥乙磺酸等。
本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可按照常規(guī)的化學(xué)方法由包含堿性或酸性基團(tuán)的式Ⅰ化合物合成。通常，將游離堿或酸與化學(xué)計(jì)量量的或與過(guò)量的希望的成鹽無(wú)機(jī)或有機(jī)酸或堿在適當(dāng)?shù)娜軇┗蚨喾N復(fù)合溶劑中進(jìn)行反應(yīng)來(lái)制備所述鹽。
式Ⅰ酸的藥學(xué)上可接受的鹽很容易通過(guò)常規(guī)方法制備，例如用適量的堿，(如堿金屬氫氧化物或堿土金屬氫氧化物)，或有機(jī)堿處理式Ⅰ酸，所述堿金屬或堿土金屬的例子有鈉、鉀、鋰、鈣、或鎂，有機(jī)堿的例子有胺，如二芐基乙二胺、三甲胺、哌啶、吡咯烷、芐胺等，或季胺氫氧化物如氫氧化四甲胺等。
式Ⅰ化合物可用來(lái)抑制血纖維蛋白原與血小板結(jié)合并抑制血小板凝結(jié)，還可用來(lái)防治血栓形成和栓子形成。這些化合物可用作哺乳動(dòng)物尤其是人的藥用試劑?？梢詫⒈景l(fā)明化合物用于需要通過(guò)抑制血纖維蛋白原與血小板膜糖蛋白復(fù)合體Ⅱb/Ⅲa受體的結(jié)合來(lái)避免血栓形成的患者。當(dāng)需要進(jìn)行長(zhǎng)期治療時(shí)，本發(fā)明化合物也可用來(lái)防止或調(diào)節(jié)心肌梗塞、不穩(wěn)定絞痛和血栓發(fā)作。它們可用于外圍的動(dòng)脈外科手術(shù)(動(dòng)脈移植、頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù))和心血管外科手術(shù)中，在這些手術(shù)中，由于對(duì)動(dòng)脈和器管的處理，和/或血小板與人造表面的相互作用，使血小板凝結(jié)和消耗。凝結(jié)的血小板可以形成血栓和血栓栓塞。本發(fā)明化合物可用給這些外科患者，以免形成血栓和血栓栓塞。
體外循環(huán)常用于心血管外科手術(shù)以氧合血液。血小板粘附在外循環(huán)回路表面。粘合取決于血小板膜上的GPⅡb/Ⅲa與吸附在回路表面的血纖維蛋白原之間的相互作用。(Gluszko等人，Amer.J.Physiol.1987，252H，pp615-621)。從人造表面釋放出來(lái)的血小板表現(xiàn)出較弱的止血作用，本發(fā)明化合物可用來(lái)避免粘附。
這些化合物的其它應(yīng)用包括在溶解血栓治療期間或之后避免血小板性血栓形成，血栓栓塞，再閉鎖和再狹窄，以及避免在冠狀動(dòng)脈和其它動(dòng)脈的血管成形術(shù)之后，以及冠狀動(dòng)脈分流術(shù)操作之后血小板性血栓形成、血栓栓塞、再閉鎖和再狹窄。本發(fā)明化合物也可以用來(lái)避免或調(diào)節(jié)心肌硬塞形成過(guò)程，不穩(wěn)定絞痛和血栓突發(fā)。
式Ⅰ化合物可用給哺乳動(dòng)物，最好是人，可以是單獨(dú)或與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑結(jié)合給藥，還可以根據(jù)藥學(xué)實(shí)踐加入已知的輔藥(如礬)制成藥用組合物。該化合物可口服或非腸道給藥，包括靜脈內(nèi)、肌肉、腹膜內(nèi)、皮下給藥和外用給藥。
至于本發(fā)明血纖維蛋白原受體拮抗劑口服時(shí)，所選化合物可以例如以片劑或膠囊或以水溶液或混懸液形式用藥。對(duì)于口服片劑，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉，并通常加入潤(rùn)滑劑(例如硬脂酸鎂)。對(duì)于口服膠囊，可用的稀釋劑包括乳糖和干玉米淀粉。當(dāng)需要口服水混懸液時(shí)，將活性成分與乳化劑和混懸劑混合。必要時(shí)，還可加入某些增甜劑和/或調(diào)味劑。
對(duì)于肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi)給藥，通常制成活性成分的無(wú)菌溶液，并且應(yīng)適當(dāng)調(diào)節(jié)PH值制成緩沖液。對(duì)于靜脈內(nèi)用藥，應(yīng)當(dāng)控制溶質(zhì)的總濃度以便制成等滲制劑。
本發(fā)明還包括用來(lái)預(yù)防和治療與血小板凝結(jié)、血纖維蛋白形成、血栓和栓形成有關(guān)的疾病的藥用組合物，它包括使用治療有效量但無(wú)毒量的式Ⅰ化合物，還可以含或不含藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
本發(fā)明組合物包括血纖維蛋白原受體拮抗劑化合物和藥學(xué)上可接受的載體，例如，鹽水，PH值為，例如7.4，以適用抑制血小板凝結(jié)。對(duì)于更急性的病狀，它們可以與抗凝血藥(如肝素或華法令)結(jié)合使用，它們也可以與血栓試劑(如血纖維蛋白溶酶原活化劑或鏈激酶)結(jié)合使用以抑制血小板凝結(jié)。該組合物還可與抗血小板劑(如阿司匹林)結(jié)合使用?？诜o藥是本發(fā)明優(yōu)選的給藥方法。它們?cè)谒越橘|(zhì)中是可溶的，因而可以以溶液形式有效地給藥。
當(dāng)式Ⅰ化合物作為血纖維蛋白原受體拮抗劑用于人時(shí)，日劑量一般由處方醫(yī)師決定，該劑量一般隨年齡、重量和具體患者的反應(yīng)以及患者的反應(yīng)以及患者癥狀的嚴(yán)重性而變。
在一個(gè)實(shí)施例中，向血管成形術(shù)后的心臟病患者口服給以適量的本發(fā)明化合物。給藥在手術(shù)后前幾分鐘進(jìn)行，其用量足以抑制血小板凝結(jié)，例如用量為達(dá)穩(wěn)態(tài)的血漿濃度為約0.01-30μM最好為1-10μM。
本發(fā)明還包括由本發(fā)明化合物和組織型纖維蛋白酶原活化劑或鏈激酶組成的組合物。本發(fā)明還包括促進(jìn)患者血栓溶解和防止再閉鎖的方法，該方法包括向患者使用有效量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明提供一種方法，它可抑制血纖維蛋白原血小板的結(jié)合并抑制血小板凝結(jié)，治療哺育動(dòng)物的血栓形成或栓子形成，包括給予治療有效量但無(wú)毒量的本發(fā)明化合物。還可以加上藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
本發(fā)明還提供一種方法，它可抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合并抑制血小板凝結(jié)，防治哺乳動(dòng)物的血栓形成或栓子形成，包括給予治療有效量但無(wú)毒量的本發(fā)明化合物與溶解血栓劑(如組織型纖維蛋白溶酶原活化劑或鏈激酶)、抗凝血藥(如肝素或華法令)或抗血小板劑(如阿司匹林)的組合，還可加上藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
式Ⅰ化合物按下述路線制得?；衔铫癜碆ull.Soc.Chin.Fr.(1970，1，219-231，F(xiàn)raisse-Jullien，Renee;Frejezille，Claudine)所述方法制備，該文被本文引為參考文獻(xiàn)。
路線 Ⅰ
路線 Ⅰ(續(xù))
路線 Ⅱ
路線 Ⅲ(續(xù))
路線 Ⅳ
路線 Ⅴ
路線 Ⅴ(續(xù))
路線 Ⅴ(續(xù))
路線 Ⅴ(續(xù))
路線 Ⅵ(續(xù))
路線 Ⅵ(續(xù))
路線 Ⅵ(續(xù))
路線 Ⅶ
路線 Ⅶ(續(xù))
路線 Ⅶ(續(xù))
路線 Ⅷ
路線 Ⅷ(續(xù))
路線 Ⅸ
路線 Ⅸ(續(xù))
路線 Ⅸ(續(xù))
本發(fā)明可不背離其精神和實(shí)質(zhì)以其它的具體形式體現(xiàn)。提供的實(shí)施例是用來(lái)幫助進(jìn)一步了解本發(fā)明的。使用的特定材料、種類和條件是用來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明而并不限制其合理的范圍，所有柱色譜和TLC分析在硅膠上完成。全部′H NMR譜用Varian 300 MHz設(shè)備得到。除非另有說(shuō)明。
實(shí)施例1[2-(N-芐氨基甲基)-4-苯基]丁酸乙酸(2)的制備在75℃下，將烯烴1(2.7g，13.2mmol)、乙醇(20ml)、芐胺(1.9mk，18.5mmol)和AcOH(1.4ml)的混合物攪拌60小時(shí)。冷卻后，用H2O稀釋，用1N HCl酸化至PH＝3，接著用乙醚洗滌兩次。水相用1N NaOH堿化至PH＝10，隨后用乙醚提取兩次。乙醚相用MgSO4干燥并濃縮。經(jīng)閃色譜(二氧化硅，22%乙酸乙酯/己烷)得胺2(1.3g)無(wú)色油狀物。
TCL Rf＝0.46(50%乙酸乙酯/乙烷)1H NMR(CDCl3)δ7.35-7.10(m，10H)，4.17(q，J＝7Hz，2H)，3.78(m，2H)，2.90(m，H)，2.72(m，1H)，2.61(m，3H)，1.96(m，1H)，1.80(m，1H)，1.29(t，J＝7Hz，3H).
實(shí)施例2[2-(氨基甲基)-4-苯基]丁酸乙酯對(duì)甲苯磺酸鹽(3)的制備在室溫下和氫氣氛(1atm)中，將芐胺2(1.3g，3.3mmol)、10%Pd/C(200mg)，對(duì)甲苯磺酸(0.8g，3.3mmol)和乙醇(50ml)的混合物攪拌3天。用氬氣清吹反應(yīng)體系，過(guò)濾除去催化劑，將波液濃縮得鹽3(1.6g)無(wú)色油狀物。
TCL Rf＝0.42(10%甲醇/CH2Cl2)實(shí)施例3甲基N-BOC-Aha-Gly(5)的制備將氯甲酸異丁酯(1.6ml，11.9mmol)加入0℃下攪拌著的酸4(2.0g，9.9mmol)、NMM(1.3m，11.9mmol)和CH2Cl2(50ml)的溶液中，15分鐘后，先后加入甘氨酸甲酯·HCl(1.9g，15mmol)的NMM(19.8mmol，2.2ml)2小時(shí)后，用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，然后用50%鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮。經(jīng)閃色譜(二氧化硅，25%乙酸乙酯/己烷乙酸乙酯)得二肽5(2.6g)白色固體。
TCL Rf＝0.61(乙酸乙酯)實(shí)施例4N-BOC-Aha-Gly(6)的制備將酯5(2.6g，8.2mmol)、1N NaOH(12.3ml，12.3mmol)和CH3OH(130ml)的溶液在室溫下攪拌20小時(shí)，反應(yīng)混合物經(jīng)濃縮除去CH3OH，然后用水稀釋，用5%KHSO4酸化。水相用乙酸乙酯提取，將乙酸乙酯相濃縮得羧酸6(2.1g)無(wú)色油狀物TLC Rf＝0.70(9∶1∶1 CH2Cl2/Ac OH/CH3OH)實(shí)施例5
N-BOC-Aha-Gly-2-(2-苯乙基)β-丙氨酸乙酯(7)將氯甲酸異丁酯(0.21ml，1.63mmol)加入0℃下攪拌的羧酸6(0.41g，1.32mmol)、NMM(0.18ml，1.63mmol)和CH2Cl2(5ml)的溶液中。20分鐘后加入胺鹽3(0.20g，0.54mmol)，接著加入NMM(0.36ml，3.2mmol)。20小時(shí)后，用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)體系，然后用水和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮，經(jīng)閃色譜(二氧化硅，65-85%乙酸乙酯/己烷)，得三肽7(90mg)無(wú)色油狀物TLC Rf＝0.42(乙酸乙酯).
1H NMR(CDCl3)δ7.30-7.15(m，5H)，6.88(t，J＝6Hz，1H)，6.69(t，J＝5Hz，1H)，4.68(bs，1H)，4.14(q，J＝7Hz，2H)，3.88(d，J＝4Hz，2H)，3.46(m，2H)，3.08(m，2H)，2.62(m，3H)，2.23(t，J＝7Hz，2H)，1.96(m，1H)，1.80(m，1H)，1.63(m，2H)，1.43(S，9H)，1.28(t，J＝7Hz，3H).
實(shí)施例6將酯7(90mg，0.18mmol)、1N NaOH(2.0ml，2.0mmol)和CH OH(4ml)的溶液在室溫下攪拌1.5小時(shí)，用5%KHSO4酸化反應(yīng)混合物，接著用乙酸乙酯提取(3次)，將提取液合并，MgSO4干燥，濃縮得羧酸8(70mg)無(wú)色油狀物。
TLC Rf＝0.84(9.5∶2.5∶2.5乙醇/NH4OH/H2O)1H NMR(CD3OD)δ7.21(m，5H)，4.80(S，2H)，3.42(m，2H)，2.99(t，J＝7Hz，2H)，2.63(m，3H)，2.24(t，J＝7Hz，2H)，1.82(m，2H)，1.61(m，2H)，1.50-1.30(m，6H)，1.43(S，9H).
實(shí)施例7Aha-Gly-2-(2-苯乙基)β-丙氨酸(9)的制備將三氟乙酸(TFA;200μl)加入0℃下攪拌著的8(70mg，0.15mmol)的CH2Cl2(2.0ml)溶液中，接著移去冷卻浴，1.5小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑，所得黃色溶液經(jīng)閃色譜(二氧化硅，94.3∶乙醇/H2O/NH4OH)得氨基酸9(30mg)白色粉末。
TLC Rf＝0.22(9.5∶2.5∶2.5乙醇/H2O/NH4OH)1H NMR(D2O)δ7.32(m，5H)，3.85(s，2H)，3.33(m，2H)，2.82(t，J＝7Hz，2H)，2.61(m，2H)，2.45(m，1H)，2.30(t，J＝7Hz，2H)，1.77(m，2H)，1.60(m，4H)，1.33(m，4H).
實(shí)施例8N-BOC-4-哌啶乙醇(11)的制備將N-叔丁氧基羰基酐(31g，0.14mol)加入0℃下攪拌的4-哌啶乙醇10(18.7g，0.14mol)和DMF(200ml)的溶液中，1.0小時(shí)后，移去冷卻浴，攪拌反應(yīng)混合物20小時(shí)，用乙醚稀釋隨后用H2O(2次)和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮得11(26g)無(wú)色油狀物。
TCL Rf＝0.25(40%乙酸乙酯/己烷)1H NMR(CDCl3)δ4.09(bs，2H)，3.72(t，J＝7Hz，2H)，2.70(m，2H)，1.75-1.10(m，7H)，1.46(s，9H).
實(shí)施例94-(N-BOC-4-哌啶基)反式-巴豆酸乙酸(12)的制備向-78℃下攪拌的草酰氯(0.43ml，5.0mmol)的CH2Cl2(20ml)溶液中滴加DMSO(0.52ml，7.0mmol)，氣體釋放緩慢后(約5分鐘)，以液流形式加入醇11(0.8g，3.5mmol)的CH Cl(20ml)溶液。20分鐘后滴加三乙胺(1.7ml，12mmol)，然后移去冷卻浴。20分鐘后加(碳化乙氧基亞甲基)三苯膦(1.4g，4.0mmol)。2.0小時(shí)后，用石油醚稀釋反應(yīng)混合物，然后依次用H2O，5%KHSO4和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮，經(jīng)閃色譜(二氧化硅，15%乙酸乙酯/己烷)得酯12(0.57g)無(wú)色油狀物。
TCL Rf＝0.79(50%乙酸乙酯/己烷)1H NMR(CDCl3)δ6.91(dt，J＝16 and 7Hz，1H)，5.81(bd，J＝17Hz，1H)，4.18(q，J＝7Hz，2H)，4.08(m，2H)，2.67(m，2H)，2.14(t，J＝7Hz，2H)，1.70-1.05(m，5H)，1.44(S，9H)，1.28(t，J＝7H，3H).
實(shí)施例104-(N-BOC-4-哌啶基)丁酸甲酯的制備在10%Pd/C(5.0g)的存在下，將烯烴12(26g，87mmol)的乙酸乙酯(500mmol)溶液在室溫下和氫氣氛(1atm)下進(jìn)行氫化過(guò)夜。反應(yīng)混合物隨后用氬氣清吹，接著用硅藻土填料過(guò)濾。波液經(jīng)濃縮及閃色譜(二氧化硅，10%乙酸乙酯/己烷)得酯13(24g)結(jié)晶固體。
TCL Rf＝0.52(20%乙酸乙酯/己烷)1H NMR(CDCl3)δ4.16(q，J＝7Hz，2H)，4.10(m，2H)，2.69(m，2H)，2.31(t，J＝7Hz，2H)，1.68(m，4H)，1.38(s，9H)，1.40(m，1H)，1.11(m，2H).
實(shí)施例114-(N-BOC-4-哌啶基)丁酸(14)的制備將酯13(19g，63mmol)、乙醇(300ml)和1N NaOH(100ml，100mmol)的溶液在室溫下攪拌2.5小時(shí)，接著濃縮。殘留物用5%KHSO4和乙酸乙酯稀釋，移入分液漏斗。振蕩，分相，用鹽水洗滌有機(jī)相，MgSO4干燥，濃縮得得酸14(18g)無(wú)色油狀物，靜置結(jié)晶。
TCL Rf＝0.68(乙酸乙酯)實(shí)施例125-(4-哌啶基)戊酸甲酯(15)的制備將亞硫酰氯一次加入室溫下攪拌的羧酸14(600mg，2.2mmol)、乙醚(4.0ml)和吡啶(2滴)的溶液中使放熱。25分鐘后，將乙醚、吡啶和亞硫酰氯蒸發(fā)。將中間體酰基氯溶于乙醚(5ml)中，冷卻至0℃，然后用重氮甲烷(15ml，約10mmol)的乙醚溶液處理。2.0小時(shí)后，用氬氣清吹除去過(guò)量重氮甲烷。原位蒸發(fā)得固體，將其溶于甲醇(10ml)中，然后依次用NEt3(0.5ml)和苯甲酸銀(20mg)處理，15分鐘后，將黑色反應(yīng)混合物濃物，殘留物經(jīng)閃色譜(二氧化硅，10%乙酸乙酯/己烷)得15(300mg)油狀物。
TCL Rf＝0.73(30%乙酸乙酯/己烷)1H NMR(CDCl3)δ4.09(m，2H)，3.69(s，3H)，2.68(m，2H)，2.33(t，J＝7Hz，2H)，1.80-1.00(m，11H)，1.47(s，9H).
實(shí)施例13N-BOC-5-(4-哌啶基)戊酸的制備將酯15(200mg，0.7mmol)的NaOH(1.0ml，1.0mmol)和CH3OH(4.0ml)溶液在室溫下攪拌20小時(shí)。反應(yīng)混合物依次用5%KHSO4和乙酸乙酯稀釋。乙酸乙酯相用鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮得羧酸16(190mg)無(wú)色油狀物。
TCL Rf＝0.70(乙酸乙酯)實(shí)施例14N-BOC-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸甲酯(18)的制備將氯甲酸異丁酯加入0℃下攪拌的N-BOC-D-苯基丙氨酸17(15g，53.7mmol)、NMM(7.1ml，64.4mmol)和CH2Cl2(270ml)的溶液中，15分鐘后，分次加入重氮甲烷(120ml，75mmol)的乙醚溶液。然后移去冷卻浴，將反應(yīng)攪拌1.5小時(shí)，再用氬氣清吹反應(yīng)混合物15分鐘，以除去過(guò)量重氮甲烷。用乙酸乙酯稀釋，接受用飽和NaHCO3、H2O和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮得重氮酮粗品，將其溶于CH3OH(300ml)中，然后，依次用AgO2CPh(4.3g，19mmol)和NEt處理。20小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物，經(jīng)閃色譜(二氧化硅，10%乙酸乙酯/己烷)得甲基酯18(50g)白色固體。
TCL Rf＝0.38(20%乙酸乙酯/己烷)實(shí)施例153(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸甲酯-TFA鹽(19)的制備將18(3.2g，10.9mmol)、三氟乙酸(55ml)和CH2Cl2(55ml)的混合物在0℃下攪拌1小時(shí)。濃縮，用甲苯共沸蒸餾除去殘留三氟乙酸(2次)得TFA·鹽19(4.3g)黃色油狀物。
TLC Rf＝0.40(9∶1∶1 CH2Cl2/CH3OH/Ac OH)實(shí)施例16BOC-Gly-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸甲酯(20)的制備將EDC(2.9g，15.2mmol)加入0℃攪拌的BOC-Gly-(2.1g，12.0mmol)、胺19(3.3g，10.9mmol)、HOBT(2.2g，16.3mmol)、NMM(3.9ml，36mmol)和無(wú)水DMF(55ml)的溶液中，然后移去冷卻浴。20小時(shí)后，用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，然后依次用H2O、飽和NaHCO3、5%KHSO4、H2O和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮。經(jīng)閃色譜(二氧化硅，35%乙酸乙酯/己烷)得二肽20(2.1g)無(wú)色油狀物。
TCL Rf＝0.37(50%乙酸乙酯/己烷)實(shí)施例17Gly-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸甲酯·HCl鹽(21)的制備將HCl氣體通入-10℃的二肽20(2.0g，5.7mmol)的乙酸乙酯(20ml)溶液15分鐘。用氬氣清吹反應(yīng)混合物15分鐘以除去過(guò)量HCl。濃縮得白色固體，用乙醚研制得HCl·鹽21(1.7g)。
1H NMR(CDCl3)δ8.31(bs，1H)，8.10(bs，3H)，7.15(m，5H)，4.25(bs，1H)，4.04(m，2H)，3.57(s，3H)，2.65(m，1H)，2.50(m，4H)，1.78(m，2H).
實(shí)施例18
N-Boc-Pib-Gly-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸甲酯(22)的制備將EDC(185mg，0.97mmol)加入0℃下攪拌的羧酯14(205mg，0.76mmol)21(200mg，0.67mmol)、HOBT(140mg，1.0mmol)、NMM(0.25ml，2.3mmol)和DMF(3.5ml)的溶液中，接著移去冷卻浴。20小時(shí)后，用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，然后用H2O(2次)和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮。經(jīng)閃色譜(二氧化硅，85%乙酸乙酯/己烷)得22(150mg)無(wú)色油狀物。
TCL Rf＝0.99(80%乙酸乙酯/己烷)實(shí)施例19N-BOC-Pib-Gly-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸甲酯(23)的制備將甲基酯22(150mg，0.30mmol)、CH3OH(3ml)和1N NaOH(1.0ml，1.0mmol)的混合物室溫下攪拌1.5小時(shí)，反應(yīng)混合物依次用5%KHSO4和乙酸乙酯相用水洗滌，MgSO4干燥，濃縮得羧酸23(150mg)無(wú)色油狀物。
TLC Rf＝0.41(9∶0.5∶0.5CH2Cl2/CH3OH/Ac OH)1H NMR(CDCl3)δ7.40-7.07(m，6H)，6.71(t，J＝4Hz，1H)，4.30(m，1H)，4.05(m，2H)，3.90(m，2H)，3.66(s，3H)，2.65(m，3H)，2.55(d，J＝6Hz，2H)，2.23(t，J＝7Hz，2H)，1.88(m，1H)，1.65(m，4H)，1.46(s，9H)，1.30(m，1H)，1.06(m，2H).
實(shí)施例20Pib-Gly-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸甲酯(24)的制備將23(150mg，0.30mmol)、三氟乙酸(1.0ml)和CH2Cl2(1.0ml)的溶液在室溫下攪拌45分鐘，接著蒸發(fā)。經(jīng)閃色譜(二氧化硅，10∶0.8∶0.8乙醇/H O/NH OH得氨基酸24(35mg)白色固體。
TLC Rf＝0.17(10∶1∶1乙醇/NH4OH/H2O)1H NMR(CDCl3)δ7.40(m，5H)，4.42(m，1H)，4.10(d，J＝17Hz，1H)，4.01(d，J＝17Hz，1H)，3.15(m，2H)，2.86(t，J＝8.Hz，2H)，2.61(m，2H)，2.52(t，J＝7Hz，2H)，2.15-1.55(m，9H).
實(shí)施例21N-BOC-(5-4-(哌啶基)戊酸基)-Gly-3(R)(2-苯乙基)β-丙氨酸甲酯(25)的制備將氯甲酸異丁酯(45μl，0.35mmol)加入-15℃下攪拌的羧酸16(100mg，0.35mmol)、NMM(40μl，0.35mmol)和乙酸乙酯的溶液中，15分鐘后加入氨·HCl 21(100mg，0.34mmol)和NMM(40μl，0.35mmol)，再繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)混合物用H2O、飽和NaHCO3、5%KHSO4和鹽水洗滌。MgSO4干燥，濃縮。經(jīng)閃色譜(二氧化硅，70%乙酸乙酯/己烷)得25(110mg)油狀物。
TCL Rf＝0.26(乙酸乙酯)實(shí)施例22N-BOC-(5-4-(哌啶基)戊?；?-Gly-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸(26)的制備將酯25(110mg，0.21mmol)、1N NaOH(0.4ml，0.42mmol)和CH3OH(5ml)的混合物在室溫下攪拌20小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮干燥，然后溶于H2O中，用5%KHSO4酸化(PH～3.0)，接著用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯相用鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮得羧酸26(107mg)無(wú)色油狀物。
TLC Rf＝0.40(9∶0.5∶0.5CH2Cl2/CH3OH/Ac OH)1H NMR(CD3OD)δ7.20(m，5H)，4.22(m，1H)，4.01(m，2H)，3.80(m，2H)，2.65(m，3H)，2.50(d，J＝6Hz，2H)，2.26(t，J＝7Hz，2H)，1.84(m，2H)，1.63(m，4H)，1.37(m，2H)，1.27(m，2H)1.42(s，9H)，1.00(m，2H).
實(shí)施例235-(4-哌啶基)戊酸基)-Gly-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸甲酯(27)的制備將26(100mg，0.20mmol)、三氟乙酸(4.5ml)和CH2Cl2(4.5ml)的溶液在0℃下攪拌1.0小時(shí)。然后濃縮反應(yīng)混合物。經(jīng)閃色譜(二氧化硅，10∶1∶1乙醇/NH4OH/H2O)得氨基酸27(30mg)白色固體。
1H NMR(D2O)δ7.20(m，5H)，4.17(m，1H)，4.81(m，2H)，3.28(m，2H)，2.86(m，2H)，2.63(t，J＝7Hz，2H)，2.36(m，2H)，2.29(t，J＝7Hz，2H)，1.90-1.28(m，11).
實(shí)施例243-(吲哚-3-基)丙醇-叔丁基二甲基甲硅烷本醚(29)的制備將叔丁基二甲基甲硅烷基氯(14.2g，95mmol)加入0℃下攪拌的3-吲哚丙醇28(15g，86mmol)、DMF(200ml)和咪唑(12.8g，0.19mol)的溶液中，接著移去冷卻浴。20小時(shí)后，用乙醚稀釋反應(yīng)混合物，然后用H2O(2次)和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮得甲硅烷基醚29(29g)琥珀色油狀物。
TCL Rf＝0.54(20%乙酸乙酯/己烷)1H NMR(CDCl3)δ8.07(bs，1H)，7.77(d，J＝7Hz，1H)，7.49(d，J＝7Hz，1H)，7.33(t，J＝7Hz，1H)，7.26(t，J＝7Hz，1H)，7.12(s，1H)，3.84(t，J＝6Hz，2H)，2.95(t，J＝7Hz，2H)，2.08(m，2H)，1.08(s，9H)，0.25(s，3H)，0.22(s，3H).
實(shí)施例25N-乙?；?3-(吲哚-3-基)丙醇-叔丁基二甲基甲硅烷基醚(30)的制備將吲哚29(29g，86mmol)、CH Cl(450ml)、1.8-二氮雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(38ml，0.26mol)、4-二甲基氨基吡啶(1.0g，8.5mmol)和乙酸酐(32ml，0.34mol)溶液在室溫下攪拌1星期。濃縮反應(yīng)混合物，隨后用乙醚稀釋。該乙醚溶液隨后用H2O，5%KHSO4和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮，經(jīng)閃色譜(二氧化硅，5%乙酸乙酯/己烷)得乙酰化產(chǎn)物30(27g)黃色油狀物。
TCL Rf＝0.56(20%乙酸乙酯/己烷)實(shí)施例26N-乙酰基-2-(吲哚-3-基)丙醇(31)向室溫下攪拌的甲硅烷基醚30(27g，81mmol)的THF溶液中加入予先混合好的n-Bu4NF(1M THF溶液244mk，0.24mol)和Ac OH(14ml，0.24mmol)(1∶1)溶液，20分鐘后用乙醚稀釋反應(yīng)混合物;隨后用HO(2次)和鹽水洗滌、MgSO4干燥，濃縮得醇31(19g)黃色結(jié)晶固體。
TCL Rf＝0.35(60%乙酸乙酯/己烷)1H NMR(CDCl3)δ8.42(m，1H)，7.55(d，J＝7Hz，1H)，7.36(t，J＝7Hz，1H)，7.29(t，J＝7Hz，1H)，7.27(7d，J＝7Hz，1H)，7.22(s，1H)，3.76(t，J＝7Hz，2H)，2.82(t，J＝7Hz，2H)，2.61(s，3H)，2.00(m，2H).
實(shí)施例275-(N-乙?；胚?3-基)戊烯-2-酸乙酯(32)的制備將無(wú)水DMSO(2.4ml，0.17mol)滴加入-78℃下攪拌的草酰氯(11.4ml，0.13mol)的CH2Cl2(440ml)溶液中，5分鐘后，不再放出氣體，加入醇31(19g，87mmol)的CH2Cl2(40mol)的溶液。30分鐘后，加入NEt3(73ml，0.52mol)使之成為稠漿。移去冷卻浴，再繼續(xù)攪拌15分鐘，然后加入(乙酯基亞甲基)三苯膦(33.5g，96mmol)2.0小時(shí)后，用乙醚稀釋反應(yīng)混合物，然后用水(2次)、5%KHSO4和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮，經(jīng)閃色譜(20%乙酸乙酯)得烯烴32(14g)白色固體。
TCL Rf＝0.54(60%乙酸乙酯/己烷)1H NMR(CDCl3)8.42(bd，1H)，7.50(d，J＝7Hz，1H)，7.34(t，J＝7Hz，1H)，7.28(t，J＝7Hz，1H)，7.19(bs，1H)，7.03(dt，J＝18 and 7Hz，1H)，5.88(d，J＝18Hz，1H)，4.19(q，J＝7Hz，2H)，2.87(t，J＝7Hz，2H)，2.63(m，2H)，2.61(s，3H)，1.28(t，J＝7Hz，3H).
實(shí)施例28N-芐基-3-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨基乙酯(33)的制備將烯烴32(5.0g，17.5mmol)和芐胺(7.7ml，70mmol)的混合物在80℃下加熱20小時(shí)。冷卻的反應(yīng)混合物直接經(jīng)閃色譜柱(二氧硅，30%乙酸乙酯/己烷)得到Micheal加合物33(4.9g)粘性黃色油狀物TCL Rf＝0.43(40%乙酸乙酯/己烷)
實(shí)施例293-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸乙酯·pTSA鹽(34)的制備將芐胺33(4.6g，11.7mmol)，10%Pd/C(2.3g)和對(duì)甲苯磺酸(pTSA)(2.2g，11.7mmol)在室溫和氫氣氛(1atm)中攪拌4小時(shí)。然后用氬氣清吹反應(yīng)體系，用硅藻土填料過(guò)濾，濃縮。所得泡沫用50%乙醚/石油醚研制得鹽34(4.8g)白色固體。
TLC Rf＝0.22(9∶1∶1CH2Cl2/CH3OH/AcOH);
1H NMR(CD3OD)δ7.70(d，J＝8Hz，2H)，7.53(d，J＝7Hz，1H)，7.32(d，J＝7Hz，1H)，7.20(d，J＝8Hz，2H)，7.06(t，J＝7Hz，1H)，7.05(s，1H)，6.99(t，J＝7Hz，1H)，4.15(q，J＝7Hz，1H)，3.56(m，1H)，2.85(m，3H)，2.65(m，1H)，2.33(s，3H)，2.05(m，2H)，1.22(t，7Hz，3H).
實(shí)施例30N-BOC-Pib-Gly-乙酯(35)的制備將氯甲酸異丁酯(1.9ml，14.7mmol)加入-15℃下攪拌的羧酸14(4.0g，14.7mmol)、NMM(1.6ml，14.7mmol)和乙酸乙酯(200ml)的溶液中，15分鐘后，加入甘氨酸乙酯·HCl(4.1g，29mmol)和NMM(4.8ml，45mmol)，45分鐘后，用水、飽和NaHCO3和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮。經(jīng)閃色譜(二氧化硅，60%乙酸乙酯/己烷)得二肽35(5.0g)無(wú)色油狀物。
TCL Rf＝0.60(乙酸乙酯)
1H NMR(CDCl3)δ5.98(m，1H)，4.22(q，J＝7Hz，2H)，4.08(m，2H)，4.05(d，J＝5Hz，2H)，2.68(m，2H)，2.24(t，J＝7Hz，2H)，1.70(m，4H)，1.47(s，9H)，1.30(t，J＝7Hz，3H)1.10(m，2H).
實(shí)施例31N-BOC-Pib-Gly-(36)的制備將酯35(5.0mg，14mmol)、1N NaOH(21ml，21mmol)和CH OH(100ml)的溶液在室溫下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮至干，溶解于水中，用5%KHSO4酸化(PH-3.0)。用乙酸乙酯提取，接著用鹽水洗滌乙酸乙酯相，MgSO4干燥，濃縮得羧酸36(4.2g)無(wú)色油狀物。
TLC Rf＝0.50(9∶0.5∶0.5CH2Cl2/CH3OH/AcOH).
實(shí)施例32N-BOC-Pib-Gly-3-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸乙酯(37)的制備將EDC(370mg，2.0mmol)加入室溫下攪拌的羧酸36(415mg，1.5mmol)胺34(600mg，1.4mmol)、HBT(280mg，2.1mmol)、NMM(0.5ml，4.6mmol)和無(wú)水DMF(7ml)溶液中，20小時(shí)后，用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，然后用H2O、飽和NaHCO3、5%KHSO4和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮，經(jīng)閃色包譜(二氧化硅，95%乙酸乙酯/己烷)得三肽37(135mg)固體。
TCL Rf＝0.17(乙酸乙酯)
1H NMR(CDCl3)δ8.20(bs，1H)，7.57(d，J＝7Hz，1H)，7.36(d，J＝7Hz，1H)，7.28(t，J＝7Hz，1H)，7.11(t，J＝7Hz，1H)，7.01(s，1H)，6.67(d，J＝8Hz，1H)，6.20(t，J＝4Hz，1H)，4.35(m，1H)，4.14(q，J＝7Hz，2H)，4.10(m，2H)，3.83(m，2H)，2.80(m，2H)，2.65(m，2H)，2.54(d，J＝6Hz，2H)，2.20(t，J＝7Hz，2H)，1.95(m，2H)，1.80-1.00(m，9H)，1.48(s，9H)，1.24(t，J＝7Hz，3H).
實(shí)施例33N-BOC-Pib-Gly-3-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸(38)的制備將酯37(135mg，0.24mmol)、1N NaOH(0.5ml，0.5mmol)和CH3OH(5ml)的混合物在室溫下攪拌20小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮至干，溶解于H2O中，再用5%KHSO4酸化至PH～3.0。水溶液用乙酸乙酯提取，有機(jī)相用鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮得羧酸38(110mg)白色固體。
TLC Rf＝0.55(9∶1∶1CH2Cl2/CH3OH/AcOH).
實(shí)施例34Pib-Gly-3-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸(39)的制備將三氟乙酸(5ml)加入℃下攪拌的38(110mg，0.20mmol)、CH Cl(5ml)和芐甲醚(45μl，0.40mmol)的溶液中，1小時(shí)后，濃縮反應(yīng)混合物，經(jīng)閃色譜(二氧化硅，10∶1∶1乙醇/NH OH/HO)得氨基酸39(61mg)泡沫。
TLC Rf＝0.15(10∶1∶1乙醇/NH OH/HO)
1H NMR(D2O)δ7.52(d，J＝8Hz，1H)，7.34(d，J＝8Hz，1H)，7.08(t，J＝8Hz，1H)，7.03(s，9H)，7.00(t，J＝8Hz，1H)，4.05(m，1H)，3.62(s，2H)，3.10(m，2H)，2.60(m，4H)，2.25(d，J＝5Hz，2H)，2.13(t，J＝7Hz，2H)，1.90-1.00(m，11H).
實(shí)施例35N-(R)-2-甲基芐基-3-(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸乙酯(33a)和N-(R)-α-甲基芐基-3-(S)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸乙酸(33b)的制備將烯烴32(2.77g，9.7mmol)和R-(+)-α-甲基芐基(5.03ml，39mmol)的混合物在110℃下加熱回流(指形冷凝管)40小時(shí)。冷卻的反應(yīng)混合物直接經(jīng)閃色譜柱(二氧化硅，40∶2∶1，己烷乙酸乙酯、2-丙醇)。(R，R)異構(gòu)體33a首先流出(1.19g)，為粘性黃然油狀物，靜置固化。用己烷/乙酸乙酯重結(jié)晶得結(jié)晶物料。(R，S)異(33b)隨后流出(1.55g)，為粘性黃色油狀物，約含10%(R，R)異構(gòu)體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.84(br s，1H)，7.52(dd，J＝7.9，0.7Hz，1H)，7.20-7.35(m，6H)，7.16(tm，J＝7.1，1.3Hz，1H)，7.08(tm，J＝7.3，1.1Hz，1H)，6.70(br d，J＝2.4Hz，1H)，4.10(q，J＝7.1Hz，2H)，3.90(q，J＝6.6Hz，1H)，2.80-2.90(m，2H)，2.68(ABX dt，J＝16，7.9Hz，1H)，2.53(ABX dd，J＝14.5，5.9Hz，1H)，2.42(ABX dd，J＝14.6，5.3Hz，1H)，1.79(q，J＝7.5Hz，2H)，1.33(d，J＝6.4Hz，3H)，1.22(t，J＝7.1Hz，3H).33bRf＝0.42(60%EtOAc/∶己烷);
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.95(br s，1H)，7.57(dd，J＝7.5，0.7Hz，1H)，7.34(dm，J＝8.1，0.7Hz，1H)，7.17-7.30(m)，7.11(tm，J＝7.9，0.9Hz，1H)，6.89(brd，J＝2.2Hz，1H)，4.02-4.15(ABX m，2H)，3.89(q，J＝6.6Hz，1H)，2.95(m，1H)，2.82(ABX ddd，J＝15，9.7，5.9Hz，1H)，2.69(ABX ddd，J＝15，9.7，6.0Hz，1H)，2.47(ABX dd，J＝15.0，5.1Hz，1H)，2.40(ABX dd，J＝15.0，7.7Hz，1H)，1.96(m，1H)，1.83(m，1H)，1.30(d，J＝6.6Hz，3H)，1.21(td，J＝7.1，0.7Hz，3H).
實(shí)施例363(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸乙酯(34a)的制備將胺33a(996mg，2.74mmol)溶解在10ml EtOH中。加入Pearlman催化劑(20%Pd(OH)2/C，128mg)后，向燒瓶中充入氫氣，并保持在充氣壓力下。16小時(shí)后，再加入一部分催化劑(122mg)并伴以新鮮H2，4小時(shí)后，用硅藻土填料過(guò)濾，濃縮，得胺34a(707mg，99%，純度約95%);
Rf＝0.22(10∶1.NH3飽和CHCl3∶EtoAc)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.01(br s，1H)，7.60(dt，J＝8.9，0.4Hz，1H)，7.35(dt，J＝8.1，0.9Hz，1H)，7.19(td，J＝7.1，1.3Hz，1H)，7.11(td，J＝7.1，1.2Hz，1H)，6.99(br d，J＝2.2Hz，1H)，4.15(q，J＝7.1Hz，2H)，3.72(q，J＝7.0Hz，1H)，3.29(m，1H)，2.92-2.78(m，2H)，2.53(ABX dd，J＝15.6，4.0Hz，1H)，2.33(ABX dd，J＝15.6，8.8Hz，1H)，1.92-1.73(m，2H)，1.25(q，J＝7.1Hz，3H).
實(shí)施例37
N-BOC-Pib-Gly-3-(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸乙酯(37a)的制備將EDC(215mg，1.12mmol)加入0℃下攪拌的羧酸36(280mg，0，85mmol)、胺34a(214mg，0.82mmol)、HOBT(150mg，1.11mmol)和Et N(0.36ml，2.59mmol)的3ml無(wú)水DMF溶液中。16小時(shí)內(nèi)緩慢溫?zé)嶂潦覝睾?，用乙酸乙酯烯釋反?yīng)混合物，用水洗滌、水相用新鮮乙酸乙酯反提取。合并的有機(jī)相用水、5%KHSO4、飽和NaHCO3和鹽水洗滌，MgSO4干燥、濃縮、經(jīng)閃色譜(二氧化硅，乙酸乙酯)得被護(hù)的三肽37a(354mg，76%)白色固體Rf＝0.19(乙酸乙酯)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.07(br s，1H)，7.57(d，J＝7.8Hz，1H)，7.36(d，J＝8.0Hz，1H)，7.19(td，J＝7.1，1.0Hz，1H)，7.11(td，J＝7.9，1.2Hz，1H)，7.03(br d，J＝2.2Hz，1H)，6.47(d，J＝9.3Hz，1H)，6.00(br t，J＝7Hz，1H)，4.35(m，1H)，4.12(q，J＝7.2Hz，Hz，2H)，4.15-4.0(br m，2H)，3.87(ABX dd，J＝15，5.2Hz，1H)，3.79(ABX dd，J＝15，4.9Hz，1H)，2.80(td，J＝7.3，2.6Hz，2H)，2.64(br t，J＝12Hz，2H)，2.55(d，J＝4.9Hz，2H)，2.19(t，J＝7.5Hz，2H)，1.98(m，2H)，1.7-1.6(m，4H)，1.45(s，9H)，1.35(m)，1.24(t，J＝7.0Hz，3H)，1.05(qd，J＝12.2，4.1Hz，2H).
實(shí)施例38N-BOC-Pib-Gly-3(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸(38a)的制備將酯37a(494mg，0，87mmol)溶解于10mlMeOH和NaOH水溶液(2N，0.87ml，1.64mmol)中。攪拌16小時(shí)后，再加入NaOH(2N，0.43ml，0.86mmol)，讓反應(yīng)繼續(xù)24小時(shí)以上。接著蒸發(fā)溶劑，殘留物用水和5%KHSO4處理至PH＜2，用乙酸乙酯提取兩次，合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮得酸38a(463mg，98%)Rf＝0.30(19∶1∶1CH2Cl2∶MeOH∶HOAc);
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.04(br s，1H)，7.57(dd，J＝7.1，0.4Hz，1H)，7.35(d，J＝8.1Hz，1H)，7.19(t，J＝6.8Hz，1H)，7.10(t，J＝7.3Hz，1H)，6.99(br d，J＝2.2Hz，1H)，6.81(br d，J＝9.0Hz，1H)，6.39(br s，1H)，4.37(m，1H)，4.05(br s，2H)，3.91(ABX dd，J＝16.7，5.1Hz，1H)，3.84(ABX dd，J＝16.5，5.5Hz，1H)，2.81(br q，J＝6Hz，2H)，2.68-2.58(m，2H)，2.62(ABX dd，J＝16，4.6Hz，1H)，2.53(ABX dd，J＝15.9，6.0Hz，1H)，2.19(br t，J＝7.1Hz，2H)，2.06-1.92(m，2H)，1.68-1.56(m，4H)，1.45(s，9H)，1.38(m)，1.29-1.21(m，4H)，1.08(qd，J＝12.4，4.0Hz，2H).
實(shí)施例39Pib-Gly-3(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸鹽酸鹽的制備向-20℃下機(jī)械攪拌的38a(3.7g，6.8mmol)苯甲醚(1.0ml)和乙酸乙酯(200ml)溶液中猛烈通入HCl氣體(細(xì)壓縮氣瓶)。開(kāi)始(約2分鐘)出現(xiàn)白色沉淀，但是，再過(guò)2分鐘它便由固體轉(zhuǎn)變?yōu)槟z狀物。再向溶液中通HCl氣體10分鐘，內(nèi)部溫度升至5℃，而膠仍保持，即使加入CH2Cl2(100ml)仍能保持原狀。溶液的TLC分析表明沒(méi)殘留38a，然后在不冷卻的情況下將氬氣通入反應(yīng)混合物1.0小時(shí)。1.0小時(shí)后剩下大塊硬膠的白色懸浮液，濾出固體、用EtOAc(3×100ml)洗滌，將固體磨碎用乙腈研制(50ml)，然后過(guò)濾收集，以除去少量38a和其它雜質(zhì)得39a(3.1g，6.5mmol，95%)象牙色固體。
TLC Rf＝0.19(10∶1∶1 己烷/conc.NH4OH/H2O);
1H NMR(300MHz，D20)δ7.66(d，J＝7Hz，1H)，7.50(d，J＝7Hz，1H)，7.23(t，J＝7Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.15(t，J＝7Hz，1H)，4.23(m，1H)，2.78(s，2H)，3.29(m，2H)，2.78(m，4H)，2.58(m，2H)，2.29(t，J＝6Hz，2H)，2.05-1.17(m，11H).
實(shí)施例40N-(S)-α-甲基芐基-3-(S)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸乙酯(33c)和N-(S)-α-甲基芐基-3(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸乙酯(33d)的制備象制備33a和33b那樣，將烯烴32(1.00g，3.5mmol)和S-(-)-α-甲基芐胺(1.8ml，14mmol)在100℃下加熱64小時(shí)，得33c(396mg，28%)和33d(484mg，34%)。
33c[α]D-30.3°(c＝0.0148g/mL，CHCl3).33d[α]D-53.7°(c＝0.01185g/mL，CHCl3).
實(shí)施例413(S)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β--丙氨酸乙酯·pTSA鹽(34c)的制備按制備34的方法，由33c(257mg，0.63mmol)、pTSA(122mg，0.63mmol)、和10%Pd/C(70mg)的MeOH(5ml)溶液出發(fā)制得34c(290mg)褐色固體。
實(shí)施例42N-BOC-Pib-Gly-3(S)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸乙酯(37c)的制備將酸36(207mg，0.63mmol)在2ml乙酸乙酯中的懸浮液冷卻至-10℃。加入NMM(69μl，0.63mmol)和氯甲酸異丁酯(82μl，0.63mmol)后反應(yīng)繼續(xù)20分鐘。在另一燒瓶中，在-10℃下將胺鹽34c(290mg，0.63mmol)和NMM(207μl，1.89mmol)懸浮在4ml乙酸乙酯中，然后將其加入混合酐中。2.5小時(shí)后，用水驟冷混合物，用乙酸乙酯提取兩次，合并的有機(jī)相用5%KHSO4，飽和NaHCO3和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮。經(jīng)閃色譜(二氧化硅，90%乙酸乙酯己烷)得被保護(hù)的三肽37c(163mg，45%)泡沫固體。
實(shí)施例43N-BOC-Pib-Gly-3(S)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸(38c)的制備將酯37c(163mg，0.29mmol)溶解在5mlMeOH中，加NaOH水溶液(1N，0.58ml，0.58mmol)，攪拌16小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑，殘留物用水和5%KHSO4處理至PH＜2，用CH.Cl3提取，有機(jī)層用鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮得酸38c(168mg)。
實(shí)施例44
Pib-Gly-3(S)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸(39c)的制備將TFA(5ml)加入0℃下攪拌的38c(168mg，0.31mmol)CH Cl(5ml)溶液、苯甲醚(67μl，0.62mmol)和甲硫醚(114μl，1.55mmol)組成的溶液中。1小時(shí)后，除去溶劑，殘留物經(jīng)二氧化硅色譜(10∶1∶1，EtOH;H2O∶NH4OH)，預(yù)備的HPLC提純(Delta Pak C18，H2O/CH3CN/TFA)得39cTFA鹽。
Rf＝0.16(10∶1∶1 EtOH∶conc NH4OH∶H2O)1H NMR(400MHz，D2O)δ7.57(d，J＝7.8Hz，1H)，7.40(d，J＝8.0Hz，1H)，7.14(t，J＝7.1Hz，1H)，7.08(s，1H)，7.05(t，J＝7.1Hz，1H)，4.11(brs，1H)，3.68(s，2H)，3.18(br d，J＝12.8Hz，2H)，2.74-2.62(m，4H)，2.44(br s，2H)，2.19(t，J＝7.1Hz，2H)，1.91(m，1H)，1.78(m，1H)，1.72-1.63(m，2H)，1.49(m，2H)，1.30(m，1H)，1.18-1.06(m，4H).
實(shí)施例45N-BOC-Pib-Sar-乙酯(40)的制備用將14轉(zhuǎn)化為35的方法，由14(500mg，1.8mmol)制得40(610mg，1.6mmol)無(wú)色油狀物。TLC Rf＝0.65(乙酸乙酯)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.23(m，2H)，4.14(s，1.5H)，4.10(m，2H)，4.05(s，0.5H)，3.11(s，2H)，3.01(s，1H)，2.70(m，2H)，2.40(t，J＝6Hz，1.5H)，1.70(m，4H)，1.49(s，9H)，1.50-1.00(m，5H)，1.32(m，3H).
實(shí)施例46N-BOC-Pib-Sar(41)的制備按將37轉(zhuǎn)化為38的方法，由40(600mg，1.6mmol)制得41(570mg，1.6mmol)無(wú)色油狀物。
TLC Rf＝0.72(9∶1∶1 CH2Cl2/CH3OH/AcOH).
實(shí)施例47N-BOC-Pib-Sar-3(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸乙酯(42)的制備按將14轉(zhuǎn)化為35的方法，使41(150mg，0.44mmol)與34a(140mg，0.53mmol)反應(yīng)，經(jīng)閃色譜(二氧化硅，80%乙酸乙酯/己烷，再用乙酸乙酯)得42(80mg，0.18mmol)。
TLC Rf＝0.25(乙酸乙酯)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.20(m，1H)，7.67(m，1H)，7.38(d，J＝7Hz，1H)，7.20(t，J＝7Hz，1H)，7.12(t，J＝7Hz，1H)，7.05(s，1H)，6.76(d，J＝10Hz，0.75H)，6.66(d，J＝10Hz，0.25H)，4.30(m，1H)，4.12(m，2H)4.05(m，2H)，4.02(s，2H)，3.10(s，2.25H)，2.97(s，0.75H)，2.85-2.50(m，6H)，2.38(t，J＝7Hz，1.5H)，2.25(t，J＝7Hz，0.5H)，2.00-1.00(m，11H)，1.48(s，9H)，1.28(m，3H).
實(shí)施例48
N-BOC-Pib-Sar-3(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸(43)的制備采用將37轉(zhuǎn)化為38的方法，由42(80mg，0.14mmol)制得43(80mg，0.14mmol)無(wú)色泡沫。
TLC Rf＝0.41(9∶0.5∶0.5 CH2Cl2/CH3OH/AcOH).
實(shí)施例49Pib-Sar-3(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸(44)的制備將TFA(2ml)加入-15℃下攪拌的43(80mg，0.14mmol)的CH2Cl2(2ml)的溶液中，一小時(shí)后，濃縮反應(yīng)混合物，用甲苯共沸蒸餾除去殘留TFA，經(jīng)閃色譜(二氧化硅，10∶0.5∶0.5 CH3OH/NH4OH/H2O)得44(10mg，22μl)無(wú)色玻璃體。
Rf＝0.29(10∶1∶1 CH3OH/NH4OH/H2O);
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.52(m，1H)，7.28(m，1H)，7.08-6.90(m，3H)，4.30(m，1H)，4.02(m，2H)，3.21(m，2H)，3.11(s，1.8H)，2.95(s，1.2H)，3.00-2.70(m，4H)，2.43(m，3H)，2.30(m，1H)，2.00-1.20(m，11H).
實(shí)施例50N-BOC-Pib-4(R)-芐基-2-噁唑烷二酮(45)的制備將三甲基乙酰氯(0.96ml，7.8mmol)加入-78℃下攪拌的14(2.0g，7.4mmol)、NEt3(1.2ml，8.9mmol)和無(wú)水THF(40ml)的溶液中。10分鐘后，將所得白色懸浮液溫?zé)嶂?℃，并攪拌30分鐘，反應(yīng)混合物再冷卻至-78℃，用(R)-(+)-4-芐基-2-噁唑烷二酮鋰(45ml，6.8mmol，0.15M的THF溶液)處理。該噁唑烷二酮鋰的制備方法是在-78℃下將n-BuLi(4.4ml，6.8mmol，1.6M/己烷)加入(R)-(+)-4-芐基-2-噁唑烷二酮(1.2g，6.8mmol)的THF(40ml)溶液中。加完后，將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃1.0小時(shí)，然后用飽和NH4Cl(25ml)驟冷，然后濃縮，殘留物用EtOAc稀釋，再用H2O、1N NaOH、5%KHSO4和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮，經(jīng)閃色譜(二氧化硅，15%EtoAc/己烷)得45(3.0g，94%)無(wú)色油狀物。
TLC Rf＝0.42(30%EtOAc/己烷);1H NMR(CDCl3)δ7.5-7.2(m，5H)，4.70(m，1H)，4.22(m，2H)，4.12(m，2H)，3.34(dd，J＝13 and 3Hz，1H)2.97(m，2H)，2.82(m，1H)，2.73(m，2H)，1.75(m，4H)，1.49(s，9H)，1.40(m，2H)，1.15(m，2H).
實(shí)施例51[2(S)-(丙-2-基)-4-(N-Boc-哌啶-4-基)]-丁醇-4(R)-芐基-2-噁唑烷二酮(46)的制備將雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰(7.0ml，7.0mmol)1M/己烷)和稀丙基溴(2.5ml，29mmol)先后加入-78℃下攪拌的45(2.5g，5.8mmol)的THF(50ml)溶液中。然后移去冷卻浴，將反應(yīng)在0℃下攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)體系用飽和NH4Cl驟冷，然后用EtoAc稀釋，接著用飽和NaHCO3，5%KHSO4和鹽水洗滌，MgSO4干燥、濃縮、經(jīng)閃色譜(二氧化硅15%Et OAc/己烷)得46(1.8g，66%)無(wú)色油狀物。
TLC Rf＝0.53(30% EtOAc/己烷);1H NMR(CDCl3)δ7.40-7.20(m，5H)，5.82(m，1H)，5.10(m，2H)，4.80(m，1H)，4.20(m，2H)，4.07(m，2H)，3.90(m，1H)，3.31(dd，J＝13 and 3Hz，1H)，2.68(m，2H)，2.48(m，1H)，2.35(m，1H)，1.90-1.20(m，7H)，1.47(s，9H)，1.10(m，2H).
實(shí)施例52[2(S)-(丙-2-基)-4-(N-Boc-哌啶-4-基)]-丁酸(47)的制備將Li OH(14ml.14mmol，1N)加入室溫下攪拌的46(1.8g，3.8mmol)30%H2O2(8.5ml，8.3mmol)、THF(41ml)和H2O(12ml)的溶液中，2小時(shí)后，0℃下將10%NaHSO4滴入驟冷過(guò)量的LiOH。然后用5%KHSO4酸化，用Et OAc提取。Et OAc相用鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮得47(0，37g)無(wú)色油狀物。
TLC Rf＝0.79(10% CH3OH/Et OAc)實(shí)施例53[2(S)-(丙-2-基)-4-(N-Boc-哌啶-4-基)]-丁?；?Sar(乙酯)(47)的制備將EDC(260mg，1.3mmol)加入-15℃下攪拌的47(350mg，1.1mmol)、肌氨酸乙酯·HCl(870mg，5.6mmol)、HOBT(180mg，1.3mmol)、NET(0.47ml，3，3mmol)和DMF(10ml)的懸浮液中，接著移去冷卻浴。3.5小時(shí)后用Et OAc稀釋反應(yīng)混合物。用水、飽和NaHCO3、5%KHSO4和鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮。經(jīng)閃色譜(二氧化硅，30%Et OAc/己烷)得48(210mg，47%)油狀物。
TLC Rf＝0.83(EtOAc);1H NMR(CDCl3)δ5.82(m，1H)，5.10(m，2H)，4.20(m，4H)，4.10(m，2H)，3.15(s，0.9H)，3.05(s，0.1H)，2.78(m，1H)，2.70(m，2H)，2.45(m，1H)，2.22(m，2H)，1.80-1.00(m，9H)，1.48(s，9H)，1.31(t，J＝7Hz，3H).
實(shí)施例54[2(S)-(丙-2-基)-4-(N-Boc-哌啶-4-基)]-丁?；?Sar(49)的制備將Li OH(60mg，1.5mmol)加入攪拌的48(200mg，0.49mmol)THF(5ml)、乙醇(10ml)和H2O(0.5ml)的溶液中，2.5小時(shí)后，濃縮反就混合物，然后用5%KHSO4酸化，用Et OAc提取水相溶液，用鹽水洗滌有機(jī)相，MgSO4干燥，濃縮得49(190mg，定量)TLC Rf＝0.40(9∶0.5∶0.5 CH2Cl2/HOAc/CH3OH)實(shí)施例55[2(S)-(丙-2-基)-4-(N-Boc-哌啶-4-基)]-丁?；?Sar-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸甲酯(50)的制備按將47轉(zhuǎn)化為48的相同方法，在閃色譜(二氧化硅，60%Et OAc/己烷)后將化合物49(190mg，0.50mmol)轉(zhuǎn)化為50(260mg，91%).
TLC Rf＝0.69(EtOAc);1H NMR(CDCl3)δ7.35-7.10(m，5H)，6.70(m，1H)，5.78(m，1H)，5.05(m，2H)，4.30(m，1H)，4.17(d，J＝16Hz，1H)，4.05(m，2H)，3.90(d，J＝16H，1H)，3.68(s，3H)，3.17(s，0.8H)，3.01(s，0.2H)，2.80-2.40(m，8h)，2.23(m，1H)，1.90-1.00(m，11H)，1.48(s，9H).
實(shí)施例56[2(S)-丙基-4-(N-Boc-哌啶-4-基)]-丁酰-Sar-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸甲酯(51)的制備將50(130mg，0.23mmol)，10%Pd/C(65mg)和乙醇(2.5ml)在氫氣氛中攪拌24小時(shí)。反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土填料過(guò)濾，濾液經(jīng)濃縮得51(130mg，定量)油狀物。
TLC Rf＝0.69(EtOAc);1H NMR(CDCl3)δ7.30(m，2H)，7.20(m，3H)，6.80(d，J＝10Hz，1H)，4.32(m，1H)，4.13(d，J＝16Hz，1H)，4.07(m，1H)3.95(d，J＝16Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.19(s，0.9H)，3.02(s，0.1H)2.75-2.55(m，5H)，1.85(m，1H)，1.70-1.00(m，1H)，1.48(s，9H)，0.94(t，J＝7Hz，3H).
實(shí)施例57[2(R)-丙基-4-(N-Boc-哌啶-4-基)]-丁?；?Sar-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸(52)的制備將1N Li OH(0.7ml，0.7mmol)加入攪拌的51(130mg，0.23mmol)、THF(1ml)、CH3OH(2ml)和H2O(1ml)的溶液中，2.0小時(shí)后，將反應(yīng)混合物濃縮，用5%KHSO4酸化，接著用Et OAc提取，Et OAc相用鹽水洗滌、MgSO4干燥，濃縮得52(125mg，97%)
TLC Rf＝0.50(9∶0.5∶0.5 CH2Cl2/CH3OH/HOAc).
實(shí)施例58[2(R)-丙基-4-(哌啶-4-基)]-丁?；?Sar-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸(53)的制備將TFA(2.5ml)加入室溫下攪拌的52(125mg，0.22mmol)和CH2Cl2(2.5ml)溶液中，1.5小時(shí)后將反應(yīng)混合物濃縮，殘留物經(jīng)閃色譜純化(二氧化硅，10∶0.4∶0.4 CH3OH/NH4OH/H2O得53(110mg，92%)的白色固體。
TLC Rf＝0.48(10∶1∶1 CH3OH/NH4OH/H2O);
1H NMR(CD3OD)δ7.30-7.10(m，5H)，4.45(m，1H)，4.27(m，0.4H)，4.18(m，0.6H)，3.83(d，J＝16Hz，0.4H)，3.64(d，J＝16Hz，0.6H)，3.30(m，2H)，3.19(s，1.8H)，3.00(s，1.2H)，2.88(m，2H)，2.65(m，2H)，2.35(m，2H)，2.35(m，2H)，2.00-1.20(m，15H)，0.90(t，J＝7Hz，3H).
本申請(qǐng)人引用參考文獻(xiàn)的方法來(lái)制備本發(fā)明化合物，胍是由胺制備的，脒是由相應(yīng)的腈制備的。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使胺與3，5-二甲基哌唑-1-羧基脒硝酸酯反應(yīng)制得胍(Methods Enzymol.25b，558，1972)。脒可以按Boere，R.T.et.al J.Organomet.Chem 331(2)，161-7，1987;和Fuks，R，Tetrahedron 29(14)，2147-51，1973的方法由本領(lǐng)域技術(shù)人員從相應(yīng)腈制備。
本申請(qǐng)人還引用參考文獻(xiàn)Repke等人，Tetrahedron Letters(1979)PP.4183-4184描述的方法由甘氨酸乙酯·HCl和相應(yīng)醛或酮在10%Pd/C和氫的存在下制得N-烷基化甘氨酸。
采用本發(fā)明所述的方法，可制得下列實(shí)例化合物，包括在下列表Ⅰ中。
表Ⅰ
表Ⅰ(續(xù))
權(quán)利要求
1.式Ⅰ血纖維蛋白原受體拮抗劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或其光學(xué)異構(gòu)體
其中A=N，B=-CH2-；或A=
，B=NR2Y是
R和R1各自是氫；芳基，其中芳基定義為五元或六元單環(huán)多環(huán)芳香環(huán)體系，該體系含0、1、2、3或4個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子，它可以是未取代的或由選自下列的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的羥基、囟素、氰基、三氟甲基、C1-3烷氧基、C1-5烷基羰氧基、C1-5烷氧基羰基、C1-5烷基、氨基C1-5烷基、羥基羰基C0-15烷基或羥基羰基C1-5烷氧基；C0-6烷基，它可以是未取代的或被下列一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的囟素、羥基、C1-5烷基羰基氨基、芳基C1-5烷基羰基氨基、芳氧基、C1-10烷氧基、C1-5烷氧基羰基、C0-5烷氨基羰基、C1-5烷基羰基氧基、C3-8環(huán)烷基、芳基、氧、氨基、C1-6烷基、C1-3烷氨基、氨基C1-3烷基、芳基C0-5烷氨基羰基、亞乙基、苯基C1-3烷氨基、氨基羰基C0-4烷基或羥基羰基C0-5烷基，但必須與R和R1連接的碳原子只與一個(gè)雜原子相連。R2、R3和R4各自是氫；C1-12烷基，它可以是未取代的或由一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基取代的；芳基C0-4烷基；或氰基；須當(dāng)R2和R3各自是氰基時(shí)，
R5是氫；C1-6烷基，它可以是未取代的或由一或或多個(gè)下列基團(tuán)取代的C1-6烷基、C1-5烷氧基、C1-5烷氧基羰基、羥基羰基C0-4烷基、芳基、氨基C1-4烷基、芳基氨基羰基C0-4烷基、C1-4烷基磺?；?、苯基C0-4烷基磺?；?、羥基或氨基；羥基羰基；羥基或氨基，但必須當(dāng)R5是羥基或氨基時(shí)，R5不與帶有雜原子的碳連接；R6是氫；C1-12烷基，它可以是未取代的或由一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基取代的；芳基C0-3烷基C1-4烷氧基羰基；芳基C1-4烷氧基羰基；C1-4烷氨基羰基；芳基C1-4烷氨基羰基；C2-5烷氧基；羥基羰基C2-5烷基；氨基羰基C2-5烷基；R7是氫；C1-12烷基，它可以是未取代的或由一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、羥基、羥基、羥基羰基、氨基羰基、氧、芳基取代的；芳基；或C3-7環(huán)烷基m取1-10n取0-9q取0-2z是O、N或S。
2.如權(quán)利要求1中式Ⅰ的血纖維蛋白原受體拮抗劑，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其光學(xué)異構(gòu)體，其中
R和R1各自選自苯基、噻吩、咪唑、萘基、吲哚、吲唑、硫茚、它們可以是未取代的或被羥基、囟素、羥基羰基C0-5烷基、C1-3烷基取代的，該C1-3烷基又可以是未取代的或被下列一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的芳基、芳氧基、C1-10烷氧基、C0-5烷氨基羰基、芳基C0-5烷氨基羰基。氫;C1-6烷基，它可以是未取代的或是被一個(gè)或多個(gè)下列基團(tuán)取代的苯基、噻吩、咪唑、萘基、吲哚、吲唑、硫茚;R2、R3和R4各自是氫，或C1-3烷基，它可以是未取代的或是被一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基取代的;R5是氫C1-3烷基，它可以是未取代的或是被一個(gè)或多個(gè)氨基、氨基C1-4烷基、羥基、芳氨基羰基C0-4烷基取代的;R6是氫;或羥基羰基C2-4烷基;R7是氫;C1-12烷基，它可以是未取代的或由一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、羥基、羥基羰基、氨基羰基、氧、芳基取代的;芳基;或C3-7環(huán)烷基;m取1-5n取0-4q取0-2p取1-3Z是S。
3.如權(quán)利要求1中式Ⅰ的血纖維蛋白原受體拮抗劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或其光學(xué)異構(gòu)體，其中X是
Y是
R和R1各自選自苯基、咪唑、吲哚、吲唑，它們可以是未取代的，或是被甲基、羥基羰基C0-2烷基取代的，氫，C1-6烷基，它可以是未取代的或是被一個(gè)或多個(gè)苯基、咪唑、吲哚、吲唑取代的;R2、R3和R4是氫或C1-3烷基;R5是氫;R6是氫;R7是氫;C1-6烷基，它可以是未取代的或是被一個(gè)或多個(gè)C1-6烷基或芳基取代的;m取1-5n取0-3p取3。
4.如權(quán)利要求1的化合物，它是Pib-Gly-3-(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸。
5.如權(quán)利要求1的化合物，它是Pib-Gly-3-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸。
6.如權(quán)利要求1的化合物，它是Pib-Gly-3-(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸。
7.如權(quán)利要求1的化合物，它是Pib-Gly-3-(S)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸。
8.如權(quán)利要求1的化合物，它是Pib-Sar-3(R)-[2-(吲哚-3-基)乙基]β-丙氨酸。
9.如權(quán)利要求1的化合物，它是[2(R)-丙基-4-(哌啶-4-基)]丁?；?Sar-3(R)-(2-苯乙基)β-丙氨酸。
10.權(quán)利要求4的化合物用于哺乳動(dòng)物以抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合;抑制血小板的凝結(jié);防治血栓形成或栓子形成。
11.權(quán)利要求5的化合物用于哺乳動(dòng)物以抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合;抑制血小板的凝結(jié);防治血栓形成或栓子形成。
12.權(quán)利要求6的化合物用于哺乳動(dòng)物以抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合;抑制血小板的凝結(jié);防治血栓形成或栓子形成。
13.權(quán)利要求7的化合物用于哺乳動(dòng)物以抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合;抑制血小板的凝結(jié);防治血栓形成或栓子形成。
14.權(quán)利要求8的化合物用于哺乳動(dòng)物以抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合;抑制血小板的凝結(jié);防治血栓形成或栓子形成。
15.權(quán)利要求9的化合物用于哺乳動(dòng)物以抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合;抑制血小板的凝結(jié);防治血栓形成或栓子形成。
16.一種組合物，用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物的血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合，包括權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
17.一種組合物，用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物的血小板的凝結(jié)，包括權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
18.一種組合物，用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物的血小板的凝結(jié)，包括權(quán)利要求1的化合物與溶解血栓劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合。
19.權(quán)利要求18的組合物，其中溶解血栓劑是纖維蛋白溶酶原活性劑或鏈激酶。
20.一種組合物，用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物的血小板的凝結(jié)，包括權(quán)利要求1的化合物與抗凝血藥和藥學(xué)上可接受的載體的組合。
21.權(quán)利要求20的組合物，其中抗凝血藥是肝素或華法令。
22.一種組合物，用來(lái)防止哺乳動(dòng)物血栓或栓子形成，它包含權(quán)利要求1的化合物及藥學(xué)上可接受的載體。
23.一種組合物，用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物血栓或栓子形成，包括權(quán)利要求1的化合物，與溶解血栓劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合。
24.如權(quán)利要求23的組合物，其中溶解血栓劑是纖維蛋白溶酶原活化劑或鏈激酶。
25.一種組合物，用來(lái)防止哺乳動(dòng)物的血栓或栓子形成，包括權(quán)利要求1的化合物與抗凝血藥和藥學(xué)上可接受的載體的組合。
26.權(quán)利要求25的組合物，其中抗凝血藥是肝素或華法令。
27.一種組合物，用來(lái)治療哺乳動(dòng)物的血栓或栓子形成，包括權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
28.一種組合物，用來(lái)治療哺乳動(dòng)物的血栓或栓子形成，包括權(quán)利要求1的化合物與血栓溶解劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合。
29.權(quán)利要求28的組合物，其中溶解血栓劑是纖維蛋白溶酶原活性劑或鏈激酶。
30.一種組合物，用來(lái)治療哺乳動(dòng)物的血栓或栓子形成，包括權(quán)利要求1的化合物與抗凝血藥和藥學(xué)上可接受的載體的組合。
31.權(quán)利要求30的組合物，其中抗凝血藥是肝素或華法令。
32.一種組合物，用來(lái)治療哺乳動(dòng)物的血栓或栓子形成，包括權(quán)利要求1的化合物與抗血小板劑和藥學(xué)上可接受的載體的組合。
33.權(quán)利要求32的組合物，其中抗血小板劑是阿斯匹林。
34.一種方法，用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物的血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求17的組合物。
35.一種方法，用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物血小板的凝結(jié)，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求17的組合物。
36.一種方法，用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物血小板的凝結(jié)，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求18的組合物。
37.一種方法，用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物的血小板凝結(jié)，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求20的組合物。
38.一種方法，用來(lái)防止哺乳動(dòng)物血栓或栓子形成，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求22的組合物。
39.一種方法，用來(lái)防止哺乳動(dòng)物血栓或栓子形成，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求23的組合物。
40.一種方法，用來(lái)防止哺乳動(dòng)物的血栓或栓子形成，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求25的組合物。
41.一種方法，用來(lái)防止哺乳動(dòng)物的血栓或栓子形成，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求27的組合物。
42.一種方法，用來(lái)治療哺乳動(dòng)物的血栓或栓子形成，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求28的組合物。
43.一種方法，用來(lái)治療哺乳動(dòng)物的血栓或栓子形成，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求30的組合物。
44.一種方法，用來(lái)治療哺乳動(dòng)物的血栓或栓子形成，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求32的組合物。
45.一種組合物，用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物血小板的凝結(jié)，包括權(quán)利要求1的化合物與至少兩種選自溶解血栓劑、抗凝血?jiǎng)┖涂寡“鍎┑乃巹┖退帉W(xué)上可接受的載體的組合。
46.權(quán)利要求45的組合物，其中溶解血栓劑是纖維蛋白溶酶原活性劑或鏈激酶，抗凝血?jiǎng)┦歉嗡鼗蛉A法令，抗血小板劑是阿斯匹林。
47.一種組合物用來(lái)防治哺乳動(dòng)物血栓或栓子形成，包括權(quán)利要求1的化合物與至少兩種選自溶解血栓劑、抗凝血?jiǎng)┖涂寡“鍎┑乃巹┖退帉W(xué)上可接受的載體的組合。
48.權(quán)利要求47的組合物，其中溶解血栓劑是纖維蛋白溶酶原活性劑或鏈激酶，抗凝血?jiǎng)┦歉嗡鼗蛉A法令，抗血小板劑是阿斯匹林。
49.一種方法，用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物血小板的凝結(jié)，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求45的組合物。
50.一種方法，用來(lái)防止哺乳動(dòng)物的血栓或栓子形成，包括給哺乳動(dòng)物使用權(quán)利要求47的組合物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了下述血纖維蛋白原受體拮抗劑，它可用來(lái)抑制血纖維蛋白原與血小板的結(jié)合，以及用來(lái)抑制血小板凝結(jié)。
文檔編號(hào)C07K5/06GK1060096SQ9110936
公開(kāi)日1992年4月8日 申請(qǐng)日期1991年9月26日 優(yōu)先權(quán)日1990年9月27日
發(fā)明者M·E·達(dá)根, N·C·伊勒 申請(qǐng)人:麥克公司