專利名稱：拆開亞葉酸的方法
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本發(fā)明涉及拆開N5-甲?；?(6R，S)-5，6，7，8-四氫葉酸[即5-CHO-(6R，S)-THF，簡(jiǎn)稱作亞葉酸]以及離析NS-甲?；?(6S)-5，6，7，8-四氫葉酸[即5-CHO-(6S)-THF，生物化學(xué)活性亞葉酸，即檸膠明串珠菌的生長(zhǎng)因子]的方法。
亞葉酸含有兩個(gè)不對(duì)稱中心。在這方面來說，由于亞葉酸是用葉酸[即N-(喋酰)-L-谷氨酸]含成的，在谷氨酸殘基中所含的旋光性碳原子處于左旋形式，因而利用在喋?；訄F(tuán)的5，6位上雙鍵氫化生產(chǎn)的亞葉酸，其6位上的旋光性碳原子處于外消旋形式下，即(6R，S)下。所以含成的亞葉酸(甲酰四氫葉酸)是由兩種非對(duì)映體(1∶1)的混合物所組成。
天然存在(例如肝中)的亞葉酸只以(6S)構(gòu)形，即5-CHO-(6S)-THF形成存在。亞葉酸[即5-CHO-(6R，S)-THF，)鈣鹽(甲酰四氫葉酸鈣)是治療巨成紅細(xì)胞葉酸缺乏性貧血的藥物，在癌癥治療中用作提高葉酸拮抗藥(尤其是氨喋呤、氨甲喋呤和氟尿嘧啶)耐藥性的解毒藥(即甲酰四氫葉酸營(yíng)救)，治療牛皮癬和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎之類自身免疫疾病用藥，以及在化學(xué)治療中用于提高對(duì)于某些抗寄生物藥(例如甲氧芐氨嘧啶-磺胺甲基異惡唑)的耐藥性。給藥5-CHO-(6R，S)-THF之后，這種非對(duì)映體混合物中的(6S)異構(gòu)體迅速轉(zhuǎn)變成5-甲基-(6S)-四氫葉酸，而(6S)異構(gòu)體并不產(chǎn)生代謝并且緩慢地與尿一起排出，參見J.A.Straw等，癌研究，44，3114-3119頁(yè)(1984年)。
F.M.Sirotnak等人發(fā)現(xiàn)[生物化學(xué)藥理學(xué)，28，2993-2997頁(yè)(1979年)]，在亞葉酸[5-CHO-(6R)-THF]非天然的非對(duì)映體的L1210培養(yǎng)物中由氨甲喋呤壓抑細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用時(shí)的效能為100，而化學(xué)合成的非對(duì)映體混合物[5-CHO-(6R，S)-THF]的相應(yīng)效能為天然非對(duì)映體[5-CHO-(6S)-THF]的一半。C.Temple等人在癌治療報(bào)告65，1117-1119頁(yè)(1981年)中，用體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)了于體外獲得的這些結(jié)果，同時(shí)發(fā)現(xiàn)在減小氨甲喋呤的毒性方面，天然的非對(duì)映體的效能是非對(duì)映體混合物(甲酰四氫葉酸)的兩倍以上。事實(shí)上這些作者指出，這種非天然的非對(duì)映體可能具有傷害作用。
這是因?yàn)?-CHO-(6R)-THF，抑制一些引起Ci轉(zhuǎn)移酶，因而抑制四氫葉酸鹽類的生物化學(xué)作用，參見R.P.Leary等生物化學(xué)和生物物理研究通訊，56，484頁(yè)(1973年);V.F.Scott等人，同上期刊，14，523頁(yè)(1964年);G.K.Smith等人，生物化學(xué)，20，4034頁(yè)(1981年)。采用(6S)-四氫葉酸鹽類代替(6R，S)-四氫葉酸鹽類，不僅在效能上應(yīng)當(dāng)提高一倍，而且還應(yīng)當(dāng)具有合乎要求的治療優(yōu)點(diǎn)。
因此，需要用天然的活性物質(zhì)[5-CHO-(6S)-THF]來代替迄今沿用的非對(duì)映體(1∶1)混合物。
在拆開5-CHO-(6R，S)-THF上和進(jìn)行5-CHO-(6S)-THF的不對(duì)稱合成上，人們做了一些試驗(yàn)。例如D.Cosulich等人在美國(guó)化學(xué)會(huì)志74，4215-4216頁(yè)(1952年)上和美國(guó)專利第2，688，018號(hào)(1954年8月31日)中試驗(yàn)了用5-CHO-(6R，S)-THF的堿土金屬鹽(例如鈣鹽或鍶鹽)從水溶液中分步結(jié)晶法進(jìn)行拆開[另見J.C.Fontecilla-Campas等人，美國(guó)化學(xué)會(huì)志，101，6114頁(yè)(1979年)]。
然而，在由D.Cosulich等人公布的條件下不能達(dá)到所希望的拆開作用。從PH＝7-8的水中結(jié)晶5-CHO-(6R，S)-THF鹽(如鈣鹽)時(shí)，回收到的總是(6R，S)形物質(zhì)，利用手性高壓液相色譜柱進(jìn)行色譜分析和旋光性測(cè)定可以定量證明這一點(diǎn)。在這方面，結(jié)晶使用的5-CHO-(6R，S)-THF的鈣鹽是否純凈并不重要，回收到的總是(6R，S)形。而且，也不能通過在5-CHO-(6R，S)-THF堿土金屬鹽的過飽和水溶液中用5-CHO-(6R，S)-THF的真實(shí)堿土金屬鹽種晶接種的方法拆開和富集(6S)形物質(zhì)。
另外，有人試驗(yàn)了用色譜法拆開這對(duì)非對(duì)映體，參見J.Feeney等生物化學(xué)20，1837頁(yè)(1981年)。此外，在二氫葉酸還原酶存在下利用二氫葉酸鹽的立體有擇還原法制備了(6S)-異構(gòu)體類，參見L.Rees等人，四面體42，117頁(yè)(1986年)。
L.Rees等人在美國(guó)化學(xué)會(huì)志，化學(xué)通訊1987，470頁(yè)和EP-A20266042中介紹了一種拆開(6R，S)-THF用方法，利用此方法可以生產(chǎn)少量5-CHO-(6S)-THF和5-CHO-(6R)-THF。此方法包括使(6R，S)-THF和(-)-
基氯甲酸酯反應(yīng)生成非對(duì)映體5-(-)-
氧羰基四氫葉酸，反復(fù)用正丁醇處理拆開此生成物，與在甲酸和乙酸混合物中的溴化氫飽和溶液一起加熱得到的非對(duì)映體，水解后生成5-甲?；?(6S)-四氫葉酸和5-甲?；?(6R)-四氫葉酸，最后以鈣鹽離析它們。此方法麻煩且困難，而且需要高毒性碳酰氯來制備此手性試劑。此外，原料(6R，S)-THF極不穩(wěn)定。在大于50℃下于乙酸中用HBr消去手性輔助基團(tuán)時(shí)，會(huì)消去一部分谷氨酸，導(dǎo)致生成在困難條件下才能分離出來的副產(chǎn)物。由這種類型的方法所生產(chǎn)出的(6S)-亞葉酸成本過高，幾乎設(shè)有什么人考慮用它來代替(R，S)-四氫葉酸鹽。
因此，迄今為止尚沒有可以用來制得(6S)-四氫葉酸鹽的方法。
鑒于此，本發(fā)明目的依然是確立一種制備5-CHO-(6S)-THF的簡(jiǎn)單的和適于工業(yè)上使用的方法。
現(xiàn)在令人驚奇地發(fā)現(xiàn)向(6R，S)-亞葉酸[5-CHO-(6R，S)-THF]鹽水溶液中加入無機(jī)酸或有機(jī)酸的水溶性堿金屬、銨或堿土金屬鹽后，只由極占優(yōu)勢(shì)的非天然非對(duì)映體(6R)-亞葉酸鹽[5-CHO-(6R)-THF]組成的相應(yīng)的亞葉酸鹽析出。析出的這種亞葉酸鹽可以過濾除去。從濾液中可以離析出主要由所需的天然(6S)-亞葉酸鹽組成的(6S)-亞葉酸鹽，離析方法是加入與水溶混的有機(jī)溶劑(例如乙醇或丙酮)和/或水溶性堿土金屬鹽。然后用重結(jié)晶法可以使殘余的(6R)-亞葉酸鹽從(6S)-亞葉酸鹽中除去。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“銨鹽”是未取代或取代1-4次的銨鹽，其中包括吡咯烷鎓、哌啶鎓和嗎啉鎓鹽。具體適用的取代基是1-4個(gè)碳原子烷基或羥烷基或芐基。
按此法拆開(6S)-亞葉酸的堿土金屬鹽只在近中性PH下才能實(shí)現(xiàn)。從堿性介質(zhì)(PH＞8)中開始析出的產(chǎn)物主要是(6S)-亞葉酸的堿土金屬鹽，與PCT/EP專利申請(qǐng)88/00341(1988年11月17日公開，公開號(hào)WO88/08844)中介紹的方法相符。在拆開(6R，6S)-亞葉酸的堿金屬鹽時(shí)，在近中性或堿性介質(zhì)中加入堿金屬鹵化物后開始析出的都是(6S)-亞葉酸鹽。
欲加以拆開的非對(duì)映體混合物中的陽(yáng)離子和無機(jī)酸或低分子量有機(jī)酸的堿金屬鹽、銨鹽或堿土金屬鹽中的陽(yáng)離子既不必要而且一般來說也不好。例如，如果在近中性PH中向(6S)-亞葉酸的堿土金屬鹽溶液內(nèi)加入水溶性堿金屬鹵化物(例如碘化鈉)，開始析出的是(6S)-亞葉酸的相應(yīng)的堿土金屬鹽。在近中性PH下向(6R，S)-亞葉酸堿金屬鹽溶液中加入水溶性堿土金屬鹽時(shí)結(jié)果類似。相應(yīng)的(6R)-亞葉酸堿土金屬鹽開始析出。向(6R，S)-亞葉酸堿金屬鹽溶液中加入可溶性的無機(jī)酸堿金屬鹽時(shí)，往往僅在加入甲醇、乙醇、異丙醇或丙酮之類有機(jī)溶劑之后才開始析出相應(yīng)的(6R)-亞葉酸堿金屬鹽。加入(更多)有機(jī)溶劑可以誘發(fā)(6S)-亞葉酸堿金屬鹽從母液中析出。但是，加入水溶性堿土金屬鹽也可以使相應(yīng)的(6S)-亞葉酸堿土金屬鹽自母液中析出。在此過程中若將PH提高到8以上不會(huì)出現(xiàn)任何問題。
有機(jī)或無機(jī)酸的水溶性堿金屬鹽或銨鹽需要量相當(dāng)高。按重量計(jì)，相對(duì)于所用的(6R，S)-亞葉酸鹽來說，其量大約為0.5-10倍，優(yōu)選1-5倍。水溶性堿土金屬鹽需要量卻小的多。
當(dāng)保持最佳條件(可以用一系列試驗(yàn)確定)下，所說的(6R)-亞葉酸鹽以實(shí)際上旋光純度和高產(chǎn)率析出。在這樣的條件下，所說的母液此時(shí)總是只含有極少量(6R)-亞葉酸鹽，因此例如通過加入有機(jī)溶劑或堿土金屬鹽隨后誘導(dǎo)析出的(6R)-亞葉酸鹽，其含量高達(dá)70-95%以上。按此方式，經(jīng)過重結(jié)晶可以使伴生的(6S)-亞葉酸鹽完全從高度富集(6S)-亞葉酸鹽中除去。但是，如果(6S)-亞葉酸鹽含量只約60%或更少，則重結(jié)晶會(huì)導(dǎo)致外消旋型，即(6R，S)形物質(zhì)再次形成，溶液中卻依然有過量(6S)形物質(zhì)。
當(dāng)此過程得到最佳控制時(shí)，此方法是簡(jiǎn)單而有效的。
本發(fā)明涉及一種拆開(6R，S)-亞葉酸鹽用方法，其中包括向(6R，S)-亞葉酸鹽水溶液中加入有機(jī)或無機(jī)酸的水溶性堿金屬鹽、銨鹽或堿土金屬鹽，濾出析出的(6R)-亞葉酸鹽，并且從濾液中離析(6S)-亞葉酸鹽。
所說的(6S)-亞葉酸鹽離析如下加入與水溶混的有機(jī)溶劑和/或優(yōu)選加入水溶性堿土金屬鹽使(6S)-亞葉酸鹽自濾液中析出，過濾，必要時(shí)重結(jié)晶。
優(yōu)選在接近中性PH下，對(duì)(6R)-亞葉酸的堿土金屬鹽進(jìn)行分離。
特別適于作為原料的(6R，S)-亞葉酸鹽，是鈉、鉀、鈣、鎂、鍶或鋇鹽。優(yōu)選鈉鹽，尤其是鈣和鎂鹽，因?yàn)檫@些鹽在拆開、離析和提純后可以直接用作藥物。
構(gòu)成相應(yīng)鹽的無機(jī)或有機(jī)酸類，優(yōu)選強(qiáng)酸，最好是含1-4個(gè)碳原子的有機(jī)酸類。提到的無機(jī)酸可以是氫碘酸、氫溴酸、鹽酸和硝酸，作為有機(jī)酸，可以是甲酸、乳酸、檸檬酸和甲磺酸。
已證明很適用的水溶性的堿金屬鹽、銨鹽或堿土金屬鹽是鹵化物，尤其是碘化物和溴化物。特別優(yōu)選下列物質(zhì)碘化鈉、溴化鈉、氯化鈉、碘化鉀、氯化鉀、溴化鉀、碘化銨、溴化銨、氯化銨、碘化鈣、氯化鈣、溴化鈣、溴化鎂、氯化鎂、溴化鍶、氯化鍶、碘化鋇、溴化鋇和氯化鋇。
向(6R，S)-亞葉酸堿金屬鹽溶液中適宜地加入水溶性堿土金屬鹽，優(yōu)選碘化鈣、溴化鈣、氯化鈣、溴化鎂或氯化鎂。
然而，本發(fā)明的拆開操作在加入其它水溶性堿金屬鹽、銨鹽和堿土金屬鹽時(shí)，例如加入硝酸鈉、硝酸鉀、硝酸銨、甲酸鈉、乳酸鈉、檸檬酸鈉、乳酸鈣或甲磺酸鈉時(shí)也獲得成功。
適于離析(6S)-亞葉酸鹽類用與水溶混的有機(jī)溶劑是低級(jí)醇類(如甲醇、乙醇、正丙醇和異丙醇)、乙二醇醚類(如2-甲氧乙醇、2-乙氧乙醇、2-丁氧乙醇、1-甲氧基-2-丙醇、1，2-二甲氧基乙烷、1，2-二乙氧基乙烷以及二惡烷、四氫呋喃)、低級(jí)酮類(如丙酮、甲基乙基酮、甲氧基丙酮、1，3-二甲氧基丙酮)及乙腈。優(yōu)選低級(jí)醇或酮類，尤其是甲醇、乙醇、異丙醇和丙酮。
適于析出相應(yīng)(6S)-亞葉酸鹽用的水溶性堿土金屬鹽是堿金屬鹵化物，例如氯化鈣、溴化鈣、碘化鈣、氯化鎂、溴化鎂、氯化鍶、溴化鍶或鹵化鋇。為此目的優(yōu)選氯化鈣和氯化鎂。
因此，本發(fā)明還包括作為(6R，S)-亞葉酸堿金屬或堿土金屬鹽優(yōu)選使用鈉鹽、鈣鹽或鎂鹽，作為水溶性無機(jī)酸鹽優(yōu)選鈉、鉀或銨的鹵化物，特別是碘化鈉、溴化鈉、氯化鈉、碘化鉀、溴化鉀、氯化鉀、碘化銨、溴化銨和/或氯化銨，以及作用析出相應(yīng)的(6S)-亞葉酸鹽用有機(jī)溶劑優(yōu)選低級(jí)醇類或低級(jí)酮類和/或作為水溶性堿土金屬鹽優(yōu)選鈣或鎂的鹵化物。
詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施例。
實(shí)施例1(6R，S)-亞葉酸鈣的拆開以及(6R)-亞葉酸鈣及(6S)-亞葉酸鈣的離析將50克純(6R，S)-亞葉酸鈣溶解在500ml水中，加入100克碘化鈉。水溶液PH調(diào)節(jié)到7.0。然后在攪拌下水溶液冷卻到1℃。水溶液PH提高到大約7.70。15-20小時(shí)之后，過濾析出的產(chǎn)物，用濃縮的碘化鈉水溶液洗滌，然后用乙醇洗滌。得到(6R)形物質(zhì)含量為98.1%的(6R)-亞葉酸鈣，用手性柱(Resolvosil-BSA-7)作高壓液相色譜法測(cè)定。在氯化鈣存在下自水中重結(jié)晶，得到(6R)形物質(zhì)含量為100.0%的純(6R)-亞葉酸鈣。比旋光度[α]＝+43.7(根據(jù)無水的鈣鹽)。20℃下于水中的溶解度為2.0克/100ml。
向?yàn)V液中加入乙醇，攪拌下將其冷卻到30℃。大約15-20小時(shí)后，過濾析出的產(chǎn)物并且用乙醇洗滌。得到其中含84%(6S)-亞葉酸鈣和16%(6R)-亞葉酸鈣的亞葉酸鈣。在氯化鈣存在下自水中進(jìn)行重結(jié)晶，得到(6S)形物質(zhì)含量為97.6%的(6S)-亞葉酸鈣。進(jìn)一步重結(jié)晶后所說(6S)形物質(zhì)的含量＞＝99.5%。比旋光度[α]＝-15℃(根據(jù)無水的鈣鹽)。
實(shí)施例2(6R，S)-亞葉酸的拆開以及(6R)-亞葉酸鈉和(6S)-亞葉酸鈣的離析將25克純(6R，S)-亞葉酸鈣懸浮在70ml水中，加入49ml2N氫氧化鈉溶液使之溶解。向溶液中加入40克氯化鈉和140克碘化鈉。形成凝膠析出。幾小時(shí)后過濾，用甲醇充分洗滌。得到(6R)形物質(zhì)含量為99%的旋光純(6R)-亞葉酸鈉。
向母液中加入25克氯化鈣，將PH調(diào)節(jié)到8.5，然猴逐漸析出(6S)-形物質(zhì)含量為78%的(6S)-亞葉酸鈣。將此粗品(6S)-亞葉酸鈣溶解在30-35℃水中，加入活性碳和過濾助劑(Solkafloc)，過濾此混合物，將濾液蒸發(fā)到濃度達(dá)10%，然后在5-1℃1下結(jié)晶之。得到(6S)-形物質(zhì)含量為98%左右的(6S)-亞葉酸鈣。
實(shí)施例3(6R，S)-亞葉酸的拆開和(6R)-亞葉酸鈉與(6S)-亞葉酸鎂的離析將25克(6R，S)亞葉酸懸浮在75ml水中，加入5N氫氧化鈉水溶液使之溶解。攪拌下先后向弱堿性溶液中加入75克溴化鈉和200ml甲醇。二周之后(6R)-亞葉酸鈉逐漸析出。濾出產(chǎn)物，用甲醇洗滌后干燥之。得到(6R)形物質(zhì)含量為98%的實(shí)際旋光純的(6R)-亞葉酸鈉。比旋光度[α]＝+39.5(根據(jù)無水鈉鹽，水中濃度1%)。
從母液中除去甲醇，將PH調(diào)節(jié)到9.8，加入25克氯化鎂并且緩緩攪拌此混合物。一段時(shí)間后逐漸結(jié)晶出(6S)-亞葉酸鎂，100小時(shí)左右之后將其濾出，用乙醇充分洗滌后干燥之，(6S)形物質(zhì)含量為85%。在氯化鎂存在下重結(jié)晶后，得到旋光純的(6S)-亞葉酸鎂。
實(shí)施例4(6S)-亞葉酸鈉的析出和兩種非對(duì)映體的離析將25克(6R，S)-亞葉酸利用加入5N氫氧化鈉水溶液的方法溶于75ml水中。20℃下加入140克碘化鈉，攪拌下將此混合物冷卻到5℃。放置過夜后濾出的(6R)-亞葉酸鈉，用丙酮加以洗滌。得到的產(chǎn)物含82.9%的(6R)形物質(zhì)。向合并的母液中加入600ml丙酮，0℃下攪拌此混合物。過濾析出的產(chǎn)物。此產(chǎn)物主要由(6S)-亞葉酸鈉(含量為71%)組成。
實(shí)施例5在近中性介質(zhì)中加入碘化銨拆開(6R，S)-亞葉酸鈉36℃下將50克(6R，S)-亞葉酸鈣和100克碘化銨溶解在500ml水中，此溶液PH為7.7。然后在攪拌下將其慢慢冷卻到室溫，并且繼續(xù)攪拌進(jìn)一步冷卻到5℃，最后冷卻到0-2℃。加入幾毫克純(6R)-亞葉酸鈣作為種晶后開始結(jié)晶。
由此結(jié)晶出的產(chǎn)物主要由(6R)-亞葉酸鈣組成，將其濾出后用乙醇洗滌并加以干燥。(6R)-亞葉酸鹽含量為98%。將濾液和洗液合并，并且在攪拌下再加入1升乙醇。濾出逐漸析出的主要由(6S)-亞葉酸鈣組成的部分產(chǎn)物，用乙醇洗滌后干燥之。(6S)-亞葉酸鹽含量為96%。用加有活性碳和過濾助劑的少量水分別重結(jié)晶得到的粗品(6R)-亞葉酸鈣和(6S)-亞葉酸鈣，其(6R)-和(6S)-亞葉酸鹽含量分別提高到99.5-99.7%。
實(shí)施例6在近中性介質(zhì)中加入溴化鈉拆開(6R，S)-亞葉酸鈣以及隨后加入CaCl離析(6S)-亞葉酸鈣將75克溴化鈉加入含50克(6R，S)-亞葉酸鈣的500ml水中，此溶液PH為7.4。攪拌下將其從35℃冷卻到1-3℃，之后開始緩慢結(jié)晶。濾出晶體，用甲醇洗滌。得到的晶體由(6R)-亞葉酸鈣(含量為93%)組成。向?yàn)V液中加入100克氯化鈣，之后析出(6S)-亞葉酸鈣。將其濾出，用乙醇洗滌。得到的(6S)-亞葉酸鈣含(6S)-形物質(zhì)達(dá)84%。在氯化鈣存在下自少量水中重結(jié)晶，以高產(chǎn)率獲得(6S)-形物質(zhì)含量為99.6%的(6S)-亞葉酸鈣純品。
實(shí)施例7在近中性介質(zhì)中加入溴化銨拆開(6R，S)-亞葉酸鈣將70克溴化銨加入含50克(6R，S)-亞葉酸鈣的500ml水中，此溶液PH為6.5。攪拌下將此溶液冷卻到0℃，用純的(6R)-亞葉酸鈣作種晶引晶，逐漸開始結(jié)晶。當(dāng)此上層溶液中(6S)-亞葉酸鈣含量停止增加后，即不再進(jìn)一步析出(6R)-亞葉酸鈣后，過濾，用甲醇和乙醇洗滌。得到的(6R)-亞葉酸鈣中，(6R)形物質(zhì)含量為93.8%。向?yàn)V液中加入100克氯化鈣，調(diào)節(jié)PH為7，此后(6S)-亞葉酸鈣逐漸析出。濾出生成的產(chǎn)物，用乙醇洗滌之。(6S)-亞葉鈣含量為98.7%。在氯化鈣存在下用結(jié)晶法由其獲得純品(6S)-亞葉酸鈣。
實(shí)施例8加入碘化鉀拆開(6R，S)-亞葉酸鈣將500ml水和110克碘化鉀加入50克(6R，S)-亞葉酸鈣中，在55℃下使之溶解。將得到的溶液(PH7.1)在攪拌下分步冷卻到0℃，用純(6R)-亞葉酸鈣引晶。放置過夜后，過濾析出的結(jié)晶，用少量碘化鉀溶液和用乙醇洗滌。這樣制得的(6R)-亞葉酸鈣很純，(6R)非對(duì)映體含量為99.1%。
60℃下將溶于50ml水中的100克氯化鈣加至濾液中，加入少量氫氧化鈉將PH調(diào)節(jié)到7.3，將此溶液分步冷卻到15℃時(shí)，(6S)-亞葉酸鈣結(jié)晶析出。
三天后濾出結(jié)晶，用氯化鈣冷溶液洗滌后用乙醇洗滌。以高產(chǎn)率獲得之粗品(6S)-亞葉酸鈣中(6S)形物質(zhì)含量為97.3%。
實(shí)施例9加入氯化鈉拆開(6R，S)-亞葉酸鈣60℃下在320ml水中溶解50克純品(6R，S)-亞葉酸鈣，加入35克氯化鈉，攪拌下逐漸將混合物冷卻到0℃，同時(shí)用可靠的(6R)-亞葉酸鈣引晶。濾出緩慢析出的結(jié)晶。結(jié)晶為粗品(6R)-亞葉酸鈣，其(6R)形含量為82.5%。通過加入氯化鈣和乙醇自此濾液中得到(6S)-亞葉酸鈣。如果除了加入的氯化鈉量減半為17.5克之外采用同樣的操作，則獲得的是(6R)形含量只為67%的(6R)-亞葉酸鈣粗品。當(dāng)使用(6R，S)-亞葉酸鈣代替(6R)-亞葉酸鈣引晶時(shí)，盡管加入35克氯化鈉仍然獲得近似相同的結(jié)果。
實(shí)施例10以類似于實(shí)施例7的方式加入35克氯化銨，拆開500ml水中的50克(6R，S)-亞葉酸鈣獲得的(6R)-亞葉酸鈣中(6R)形含量為92.7%，而且向母液中加入100克氯化鈣后獲得的(6S)-亞葉酸鈣中(6S)形物質(zhì)含量為97%。
實(shí)施例11按類似于實(shí)施例7的方式在500ml水中加入100克溴化四甲銨，拆開50克(6R，S)-亞葉酸鈣獲得的(6S)-亞葉酸鈣中(6R)形物質(zhì)含量為89.1%，而且獲得的(6S)-亞葉酸鈣中(6S)形物質(zhì)含量為97.4%。
實(shí)施例12在100ml水中加入約125克二乙胺氫溴酸鹽，拆開400ml水中的50克(6R，S)-亞葉酸鈣按類似于實(shí)施例7的方式進(jìn)行拆開時(shí)，獲得下列物質(zhì)(6R)含量為99.1%3(6R)-亞葉酸鈣和(6S)含量為80%的(6S)-亞葉酸鈣。
實(shí)施例13用溴化銨或氯化銨拆開自5，10-次甲基四氫葉酸[5，10-CH-(6R，S)-THF＝無水甲酰四氫葉酸]中原位制得的(6R，S)-亞葉酸鈣將12.6克氫氧化鈣溶解在90℃水(100ml)中，在幾分鐘內(nèi)向攪拌著的此溶液中加入110克溴化無水甲酰四氫葉酸氫溴酸鹽([5，10-CH-(6R，S)-THF]BrOHBr)，同時(shí)加入25%濃氨水以便使反應(yīng)溶液PH保持在6。然后在PH6下回流得到的溶液3小時(shí)，回流期間內(nèi)形成(6R，S)-亞葉酸鈣(5-CHO-THF)。用活性炭和過濾助劑處理使反應(yīng)溶液澄清，加入100克溴化銨，將PH調(diào)節(jié)到7，冷卻溶液，并用純的(6R)-亞葉酸鈣引晶，之后逐漸析出大部分(6R)-亞葉酸鈣。濾出結(jié)晶并洗滌之，其(6R)形物質(zhì)含量為98.3%。向?yàn)V液中加入溶于100ml水中的200克氯化鈣，將PH調(diào)節(jié)到7，然后用純的(6S)-亞葉酸鈣引晶，引晶后存在的(6S)-亞葉酸鈣結(jié)晶析出。濾出這些結(jié)晶，其(6S)形物質(zhì)含量為92%。
在此實(shí)施例中，也可以用等當(dāng)量氯化無水甲酰四氫葉酸鹽酸鹽代替溴化無水甲酰四氫葉酸氫溴酸鹽，用等量氯化銨代替溴化銨。在這種情況下獲得了類似結(jié)果。
按照上述實(shí)施例中所介紹的相似方式進(jìn)行下列類似物的拆開。
實(shí)施例14通過在近中性介質(zhì)中加入溴化銨將(6R，S)-亞葉酸鎂拆開成其成分物實(shí)施例15加入碘化鈉除去(6R)-亞葉鍶，隨后加入2-甲氧基乙醇和氯化鍶析出(6S)-亞葉酸鍶，用這種方法拆開(6R，S)-亞葉酸鍶。
實(shí)施例16開始時(shí)加入碘化鋇，然后加入1，2-二甲氧基乙烷，用這種方法拆開(6R，S)-亞葉酸鋇和離析(6R)-亞葉酸鋇及(6S)-亞葉酸鋇。
實(shí)施例17加入溴化鎂除去(6R)-亞葉酸鎂，加氯化鈣于此濾液中并且離析(6S)-亞葉酸鈣，用這種方法拆開(6R，S)-亞葉酸鈉。
實(shí)施例18加入溴化鎂除去析出的(6R)-亞葉酸鹽，向?yàn)V液中加入氯化鈣并且離析此時(shí)析出的(6S)-亞葉酸鈣，用這種方法拆開(6R，S)-亞葉酸鈣。
實(shí)施例19加入溴化四乙銨以拆開(6R，S)-亞葉酸鈣。
實(shí)施例20加入溴化四丁銨以拆開(6R，S)-亞葉酸鈣。
實(shí)施例21加入三乙胺鹽酸鹽拆開(6R，S)-亞葉酸鈣。
實(shí)施例22加入二乙醇胺鹽酸鹽拆開(6R，S)-亞葉酸鈣。
實(shí)施例23加入芐胺氫碘酸鹽拆開(6R，S)-亞葉酸鈣。
實(shí)施例24加入嗎啉氫溴酸鹽拆開(6R，S)-亞葉酸鈣。
權(quán)利要求
1.一種拆開(6R，S)-亞葉酸鹽的方法，其中包括向(6R，S)-亞葉酸鹽水溶液中加入無機(jī)或有機(jī)酸的水溶性堿金屬鹽、銨鹽或堿土金屬鹽，過濾析出的(6R)-亞葉酸鹽和從濾液中離析(6S)-亞葉酸鹽。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中利用加入與水溶混的有機(jī)溶劑和/或優(yōu)選水溶性堿土金屬鹽的方法使(6S)-亞葉酸鹽自濾液中析出，將其濾出并且必要時(shí)加以重結(jié)晶。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中在近中性PH下除去(6R)-亞葉酸的堿土金屬鹽。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中使用鈉鹽或者特別是鈣鹽或鎂鹽作為所說(6R，S)-亞葉酸鹽的堿金屬鹽或堿土金屬鹽。
5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中使用鈉、鉀或銨的鹵化物，具體地說使用碘化鈉、溴化鈉、氯化鈉、碘化鉀、溴化鉀、氯化鉀、碘化銨、溴化銨和/或氯化銨作為無機(jī)酸的水溶性堿金屬鹽或銨鹽。
6.按照權(quán)利要求1或2中至少一項(xiàng)所述的方法，其中使用低級(jí)醇或低級(jí)酮作為有機(jī)溶劑。
7.按照權(quán)利要求1、2或6中至少一項(xiàng)所述的方法，其中使用鹵化鈣或鹵化鎂作為析出(6S)-亞葉酸鹽用的水溶性堿土金屬鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及拆開(6R，S)-亞葉酸鹽為其非對(duì)映體的方法，其詳細(xì)步驟見說明書。得到的(6S)-亞葉酸鹽類是有價(jià)值的藥物，即治療巨成紅細(xì)胞葉酸缺乏性貧血用藥，提高對(duì)葉酸拮抗劑耐藥性的解毒藥，尤其是在癌癥治療中提高對(duì)于氨喋呤、氨甲喋呤和5-氟尿嘧啶耐藥性的解毒藥(甲酰四氫葉酸營(yíng)救)以及治療牛皮癬和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎之類自身免疫性疾病用藥和提高對(duì)于某些抗寄生物藥耐藥性的解毒劑。
文檔編號(hào)C07D475/04GK1042541SQ8910972
公開日1990年5月30日 申請(qǐng)日期1989年11月10日 優(yōu)先權(quán)日1988年11月11日
發(fā)明者穆勒·漢斯·諾多夫, 優(yōu)曼·馬丁, 考替·約瑟夫, 穆德爾·干特 申請(qǐng)人:埃普羅瓦股份公司