從植物甾醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的方法和工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種從植物甾醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的方法和工藝。所述方法包括：采用植物甾醇為原料進(jìn)行微生物發(fā)酵生成4-雄烯二酮；將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液通過離心機(jī)進(jìn)行液固分離，提取濕固體物料；在所述濕固體物料中加入丙酮-純水的混合溶劑，在升溫至40-60℃的條件下持續(xù)攪拌60-90分鐘后，在40℃以上的溫度條件下進(jìn)行固液分離；對(duì)固液分離后得到的溶液進(jìn)行結(jié)晶處理；對(duì)結(jié)晶后的物料進(jìn)行離心得到4-雄烯二酮的粗品，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品。本發(fā)明可以減少4-雄烯二酮產(chǎn)品中的雜質(zhì)，簡(jiǎn)化提取精制的過程。
【專利說明】從植物留醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的方法和工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及發(fā)酵領(lǐng)域，特別是涉及一種從植物留醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的方法和工藝。
【背景技術(shù)】 [0002]4-雄烯二酮是合成甾體激素類藥物的重要中間體，目前主要由植物甾醇作為主要原料經(jīng)微生物發(fā)酵制得。由于發(fā)酵過程中很難將植物留醇全部轉(zhuǎn)化為4-雄烯二酮，因此，發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵液中存在著植物留醇和4-雄烯二酮兩種物質(zhì)。發(fā)酵結(jié)束后需要用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑將4-雄烯二酮從發(fā)酵液中分離提取出來(lái)。
[0003]目前國(guó)內(nèi)在這一提取過程中使用的有機(jī)溶劑有多種，例如乙酸乙酯，乙酸丁酯，丙酮，甲醇，乙醇，二氯甲烷等。而上述這些溶劑，對(duì)植物甾醇和4-雄烯二酮這兩種物質(zhì)沒有選擇性(或選擇性很低)，其結(jié)果是經(jīng)過上述溶劑的提取，兩種物質(zhì)都被提取到有機(jī)溶劑中，給其后的分離精制過程(精制的目的是制備高純度的4-雄烯二酮)帶來(lái)了很大的麻煩。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種從植物甾醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的方法，以減少4-雄烯二酮產(chǎn)品中的雜質(zhì)，簡(jiǎn)化提取精制的過程。
[0005]為了解決上述問題，本發(fā)明公開了一種從植物留醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的方法，包括:
[0006]采用植物留醇為原料進(jìn)行微生物發(fā)酵生成4-雄烯二酮；
[0007]將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液通過離心機(jī)進(jìn)行液固分離，提取濕固體物料；
[0008]在所述濕固體物料中加入丙酮-純水的混合溶劑，在升溫至40_60°C的條件下持續(xù)攪拌60-90分鐘后，在40°C以上的溫度條件下進(jìn)行固液分離，其中，每千克濕固體物料加入4升混合溶劑，所述混合溶劑中丙酮的比例為70~80% ；
[0009]對(duì)固液分離后得到的溶液進(jìn)行結(jié)晶處理，所述結(jié)晶處理包括:將所述溶液升溫至40-60°C，使所述溶液中包含的4-雄烯二酮全部溶解，對(duì)所述溶液逐漸降溫至0-10°C后保溫0.5-2.0小時(shí)，降溫速度為每小時(shí)5~7°C，所述結(jié)晶的過程中持續(xù)攪拌，攪拌的速度為15 ~25r/min ；
[0010]對(duì)結(jié)晶后的物料進(jìn)行離心得到4-雄烯二酮的粗品，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品。
[0011]優(yōu)選地，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品的步驟包括:
[0012]在所述粗品中按照每升丙酮溶解180g粗品的比例加入丙酮；
[0013]采用80°C的水浴進(jìn)行升溫，升溫至40-60°C后保溫一小時(shí)，緩慢降溫至0-10°C時(shí)停止降溫，保溫0.5-2.0小時(shí)后進(jìn)行離心，將離心后的固相作為4-雄烯二酮成品。
[0014]優(yōu)選地，所述方法還包括:
[0015]對(duì)所述4-雄烯二酮成品進(jìn)行干燥，得到干燥的成品。[0016]本發(fā)明還提供了一種從植物留醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的工藝，包括:
[0017]采用植物留醇為原料進(jìn)行微生物發(fā)酵生成4-雄烯二酮；
[0018]將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液通過渦螺離心機(jī)進(jìn)行液固分離，將分離后的濕固體物料置入提取te ；
[0019]在所述提取罐中加入丙酮-純水的混合溶劑，對(duì)所述提取罐加熱至40_60°C的條件下持續(xù)攪拌90分鐘，其中，每千克濕固體物料加入4升混合溶劑，所述混合溶劑中丙酮的比例為70~80%，所述提取罐的頂部安裝有回流裝置以防止所述混合溶劑中的丙酮揮發(fā)；
[0020]在40°C以上的溫度條件下，使用碟片離心機(jī)或板框壓濾機(jī)進(jìn)行固液分離；
[0021]對(duì)固液分離后得到的溶液進(jìn)行結(jié)晶處理，所述結(jié)晶處理包括:將所述溶液升溫至40-60°C，使所述溶液中包含的4-雄烯二酮全部溶解，對(duì)所述溶液逐漸降溫至0-10°C后保溫0.5-2.0小時(shí)，降溫速度為每小時(shí)5~7°C，所述結(jié)晶的過程中持續(xù)攪拌，攪拌的速度為15 ~25r/min ；
[0022]采用吊帶離心機(jī)對(duì)結(jié)晶后的物料進(jìn)行離心得到4-雄烯二酮的粗品，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品。
[0023]優(yōu)選地，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品的步驟包括:
[0024]將所述粗品投入到結(jié)晶罐中，按照每升丙酮溶解180g粗品的比例加入丙酮；
[0025]向所述結(jié)晶罐的夾套內(nèi)通入80°C的熱水進(jìn)行升溫，升溫至40-60°C后保溫一小時(shí)，緩慢降溫至0-10°C時(shí)停止降溫，保溫0.5-2.0小時(shí)后進(jìn)行離心，將離心后的固相作為4-雄烯二酮成品。
[0026]優(yōu)選地，所述工藝還包括:`
[0027]將所述4-雄烯二酮成品裝入到雙錐干燥機(jī)內(nèi)進(jìn)行干燥，得到干燥的成品。
[0028]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明包括以下優(yōu)點(diǎn):
[0029]依據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，在發(fā)酵結(jié)束后，對(duì)提取的濕固體物料中加入丙酮-純水的混合溶劑，在升溫至40-60°C的條件下持續(xù)攪拌60-90分鐘后進(jìn)行固液分離，其中，每千克濕固體物料加入4升混合溶劑，所述混合溶劑中丙酮的比例為70~80%，并對(duì)分離后的溶液按照預(yù)設(shè)的條件進(jìn)行結(jié)晶和離心處理得到4-雄烯二酮成品。相比于【背景技術(shù)】，本發(fā)明實(shí)施例采用了一種新的溶劑系統(tǒng)，將丙酮和純水按一定比例配制成混合溶劑，代替了傳統(tǒng)的單一溶劑，此混合溶劑在一定溫度下對(duì)4-雄烯二酮有較好的溶解度，而對(duì)植物留醇的溶解度極小。因此，本發(fā)明實(shí)施例可以選擇性地將發(fā)酵產(chǎn)物4-雄烯二酮提取出來(lái)，而將植物留醇留在殘?jiān)?。提取后混合溶劑中的植物留醇量極小(可以忽略不計(jì))。使用該溶劑系統(tǒng)，本發(fā)明制備的4-雄烯二酮產(chǎn)品質(zhì)量好，極大地減少了 4-雄烯二酮產(chǎn)品中的雜質(zhì)，簡(jiǎn)化了提取精制的過程。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0030]圖1是本發(fā)明的一種從植物留醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的方法實(shí)施例的流程圖；
[0031]圖2是本發(fā)明的一種從植物甾醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的工藝實(shí)施例的流程圖；
[0032]圖3給出了本發(fā)明示例中從植物留醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的工藝的流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0033]為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0034]參見圖1給出了本發(fā)明的一種從植物留醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的方法實(shí)施例的流程圖，包括:
[0035]發(fā)酵步驟101、采用植物留醇為原料進(jìn)行微生物發(fā)酵生成4-雄烯二酮。
[0036]4-雄烯二酮(4-androstenedione)簡(jiǎn)稱AD,本發(fā)明實(shí)施例采用植物甾醇為原料進(jìn)行微生物發(fā)酵生成4-雄烯二酮，可以采用現(xiàn)有技術(shù)中任意一種可實(shí)現(xiàn)的具體方法，一般而言，已知的發(fā)酵方法包括在適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中增殖分枝桿菌屬突變體，將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入含植物甾醇的生物反應(yīng)器中，隨后經(jīng)過大約120小時(shí)生物轉(zhuǎn)化為AD。
[0037]發(fā)酵液的離心分離步驟102、將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液通過離心機(jī)進(jìn)行液固分離，提取濕固體物料。
[0038]發(fā)酵結(jié)束后，先將發(fā)酵液通過離心機(jī)進(jìn)行液固分離，由于產(chǎn)物4-雄烯二酮位于濕固體物料中，因此發(fā)酵液的離心分離這一過程的目的是將含有4-雄烯二酮的固相與液相(發(fā)酵廢水)分離，將濕固體物料(稱為菌渣)保留，菌渣中含有4-雄烯二酮、殘余的植物甾醇、微生物菌體以及殘余的發(fā)酵培養(yǎng)基成分,將水相(廢液)棄去。
[0039]混合溶劑提取步驟103、在所述濕固體物料中加入丙酮-純水的混合溶劑，在升溫至40-60°C的條件下持續(xù)攪拌60-`90分鐘后，在40°C以上的溫度條件下進(jìn)行固液分離，其中，每千克濕固體物料加入4升混合溶劑，所述混合溶劑中丙酮的比例為70~80%。
[0040]本發(fā)明所述的方法適用于水相發(fā)酵液，需要說明的是，該方法并不適用于水油兩相發(fā)酵液。
[0041]具體而言，對(duì)濕固體物料進(jìn)行秤重后，再按一定的比例加入計(jì)算量的丙酮和純水，然后升溫至40-60度并攪拌90分鐘進(jìn)行提取，提取結(jié)束后，趁熱進(jìn)行固液分離，為了防止丙酮揮發(fā)，可以在本步驟進(jìn)行的設(shè)備中安裝有回流裝置。
[0042]其中，菌渣與混合溶劑的比例為1:4，即Ikg重量的菌渣，加入4L的混合溶劑。
[0043]攪拌后，在40°C以上的溫度條件下進(jìn)行固液分離，固液分離的目的是將混合溶劑提取后的液相與固相分離。此時(shí)，4-雄烯二酮已經(jīng)被提取到混合溶劑的液相中，而固相中主要含有菌體、不溶解的培養(yǎng)基成分和植物留醇。固液分離的溫度需要保持溫度在40度以上，以防止在低溫下4-雄烯二酮結(jié)晶析出。此步得到的濾液通入到結(jié)晶罐中，而固相為廢棄物。
[0044]結(jié)晶步驟104、對(duì)固液分離后得到的溶液進(jìn)行結(jié)晶處理，所述結(jié)晶處理包括:將所述溶液升溫至40-60°C，使所述溶液中包含的4-雄烯二酮全部溶解，對(duì)所述溶液逐漸降溫至0-10°C后保溫0.5-2.0小時(shí)，降溫速度為每小時(shí)5~7°C，所述結(jié)晶的過程中持續(xù)攪拌，攪拌的速度為15~25r/min。
[0045]結(jié)晶時(shí)先對(duì)溶液加熱至40_60°C，以使所述溶液中包含的4-雄烯二酮全部溶解，然后，停止加熱，并控制溶液緩慢降溫，每小時(shí)降低5~7°C，當(dāng)降至0-10度時(shí)停止降溫，并保持此溫度0.5-2.0小時(shí)后進(jìn)行放料離心。[0046]精制步驟105、對(duì)結(jié)晶后的物料進(jìn)行離心得到4-雄烯二酮的粗品，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品。
[0047]將結(jié)晶后的物料進(jìn)行離心，得到的固相為4-雄烯二酮的濕粗品，液相為粗品母液，可以回收。
[0048]其中，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品的步驟可以包括:
[0049]子步驟S11、在所述粗品中按照每升丙酮溶解180g粗品的比例加入丙酮；
[0050]子步驟S12、采用80°C的水浴進(jìn)行升溫，升溫至40-60°C后保溫一小時(shí)，緩慢降溫至0-10°C時(shí)停止降溫，保溫0.5-2.0小時(shí)后進(jìn)行離心，將離心后的固相作為4-雄烯二酮成
品O
[0051]在制得成品后，還可以對(duì)成品進(jìn)行進(jìn)一步的精制，具體還包括:
[0052]對(duì)所述4-雄烯二酮成品進(jìn)行干燥，得到干燥的成品。
[0053]綜上所述，依據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，在發(fā)酵結(jié)束后，對(duì)提取的濕固體物料中加入丙酮-純水的混合溶劑，在升溫至40-60°C的條件下持續(xù)攪拌60-90分鐘后進(jìn)行固液分離，其中，每千克濕固體物料加入4升混合溶劑，所述混合溶劑中丙酮的比例為70~80%，并對(duì)分離后的溶液按照預(yù)設(shè)的條件進(jìn)行結(jié)晶和離心處理得到4-雄烯二酮成品。相比于【背景技術(shù)】，本發(fā)明實(shí)施例采用了一種新的溶劑系統(tǒng)，將丙酮和純水按一定比例配制成混合溶劑，代替了傳統(tǒng)的單一溶劑，此混合溶劑在一定溫度下對(duì)4-雄烯二酮有較好的溶解度，而對(duì)植物甾醇的溶解度極小。因此，本發(fā)明實(shí)施例可以選擇性地將發(fā)酵產(chǎn)物4-雄烯二酮提取出來(lái)，而將植物留醇留在殘?jiān)?。提取后混合溶劑中的植物留醇量極小(可以忽略不計(jì))。使用該溶劑系統(tǒng)，本發(fā)明制備的4-雄烯二酮產(chǎn)品質(zhì)量好，極大地減少了 4-雄烯二酮產(chǎn)品中的雜質(zhì)，簡(jiǎn)化了提取精制的過程。
`[0054]參見圖2給出了本發(fā)明的一種從植物留醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的工藝實(shí)施例的流程圖，包括:
[0055]步驟201、采用植物留醇為原料進(jìn)行微生物發(fā)酵生成4-雄烯二酮。
[0056]步驟202、將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液通過渦螺離心機(jī)進(jìn)行液固分離，將分離后的濕固體物料置入提取罐。
[0057]發(fā)酵液的離心分離的目的是將含有4-雄烯二酮的固相與液相(發(fā)酵廢水)分離，然后將水相棄去，保留固相(稱為菌渣)。菌渣中含有4-雄烯二酮、殘余的植物留醇、微生物菌體以及殘余的發(fā)酵培養(yǎng)基成分，分離用的設(shè)備為渦螺離心機(jī)。
[0058]步驟203、在所述提取罐中加入丙酮-純水的混合溶劑，對(duì)所述提取罐加熱至40-60°C的條件下持續(xù)攪拌90分鐘，其中，每千克濕固體物料加入4升混合溶劑，所述混合溶劑中丙酮的比例為70~80%，所述提取罐的頂部安裝有回流裝置以防止所述混合溶劑中的丙酮揮發(fā)。
[0059]混合溶劑提取過程使用的設(shè)備為提取罐，菌渣與混合溶劑的比例為1:4 ( Ikg重量的菌渣，加入4L的混合溶劑，在提取罐中進(jìn)行加熱攪拌90分鐘，加熱至40-60度，為了防止丙酮揮發(fā)，提取罐頂部安裝有回流裝置。
[0060]步驟204、在40°C以上的溫度條件下，使用碟片離心機(jī)或板框壓濾機(jī)進(jìn)行固液分離。
[0061]這步操作的目的是將提取后的液相與固相分離。此時(shí)，4-雄烯二酮已經(jīng)被提取到混合溶劑的液相中，而固相中主要含有菌體、不溶解的培養(yǎng)基成分和植物留醇。分離使用的設(shè)備為碟片離心機(jī)，也可以使用板框壓濾機(jī)。此過程需要保持溫度在40度以上，以防止在低溫下4-雄烯二酮結(jié)晶析出。此步得到的濾液通入到結(jié)晶罐中，而分離出的固相為廢棄物。
[0062]步驟205、對(duì)固液分離后得到的溶液進(jìn)行結(jié)晶處理，所述結(jié)晶處理包括:將所述溶液升溫至40-60°C，使所述溶液中包含的4-雄烯二酮全部溶解，對(duì)所述溶液逐漸降溫至
0-10°C后保溫0.5-2.0小時(shí)，降溫速度為每小時(shí)5~TC，所述結(jié)晶的過程中持續(xù)攪拌，攪拌的速度為15~25r/min。
[0063]結(jié)晶處理時(shí)先將溶液(濾液)攪拌并升溫至40-60度，而后開始逐漸降溫，控制降溫速度為每小時(shí)5-7度，當(dāng)降至0-10度時(shí)停止降溫，并保持此溫度0.5-2.0小時(shí)后進(jìn)行放料離心。結(jié)晶過程中控制攪拌速度在15-25r/min。
[0064]步驟206、采用吊帶離心機(jī)對(duì)結(jié)晶后的物料進(jìn)行離心得到4-雄烯二酮的粗品，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品。
[0065]將結(jié)晶后的物料通入到吊帶離心機(jī)中進(jìn)行離心，得到的固相為4-雄烯二酮的濕粗品，液相為粗品母液(回收)。
[0066]其中，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品的步驟包括:
[0067]將所述粗品投入到結(jié)晶罐中，按照每升丙酮溶解180g粗品的比例加入丙酮；
[0068]向所述結(jié)晶罐的夾套內(nèi)通入80°C的熱水進(jìn)行升溫，升溫至40-60°C后保溫I小時(shí)，緩慢降溫至0-10°C時(shí)停止降溫，保溫0.5-2.0小時(shí)后進(jìn)行離心，將離心后的固相作為4-雄烯二酮成品。
[0069]將粗品投入到結(jié)晶罐內(nèi)，按照每升丙酮溶解180g粗品的量加入丙酮，向結(jié)晶罐的夾套內(nèi)通入80度熱水進(jìn)行升溫，升溫至40-60度后保持I小時(shí)，然后再緩慢降溫，當(dāng)溫度降至0-10度時(shí)，停止降溫，保持該溫度0.5-2.0小時(shí)后，放料離心，得到固相為濕成品，液相為成品母液(回收)。
[0070]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述工藝還可以包括:
[0071]將所述4-雄烯二酮成品裝入到雙錐干燥機(jī)內(nèi)進(jìn)行干燥，得到干燥的成品。
[0072]將濕成品裝入到雙錐干燥機(jī)內(nèi)進(jìn)行干燥，得到干燥的成品。
[0073]本實(shí)施例中離心機(jī)的使用主要在以下幾步中，離心機(jī)的選取主要依據(jù)各步的物料性質(zhì)和工藝要求而定。
[0074]例如:本實(shí)施例第一次使用的離心機(jī)是用來(lái)將發(fā)酵液中的廢水和發(fā)酵液中的固體物料(菌渣)分開，此時(shí)的物料為 水性物料，不含有機(jī)溶劑，但發(fā)酵液較粘。此時(shí)使用渦螺離心機(jī)是因?yàn)樵撾x心機(jī)適合粘性物料的分離，同時(shí)由于物料中不含有機(jī)溶劑，而不必?fù)?dān)心渦螺離心機(jī)密封性差的缺點(diǎn)。
[0075]本實(shí)施例中第二次使用的離心機(jī)是用來(lái)從提取罐放出的物料中將丙酮-水提取液和料渣分開，此時(shí)物料的特點(diǎn)是物料中含有熱的有機(jī)溶劑，對(duì)提取設(shè)備的要求除了要能分離開液固兩相外，還要求設(shè)備的密封性較好，避免熱的有機(jī)溶劑揮發(fā)，固此時(shí)選用密封性較好的碟片離心機(jī)，或使用帶隔膜閥的板框壓濾機(jī)。這兩款離心機(jī)密封性較好，可以降低有機(jī)溶劑的揮發(fā)。
[0076]本實(shí)施例中第三次和第四次使用的離心機(jī)是用來(lái)分離結(jié)晶罐放出的料液(主要含結(jié)晶AD濕粗品和結(jié)晶母液)，此時(shí)物料的特點(diǎn)是:低溫，含有機(jī)溶劑多，由于有結(jié)晶性顆粒的存在，物料過濾性較好，不粘稠。此時(shí)選用吊帶式離心機(jī)是因?yàn)樵撾x心機(jī)的密封性較好，可以防止離心時(shí)有機(jī)溶劑的揮發(fā)，此外如選用自動(dòng)下料式吊帶離心機(jī)還可以減輕勞動(dòng)強(qiáng)度，避免工人直接接觸有機(jī)溶劑，有利于保護(hù)勞動(dòng)者的身體健康。
[0077]為了使本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明，通過具體的示例對(duì)本發(fā)明的從植物甾醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮(AD)的工藝進(jìn)行說明，參見圖3給出了本發(fā)明示例中從植物留醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的工藝的流程圖，具體包括:
[0078]對(duì)水相發(fā)酵液進(jìn)行液固分離，得到將水相的廢水排污棄去，保留固相的菌渣。對(duì)固相的菌渣采用丙酮-水的混合溶劑進(jìn)行提取。提取的混合液進(jìn)行液固兩相分離，固相為提取后的料渣，可以棄去，液相為混合溶劑的提取液，進(jìn)行降溫結(jié)晶后離心處理，得到AD粗品.AD粗品進(jìn)一步采用一定比例的丙酮加熱溶解，并降溫結(jié)晶，得到AD的濕精品，進(jìn)一步干燥后得到干燥的AD成品。
[0079]其中具體的細(xì)節(jié)在上述兩個(gè)實(shí)施例中有詳細(xì)說明，此處不再贅述。
[0080]下面通過三個(gè)表分別示出了 4-雄烯二酮發(fā)酵提取生產(chǎn)的三個(gè)具體的示例及主要參數(shù):
[0081]示例一、
[0082]
【權(quán)利要求】
1.一種從植物留醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的方法，其特征在于，包括: 采用植物留醇為原料進(jìn)行微生物發(fā)酵生成4-雄烯二酮； 將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液通過離心機(jī)進(jìn)行液固分離，提取濕固體物料； 在所述濕固體物料中加入丙酮-純水的混合溶劑，在升溫至40-60°C的條件下持續(xù)攪拌60-90分鐘后，在40°C以上的溫度條件下進(jìn)行固液分離，其中，每千克濕固體物料加入4升混合溶劑，所述混合溶劑中丙酮的比例為70~80% ； 對(duì)固液分離后得到的溶液進(jìn)行結(jié)晶處理，所述結(jié)晶處理包括:將所述溶液升溫至40-60°C，使所述溶液中包含的4-雄烯二酮全部溶解，對(duì)所述溶液逐漸降溫至0-10°C后保溫0.5-2.0小時(shí)，降溫速度為每小時(shí)5~7°C，所述結(jié)晶的過程中持續(xù)攪拌，攪拌的速度為15 ~25r/min ； 對(duì)結(jié)晶后的物料進(jìn)行離心得到4-雄烯二酮的粗品，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品的步驟包括: 在所述粗品中按照每升丙酮溶解180g粗品的比例加入丙酮； 采用80°C的水浴進(jìn)行升溫，升溫至40-60°C后保溫一小時(shí)，緩慢降溫至0-10°C時(shí)停止降溫，保溫0.5-2.0小時(shí)后進(jìn) 行離心，將離心后的固相作為4-雄烯二酮成品。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括: 對(duì)所述4-雄烯二酮成品進(jìn)行干燥，得到干燥的成品。
4.一種從植物留醇水相發(fā)酵液中提取4-雄烯二酮的工藝，其特征在于，包括: 采用植物留醇為原料進(jìn)行微生物發(fā)酵生成4-雄烯二酮； 將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液通過渦螺離心機(jī)進(jìn)行液固分離，將分離后的濕固體物料置入提取te ； 在所述提取罐中加入丙酮-純水的混合溶劑，對(duì)所述提取罐加熱至40-60°C的條件下持續(xù)攪拌90分鐘，其中，每千克濕固體物料加入4升混合溶劑，所述混合溶劑中丙酮的比例為70~80%，所述提取罐的頂部安裝有回流裝置以防止所述混合溶劑中的丙酮揮發(fā)； 在40°C以上的溫度條件下，使用碟片離心機(jī)或板框壓濾機(jī)進(jìn)行固液分離； 對(duì)固液分離后得到的溶液進(jìn)行結(jié)晶處理，所述結(jié)晶處理包括:將所述溶液升溫至40-60°C，使所述溶液中包含的4-雄烯二酮全部溶解，對(duì)所述溶液逐漸降溫至0-10°C后保溫0.5-2.0小時(shí)，降溫速度為每小時(shí)5~7°C，所述結(jié)晶的過程中持續(xù)攪拌，攪拌的速度為15 ~25r/min ； 采用吊帶離心機(jī)對(duì)結(jié)晶后的物料進(jìn)行離心得到4-雄烯二酮的粗品，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品。
5.如權(quán)利要求4所述的工藝，其特征在于，對(duì)所述粗品進(jìn)行精制得到4-雄烯二酮成品的步驟包括: 將所述粗品投入到結(jié)晶罐中，按照每升丙酮溶解180g粗品的比例加入丙酮； 向所述結(jié)晶罐的夾套內(nèi)通入80°C的熱水進(jìn)行升溫，升溫至40-60°C后保溫一小時(shí)，緩慢降溫至0-10°C時(shí)停止降溫，保溫0.5-2.0小時(shí)后進(jìn)行離心，將離心后的固相作為4-雄烯二酮成品。
6.如權(quán)利要求4所述的工藝，其特征在于，還包括:將所述4-雄烯二 酮成品裝入到雙錐干燥機(jī)內(nèi)進(jìn)行干燥，得到干燥的成品。
【文檔編號(hào)】C07J1/00GK103773832SQ201310754003
【公開日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2013年12月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月31日
【發(fā)明者】何建勇, 劉艷玲, 潘之安 申請(qǐng)人:菏澤賽托生物科技有限公司